洗滌劑和清潔劑的制作方法

專利名稱：洗滌劑和清潔劑的制作方法
洗滌劑和清潔劑本發明涉及含酶的洗滌劑和清潔劑，其除了常規成分外，還含有由葉綠素酶與至少另外一種水解酶，優選脂肪酶，特別優選半乳糖脂酶組成的組合。洗滌劑除了含有對于洗滌過程不可缺少的內容物，如表面活性劑和構建劑材料 (Buildermaterial)之外，通常還含有其它成分，它們可概括為術語洗滌助劑并且它們包括這樣不同的活性物質組，如泡沫調節劑、灰變抑制劑、漂白劑和染料轉移抑制劑。這類助劑還包括通過對紡織品上的污漬進行酶降解來促進表面活性劑功效的物質。這對于應用于硬質表面的清潔劑也同樣適用。在此，除了促進蛋白質去除的蛋白酶，使脂肪裂解的脂肪酶外，特別重要的是淀粉酶和纖維素酶，所述淀粉酶的任務是通過淀粉_多糖的催化水解而使含淀粉的污漬易于去除。洗滌劑和清潔劑的其它常規內容物是能有助于去除像茶和紅葡萄酒漬的顏色污漬。對此使用無機過氧化合物，特別是過氧化氫和固體過氧化物，其通過釋放過氧化氫而溶解于水中，如過硼酸鈉和碳酸鈉-過氧化氫合物，歷來作為氧化劑用于消毒和漂白目的。這些化合物在稀釋溶液中的氧化效果主要依賴于溫度。在較低溫度時，無機過氧化合物的氧化效果將通過添加所謂的漂白活化劑來改善。在此首選考慮出自N-或0-酰基化合物的物質類別的化合物，例如多酰基化的亞烷基二胺或羧酸酯。通過添加這些物質可以增強過氧化物漂洗液的漂白效果，以致在低于60°C的溫度下已經達到過氧化物漂洗液單獨使用下 95 °C時的相同效果。通常，酶與漂白體系在效果上是互補的，甚至常觀察到協同效應。特別頑固的污漬類別是含葉綠素的污漬，特別是草和樹葉的污斑，無論是至今使用的酶還是漂白體系，均不能達到足夠程度的去除。對此的難題是，葉綠素不以游離形式而是以與疏水的或含蛋白的植物成分的組合存在，由此增加了漂白體系進攻發色團的難度。葉綠素酶(EC 3. 1. 1. 14)，作為催化葉綠素或脫鎂葉綠素催化分解為葉綠素酯或脫鎂葉綠酸和葉綠醇的水解酶，已知約100年了。通過葉綠素酶與葉綠素的反應改善發色團體系的水溶性。脂肪酶已然常規地在洗滌劑和清潔劑的配方中用于清除脂質或油的污漬。這種酶在此通過水解三酰甘油以及磷脂中一個或多個酯鍵來清除含油污漬。半乳糖脂酶是脂肪酶中的一個特殊類別，其僅裂解三酰甘油和磷脂或除此之外還裂解半乳糖脂中的一個或多個酯鍵。目前還未見報道特別是半乳糖脂酶在商品洗滌劑和清潔劑的配方中的使用。在半乳糖脂中，一個或多個半乳糖殘基以sn-3-位與二酰甘油連接。半乳糖脂是光合活性膜的主要成分，并因此主要存在于植物和光合活性細菌中。在所述半乳糖脂膜中嵌有葉綠素分子。人們例如在植物中發現半乳糖脂酶，其主要存在于葉綠體中。半乳糖脂解酶的其它來源是來自哺乳動物消化道中的脂肪酶并且在微生物中也已檢測到該活性。令人驚訝地發現，葉綠素酶與另一種水解酶，特殊脂肪酶且特別是半乳糖脂酶的組合導致對含葉綠素的污漬意想不到的協同改善效果，從而這種酶的聯合使用特別適合在洗滌劑和清潔劑中使用。
本發明的主題是洗滌劑或清潔劑，其包含葉綠素酶與水解酶的組合，優選脂肪酶且特別是半乳糖脂酶。通過使 用葉綠素酶與至少另外一種水解酶，優選脂肪酶，特別是半乳糖脂酶的這種組合將提高特別是在含有過氧化合物的含水洗滌液和清潔液中洗滌劑和清潔劑的去污能力，尤其是針對帶顏色的、基于葉綠素的污漬。針對帶顏色的污漬的去污能力這一概念在此以其最廣泛的意義進行理解，不僅包括漂白存在于紡織品上的污漬，漂白從紡織品上脫離而存在于漂洗液中的污漬，還包括將漂洗條件下從紡織品上脫離的、存在于漂洗液中的紡織染料在其又能附著于其它顏色的紡織品之前紡織染料氧化破壞。即使在使用用于堅硬表面的清潔液時，該概念理解為，不僅漂白存在于堅硬表面的污漬，特別是茶，還有漂白存在于洗碗液中、從堅硬表面脫離的污漬。作為成分，根據本發明的洗滌劑和清潔劑包含葉綠素酶。作為葉綠素酶主要使用植物酶，優選取自橙(Citrus sinensis)和小麥(Triticum aestivum)的酶。對于在根據本發明的產品中的使用，所述酶可以重組地例如在大腸桿菌或巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)中生產，并隨即用標準方法從細胞質粗提物或培養基上清液中純化。作為其它成分，根據本發明的洗滌劑和清潔劑包含水解酶，優選脂肪酶，特別是半乳糖脂酶。所用的半乳糖脂酶一方面可以取自原核生物來源，例如假單胞菌屬 (Pseudomomas sp.)或色桿菌屬(Chromobacter sp.)，另一方面也可以取自酵母菌、真菌、以及植物或動物來源的真核生物的半乳糖脂酶，例如念珠菌屬(Candida sp.)，豆類 (Phaseolus vulgaris),(Solanum tuberosum), Ι^ (Cavia porcellus)，馬(Equus caballus)或人(Homo sapiens) 0對于在根據本發明的產品中的使用，所述酶可以重組地例如在大腸桿菌或巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)中生產，并隨即用標準方法從細胞質粗提物或培養基上清液中純化。