專利名稱：：治療血管相關疾病的包含肽的藥物組合物的制作方法
技術領域：
：本發明涉及治療水腫、缺血和血管相關疾病的化合物，該化合物通過穩定血管壁以形成和維持新血管，從而防止血液滲漏并幫助正常血管生長。更具體地，本發明涉及能夠用作治療血管相關疾病治療劑的組合物，該組合物通過利用含有堿性氨基酸-Gly-Asp序列的肽和/或干細胞形成和維持正常血管，從而防止血液;參漏。
背景技術：
：作為血管疾病之一的缺血也被稱為局部缺血，在局部缺血中，供給到組織的血液因血管狹窄、收縮、血栓、栓塞等原因被止住而導致細胞損傷。1961年，據Majno和Palade報告，血液滲漏是由于由組織胺、緩激肽和5-羥色胺引起的炎癥導致小靜脈血管的內皮細胞之間形成間隙造成的。是(MajnoG.,PaladeG.E.,生物物理學和生物化學細胞學雜志(J.所op/^.Cytol.)11:571-605(1961);MajnoG.，PaladeG.E.,SchoeflG.I"J.C>tol.11:607-625(1961)。已知血管內皮細胞之間的間隙是在暴露于炎癥誘導劑以及各種細胞因子(ClaudioL.等"丄W/"組70:850-861(1994);WuN.Z"BaldwinA.LAm.生理學雜志U尸—z.o/).262:H1238陽1247(1992))、蛋白酶(VolklK,P.，DierichsR.血栓研究(77zram6.)42:11-20(1986))、輕微灼傷(CloughG.等，J尸/z;^'o/.395:99-114(1988))之后產生的。在不同種類的癌癥中也發現了這種現象(HobbsS.K.等，美國國家科學院院刊(尸rac.Ato/.JcW.L/iSJ)95:4607-4612(1998);RobertsW.G.等，美國病理學雜志(^m./i^Ao/.)153:807-830(1998);NishioS.等，神經病理學學報(Jcto.7Ve腳—o/).(Berl)59:1-10(1983)。除癌癥之外，這種現象在人哮喘病(LaitinenA.，LaitieneL.A.過敏進展(AllergyProc).15:323-328(1994))、色素性蕁麻滲(LudatscerR.M.Microrasc.Res.31:345-355(1986))、風濕病(SchumacherH.R.Jr.紐約科學院院報(Ann.N.Y.Acad.Sci.)256:39-64(1975))等病癥中也有體現。戽管具有各種特征，例如在慢性炎癥的情況下，與血管變化相關的特征包括血管舒張和血管生成。這時，人們發現血管的形狀變成畸形，它具有異常特征而非正常特征，以及血管的直徑增加，同時在鼠慢性氣管炎癥模型中，對血管假性血友病因子和P-選擇蛋白(血小板選擇蛋白)的免疫反應提高。如上所述揭示出，與正常小鼠的血管相比，畸形血管對免疫介質的反應能力較差。為此，為了開發出能夠抑制或減慢異常血管生長或血液滲漏的物質，人們做出了很多努力。據報道，合成肽麥斯蒂辛斯(mystixins)能夠抑制血漿滲漏不阻止血管內皮細胞中的間隙形成(BlaukP.等，藥理學與實驗治療學雜志(J.Pharmacol.Exp.Ther.),284:693-699(1998))。同樣，如果血管內皮細胞中的間隙形成得到抑制，P-2-腎上腺素能受體激動劑福莫特羅減少血液滲漏(BlaukP.和McDonaldD.M.,^m.JP/z^z.o/,266:L461曙468(1994))。已經有很多嘗試來開發引起血管形態變化的物質，血管生成素是其中關注的焦點物質之一。血管生成素-1具有穩定血管的功能(ThurstonG.等，天然藥物(Ato.MW).6(4):460-3(2000))，并能夠使血管內皮生長因子的血管生成穩定化，因此能抑制血液滲漏。