具有持久性的透明質酸凝膠組合物的制作方法
【專利摘要】本發明涉及一種具有長期持久性的交聯的多糖類凝膠組合物，其用于化妝品以及醫藥領域的交聯的透明質酸凝膠組合物，所述具有長期持久性的交聯的多糖類凝膠組合物，使得具有抑制多糖類分解以及抗氧化作用的物質包含于交聯的多糖類凝膠，即使不提高交聯率，也在生體內維持長期的持久性，所述具有長期持久性的交聯的多糖類凝膠組合物的特征在于，其為在未交聯的或交聯的多糖類中包括熊果酸的水凝膠復合體。
【專利說明】
具有持久性的透明質酸凝膠組合物
技術領域
[0001]本發明涉及一種用于化妝品以及醫藥領域的交聯的多糖類凝膠(gel)組合物，更 為詳細地，涉及一種具有持久性的透明質酸(hyaluronic acid)凝膠組合物，所述具有持久 性的透明質酸凝膠組合物使得具有抑制多糖類分解以及抗氧化作用的物質包含于交聯的 多糖類凝膠，從而即使不提高交聯率，也在生體內維持長期的持久性。
【背景技術】
[0002]多糖類作為糖的復合體，是通過配糖體(glycoside)結合使單糖類結合的形態，尤 其是透明質酸鈉 (Natrium)正廣泛用于化妝品以及醫藥領域。
[0003] 透明質酸鈉是一種生體高分子物質，其作為存在于真皮層的粘多糖 (mucopolysaccharide)，N-乙酰(acetyl)-D-氨基葡萄糖（glucosamine)與D-葡萄糖醛酸 (glucuronic acid)通過beta-1,3糖苷鍵(glycosidic bond)來連接，并且所述重復單元以 線性的形式連接。
[0004] 此外，作為在體液、牛的眼球、雞冠、動物的緩沖組織、胎盤等發現的生體構成物 質，特別是以高濃度的形式存在于結締組織以及皮膚。
[0005] 此外，透明質酸鈉具有可含有本身重量的1000倍程度的水的能力，因此廣泛用作 防止皮膚干燥的化妝品的保濕劑，并且在皮膚美容領域，插入至特定部位，從而使得軟組織 擴張，以此，正用作在改善皺紋或校正輪廓等方面使用的皮膚填充劑(dermal filler)等。 另外，透明質酸鈉具有良好的粘彈性+++、生物相容性、生物降解性，從而使用范圍不僅包括 皮膚美容，而且正廣泛用作退行性骨關節炎治療藥物、傷口治療藥物、眼球手術輔助劑以及 用于防止術后組織間粘連的防粘連劑等。
[0006] 但是，由于天然(native)透明質酸(hyaluronic acid:HA)在生體內通過透明質酸 酶(hyaluronidase)與自由基(free radicals)進行快速分解，從而半衰期非常短，為一天 的程度，因此盡管所述透明質酸具有優越性，但是在如皺紋治療藥物一樣需要長久的半衰 期的領域中，無法將天然透明質酸直接適用于產品。
[0007] 為了克服所述不足，開發了多種交聯技術(Cross-linking technology)，在歐洲 與美國大量開發了利用其的交聯的透明質酸填充劑（Cross-linked hyaluronic acid filler)并在最近幾年間也在韓國推出了幾種產品。
[0008] 美國專利第4,582,865號中公開了一種將二乙烯基砜(DVS)用作交聯劑并進行交 聯的透明質酸衍生物，其的水凝膠(hydro ge 1)形態以Hy I af orm為商品名正在市場上銷售， 美國專利第5,827,937號中公開了一種通過將多功能環氧(epoxy)化合物用作交聯劑來制 造透明質酸衍生物交聯物的方法，其中，作為多功能環氧化合物，通過將1，4_丁二醇二縮水 甘油醚（B D D E )用作交聯劑而制造的作為透明質酸交聯物的水凝膠形態的玻尿酸 (Restylane)獲得美國FDA的批準，從而作為用于增強組織的填充劑正在在世界性的市場銷 售。
[0009] 所述產品都是由透明質酸的羥基(hydroxy)與交聯劑結合而生成的，相比于未交 聯透明質酸，雖然其生體內持久性增大，但是仍然需要6-12個月之內的時間進行分解等，因 而存在生體持久性低的問題。
[0010]由于所述大部分的交聯的透明質酸填充劑的持久性為一年之內，因此為了延長持 久性，雖然試圖提高交聯率，但是由于高的儲能模量可導致有堅硬的異物感，因此所述方法 有限。