根據本發明的洗滌劑和清潔劑，通常每克含有各自0. 0001至10mg，優選各自 0. OOlmg至1. Omg，特別是各自0. 02至0. 3mg的葉綠素酶和另一種水解酶。根據本發明的洗滌劑和清潔劑可以作為粉狀固體、以后壓實的微粒形式、作為均質溶液或懸濁液存在，除了上述的酶之外，原則上還包含所有熟知的和在此類制劑中常規的內容物。根據本發明的制劑可以包含表面活性劑、構建物質(Buildersubstanzen)、附加的基于有機和/或無機的過氧化合物的漂白劑、附加的漂白活化劑、漂白催化劑、水可混的有機溶劑、附加酶、螯合劑、電解質、PH調節劑和其它助劑，如光學增亮劑、灰變抑制劑、染料轉移抑制劑、泡沫調節劑、銀緩蝕劑、以及染料和香料。本發明的清洗劑可以包含一種或多種表面活性劑，其中特別是陰離子表面活性劑，非離子表面活性劑及其混合物，然而，陽離子、兩性離子和兩親表面活性劑也是考慮的。適宜的非離子表面活性劑尤其是烷基糖苷和烷基糖苷的乙氧基化和/或丙氧基化的產物，或者直鏈或分支的醇，其具有各自12 18個碳原子的烷基和3 20，優選4 10個烷基醚基團。此外可用的是鑒于烷基部分相應于所述長鏈的醇衍生物的N-烷基胺、鄰二醇、脂肪酸酯和脂肪酸酰胺的乙氧基化和/或丙氧基化的產物，以及具有5 12個碳原子的烷基的烷基酚的乙氧基化和/或丙氧基化的產物。作為非離子表面活性劑優選使用烷氧基化的、有利的是乙氧基化的、特別是具有優選8 18個碳原子的伯醇且每摩爾醇平均含有1 12mol氧化亞乙基單元(EO)，其中醇殘基可以是直鏈或優選在2-位有甲基分支的，或者可以以混合形式包含直鏈和 甲基分支的殘基，以及通常以氧代醇殘基形式存在。然而特別優選的是醇乙氧基化物，其直鏈殘基源自具有12 18個碳原子的天然醇，例如椰醇、棕櫚醇、牛油醇或油醇，并且每摩爾醇平均含有2 8個E0。屬于優選的乙氧基化的醇類的實例例如具有3E0或4E0的C12-C14醇，具有 7E0 的 C9-C11 醇，具有 3E0、5E0、7E0 或 8E0 的 C13-C15 醇，具有 3E0、5E0 或 7E0 的 C12-C18 醇， 以及它們的混合物，如具有3E0的C12-C14醇和具有7E0的C12-C18醇的混合物。給出的乙氧基化度是統計平均值，其對于特定的產物可以是整數或分數。優選的醇乙氧基化物具有狹窄的同源分布(eingeengter Homologenverteilung) (窄幅乙氧基化物，NRE)。除了這些非離子表面活性劑之外，還使用具有12個EO以上的脂肪醇。對此的實例是具有14E0、16E0、20E0、25E0、30E0或40E0的(牛油)脂肪醇。特別是對用于機洗餐具過程的清潔劑，通常使用泡沫極低的化合物。對此優選包括C12-C18烷基聚乙二醇-聚丙二醇醚，其每分子中帶有高達8mol的氧化亞乙基和氧化亞丙基單元。當然也可以使用其它熟知的低泡沫非離子表面活性劑，例如C12-C18烷基聚乙二醇-聚丁二醇醚，其每分子中帶有高達8mol的氧化亞乙基和氧化亞丁基單元，以及封端的聚烷二醇混合醚。特別優選的是還有含羥基的烷氧基化醇，所謂的羥基混合醚。作為非離子表面活性劑也可以使用由通式RO(G)x所示的烷基糖苷，其中，R是一級直鏈或甲基分支的，特別是 2-位甲基分支的具有8 22，優選12 18個碳原子的脂族殘基，并且G是五碳糖或六碳糖單元，優選葡萄糖。低聚度χ表示單糖苷或寡糖苷的分布，為1至10之間的任意值一其可以認作為分析待定的大小和分數值；優選χ為1. 2 1. 4。同樣適宜的是多羥基脂肪酸酰胺。另一類優選使用的非離子表面活性劑是烷氧基化的、優選乙氧基化的或者乙氧基化和丙氧基化的脂肪酸烷基酯，優選具有1 4個碳原子的烷基鏈，特別是脂肪酸甲酯，其作為單一的非離子表面活性劑或者與其它非離子表面活性劑結合，特別是與烷氧基化的脂肪醇和/或烷基糖苷一起使用。氧化胺型的非離子表面活性劑，例如N-椰烷基-N，N- 二甲胺氧化物和N-牛油基-N，N-二羥乙基胺氧化物，以及脂肪酸烷醇酰胺也是適用的。這些非離子表面活性劑的用量優選不超過乙氧基化的脂肪醇，特別是不多于一半。作為其它表面活性劑考慮所謂的雙子表面活性劑(Gemini-Tenside)。通常理解為這樣的化合物，即每個分子中含有兩個親水基團。這些基團通常由一個所謂的“間隔臂”彼此分開。這種間隔臂通常是應當足夠長的碳鏈，從而所述親水基團具有充分的間距以使它們各自獨立地可以發揮作用。在例外情況下，雙子表面活性劑不應僅限于這樣的“二聚體”， 還可以理解為相應的“三聚體”表面活性劑。適宜的雙子表面活性劑例如是硫酸化的羥基混合醚，或二聚醇雙_硫酸鹽和_硫酸化醚和三聚醇三_硫酸鹽和_硫酸化醚。封端的二聚和三聚混合醚尤其突出地表現出雙向和多邊的功能性。此外，也可以使用雙子-多羥基脂肪酸酰胺或聚_多羥基脂肪酸酰胺。適宜的陰離子表面活性劑尤其是肥皂和含有硫酸或磺酸基團的肥皂。作為磺酸型的表面活性劑優選考慮C9-C13烷基苯磺酸鹽、烯基磺酸鹽，即烯基烷磺酸鹽和羥基烷磺酸鹽及二磺酸鹽的混合物，例如獲自由具有端基或內雙鍵的C12-C18單烯烴通過用氣態三氧化硫磺化，隨后用堿或酸水解得到的磺化產物。