已報道這一機理用于治療包括慢性糖尿病中因外周血管疾病引起的視網膜病、因血管發育異常而導致的早產兒視網膜病等(JoussenA.M.等，Am.J.Pathol.160(5):1683-93(2002))的疾病。然而，重組血管生成素-1因其存在諸如穩定性、可溶性等問題而不能直接用于疾病治療，因此，人們已把努力開發具有血管生成素-1活性的取代物作為另一種選擇(KohG.Y.等，實驗與分子病理學(Exp.Mo/.MW).34(1):1-11(2002))。近年來，人們已知通過激活血小板以釋放血管生成素-1可以穩定血管形成中新生的血管(Huang等，血液(Blood)95:1993-1999(2000))。而且，據報道，凝血酶與激活血小板以/人血小板中釋放血管生成素-1有關(Li等，血栓與止血學(7Tzra附.//^mos)/.85:204-206(2001))。然而，凝血酶不僅能釋放出血管生成素-l來穩定血管，而且它還是伴隨血小板凝固現象的一部分。所以，使用凝血酶來控制血管生成素-1的釋放是很困難的，并且預計可能會存在因血液凝固而產生的副作用。此外，人們一直致力于尋找誘導生成血管生成素-1的化合物，但是現有技術中卻沒有這種化合物的報道。和MichaelS.G.前列腺(尸mtote)39:108-118(1999);YoheiM.等，生物化學雜志(/0/所0/0g/ca/C/7em/W7)276:3:31959-31968(2001))。據報道，當含有RGD基序和KGD基序的肽與血管內皮細胞的avp3整聯蛋白結合時，就會出現上述效應(PasqualiniR.等，天然生物化學(A^.5z'o&c/z"o/).15(6):542-6(1997))。通常，整聯蛋白是血管內皮細胞生長必需的細胞與細胞間或細胞與底物間介質(BrianREliceiri,環境研究(C7m).89:1104-1100(2001))。所以，與整聯蛋白結合以抑制其作用的解聚素含有構成纖維蛋白原主要結構基序之一的RGD或KGD基序。為此，出現了很多嘗試關于有多少含有RGD和KGD序列的肽的研究，所述肽結合整聯蛋白以通過中斷血管內皮細胞的生長遷移而抑制血管生成。此外，如在國際專利公開No.W095/25543(1995)中所公開的，組織中的血管生成需要整聯蛋白av|33,并且抑制血管形成的含RGD和KGD基序的肽用于抑制血管形成，因此通過抑制新血管的形成和消滅新形成的血管而阻斷血液供給。美國專利No.5,766,591(1998)揭示了利用包含RGD和KGD基序的肽作為整聯蛋白avP3的拮抗劑抑制血管形成可以抑制實體癌的生長。近年來，為了治療心臟疾病，已經嘗試研發能夠通過以纖維蛋白原作為配體結合整聯蛋白中的allb|33并抑制整聯蛋白的抑制劑(Topol等，Lancet353:227-231(1999);Lefkovits等，新英格蘭醫藥雜志(N.Eng.J.Med).23:15530-1559(1995);CollerBS臨床研究雜志(J.Clin.Invest).99:1467-1471))。然而，據報道這些嘗試都沒有獲得成功(OtNeill等，N.Eng.J.Med.342:1316-1324(2000);Cannon等，循環(Circulation)102:149-156(2000))。這也是含有RGD和KGD基序的肽能夠以濃度依賴方式激活整聯蛋白以誘導激活血小板，以及能和現有的整聯蛋白結合以抑制整聯蛋白活化的原因(Karlheinz等，Throm.Res.103:S21-27(2001);Karlheinz等，Blood92(9):3240-3249(1998))。整聯蛋白中存在誘導配體的結合位點(Ligand-inducedbindingsite,LIBS)。