專利名稱：從葛藤中提取分離異黃酮的方法
技術領域：
本發明涉及一種從葛藤中提取分離異黃酮的方法。
背景技術：
葛藤和葛根同樣含有豐富的異黃酮類化合物，主要有效成分為葛根素，大豆苷和大豆苷元。近年來，國內外有大量的文獻報道了其有效成分的藥理作用。葛根素和大豆苷已作為原料制成藥品，在臨床上得到廣泛的使用，葛根素用于治療心絞痛、高血壓、心肌梗塞、心率失常、高粘血癥的疾病；大豆苷元對官狀動脈和腦動脈有擴張作用，對抑制癌細胞、抗衰老也有重要療效。尤其是，目前葛根素已成為各級醫院心腦血管治療用藥的首選藥物之一；葛根異黃酮在國內主要為二、三、四類心腦血管系統新藥的原料藥；像東南亞，日本，北美等地區和國家對高含量的葛根素需求旺盛。
目前，我國對葛根異黃酮的提取往往停留在對葛根塊根的提取上，忽略了對在含有豐富異黃酮的葛藤的提取。而分離葛根有效成分主要通過水提和醇提兩種方法。醇提法分為加熱回流提取、冷浸提取和滲漉提取等方法，得到的葛根總異黃酮通過層析分離得到葛根素產品。這些工藝主要存在的問題是操作周期長，提取效率不高，得到的葛根素產品含量普遍偏低，且提取過程中用到正丁醇、乙酸乙酯等有機溶劑，導致溶劑殘留問題的不易解決。
發明內容針對國內對葛資源利用不合理的現狀，本發明目的在于提供一種高效提取葛藤中有效成分的方法。本發明所采用的技術方案是
一種從葛藤中提取分離異黃酮的方法，包括以下步驟將葛藤粉碎至60～150目，置于液體動態連續逆流提取裝置中醇提，合并提取液；將提取液過濾，濾液濃縮得到總異黃酮提取物；分離總異黃酮提取物得到葛根素和大豆苷元。
上述的分離總異黃酮提取物的方法優選按如下步驟進行總異黃酮提取物上30～60目的聚酰胺柱，以水和25～95％的乙醇洗脫，分別收集含有葛根素和大豆苷元的洗脫液；將得到的各洗脫液濃縮后重結晶，得到葛根素和大豆苷元。
進一步，所述的從葛藤中提取分離異黃酮的方法，優選按以下步驟進行(1)將葛藤進行超細粉碎，得到60～150目的粉末；(2)葛藤細粉置入液體動態連續逆流提取裝置中，以60～95％的乙醇作為提取溶劑，在30～75℃的提取溫度下，提取2～4次，每次提取的固液比為1∶1～3，總提取時間為0.5～4小時；(3)將提取液過濾，減壓濃縮得到總異黃酮；(4)總異黃酮上30～60目的聚酰胺柱，以水和25～95％的乙醇洗脫，分別收集富含葛根素和大豆苷元的洗脫液；(5)將得到的各洗脫液濃縮后重結晶，得到葛根素和大豆苷元。
所述的步驟(1)中，葛藤可以先進行粗粉碎，再進行超細粉碎。
作為提高本發明所述葛藤提取物的純度的一種方法，本發明還推薦將步驟(4)得到的洗脫液進行二次層析，如將步驟(4)得到的各洗脫液濃縮后再分別上60～200目的聚酰胺柱以25～95％的乙醇梯度洗脫，得到的洗脫餾分用于步驟(5)。
所述的液體動態連續逆流提取裝置優選為多個提取裝置串聯或并聯或串并聯合用。利用液體動態連續逆流提取技術，將葛藤粉末放在提取裝置中，通過循環的提取液不斷地將有效成分提取出來，大大縮短了提取周期和溶劑的用量。
作為對本發明的優選，所述的步驟(2)的提取液還可以進行重復提取以進行套用，如用二次提取液提取新葛藤粉末，三次提取液提取一次提取過的葛藤，依次類推。
所述的液體動態連續逆流提取優取按如下工藝條件進行在60℃的提取溫度下，以95％的乙醇作為提取溶劑，每次提取的固液比為1∶3，提取3次，總提取時間為4小時。或者在45℃的提取溫度下，以70％的乙醇作為提取溶劑，每次提取的固液比為1∶3，提取3遍，總提取時間為3小時。
通過超細粉碎技術和液體動態連續逆流提取技術得到葛根異黃酮的提取率為85～95％，層析分離得到的葛根素和大豆苷元的含量達到90％以上，經重結晶得到的產品含量達到98％以上。
本發明所述的從葛藤中提取分離異黃酮的方法充分利用了葛資源，其經濟效益、社會效益顯著，生態環境效果巨大。本工藝流程簡單，設計方法合理，提取效率高，提取周期短，總溶劑消耗少，得到的產品純度高，十分利于工業化生產。
具體實施方式
下面結合具體實施例對本發明作進一步說明，但本發明的保護范圍并不限于此。
實施例1稱取干葛藤2kg，將葛藤進行粗、細兩次粉碎，得到60～100目的粉末，在60℃的提取溫度下，以95％的乙醇作為提取溶劑，每次提取的固液比為1∶2.5，提取3遍，總提取時間為4小時，分別為第一次2小時，第二次、第三次各為1小時。合并提取液，過濾并減壓濃縮得到總異黃酮，提取率為90％。