適宜的還有烷基磺酸鹽，其由C12-C18烷烴通過例如氯磺化或磺化氧化作用，隨后水解或中和得到。適宜的還有α-磺化脂肪酸的酯(酯磺酸鹽)，例如氫化的椰酸、棕櫚仁酸或牛油脂肪酸的α -磺化甲酯，其通過對植物和/或動物來源的具有8 20個碳原子的脂肪酸分子的甲酯進行α-磺化，并之后中和形成水溶性的單鹽來制備得到。優選在此涉及氫化的椰酸、棕櫚酸、棕櫚仁酸或牛油脂肪酸的α-磺化酯，在此也可以以最低量優選不超過約2 3重量％存在諸如油酸的不飽和脂肪酸的磺化產物。特別優選的α-磺化脂肪酸烷基酯，其酯基的烷基鏈不超過4個碳原子，諸如甲酯、 乙酯、丙酯和丁酯。特別有利的是α-磺化脂肪酸的甲酯(MES)，也使用其皂化的二鹽也適用。另一類適用的陰離子表面活性劑是硫化的脂肪酸甘油酯，其為單酯、雙酯和三酯及其混合物，其制備方法是通過單甘油與1 3mol脂肪酸進行酯化或三酰甘油與0. 3 2mol甘油進行酯交換。作為烷(烯)基硫酸鹽，優選C12-Cw脂肪醇的硫酸單酯的堿金屬鹽特別是鈉鹽，所述C12-C18脂肪醇例如椰醇、牛油脂肪醇、月桂醇、肉豆蔻醇、鯨蠟醇或硬脂醇，或者Cltl-C2tl氧代醇和這樣的相同鏈長的仲醇單酯。此外優選所述鏈長的烷(烯)基硫酸鹽，其包含由合成的、石化基礎制造的直鏈烷基，其如同基于脂族化學原料相應的適當化合物類似地降解。出于洗滌技術關注的是特別優選C12-C16烷基硫酸鹽和C12-C15烷基硫酸鹽及C14-C15烷基硫酸鹽，2，3-烷基硫酸鹽也是適宜的陰離子表面活性劑。適宜的還有用1 6mol環氧乙烷乙氧基化的直鏈或分支的C7-C21 醇的硫酸單酯，如具有平均3. 5mol氧化亞乙基(EO)的2-甲基分支的C9-C11醇，或具有1 4E0的C12-C18脂肪醇。優選的陰離子表面活性劑還包括烷基磺化琥珀酸鹽，也稱為磺化琥珀酸鹽或磺化琥珀酸酯，并且與醇的磺化琥珀酸的單酯和/或二酯，是優選的脂肪醇和特別是乙氧基化的脂肪醇。優選的磺化琥珀酸鹽含有C8-C1Jg肪醇殘基或其混合。特別優選的磺化琥珀酸鹽含有其本身可視作由前述非離子表面活性劑的乙氧基化脂肪醇衍生而來的脂肪醇基。此處的琥珀酸鹽，其脂肪醇基特別優選由具有狹窄同源分布的乙氧基化脂肪醇所衍生。同樣也可以使用優選在烷(烯)基鏈中具有8 18個碳原子的烷(烯)基琥珀酸或其鹽。作為其它的陰離子表面活性劑考慮氨基酸的脂肪酸衍生物，例如N-甲基牛磺酸 (Tauride)和/或N-甲基甘氨酸(肌氨酸)。在此特別優選肌氨酸或肌氨酸鹽，此處主要是較高級的、任選的單或多不飽和脂肪酸的肌氨酸鹽，如油酰肌氨酸鹽。作為其它的陰離子表面活性劑考慮特別是肥皂。特別適宜的是飽和脂肪酸的肥皂，如月桂酸鹽、肉豆蔻酸鹽、棕櫚酸鹽、硬脂酸鹽、氫化芥酸鹽和山崳酸鹽，以及特別是從天然脂肪酸衍生的肥皂混合物， 例如椰酸、棕櫚仁酸或牛油脂肪酸。這些肥皂或肥皂替代品的組合也同樣已知用于烯基琥珀酸鹽。所述陰離子表面活性劑，包括肥皂，可以以鈉鹽、鉀鹽或銨鹽，以及諸如單、二或三乙醇胺的有機堿的可溶性鹽的形式存在。優選所述陰離子表面活性劑以鈉鹽或鉀鹽，特別是鈉鹽的形式存在。表面活性劑包含在根據本發明的洗滌劑中的混合比例優選5 50重量％，特別是 8 30重量％，然而用于堅硬表面清潔的制劑，尤其是用于餐具的機洗清潔，具有較低的表面活性劑含量在10重量％以內，特別是5重量％以內，優選0. 5 3重量％的范圍。根據本發明的制劑優選包含至少一種水溶性和/或非水溶性、有機和/或無機的構建劑。水溶性有機構建劑物質包括多羧酸，特別是檸檬酸和糖酸；單體或多聚體的氨基多羧酸，特別是甲基甘氨酸二乙酸，次氮基三乙酸和乙二胺四乙酸，以及聚天冬氨酸，聚膦酸， 特別是氨基三(亞甲基膦酸)、乙二胺四(亞甲基膦酸)和1-羥乙烷-1，1-二膦酸，多聚體羥基化合物如糊精以及多聚體多羧酸，特別是通過氧化多糖或糊精而獲得的多羧酸酯，聚合的丙烯酸、甲基丙烯酸、馬來酸和它們的共聚物，其也可以聚合入地包含較少比例的無羧酸功能性的可聚合物質。不飽和羧酸同聚物的相對分子質量通常在3000 200，000的范圍內，共聚物在2000 200，000之間，優選30，000 120，000之間，均以游離酸計。特別優選的 烯酸_馬來酸共聚物的相對分子質量是30，000 100，000。常規的商業產品如 BASF公司的Sokalan TM CP 5，CP 10和PA 30。適宜地，較少選擇這樣一類化合物其是帶有乙烯基醚的丙烯酸和甲基丙烯酸的共聚物，所述乙烯基醚如乙烯基甲基醚、乙烯基酯、乙烯、丙烯或苯乙烯，其中酸的比例至少在50重量％。作為水溶性有機構建劑的物質還可以使用三元共聚物，其包含兩個不飽和酸和/或其鹽作為單體，第三單體是乙烯基醇和/或酯化的乙烯基醇或碳水化合物。第一酸單體及其鹽衍生自單乙烯不飽和C3-C8羧酸，優選C3-C4 單羧酸，特別是(甲基)丙烯酸。第二酸單體及其鹽可以是C4-C8 二羧酸，在此特別優選馬來酸的衍生物，和/或烯丙基磺酸的衍生物，其在2-位有烷基或芳基取代。這類聚合物通常具有相對分子質量介于1000 200，000。