這時，如果所述RGD和KGD肽與整聯蛋白結合，就會誘導整聯蛋白構象發生變化并暴露LIBS,接著配體就與暴露的LIBS相結合從而激活血小板(Leisner等，生物化學雜志(J.Biol.Chem).274:12945-12949(1999))。據報道所述血小板的激活能夠在低濃度而非高濃度的條件下得到誘導。如果RGD和KGD基序能夠以這種方式穩定血小板，在血小板激活過程中分泌的細胞因子(例如，血管生成素-l)可能有助于增加和穩定而非抑制血管形成。本發明中，得到了非常不同的結果，含RGD和KGD基序的肽并非如上文所述通過抑制和消滅新生血管來抑制血液供給，而是通過促成正常血管的形成和穩定已生成的血管來抑制血液滲漏，因此有利于血液供給。經證實，含有RGD和KGD基序的肽不能有效地通過直接與整聯蛋白反應而抑制血管生成，但是它卻能有效地治療和預防損傷(injury)、燒傷、褥瘡和慢性潰瘍，同時還能預防血液滲漏以治療眼內疾病如糖尿病性視網膜病、早產兒視網膜病、年齡相關性黃斑變性等，它對血管的形成和穩定也很有效，同時含RGD和KGD基序的肽在次級反應中抑制異常的血管形成。而且，在脫發或灰發癥(trich叩oliosis)的情況下，與血管接觸的毛嚢負責形成組成頭發的髓質、皮質、角質層。這時，如果由于異常血管中的血液滲漏導致不能促成平穩提供給毛嚢的血液供給，那么毛嚢，即毛發就不會形成，同樣由于不能在組成毛干的毛根細胞中正常形成黑素體而導致毛色變白的灰發癥。可以預料，由于其能夠通過穩定血管形成來抑制血液滲漏繼而促進血液供給，本發明提供的組合物還能夠有效地預防和治療這些病癥。另外，可以預料該組合物能夠同樣有效地預防和治療與肥胖相關的心血管疾病，同樣也是用于人造皮膚和移植、局部缺血的血管治療劑。作為另外一種選擇，有一種方法能夠促進正常新血管在血管損失階段生成，并能夠預防隨后階段出現的疾病。在這種方法中，已經有使用干細胞治療眼血管疾病的嘗試。已知骨髓包含可以形成新血管內皮前體細胞(EPCs),并且據報道當為了促進視網膜血管生成而施用骨髓來源的造血干細胞(HSCs)時，其能充當內皮前體細胞的角色(GrantM.B.等，Mm/M8:607-612(2002))。內皮前體細胞可以分化成同血管發生有關的循環EPCs(cEPCs)。另夕卜，據報道造血干細胞(heamatopoieticstemcells,HCSs)、造血祖細胞(HPCs)等均與新血管的形成和維持有關(RafiiS.等，MW.9:7027-712(2003))。據報道為了治療目的通過將骨髓來源的造血干細胞施用至小鼠眼中的玻璃體腔內，造血干細胞可以充當祖細胞用于形成視網膜血管(OtaniA.等，Atoww9:1004-1010(2002))。除造血干細胞之外，也報道了各種類型的干細胞，諸如胚胎干細胞、間充質干細胞等。在自體移植中，造血干細胞不會引起免疫排異反應，但在同種異基因移植或異種移植中，它會引起免疫排異反應。因此，上述方法中的問題仍有待解決。
發明內容因此，本發明就是為解決現有技術中的這些問題而設計的，因此，它的目的就是提供一種能利用含有特定序列的肽誘導正常血管生成的治療劑。為了完成上述目的，本發明提供了能夠治療水腫和/或血管相關疾病的包含含有Xaa-Gly-Asp序列的肽作為有效成分的藥物組合物。根據本發明，所述肽中的氨基酸Xaa優選為精氨酸或賴氨酸，并且肽的序列最優選是SEQIDNO:1或SEQIDNO:2所列的序列。根據本發明，所述肽序列也包括選自從SEQIDNO:4，以及SEQIDNO:6到SEQIDNO:10所組成的組中的一個肽序列。中糖尿病視網膜病、早產兒視網膜病變、老年性黃斑變性、青光眼、糖尿病足潰瘍、肺動脈高壓、缺血性心肌病(ischemicmyocardium)、缺血性腦病、皮瓣(skinflap)存活、心力衰竭、急性后肢缺血、損傷、灼傷、褥瘡、慢性潰瘍、脫發或正常毛細血管形成條件下的灰發癥、肥胖相關的心血管疾病、用于人工皮膚和移植的血管治療劑和局部缺血。