[0011]由此，為了延長持久性，切實需要開發一種多糖類凝膠組合物，所述多糖類凝膠組 合物具有與皮膚的感覺類似的儲能模量的同時，可延長持久性，而非提高交聯率。
【發明內容】
[0012] 本發明在所述的背景下發明的，本發明的目的在于，提供一種交聯的透明質酸凝 膠組合物，所述交聯的透明質酸凝膠組合物使得具有抑制多糖類分解以及抗氧化作用的物 質包含于交聯的多糖類凝膠，即使不提高交聯率，也能夠在生體內具有長期的持久性。
[0013] 本發明的其他目的在于，提供一種具有長期持久性的交聯的透明質酸凝膠組合 物，就用于化妝品以及醫藥領域的交聯的多糖類凝膠組合物而言，所述具有長期持久性的 交聯的透明質酸凝膠組合物構成為，將熊果酸(ursolic acid)包含于交聯的多糖類凝膠， 所述熊果酸即使不提高交聯率，也具有抑制多糖類分解以及抗氧化作用。
[0014] 用于達到所述目的的本發明，特征在于，其為在未交聯的或交聯的透明質酸包含 熊果酸的水凝膠復合體。
[0015] 此外，特征在于，根據本發明，所述水凝膠組合物包括透明質酸（hyaluronic acid)、纖維素（ceIlulose)、殼聚糖（chitosan)、葡聚糖(dextran)、硫酸葡聚糖(dextran sulfate)、軟骨素(chondroitin)、硫酸軟骨素 (chondroitin sulfate)、肝素(heparin)、硫 酸肝素 (heparin sulfate)、藻酸鹽(alginate)中至少一個或一個以上的多糖類。
[0016] 此外，特征在于，根據本發明，所述多糖類的分子量為20,000道爾頓(Da)至5,000， 000道爾頓(Da)。
[0017] 此外，特征在于，根據本發明，所述熊果酸的濃度為0.OOlmM至1M。
[0018] 此外，特征在于，根據本發明，還包括利多卡因。
[0019] 如上所述，本發明優點在于，包含有熊果酸的交聯的多糖類凝膠組合物具有良好 的生物相容性，并在不提高儲能模量的情況下，將組合物注入生體內時，維持與皮膚的感覺 最類似的儲能模量的同時，在生體內具有良好的長期持久性。
[0020] 此外，優點在于，根據本發明的添加有作為局部麻醉劑的利多卡因的組合物，在施 行手術時使得患者的疼痛得以緩解。
[0021] 此外，效果在于，根據本發明的組合物，使得皮膚的皺紋消除或改善，并使得組織 恢復至鼻、臉頰、嘴唇、胸、臀、深的傷口等部位。
[0022] 此外，本發明的優點在于，用作防粘連劑，所述防粘連劑在泌尿外科方面，用于使 得男性的象征擴大的用途，并用于防止術后內臟器官的粘連，并作為用于退行性關節的改 善以及治療的潤滑劑，用作退行性關節炎治療藥物。
【附圖說明】
[0023] 圖1為關于根據本發明的交聯的透明質酸與熊果酸的復合體結構的概略圖。
[0024] 圖2為表示通過根據本發明的透明質酸酶與自由基的透明質酸-熊果酸復合體的 分解率的圖表。
[0025] 圖3為表示關于根據本發明的透明質酸-熊果酸復合體的流變特性的圖表。
[0026] 圖4為表示關于根據本發明的透明質酸-熊果酸復合體的擠壓力的圖表。
【具體實施方式】
[0027]參照附圖對本發明進行更為具體地說明。
[0028] 圖1為關于根據本發明的一個實施例的交聯的透明質酸與熊果酸的復合體結構的 概略圖。
[0029] 如圖所示，根據本發明的具有長期持久性的交聯的多糖類凝膠組合物包括水凝膠 組合物，所述水凝膠組合物在未交聯的或交聯的多糖類中包括熊果酸。
[0030] 更為具體地，本發明組合物包括水凝膠組合物，所述水凝膠組合物包括透明質酸 (hyaluronic acid)、纖維素(cellulose)、殼聚糖(chitosan)、葡聚糖(dextran)、硫酸葡聚 糖(dextran sulfate)、軟骨素(chondroitin)、硫酸軟骨素 (chondroitin sulfate)、肝素 (heparin)、硫酸肝素 (heparin sulfate)、藻酸鹽(alginate)中至少一個多糖類與作為在 抑制多糖類分解以及抗氧化方面起作用的物質的熊果酸(ur so I i c ac i d)。