總異黃酮上30～60目的聚酰胺柱，以水和25～95％的乙醇梯度洗脫。首先，以水洗脫，TLC跟蹤。等到有餾分剛出來后，改換以25％的乙醇(V/V)溶液洗脫。將洗脫液的濃度逐漸提高，等葛根素基本洗脫完畢后再增加洗脫液的濃度至45％直到提高到95％。分別收集富含葛根素和大豆苷元的洗脫液，濃縮各洗脫液；將各洗脫液分別上100～200目的聚酰胺柱以25～95％的乙醇梯度進行二次梯度洗脫，得到的二次洗脫液濃縮得到含量為葛根素91％和大豆苷元92％(HPLC測定)。重結晶后分別為葛根素98％(重結晶溶劑，醋酸∶甲醇＝1∶1)和大豆苷元99％(甲醇)。
實施例2稱取干葛藤2kg，將葛藤進行粗、細兩次粉碎，得到100～150目的粉末，在45℃的提取溫度下，以70％的乙醇作為提取溶劑，每次提取的固液比為1∶3，提取3遍，總提取時間為3小時，每次提取時間為1小時。合并提取液，過濾并減壓濃縮得到總異黃酮，提取率為86％。
總異黃酮上30～60目的聚酰胺柱，以水和25～95％的乙醇梯度洗脫，首先，以水洗脫，TLC跟蹤。等到有餾分剛出來后，改換以25％的乙醇(V/V)溶液洗脫。依次將洗脫液的濃度逐漸提高，等葛根素基本洗脫完畢后再增加洗脫液的濃度至55％直到提高到95％。分別收集富含葛根素和大豆苷元的洗脫液，濃縮洗脫液；將各洗脫液分別上60～100目的聚酰胺柱以35～95％的乙醇梯度進行二次梯度洗脫，得到二次的洗脫液濃縮得到含量為葛根素92％和大豆苷元93％(HPLC測定)。重結晶后分別為葛根素99％(重結晶溶劑，醋酸∶甲醇＝1∶1)和大豆苷元99％。
權利要求
1.一種從葛藤中提取分離異黃酮的方法，其特征在于包括以下步驟將葛藤粉碎至60～150目，置于液體動態連續逆流提取裝置中醇提，合并提取液；將提取液過濾，濾液濃縮得到總異黃酮提取物；分離總異黃酮提取物得到葛根素和大豆苷元。
2.根據權利要求1所述的從葛藤中提取分離異黃酮的方法，其特征在于所述的分離總異黃酮提取物按如下步驟進行總異黃酮提取物上30～60目的聚酰胺柱，以水和25～95％的乙醇洗脫，分別收集含有葛根素和大豆苷元的洗脫液；將得到的各洗脫液濃縮后重結晶，得到葛根素和大豆苷元。
3.根據權利要求2所述的從葛藤中提取分離異黃酮的方法，其特征在于包括以下步驟(1)將葛藤進行超細粉碎，得到60～150目的粉末；(2)葛藤細粉置入液體動態連續逆流提取裝置中，以60～95％的乙醇作為提取溶劑，在30～75℃的提取溫度下，提取2～4次，每次提取的固液比為1∶1～3，總提取時間為0.5～4小時，合并提取液；(3)將提取液過濾，濾液減壓濃縮得到總異黃酮提取物；(4)總異黃酮提取物上30～60目的聚酰胺柱，以水和25～95％的乙醇梯度洗脫，分別收集含有葛根素和大豆苷元的洗脫液；(5)將得到的各洗脫液濃縮后重結晶，得到葛根素和大豆苷元。
4.根據權利要求3所述的從葛藤中提取分離異黃酮的方法，其特征在于所述步驟(4)得到的各洗脫液濃縮后分別上60～200目的聚酰胺柱以25～95％的乙醇梯度洗脫，得到的洗脫液用于步驟(5)。
5.根據權利要求3所述的從葛藤中提取分離異黃酮的方法，其特征在于所述的液體動態連續逆流提取裝置為多個提取裝置串聯或并聯或串并聯合用。
6.根據權利要求3所述的從葛藤中提取分離異黃酮的方法，其特征在于所述的步驟(2)中在60℃的提取溫度下，以95％的乙醇作為提取溶劑，每次提取的固液比為1∶3，提取3次，總提取時間為4小時。
7.根據權利要求3所述的從葛藤中提取分離異黃酮的方法，其特征在于所述的步驟(2)中在45℃的提取溫度下，以70％的乙醇作為提取溶劑，每次提取的固液比為1∶3，提取3次，總提取時間為3小時。
全文摘要
本發明公開了一種從葛藤中提取分離異黃酮的方法，包括以下步驟將葛藤粉碎至60～150目，置于液體動態連續逆流提取裝置中醇提，合并提取液；將提取液過濾，濾液濃縮得到總異黃酮提取物；分離總異黃酮提取物得到葛根素和大豆苷元。本發明所述的從葛藤中提取分離異黃酮的方法充分利用了葛資源，其經濟效益、社會效益顯著，生態環境效果巨大。本工藝流程簡單，設計方法合理，提取效率高，提取周期短，總溶劑消耗少，得到的產品純度高，十分利于工業化生產。
文檔編號C07D311/00GK1769278SQ20041006772
公開日2006年5月10日 申請日期2004年10月28日 優先權日2004年10月28日
發明者蘇為科, 李堅軍 申請人:浙江工業大學