還可以預料包含RGD和KGD基序的肽能夠有效治療脫發或正常毛細血管形成中的灰發癥或肥胖相關的心血管疾病，而且還可有效治愈因水腫及局部缺血或燒傷造成的損傷，同時可以治療和預防褥掩和慢性潰瘍。另外，本發明中的肽還可以誘導血管生成素-1的分泌。同樣，據報道在單側輸尿管梗塞模型(UUO)中，作為改良的血管生成素-1的COMP-Angl具有保護腎的血管內皮細胞以抑制炎癥，爿t人而阻止單核細胞或巨噬細胞的浸潤作用，而且還具有通過減少組織中TGF-(31的數量來抑制Smad2/3磷酸化和激活Smad7以減輕腎纖維化的作用(Kim等，美國腎病學會雜志(/爿m.5bc.iVep/zra/.)17:2474-2483(2006))。已經揭示血管生成素-1可被用作能特異性地對腎纖維化中的血管內皮細胞做出反應以治療腎疾病的治療劑。依據本發明，認為含有RGD或KGD基序的多肽可以通過間接誘導體內血管生成素-1的釋放用于治療腎疾病。本發明的包含序列Xaa-Gly-Asp的多肽可以單獨使用，但是如果與VEGF(Benest等，微循環(M/crac/rcw/加'ow)13:423-437(2006))或bFGF聯合使用，將更有效。此外，本發明提供了用于治療血管相關疾病的藥物組合物，該組合物除了所述肽之外還包含干細胞。根據本發明，干細胞優選是至少具有分化成血管內皮細胞能力的干細胞，例如胚胎干細胞、間充質干細胞和造血干細胞。選自由肺動脈高壓、局部缺血心肌病、皮瓣存活、心力衰竭、急性后月支局部缺血、眼部疾病所組成的組中。本發明中描述的具有治療諸如局部缺血的疾病能力的肽包括含有序列Xaa-Gly-Asp的肽或其片段或其具有相同功能的衍生物，并且，如果用干細胞來治療所述疾病，那么優選所述干細胞和含有序列Xaa-Gly-Asp的多肽一起4吏用。能夠用本發明的蛋白質和干細胞治療或預防的血管生成相關疾病優選是利用誘導血管生成素-1的分泌穩定新生血管的治療^L制治療的疾病，這些疾病選自由肺動脈高壓(AnnThoracSurg20042月77(2)449-56)、心肌缺血(與VEGF;BiochemBiophysResCommun.200310月24;310(3):1002-9)、皮瓣存活(顯微外科手術(Microsurgery.)2003;23(4):374-80)、心力衰竭(冷泉港定量生物學會議錄(ColdSpringHarbSympQuantBiol)2002;67:417-27)、急性后肢缺血(與血管內皮生長因子(VEGF);生命科學(LifeSci)20036月20;73(5):563-79)等所組成的組中，更優選眼部疾病。適用本發明治療的眼部疾病具體是早產兒^L網膜病、糖尿病^L網膜病、青光眼等。本發明藥學可用的組合物包含例如可用的稀釋液、添加劑或載體。本發明的藥的組織或器官中的藥學可用的組合物。由于肽和/或蛋白質可能含有酸性和/或堿性的末端和/或側鏈，所以本發明的藥物組合物可以包含以游離酸或游離堿或藥學上可用的鹽形式存在的肽和/或蛋白質。藥學上可用的鹽可能含有合適的能與本發明中的肽和/或蛋白質形成堿的酸，所述合適的酸選自由無機酸和有機酸所組成的組中，其中無機酸諸如鹽酸、氳溴酸、高氯酸、硝酸、硫氰酸、硫酸、磷酸及它們的衍生物；有機酸有曱酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、丁二酸、順丁烯二酸、反丁烯二酸、鄰氨基苯曱酸(anthranilicacid)、肉桂酸、萘磺酸、磺胺酸及它們的衍生物。與目標蛋白質形成堿的合適的堿例如包括無機堿和有機堿；所述無機堿諸如氫氧化鈉、氫氧化銨、氳氧化鉀及它們的衍生物；所述有機堿諸如單、二和三烷基胺(例如三乙胺、二異丙胺、甲胺、二曱胺及它們的衍生物)和任選取代的乙醇胺(例如乙醇胺、二乙醇胺及它們的衍生物)。