[0031] 所述多糖類使用透明質酸（hyaluronic acid)、纖維素（cellulose)、殼聚糖 (chitosan)、葡聚糖(dextran)、硫酸葡聚糖(dextran sulfate)、軟骨素(chondroitin)、硫 酸軟骨素 （chondroitin sulfate)、肝素(heparin)、硫酸肝素 (heparin sulfate)、藻酸鹽 (alginate)中至少一個或一個以上的多糖類，并優選地使用透明質酸。
[0032]用于本發明的所述多糖類的分子量為20，000道爾頓（dalton)至5，000,000道爾 頓，優選地為500，000道爾頓至3，000，000道爾頓。
[0033] 用于本發明的熊果酸(ursolic acid)為五環三砲(pentacyclic triterpenoid) 類化合物，并廣泛分布于藥用植物與草藥，所述五環三砲類化合物以ur son、prunol、 micromerol 與 malol 等著稱。
[0034] 所述熊果酸在藥物學方面長時間被認為是具有惰性的，熊果酸與熊果酸鹽(例如： 熊果酸鉀或熊果酸鈉 (potassium or sodium ursolates))在制藥、化妝品并食品中全部用 作表面活性劑。
[0035] 但是，通過更為縝密的研究表明，當局部服用熊果酸時，在藥學方面兩種都具有活 性。
[0036]熊果酸的效果體現在抗炎癥作用、抗癌作用(皮膚癌）、抗菌作用方面。如大部分的 三萜(triterpenoids)類化合物一樣，熊果酸是在植物界中非常常見的化合物，而且是使得 系統發生起源與分類位置多元化的多種植物的成分。
[0037] 熊果酸是從蘋果、梨、蔓越橘、李子等水果皮中分離的。此外，熊果酸衍生物也大量 存在于海藻類。
[0038] 用于本發明的熊果酸(ursolic acid)在抑制多糖類分解的同時，具有抗氧化的作 用，從而同時具有多糖類分解抑制劑與抗氧化劑的雙重作用，從而成為用于增加多糖類凝 膠的生體內持久性的最佳物質。
[0039] 用于本發明的熊果酸的濃度為0.0 ImM至IM，優選地為0.05mM至I OOmM，更為優選地 為0.ImM至IOmM。
[0040] 此外，根據本發明，為了在施行手術時減輕患者的疼痛，可將作為局部麻醉劑的利 多卡因（Iidocaine)添加至含有熊果酸的交聯的多糖類凝膠組合物。
[0041] 本發明的組合物在醫學方面或美容方面使得皮膚的皺紋消除或改善，或者可用于 將組織恢復至鼻、臉頰、嘴唇、胸、臀、深的傷口等部位。
[0042]此外，用作防粘連劑，所述防粘連劑在醫學方面用于使得男性的象征（symbol)擴 大，或者防止術后內臟器官的粘連，并作為用于退行性關節的改善以及治療的潤滑劑，可用 作退行性關節炎治療藥物。
[0043]以下，根據下述實施例對本發明進行更為詳細地說明，但是，下述實施例僅用于對 本發明進行舉例說明，本發明的范圍并未僅限定于此。
[0044] 對比例1:準備已開發的交聯的透明質酸填充劑
[0045] 將roS(pH 7.0)溶液IOOuL添加至HA濃度為24mg/mL，儲能模量似）為130Pa程度的 交聯的透明質酸填充劑(REV0LAX?，ACR0SS CO. ,LTD. Hg之后，進行攪拌，以便于完全混合。 [0046] 實施例1:制造本發明的透明質酸-熊果酸(0.1 mM)復合體水凝膠
[0047] 將添加有熊果酸0.1 mM的PBS(pH 7.0)溶液IOOuL添加至HA濃度為24mg/mL，儲能模 量似）為130Pa程度的交聯的透明質酸填充劑(REV0LAX?，ACROSS CO ·，LTD ·) Ig之后，進行 攪拌，以便于完全混合。
[0048] 實施例2:制造本發明的透明質酸-熊果酸(0.5mM)復合體水凝膠