另外優選的共聚物是，其單體優選丙烯醛和丙烯酸/丙烯酸鹽或者醋酸乙烯酯。所述有機構建劑物質可以特別是用于制成液體制劑以水溶液形式，優選以30-50重量百分比的水溶液形式使用。所有提到的酸通常以它們的水溶性鹽的形式使用，特別是堿金屬鹽。這類有機構建劑物質可以按希望以用量在40重量％以內，尤其在25重量％以內， 優選1 8重量％包含。臨近所述上限值的用量優選以糊狀或液體，特別是含水的根據本發明的制劑使用。作為水溶性無機構建劑的物料尤其考慮堿金屬硅酸鹽、堿金屬碳酸鹽和堿金屬磷酸鹽，其可以其堿性、中性或酸性的鈉鹽或鉀鹽的形式存在。此處舉例如磷酸三鈉，二磷酸四鈉，二氫二磷酸二鈉，三磷酸五鈉，所謂的六偏磷酸鈉，低聚磷酸三鈉，其低聚度為5 1000，特別是5 50，及相應的鉀鹽或者鈉鹽與鉀鹽的混合物。作為非水溶性、水可分散的無機構建劑的物料尤其使用晶體或無定型的堿金屬鋁硅酸鹽，用量在50重量％以內，優選不超過40重量％，在液體制劑中特別是1 5重量％。其中晶體鋁硅酸鈉優選具有洗滌劑品質，特別是沸石的A型、P型和任選用X型，單獨或混合，例如A型和X型沸石的共晶形式 (Vegobond TM AX, Condea Augusta S. p. Α.的商品)。臨近所述上限值的用量優選在固
體、顆粒型制劑中使用。適宜的鋁硅酸鹽尤其不含粒徑大于30 μ m的顆粒，并且優選至少80 重量％的顆粒粒劑小于loym。其鈣束縛力(CalciumbindevermSgen)通常在每克 100 200mg CaO的范圍。所述鋁硅酸鹽的適宜的取代物或部分取代物是晶體堿金屬硅酸鹽，其可單獨存在或與無定型的硅酸鹽混合存在。在根據本發明的制劑中作為骨架物質所使用的堿金屬硅酸鹽優選具有堿金屬氧化物與SiO2的摩爾比小于0.95，特別是在1 1. 1至1 12， 并且可以無定型或晶體存在。優選的堿金屬硅酸鹽是硅酸鈉，特別是無定型的硅酸鈉， 具有Na2O SiO2的摩爾比為1 2至1 2.8。作為晶體硅酸鹽，其可以單獨存在或與無定型硅酸鹽以混合物存在，優選使用通式Na2Six02x+1 ·ΥΗ20的晶體片層硅酸鹽，其中χ(所謂的模量)的數值為1. 9 22，尤其是1. 9 4，y的數值為O 33，優選的數值對應χ為2、3或4。優選的晶體片層硅酸鹽是所述通式中χ的數值設定為2或3。特別優選β-或S-二硅酸鈉(Na2Si2O5 · yH20)。由無定型堿金屬硅酸鹽制造的、上述通式的實質上無水的晶體堿金屬硅酸鹽，其中χ數值為1. 9 2. 1，也可用于根據本發明的制劑中。在另一種根據本發明的制劑的優選實施形式中，使用具有2 3的模量的晶體片層硅酸鈉。具有1. 9 3. 5范圍模量的晶體硅酸鈉在根據本發明的制劑的其它優選實施形式中使用。符合上述式(I)的晶體片層狀硅酸鹽由Clariant以商品名Na-SKS出售，例如 Na-SKS-I (Na2Si22O45 · xH20, Kenyait)，Na-SKS-2 (Na2Sil4O29 · xH20, Magadiit)， Na-SKS-3 (Na2Si8O17 · χΗ20)或 Na-SKS-4 (Na2Si4O9 · xH20, Makat it)。其中主要適用的是 Na-SKS-5 ( α -Na2Si2O5)，Na-SKS-7 ( β -Na2Si2O5，Natrosilit)，Na-SKS-9 (Na2Si2O5 · 3H20,)， Na-SKS-10 (NaHSi2O5 · 3H20, Kanemit)，Na-SKS-ll(t-Na2Si205)和 Na-SKS-13 (NaHSi2O5)，尤其是Na-SKS-6( δ -Na2Si2O5)。在根據本發明的制劑的優選設計中，使用下列顆粒化合物選自晶體片層硅酸鹽和檸檬酸鹽，選自晶體片層硅酸鹽和如上所述的(共)聚合體多羧酸，或選自堿金屬硅酸鹽和堿金屬碳酸鹽，例如以名稱Nabl0n. TM 15商購可得的。 在根據本發明的制劑中，可任選以90重量％以內的用量包含構建劑物質。優選以 75重量％以內的用量包含。根據本發明的洗滌劑具有構建劑含量尤其為5 50重量％。 在用于清潔堅硬表面的根據本發明的制劑中，特別是用于機洗餐具，構建劑物質的含量尤其為5 88重量％，其中在這樣的制劑中優選不使用非水溶性構建劑物料。特別用于機洗餐具的根據本發明的制劑的優選實施形式是包含20 40重量％的水溶性有機構建劑(特別是堿金屬檸檬酸鹽)，5 15重量％的堿金屬碳酸鹽和20 40重量％的堿金屬二硅酸鹽。作為適宜的過氧化合物尤其考慮過氧化氫和在洗滌條件下釋放過氧化氫的無機鹽，其包括堿金屬的過硼酸鹽、過碳酸鹽、過硅酸鹽和/或過硫酸鹽如過一硫酸鹽 (Caroat)，也可以用有機過酸或有機酸的過酸鹽，如鄰苯二甲酰亞胺過己酸，過苯甲酸，二過十二烷二酸的鹽。如果使用固體過氧化合物，可以使用粉末或顆粒的形式，其原則上也可以按常規方法包裹。過氧化合物的用量優選50重量％以內，尤其是5 30重量％，特別優選8 25重量％。添加少量已知的漂白穩定劑例如膦酸鹽、硼酸鹽或者偏硼酸鹽和偏硅酸鹽以及諸如硫酸鎂的鎂鹽可以是有利的。