所述藥物組合物可以以各種途徑給藥，包括但不局限于腸胃外、腸、局部的給藥或吸入。腸胃外給藥是指任何不經過消化道的給藥，包括但不局限于注射液(即下文描述的靜脈內、肌內和其他注射方式)。腸內給藥就是用于腸胃外給藥的任何給藥方式，它包括但不局限于片劑、膠嚢、口服溶液、混懸液、噴霧劑及它們的衍生物。為此，腸內給藥途徑指經直腸和陰道的給藥。局部給藥途徑包括但又不局限于乳劑、軟膏、凝膠劑和腸胃外帖劑(parenteralpatches)的任何給藥方式(也可參見雷氏藥學大全(Remington'sPharmaceuticalSciences),第18版，Gennaro,等，馬克印刷公司，伊斯頓，賓夕法尼亞(MackPrintingCompany,Easton，Pennsylvania)，1990)。例如，本發明的腸胃外藥物組合物例如可以靜脈(靜脈內地)給藥、動脈(動脈內地)給藥、肌肉(肌內注射地)給藥、給藥給皮膚(皮下或植入組合物(depotcomposition))，通過冠狀動脈的注入或利用遞送入組織或器官的溶液給藥給心包。可注射的組合物可以是適合注射給藥途徑的藥物組合物，其中注射包括但不局限于注射到靜脈、動脈、冠狀血管、血管周圍的間皮瘤、肌肉內、皮下和關節的給藥。可注射的藥物組合物可以是能直接給藥至心臟、心包或冠狀動脈的藥物組合物。對于口服給藥，所述藥物組合物可以通過常規方法制備的片劑或膠嚢形式而被攝入，例如利用藥物上可獲得的添加劑制備片劑或膠嚢，諸如粘合劑(例如預凝膠玉米淀粉、聚乙烯基吡咯烷酮或羥丙基曱基纖維素)；填充劑(例如乳糖、微晶纖維素或磷酸氫鈣)；潤滑劑(例如硬脂酸鎂、滑石或硅石)；崩解劑(例如馬鈴薯淀粉或淀粉羥基乙酸鈉)；或潤濕劑(例如十二烷基硫酸鈉)。片劑可以利用本領域已知的方法進行包衣(見Remington'sPharmaceuticalSciences,第18版.Gennaro等，MackPrintingCompany,Easton,Pennsylvania,1990)。口服藥物組合物可以是以例如溶液、糖漿或懸浮液，或者是使用前與水或其他合適的溶劑混合的干燥制品的形式攝入。制備藥物組合物溶液可以使用常規方法利用藥學上可用添加劑諸如懸浮劑(例如山梨糖醇糖漿、纖維素衍生物或氫化食用脂肪)；乳化劑(例如卵磷脂或阿拉伯膠)；不溶的載體(例如杏仁油、油酯、乙醇或分餾的植物油)；防腐劑(例如曱基或對羥基苯曱酸丙酯或已二烯酸)。必要時，藥物組合物還可以包含緩沖鹽、香料、色素和甜味劑。腸內給藥的藥物組合物可以是適合口服的形式，例如片劑、含片或錠劑。本發明中的肽和/或蛋白質可以制備成用于經過直腸和陰道內給藥途徑的溶液(直腸乳劑)、栓劑或軟膏。腸內藥物組合物可以是適合全胃腸外營養(totalparenteralnutrition,TPN)混合物的混合溶液，或者攝入混合物，諸如通過飼管(intaketube)遞送的溶液(見Dudrick等，1998國際外科技術(Surg.Technol.Int).VII:174-184;Mohandas等，2003，全國醫學雜志(Natl.Med丄India)16(1):2933;Bueno等，2003胃腸內鏡(Gastrointest.Endosc).57(4):536畫40Shike等，1996,Gastrointest.Endosc.44(5):536-40)。吸入式給藥時，本發明的肽和/或蛋白質通常是在氣溶膠噴霧存在下或是以在容器中壓有合適拋射劑的噴霧器遞送的，所述拋射劑例如，諸如二氟二氯曱烷、氟三氯曱烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合適的氣體。在壓力氣溶膠的情況下，其容量可能取決于閥門輸送的重量。