[0049] 將添加有熊果酸0.5mM的PBS(pH 7.0)溶液IOOuL添加至HA濃度為24mg/mL，儲能模 量似）為130Pa程度的交聯的透明質酸填充劑(REV0LAX?，ACROSS CO ·，LTD ·) Ig之后，進行 攪拌，以便于完全混合。
[0050] 實施例3:制造本發明的透明質酸-熊果酸(ImM)復合體水凝膠
[00511 將添加有熊果酸ImM的roS(pH 7.0)溶液IOOuL添加至HA濃度為24mg/mL，儲能模量 似）為130Pa程度的交聯的透明質酸填充劑(REV0LAX?，ACR0SS CO.，LTD.)lg之后，進行攪 拌，以便于完全混合。
[0052] 實施例4:制造本發明的透明質酸-熊果酸(5mM)復合體水凝膠
[0053] 將添加有熊果酸5mM的roS(pH 7.0)溶液IOOuL添加至HA濃度為24mg/mL，儲能模量 似）為130Pa程度的交聯的透明質酸填充劑(REV0LAX?，ACR0SS CO.，LTD.)lg之后，進行攪 拌，以便于完全混合。
[0054] 實施例5:制造本發明的透明質酸-熊果酸(IOmM)復合體水凝膠
[0055] 將添加有熊果酸IOmM的roS(pH 7.0)溶液IOOuL添加至HA濃度為24mg/mL，儲能模 量似）為130Pa程度的交聯的透明質酸填充劑(REV0LAX?，ACROSS CO ·，LTD ·) Ig之后，進行 攪拌，以便于完全混合。
[0056] 實驗例1:透明質酉麵每(hyaluronidase)分角軍實驗
[0057]為了預測根據本發明的透明質酸-熊果酸復合體的生體內持久性，對于所述對比 例1與實施例1-5的透明質酸-熊果酸復合體，執行了通過透明質酸分解酶的分解實驗。 [0058]對所述對比例1與實施例1-5的透明質酸水凝膠進行冷凍干燥，并將冷凍干燥的試 樣以相同的質量裝入50mL管（tube)。添加了含有透明質酸分解酶(hyaluronidase from Streptomyces hyalurolyticus，Sigma-Aldrich)200單位（Units)的PBS溶液（pH 7·0)6mL。 將所述混合物在37°C下進行24小時的反應后，為了使得透明質酸分解酶鈍化，在90°C下加 熱10分鐘。在添加精制水18mL并進行禍旋(vortexing)之后，進行離心分離(4,000rpm，15分 鐘）。取出上清液ImL后放入epp.管中并進行離心分離（12,000rpm，5分鐘）。為了對作為離心 分離的上清液所分解出的N-乙酰葡糖胺(NAG)的量進行測定，根據咔唑(Carbozle)的方法 進行分析。下述表1表示交聯物的分解程度。
[0059] 表 1
[0060] [表1]
[0062] 如〈表1〉所示，可得知根據熊果酸的濃度對于交聯的透明質酸的分解所產生的影 響。觀察到隨著熊果酸濃度的增加，通過透明質酸分解酶(透明質酸酶(hyaluronidase))的 交聯的透明質酸的分解顯著地減少。
[0063] 此外，當熊果酸的濃度為IOmM時，幾乎不發生通過透明質酸分解酶(透明質酸酶 (hyaluronidase))的交聯的透明質酸的分解。在此基礎上，若調整熊果酸的濃度，則可制造 具有所期望的持久性的透明質酸水凝膠填充劑。
[0064] 實驗例2:自由基(free radicals)分角軍實驗
[0065] 為了預測根據本發明的透明質酸-熊果酸復合體的生體內持久性，對于所述對比 例1與實施例1-5的透明質酸-熊果酸復合體，執行了通過自由基的分解實驗。
[0066] 對所述對比例1與實施例1-5的透明質酸水凝膠進行冷凍干燥，并將冷凍干燥的試 樣以相同的質量裝入50mL管。
[0067] 添加了含有自由基（0 · 2mM ascorbic acid與0 · 2mM hydrogen peroxide的混合 物）的PBS溶液(pH 7.0)6mL。在添加精制水18mL并進行禍旋(vortexing)之后，進行離心分 離(4,000rpm，15分鐘）。取出上清液ImL后放入epp.管中并進行離心分離（12,000rpm，5分 鐘)。