作為漂白活化劑特別是使用化合物，其能夠在過水解的條件下得到優選具有1 10個碳原子尤其是2 4個碳原子的脂肪族過氧羧酸，和/或任選取代的過苯甲酸。作為適宜的物質，其0-和/或N-酰基具有所述的碳原子數和/或任選取代的苯甲酰基。優選多個酰基化的烷二胺，特別是四乙酰基乙二胺(TAED)，酰化的三嗪衍生物，特別是1，5_ 二乙酰基-2，4-二氧代六氫-1，3，5-三嗪(DADHT)，酰化的甘脲，特別是四乙酰基甘脲(TAGU)， N-酰亞胺，特別是N-壬酰基琥珀酰亞胺(NOSI)，酰化的酚磺酸鹽，特別是正壬酰或異壬酰氧基苯磺酸鹽(η-或iso-NOBS)，羧酸酐，特別是鄰苯二甲酸酐，酰化的多元醇，特別是三醋汀，乙二醇雙醋酸酯，2，5-二乙酰氧基-2，5-二氫呋喃和烯醇酯以及乙酰化的山梨醇和甘露醇，酰化的糖衍生物，特別是五乙酰基葡萄糖(PAG)，五乙酰基果糖，四乙酰基木糖和八乙酰基乳糖以及乙酰化的，任選N-烷基化的葡糖胺和葡糖酸內酯，和/或N-酰基化的內酰胺，例如N-苯甲酰基己內酰胺。也優選使用親水取代的酰基縮醛和酰基內酰胺。
這類漂白活化劑可以基于全部制劑以常規用量范圍包含，優選0. 5 10重量％， 特別是1 8重量％。添加于以上所列常用的漂白活化劑或取而代之還可包含磺酰亞胺和/ 或強化漂白的過渡金屬鹽或過渡金屬絡合物作為所謂的漂白催化劑。屬于為此考慮的過渡金屬化合物尤其是錳、鐵、鈷、釕或鉬-Salen絡合物及其已知的N-類似物，錳、鐵、鈷、釕或鉬的羰基絡合物，錳、鐵、鈷、釕、鉬、鈦、釩和銅與含氮的三齒配體的絡合物，鈷、鐵、銅和釕的胺絡合物。強化漂白的過渡金屬絡合物，特別是以Mn、Fe、Co、Cu、Mo、V、Ti和/或Ru為中心原子的，以常規用量，分別基于制劑的總量優選1重量％以內的用量，尤其是0. 0025 0. 25重量％和特別優選0. 01 0. 1重量％使用。此外，根據本發明的洗滌劑和清潔劑可以包含蛋白酶、另一種脂肪酶、淀粉酶和/ 或纖維素酶。為此所用的蛋白酶屬于由微生物尤其細菌或真菌可獲得的在堿性范圍具有最適PH的酶。根據本發明的制劑中蛋白酶的優選用量是，在成品制劑中100 7500PE/ g(每克蛋白酶單位按照iTenside 7,125(1970)中所述的方法確定)，尤其是125 5000PE/ g，特別優選150 4500PE/g。可用的蛋白酶是商購可得的，例如名為BLAP TM, Savinase TM, Esperase TM, Maxatase TM, Optimase TM, Alcalase TM, Durazym TM, Everlase TM, Maxap em◎&或 Purafect TM OxP0對于根據本發明的制劑可使用的淀粉酶，優選與至少另一種酶聯合使用，其屬于由細菌或真菌可獲得的酶，其最適PH優選在堿性范圍，最大約pH 10。可用的商品例如 Termamyl TM,Maxamyl TM,Duramyl TM 或 Purafect TM OxAm。淀粉酶在本發明的制劑中優選的使用量是成品制劑中0. 01 2KNU/g( “千Novo單位”每克，按Novo公司的標準方法， 其中IKNU是指5. 26g淀粉在pH 5. 6和37°C下分解所需的酶量，基于由S. P. Colowick的 P. Bernfeld 和 N. D. Kaplan 在 Methods in Enzymology，卷 1，1955，149 頁中所述的方法), 尤其是0. 015 1. 8KNU/g，特別優選0. 03 1. 6KNU/g。如果根據本發明的制劑包含淀粉酶，則選擇優選經基因工程修飾的淀粉酶。在根據本發明的制劑中任選地附加所包含的另一種脂肪酶涉及由微生物特別是細菌或真菌可獲得的酶。脂肪酶在根據本發明的制劑中的優選用量是成品制劑中脂解活性在10 10，000LU/g( “脂酶活性單元”每克，依照EP258068所述的方法經三丁酸甘油酯在 30°C和pH 7下酶促水解而確定)，尤其是80 50001U/g，特別優選100 1000LU/g。普通商品月旨肪醇例如 Lipolase TM, Lipomax TM, Lumafast TM 禾口 Lipozym TM。根據本發明可用的纖維素酶也同樣是由細菌或真菌可獲得的酶，其最適pH優選接近中性至弱堿性，pH范圍6 9. 5。在根據本發明的制劑中的優選用量是在成品制劑中纖維素分解活性在0.05 1.5IU/g( “國際單位”每克，基于對羧甲基纖維素鈉在pH 9.0 和40°C下酶促水解，如由S. Ito等在Agric. Biol. Chem. 53,1275(1989)中所描述的)，尤其是0. 07 1. 4IU/g，特別優選0. 1 1. 3IU/g。適用的商品例如制造商Novo Nordisk的 Celluzyme 或者 Kao 的 KAC TM。由于多種酶在根據本發明的制劑中使用，可以通過將兩種或多種分開的或者按已知方法分別生產的酶進行混合，或者通過將兩種或多種共同以一個顆粒生產的酶進行。作為在制劑中附加可使用的酶可以考慮選自如下類別角質酶、支鏈淀粉酶、半纖維素酶、氧化酶、漆酶和過氧化酶及其混合物。