例如，可制備膠嚢和膠質藥筒供包含合適的粉末基質，例如乳糖或淀粉，以及這些化合物的粉末混合物的吸入器或吹入器使用。本發明的滴眼劑可以是可溶解的眼用溶液、不溶的眼用溶液或眼用乳劑。本發明的滴眼劑可以通過將本發明中的肽溶解或懸浮在可溶解的溶劑，諸如滅菌的純凈水或生理鹽水，以及不溶的溶劑，諸如包括棉籽油、豆油的植物油等中而制備得到。在這種情況下，必要時也可向其中添加等滲劑、pH調節劑、增稠劑、懸浮劑、乳化劑、防腐劑，以及等量的藥學上可用添加劑。具體而言，等滲劑包括氯化鈉、硼酸、硝酸鈉、硝酸鉀、D-甘露醇、葡萄糖等。pH調節劑的具體實例包括硼酸、無水硫酸鈉、鹽酸、檸檬酸、檸檬酸鈉、乙酸、乙酸鉀、碳酸鈉、硼砂等。增稠劑的具體實例包括曱基纖維素、羥丙基曱基纖維素、聚乙烯醇、軟骨素疏酸鈉、聚乙烯基吡咯烷酮等。懸浮劑的具體實例包括聚山梨醇酯80、聚氧化乙烯氳化蓖麻油等。乳化劑的具體實例包括但不局限于蛋黃卵磷脂、聚山梨醇酯80等。防腐劑的具體實例包括但不局限于氯化苯甲烴銨、氯化節乙氧銨、氯代丁醇、苯乙醇、p-鄰羥基苯曱酸酯等。本發明的組合物可施用給需要治療血管相關疾病的受試者。藥物組合物的毒性和治療功效可根據實驗動物標準藥物操作，例如細胞培養或半數致死量(LD50)(—組中50%致死量)測量和半數有效劑量(ED50)(—組中50%有效量)測量確定。施用的組合物的毒性效應和治療效果的比率稱為治療指數，而治療指數可用LD5。/EDso比值表示。具有高治療指數的藥物組合物是優選的。在一個實施方案中，從細胞培養分析和動物研究得到的資料可用來確定應用于人的劑量。依據本發明的組合物的劑量優選在包括EDso值的循環密度范圍以內此劑量的組合物無毒或幾乎無毒。劑量也會隨著所使用的成分的范圍和給藥途徑而變化。在本發明方法中使用的組合物中，有效治療劑量可以在最初通過細胞培養分析計算出來。為了獲得包括ICso值(即試驗材料顯示一半極限抑制的量)的血漿濃度范圍，在動物模型上對劑量進行了設計，如在細胞培養中測定的那樣。該信息可用于更準確地確定人體用藥的有效劑量。例如可通過高效液相色語法確定血漿中測試材料的水平。在另一個實施方案中，本發明包含肽和/或蛋白質的組合物的有效含量優選在約O.l嗎至約10mg/kg病人體重范圍內給藥，更優選在約1至約1000嗎/kg病人體重給藥。所述肽和/或蛋白質的給藥量是0.1嗎、0.2昭、0.5昭、l昭、2叱、5嗎、IO嗎、20嗎、30嗎、40嗎、50嗎、60嗎、70昭、80嗎、90嗎、IOO嗎、200嗎、250fig、300jig、400嗎、500嗎或1000嗎。在另一個實施方案中已經證實本發明組合物的有效量在靜脈注射時為ljig至10mg/kg體重；眼部注射時為lng至lmg/kg體重；眼用混懸液為lng至10mg/ml。配好劑量的本發明的組合物優選使用皮內或皮下給藥。可采用單次給藥或多次分開給藥例如采用日服、隔天服用、周服、隔周服用或按月服用的形式施用所述組合物。下文將對本發明進行描述。本發明中首次證實含Xaa-Gly-Asp序列的肽用于治療血管疾病，諸如用于治療局部缺血是有效的，同時也首次顯示血管疾病病變中存在血管生成素-1的分泌。已經證實在兩個細胞系和小鼠角膜新生血管形成模型中，利用血管生成素-1的分泌可治療與異常血管生成有關的疾病，同時也證實，含有序列Xaa-Gly-Asp的多肽與干細胞一起用于氧分壓變化誘導的視網膜內血管生成小鼠模型時，能有效治療異常血管生成相關疾病。此外，已經證實在創傷-愈合小鼠模型中，當使用該多肽治療傷口時，含有Xaa-Gly-Asp序列的多肽能有效地治療小鼠皮膚創傷，這表明含有Xaa-Gly-Asp序列的多肽能用于治療損傷、燒傷，預防和治療脫發或正常毛細血管形成條件下的灰發癥或與肥胖有關的心血管疾病、以及褥瘡和慢性潰瘍。最新發現表明當用合成并純化的含有Xaa-Gly-Asp序列的多肽以不同密度處理兩個細胞系時，多肽可以誘導血管生成素-1的分泌。