[0068]為了對作為離心分離的上清液所分解出的N-乙酰葡糖胺(NAG)的量進行測定，根 據咔唑(Carbozle)的方法進行分析。下述〈表2〉表示交聯物的分解程度。
[0069] 表2
[0070] [表 2]
[0072]如〈表2〉以及圖2所示，可得知根據熊果酸的濃度對于交聯的透明質酸的分解所產 生的影響。觀察到隨著熊果酸濃度的增加，通過自由基(free radi caI s)的交聯的透明質酸 的分解顯著地減少。
[0073]此外，當熊果酸的濃度為IOmM時，幾乎不發生通過自由基(free radicals)的交聯 的透明質酸的分解。在此基礎上，若調整熊果酸的濃度，則可制造具有所期望的持久性的透 明質酸水凝膠填充劑。
[0074] 實驗例3:流變特性實驗
[0075] 為了評估本發明的流變特性，對于所述對比例1與實施例1-5的透明質酸-熊果酸 復合體，利用流變儀(rheometer) (T.A. Instruments Ltd. ,USA)對儲能模量W )、耗能模量 (G〃）與％彈性度進行測定。在25°C下，使用40mm 2°錐-板幾何（cone-plate geometer)在 0.Ol-IOHz范圍中實施實驗，在I.OHz下測定儲能模量(G')與耗能模量(G〃）。使用如下式子 對％彈性度進行計算。下述〈表3〉表示結果值。
[0076] Percentage elasticity( % ) = (G7 /G7 +G7/) X 100
[0077] 表 3
[0078] [表 3]
LUUt5U」 卯（衣3〉以及圖3所不，熊呆酸的添刀卩禾對m父狩?生帶米父化。禾添刀卩有熊呆酸的 交聯的透明質酸填充劑與以0.1-IOmM濃度添加熊果酸的交聯的透明質酸填充劑幾乎未對 儲能模量(G')、耗能模量(6〃）與％彈性度產生影響。在此基礎上，若調節熊果酸的濃度，則 儲能模量(G')不增加，并可制造可使得持久性增加的透明質酸水凝膠填充劑。
[0081 ] 實驗例4:擠壓力實驗
[0082] 為了評估本發明的擠壓力，對于所述對比例1與實施例1-5的透明質酸-熊果酸復 合體，用擠壓力實驗機實施擠壓力實驗。
[0083] 將裝有想要測定的實驗液體的玻璃注射器插入夾具（jig)之后，以玻璃注射器的 柱塞在擠壓板位于中央的形式進行調整。設置托架(培養皿(petri dish))，以便于防止實 驗液體沾染至夾具，之后，以12mm/min的速度實施擠壓力測定。
[0084] 在測定的結果中，在施加力之后，將5mm地點指定為底部標記位置(bottom marker position)，并在測定結束的地點將5mm之前的地點指定為頂部標記位置（top marker position)，而后取其之間的平均值。下述〈表4〉表示擠壓力值。
[0085] 表 4
[0086] [表 4]
[0089]如〈表4〉以及圖4所示，熊果酸的添加未對擠壓力帶來變化。未添加有熊果酸的交 聯的透明質酸填充劑與以〇. I-IOmM濃度添加熊果酸的交聯的透明質酸填充劑幾乎未對擠 壓力產生影響。在此基礎上，若調節熊果酸的濃度，則可制造透明質酸水凝膠填充劑，所述 透明質酸水凝膠填充劑在維持適當的擠壓力的同時，可使得持久性增加。
【主權項】
1. 一種具有持久性的透明質酸凝膠組合物，其特征在于，將熊果酸包含于未交聯或交 聯的透明質酸。2. 根據權利要求1所述的具有持久性的透明質酸凝膠組合物，其特征在于，所述透明質 酸的分子量為20，000道爾頓至5，000，000道爾頓。3. 根據權利要求1所述的具有持久性的透明質酸凝膠組合物，其特征在于，所述熊果酸 的濃度為O.OOlmM至1M。4. 根據權利要求1所述的具有持久性的透明質酸凝膠組合物，其特征在于，還包括利多 卡因。
【文檔編號】A61K47/30GK105979968SQ201480075016
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2014年12月5日
【發明人】禹熙東, 許正武
【申請人】Newmedic股份公司