尤其適宜的是由真菌和細菌獲得的酶有效成分，所述真菌和細菌如枯草桿菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis)、遲緩芽孢桿菌(Bacillus lentus)、灰色鏈霉菌(Streptomyces griseus)、柔毛腐殖霉菌(Humicola lanuginosa)、特異腐殖霉菌(Humicola insolens)、假 /feMjix-^-Ifilii (Pseudomonas pseudoalcaligenes) >MjixIfilif (Pseudomonas cepacia) 或灰蓋鬼傘(Coprinus cinereus)。這些酶可以吸附到載體上和/或嵌入包裹物質中，以防其過早地失活。這些酶在根據本發明的洗滌劑和清潔劑中優選以5重量％以內，尤其是 0.2 4重量％的用量包含。對于根據本發明的制劑，尤其當其以液體或糊狀形式存在，除水之外可使用的有機溶劑包括具有1 4個碳原子的醇，特別是甲醇、乙醇、異丙醇和叔丁醇，具有2 4個碳原子的二醇，特別是乙二醇和丙二醇及其混合物，和衍生自所述化合物組的醚。這類水可混的溶劑在根據本發明的制劑中的優選用量不超過30重量％，尤其是6 20重量％。此外，所述制劑可以在洗滌劑和清潔劑中進一步含有常規成分。這種非必要成分包括特別是酶穩定劑、灰變抑制劑、染料轉移抑制劑、泡沫抑制劑和光學增亮劑以及染料和香料。為了起到針對銀蝕保護的作用，在根據本發明的餐具清潔劑中可以使用的銀緩蝕劑。 用于堅硬表面的本發明的清潔劑還可以另外包含磨砂作用成分，尤其廣泛選自石英粉、木屑、塑料粉、白堊和玻璃微球及其混合物。磨砂成分在根據本發明的清潔劑中優選含有不超過20重量％，尤其是5 15重量％。為了調節所期望的、不是通過其余組份的混合物自身產生的PH值，根據本發明的制劑包含體系相容性和環境相容性的酸，尤其是檸檬酸、乙酸、酒石酸、蘋果酸、乳酸、羥乙酸、琥珀酸、戊二酸和/或己二酸，但還有無機酸，尤其硫酸，或堿，特別是氫氧化銨或堿金屬氧化物。這類PH調節劑在根據本發明的制劑中優選以用量不超過20重量％，尤其是1.2
重量％ 17重量％含有。考慮用于根據本發明的紡織品洗滌劑中的染料轉移抑制劑尤其包括聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯咪唑、聚N-氧化物如聚(乙烯基吡啶N-氧化物)和乙烯基吡咯烷酮與乙烯基咪唑的共聚物。灰變抑制劑具有以下任務使從紡織品纖維上脫落的污物保持懸浮于溶液中。多數有機性質的水溶性膠體適于此目的，例如淀粉、動物膠、明膠、淀粉或纖維素的醚羧酸或醚磺酸的鹽或者纖維素或淀粉的酸性硫酸酯的鹽。含水溶性酸性基團的聚酰胺也適于此目的。此外可以使用不同于上述的淀粉衍生物，例如醛淀粉。優選使用纖維素醚，如羧甲基纖維素(鈉鹽)、甲基纖維素、羥烷基纖維素和混合醚，如甲基羥乙基纖維素、甲基羥丙基纖維素、甲基羧甲基纖維素及其混合物，例如基于制劑計，以用量0. 1 5重量％使用。為了增強清潔效果，根據本發明的洗滌劑尤其可以包含能去污的聚合物，所謂的去污聚合物(soil-release-Polymere)，其通常由羧酸單元和任選的聚合的二醇單元組成，例如含有對苯二甲酸乙二醇酯^thylenter印hthalat)和聚對苯二甲酸乙二醇酯 (Polyoxyethylenterephthalat)基團。在能去污的聚合物中可以含有其它單體單元，例如丙二醇、聚丙二醇、亞烷基-或亞烯基二羧酸、間苯二甲酸、羧基或磺基取代的鄰苯二甲酸異構體。還可以使用封端的衍生物，即既沒有游離的羥基也沒有游離的羧基而是帶有例如CV4烷基或被一元羧酸(例如苯甲酸或磺基苯甲酸)在末端酯化的聚合物。合適的還有聚酯，其除了氧化亞乙基或對苯二甲酸單元外，還含有1，2-亞丙基、1，2-亞丁基和/或 3-甲氧基_1，2亞丙基以及甘油單元，并且被C1-C4-烷基封端；由對苯二甲酸乙二醇酯和聚對苯二甲酸乙二醇酯組成的摩爾質量為900 9000的去污聚合物，其中聚乙二醇單元的摩爾重量為300 3000，且對苯二甲酸乙二醇酯與聚對苯二甲酸乙二醇酯酯的摩爾比為0. 6 0. 95 ；具有聚對苯二甲酸丙二醇酯和聚對苯二甲酸氧乙二醇酯單元、至少部分被 CV4烷基或酰基封端的聚酯；含有磺乙基封端的對苯二甲酸酯的去污聚酯；具有對苯二甲酸酯單元、烷二醇單元和聚-c2_4-乙二醇單元的通過不飽和端基的磺化制備的去污聚酯； 具有胺基、銨基團和/或氧化胺基團的陽離子去污聚酯和具有乙氧基化的、季銨化的嗎啉單元的陽離子去污聚酯。同樣合適的是由對苯二甲酸乙二醇酯和聚對苯二甲酸乙二醇酯組成的聚合物，其中聚乙二醇單元的摩爾重量為750-5000并且對苯二甲酸乙二醇酯與聚對苯二甲酸乙二醇酯的摩爾比為50 50 90 10，以及摩爾重量為15000-50000的由對苯二甲酸乙二醇酯和聚對苯二甲酸乙二醇酯組成的聚合物，其中聚乙二醇單元的摩爾重量為1000 10000并且對苯二甲酸乙二醇酯與聚對苯二甲酸乙二醇酯的摩爾比為2 1 6 1。根據本發明的紡織品洗滌劑包含二氨基芪二磺酸的衍生物或其堿金屬鹽做作為光學增亮劑。合適的是例如4，4'-雙(2-苯胺基-4-嗎啉代-1，3，5-三嗪基-6-氨基) 芪-2，2’ - 二磺酸的鹽或同類構造的 化合物，其帶有二乙醇氨基、甲氨基、苯胺基或2-甲氧基乙氨基以代替嗎啉基。此外，也可以存在經取代的二苯乙烯基類型的增亮劑，例如4， 4’-雙(2-磺基苯乙烯基)聯苯、4，4_雙(4-氯-3-磺基苯乙烯基)聯苯、或4-(4_氯苯乙烯基)-4’ -(2-磺基苯乙烯基)聯苯的堿金屬鹽。也可使用上述光學增亮劑的混合物。特別在用于機械方法中有利的是，在所述制劑中添加常規的泡沫抑制劑。作為泡沫抑制劑合適的是例如天然或合成來源的肥皂，其含有高比例的C18-C24脂肪酸。適宜的非表面活性劑類泡沫抑制劑是例如有機聚硅氧烷及其與超細的、任選硅烷化的硅酸以及石蠟、蠟、微晶蠟的混合物及其與硅烷化的硅酸或雙脂肪酸烷二酰胺的混合物。使用各種不同的泡沫抑制劑的混合物也是有利的，例如選自聚硅酮、石蠟或蠟的那些。優選的泡沫抑制劑尤其是含聚硅酮和/或石蠟的泡沫抑制劑，結合在顆粒狀的、水溶性或水可分散的載體物質上。特別優選石蠟與雙硬脂酸乙二酰胺的混合。根據本發明的固體制劑的制備可采用已知的方法進行，例如通過噴霧干燥或造粒，其中對酶和其它可能對熱敏感的內容物如漂白劑任選地稍后分開地添加。用于具有較高散重(尤其是在650 950g/L的范圍)的根據本發明的制劑的制備，優選是已知的具有擠出步驟的方法。另一種優選的借助造粒的方法描述于歐洲專利EP0642576。為了制備根據本發明的制劑的片劑形式，其可以是單相或多相、單色或多色且特別是由單層或多層優選兩層組成，優選將所有的成分一任選各一層一在攪拌機中彼此混合，并且該混合物料借助常規壓片方式例如偏心軸壓片或輪桿壓片壓制。特別是在多層片劑的情況下，有利的是至少有一層是預先壓制的。由此制備的片劑優選重量在10 50g，特別是15 40g。該片劑的空間形狀可以是任意的且可以是圓形、橢圓形或邊角形，也可以是中間體的形式。優選邊角是整圓的。圓形片劑優選具有直徑30 40mm。尤其角形或方形式樣片劑，其主要通過投料裝置例如洗碗機使用，該片劑的尺寸依賴于所述投料裝置的幾何結構和容積。示例性優選的實施形式具有(20 30mm) X (34 40mm)，特別是26X36mm 或24 X 38mm的基面。以包含在溶液中的常規溶劑的形式的根據本發明的液體或糊狀洗滌劑和清潔劑，通常通過內容物的簡單混合(其可以以物質或作為溶液給如一個自動混合器中)而制備。通過制備克隆本發明所用的葉綠素酶是根據文獻已知的antEnz酶命名 EC 3. 1.1. 1.14)，例如根據 Tsuchiya et al.，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96， 15362-15367(1999)。例如對于葉綠素酶已知的擬南芥(Arabidopsis thaliana) AT1G19670 或AT5G43860。半乳糖脂酶已知為EC 3. 1. 1. 26，CAS登記號37278_40_3。
實施例1.在大腸桿菌中葉綠素酶的重組表達將葉綠素酶的基因用聚合酶鏈式反應，由作為引物的具有寡核苷酸CitruS_CHL_ fwd_Ndel和Citrus_CHL_rev_Xhol的cDNA探針進行擴增。為了定向克隆入相應的表達載體，例如pET28a (Novagen)，可以將針對限制性核酸內切酶(Ndel和Biol)的識別序列同時構建在該寡核苷酸中。載體pET28a包含噬菌體T7啟動子體系，并編碼C端和/或N端的His 標簽(His-tag)。擴增的DNA用這兩個限制性核酸內切酶消化，并在瓊脂糖凝膠上分級并純化，其中從凝膠中切割相應的條帶并抽提。將該消化并用凝膠純化的PCR產物與用同樣的限制性核酸內切酶切割并與去磷酸化的表達載體連接。隨后可以將該連接的DNA用于電感受態大腸桿菌DHlOB(Invitrogen)的轉化。陽性轉化子可以通過菌落PCR(Kolonie-PCR)、 限制性分析和測序鑒定。為了表達葉綠素酶可以用含有經驗證的插入子的質粒克隆轉化大腸桿菌 Tuner (DE!3)pLacl (Novagen)。將培養物在37°C下在加入卡那霉素(50 μ g/mL)和氯霉素 (34yg/mL) WhYT培養基中培養。在光學密度約為0. 8時，通過添加ImM的異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導表達。隨后在30°C下繼續培養4到6小時。2.源自大腸桿菌的重組葉綠素酶的純化通過離心收集細胞并在含有500mM NaCl、20mM咪唑和0. 5mg/mL溶菌酶的20mM磷酸鈉緩沖液中(PH 7.4)重懸浮，并在室溫下溫育。通過三次在液氮下冷凍并接著在約42°C 再解凍或通過超聲進行細胞破碎。將反應物料離心，其中葉綠素酶作為溶解的蛋白存在于上清液中。隨后將葉綠素酶通過金屬親和色譜進一步純化。為此將金屬親和基質用含有 500mM NaCl、20mM咪唑和10%甘油的20mM磷酸鈉緩沖液(pH 8)平衡，在樣品施加后，將基質用上述的緩沖液洗滌并隨后將葉綠素酶用含有500mM NaCl、250mM咪唑和10%甘油的 20mM磷酸鈉緩沖液(pH 8)洗脫。3.葉綠素酶活性測試所表達的葉綠素酶的活性根據相應的反應產物葉綠素酯提高的水溶性來確定。該反應在100 μ L反應物料中實施，該反應物料包括100 μ M取自菠菜(Fluka)的葉綠素、20% 丙酮(ν/ν)和IOOmM Na-MOPSpH 7.0。反應物料于37°C，在振蕩下溫育60分鐘，然后添加 50 μ L丙酮、50 μ L正己烷和5 μ L TriS-鹽酸QM ；pH 9. 0)使反應結束。將混合物通過劇烈振蕩來良好勻漿，然后通過兩分鐘離心加速分相。通過葉綠素酶的反應，水溶性的葉綠素酯存在于下層水相而沒有反應的葉綠素存在于上層有機相。為了定量，在80 μ L水相中混入120 μ L甲醇，并測定受激葉綠素酯的熒光(Ex 355nm ；Em 660nm)。生成的葉綠素酯的量通過標準校正曲線確定。4.在巴斯德畢赤酵母中半乳糖脂酶的重組表達
將側翼有限制性核酸內切酶Kpnl和Pagl的識別位點的人胰脂酶相關蛋白2、半乳糖脂酶的合成的基因表達盒克隆入畢赤酵母表達載體如PGKl或pGAPZa中。為此，不僅將該合成的基因，而且將隨后還被去磷酸化的相應的表達載體用限制性核酸內切酶根據廠商說明進行消化。將消化的核酸在瓊脂糖凝膠電泳上根據大小分級并純化，然后用T4DNA連接酶根據廠商說明進行連接。該連接的DNA隨后用于電感受態的大腸桿菌DHlOB的轉化。 陽性轉化子通過菌落PCR、限制性分析和測序鑒定。為了表達脂肪酶，用經驗證的質粒克隆轉化巴斯德畢赤酵母。在加入三丁酸甘油酯的YPD平板上在活性的脂肪酶分泌的情況下根據暈圈檢測表達。隨后將具有脂肪酶活性的液體培養物加入具有博萊霉素(ZeOCin，100yg/L)的YPD培養基中。將培養物在30°C在振蕩下溫育48至72小時。然后將細胞從存在脂肪酶的培養上清液中通過離心分離。將培養上清液通過透析脫鹽并通過凍干濃縮。5.脂肪酶活性測試通過在ρ-硝基苯基丁酸酯pNP-C4或ρ-硝基苯基辛酸酯ρΝΡ-CS水解期間在 405nm下消光的增加來跟蹤脂肪酶的活性。該反應在ImL反應物料中進行，該反應物料包括2mM ρ-硝基苯酯，50mM磷酸鉀緩沖液(pH 8)和0. Triton X-100。405nm下消光的增加在至少1分鐘的時間段內持續跟蹤。借助于P-硝基苯酚的消光系數ε (ρΝΡ,4ο5 ,ρΗ8)= 16. OSmr1CnT1的增加計算出體積活性。一個單位對應于在上述測試反應物料中在22°C下在一分鐘內催化釋放ι μ mol P-硝基苯酚的酶量。6.從葉綠體中釋放葉綠素酯的測定從菠菜葉分離用于該檢測的葉綠體。為此將新鮮的菠菜葉用海沙在研缽中磨碎， 并用50mM磷酸鈣緩沖液pH8和0. 33M蔗糖在研缽中勻漿。將懸液用八層紗布過濾并將細胞碎片以及剩余的沙子在200Xg離心1分鐘去除。隨后將上清液中的葉綠體在IOOOXg離心10分鐘沉淀。將葉綠體沉淀重懸浮于具有2mM EDTAUmM MgCl2和0. 33M山梨醇的50mM HEPES pH 7. 6中。通過測定在652nm下在80%丙酮中具有ε =34.51 g—cnT1的消光來確定葉綠體含量。借助于反應產物提高的水溶性確定從葉綠體中釋放的葉綠素酯。將相應于10 μ g 葉綠素含量的葉綠體在150 μ L的反應物料中在40°C下溫育60分鐘，該反應物料含有具有不同量的葉綠素酶(例如250ng)和/或脂肪酶(例如5U pNP-C4)的50mM磷酸鈣緩沖液 PH 8。隨后將葉綠體沉淀并確定上清液中釋放的葉綠素酯。通過檢測652nm下的消光或通過檢測60%甲醇中的熒光(Em 355nm ；Ex 655nm)進行葉綠素酯確定。結果
權利要求
1.洗滌劑和清潔劑，其包含葉綠素酶和另一種水解酶。
2.根據權利要求1的洗滌劑和清潔劑，其特征在于，所述水解酶是脂肪酶。
3.根據權利要求1的洗滌劑和清潔劑，其特征在于，所述水解酶是半乳糖脂酶。
4.根據權利要求1的洗滌劑和清潔劑，其特征在于，其每克含有0.OOOlmg至IOmg的葉綠素酶，和0. OOOlmg至IOmg的水解酶。
5.根據權利要求1的洗滌劑和清潔劑，其特征在于，其還含有蛋白酶。
6.根據權利要求1的洗滌劑和清潔劑，其特征在于，其還含有淀粉酶。
7.根據權利要求1-6中一項或多項的洗滌劑和清潔劑的用途，用于去除含葉綠素的污
全文摘要
本發明涉及洗滌劑和清潔劑，其包含由葉綠素酶與另一種水解酶，優選脂肪酶，特別是半乳糖脂酶組成的組合。由葉綠素酶與半乳糖脂酶構成的組合與這兩種酶的分別各自單獨使用相比改善了去污能力，特別是對于含葉綠素的污漬。
文檔編號C11D3/386GK102159697SQ200980118617
公開日2011年8月17日 申請日期2009年5月12日 優先權日2008年5月17日
發明者G·瑞恩哈茲, H·J·楚爾茲, M·斯特魯哈拉, R·克扎加, T·格瑞尼爾-斯托弗爾 申請人:科萊恩金融(Bvi)有限公司