在小鼠角膜新生血管形成模型中，也證實血管生成素-1的誘導分泌能夠促進正常血管的形成，并能通過穩定血管結構減少含有異常血管結構的病態血管原管(angiogenicvessel)的血液滲漏。同時，可以觀察到正常人細胞系的血小板衍生生長因子(PDGF)的分泌被抑制在血小板中，其中血小板衍生生長因子是血管生成的重要因素之一。在使用氧分壓變化的視網膜內血管生成誘導小鼠模型中，同時給藥含有干細胞的單核細胞(MNCs)和含有Xaa-Gly-Asp序列的多肽時，證實在異常血管生成中發現的血液滲漏和血管結構變化被抑制，正常血管形成，且血管結構穩定。所以，本發明的組合物優選用于治療早產兒視網膜病、糖尿病性視網膜病、老年性黃斑變性等。早產兒視網膜病是在正常發育抑制中發展的眼部疾病之一，而糖尿病性視網膜病和老年性黃斑變性是由正常血管結構損傷而造成的異常血管生成相關疾病之一。本發明最優方案的這些及其他特征、方面和優點將在下文對照附圖得到詳細說明。在附圖中圖l是顯示在利用血管生成因子誘導小鼠角膜血管生成的動物模型中，形成小鼠角膜袋和將VEGF團粒(pellet)注入小鼠角膜袋的操作的圖像；圖2是顯微鏡圖像，其顯示在利用VEGF誘導小鼠角膜血管生成的動物模型中，當將含有RGD序列的多肽腹膜內給藥至該動物模型中時，含有RGD序列的多肽誘導正常血管生成并抑制異常血管生成；圖3是使用熒光FITC-葡聚糖的圖像，其顯示在利用VEGF誘導小鼠角膜血管生成的動物模型中，當將含有RGD序列的多肽腹膜內給藥至該動物模型中時，含有RGD序列的多肽誘導正常血管生成并抑制變異血管生成；圖4顯示的是在利用VEGF誘導小鼠角膜血管生成的動物模型中，將含有RGD序列的多肽腹膜內給藥時，通過該多肽數字化(digitalize)的血管生成的產生水平圖表；圖5顯示在利用高壓氧處理(75%)后將高氧壓降到標準氧分壓來誘導小鼠視網膜血管生成的動物模型中，當小鼠視網膜暴露于高氧分壓時，不表現正常血管生成的小鼠的視網膜(圖5-A)與在標準氧分壓下正常生長小鼠的視網膜(圖5-B)對比圖像；圖6是使用熒光FITC-葡聚糖的圖像，其顯示在利用高壓氧處理(75%)后將高氧壓降到標準氧分壓來誘導小鼠視網膜血管生成的動物模型中，當將多肽腹膜內給藥時，含有RAD序列的多肽(SEQIDNO:3)不誘導正常血管生成(圖6A);但含有RGD序列的多肽(SEQIDNO:l和SEQIDNO:2)誘導正常血管生成，并減少血液滲漏(圖6的B和C);圖7是使用熒光FITC-葡聚糖的圖像，其顯示在利用高壓氧處理(75%)后將高氧壓降到標準氧分壓來誘導小鼠視網膜血管生成的動物模型中，當腹膜內給藥含有RGD序列的多肽(SEQIDNO:6和SEQIDNO:7)時，誘導了正常血管生成，并減少了血液滲漏(圖7的A和B);圖8是使用熒光FITC-葡聚糖的圖像，其顯示在利用高壓氧處理(75%)后將高氧壓降到標準氧分壓來誘導小鼠視網膜血管生成的動物模型中，當腹膜內給藥含有RGD序列的多肽(SEQIDNO:8)日于，誘導了正常血管生成，并減少了血液滲漏；圖9是使用熒光FITC-葡聚糖的圖像，其顯示在利用高壓氧處理(75%)后將高氧壓降到標準氧分壓來誘導小鼠視網膜血管生成的動物模型中，當腹膜內給藥鋸鱗肽(echistatin)和蝮蛇毒素時，誘導了正常血管生成，并減少了血液滲漏；圖10是H&E染色組織圖像，其顯示在利用高壓氧處理(75%)后將高氧壓降到標準氧分壓來誘導小鼠視網膜血管生成的動物模型中，當膜內給藥含有RGD序列的多肽(SEQIDNO:6和SEQIDNO:8)時，同陰性對照相比(圖10B),內部的神經節細胞層保持正常厚度而無任何肥大(圖IOC和D)，其水平與正常小鼠厚度類似(圖10A);圖ll是顯微鏡圖像，其顯示了從小鼠骨髓分離并隨后分別用熒光煙酸己可堿(Hoechst)-33342(圖IIA)、異硫氰酸熒光素(FITC)(圖11B)染色的全部單核細胞(MNC);圖12是使用熒光FITC-葡聚糖的圖像，其顯示在利用高壓氧處理(75%)后將高氧壓降到標準氧分壓來誘導小鼠視網膜生成的動物模型中，當將含有RGD序列的多肽(SEQIDNO:5)和單核細胞單獨(分別為圖12的A和B)或聯合(圖12的C)腹膜內給藥時，出生后20天可分離并觀察到小鼠視網膜，其中單獨給藥單核細胞比它與含有RGD序列的多肽聯合給藥時，正常血管生成更容易被誘導同時血液滲漏更少；圖13是使用熒光FITC-葡聚糖的圖像，其顯示在利用高壓氧處理(75%)后將高氧壓降到標準氧分壓來誘導小鼠視網膜生成的動物模型中，當將含有RGD序列的多肽(SEQIDNO:5)和單核細胞單獨(分別為圖13的A和B)或聯合(圖13的C)腹膜內給藥時，出生后27天可分離并觀察到小鼠視網膜，其中單獨給藥單核細胞比它與含有RGD序列的多肽聯合給藥時，正常血管生成更容易被誘導同時血液滲漏更少；圖14是顯示在小鼠創傷-愈合模型中，利用含有RGD序列的多肽治療損傷時，可使小鼠皮膚損傷比對照顯著減輕的圖像；圖15是顯示在小鼠創傷-愈合模型中，利用含有RGD序列的多肽治療損傷時，可使小鼠皮膚損傷比對照顯著減輕的概要圖表；圖16是H&E染色組織圖像，其顯示在小鼠創傷-愈合模型中，當利用含有RGD序列的多肽治療損傷時，與對照相比，在損傷皮膚組織下形成的精細毛細血管長成如正常小鼠一樣血管厚；圖17是顯示使用含有RGD序列的多肽處理的肉瘤細胞系中的血管生成素-l得到分泌的圖像；圖18是顯示使用含有RGD序列的多肽處理的小鼠血漿中的血管生成素-1得到分泌的圖像；圖19是顯示使用含有KGD序列的多肽處理的肉瘤細胞系中的血管生成素-l得到分泌的圖像；圖20是顯示含有RGD序列的多肽(SEQIDNO:5)抑制血小板中血小板衍生生長因子(PDGF)產生的圖表。實施本發明的最佳方式在下文中，將參照附圖詳細說明本發明中非限定性的優選實施方案。實施例1:含有RGD序列的多肽在無血管眼角膜組織中對VEGF誘導的血管生成量的治療效果為了評價含有RGD序列的多肽如何影響眼睛血管發生，開發了在小鼠眼角膜中生成微袋(micropocket)的動物模型，然后注入含有300ngVEGF的團粒(pellet)以誘導血管生成(圖1)。此時，為了測定多肽的功效，可以分別腹膜內給藥1.3pmo1(0.75ng/kg)和130pmo1(75ng/kg)的多肽。腹膜內給藥5天后，利用外科顯微鏡觀察小鼠眼睛血管生成是否被誘導。結果顯示在注入無VEGF的團粒時觀察不到血管(圖2和圖3的A),而在注入VEGF團粒的陽性對照中觀察到了血管生成(圖2和圖3的B)。然而，已經證實，含RGD序列的多肽誘導血管的增殖，而不是抑制它們的生長，因為當分別將1.3pmo1(圖2和圖3的C)和130pmo1(圖2和圖3的D)含RGD序列的多肽腹膜內給藥時，觀察到微血管形成和血管網絡(vascularnetworks)。當測量血管長度以量化血管生成時，陽性對照的血管總長度為0.43士0.02mm;分別用1.3pmol和130pmol環RGD(eyeRGD)處理組的總長分別為0.65士0.01mm和0.69土0.03mm,這表明其血管生成顯著增加(圖4)。同時，在所有用于此實驗的小鼠中都沒有觀察到副作用，例如含RGD序列的多肽引起的角膜混濁。實施例2:含RGD序列的多肽(SEQIDNO:l和SEQIDNO:2)在使用氧分壓誘導的視網膜血管生成小鼠模型中的效果氧分壓差異誘導的人工眼血管生成顯示出與早產兒視網膜病及糖尿病性視網膜病相同的特征。實施該實驗使用的原理即出生早期階段暴露在高氧環境(75%)中的小鼠回復到正常氧分壓環境中時可自發地誘導異常血管生成(HigginsRD.等，現有眼研究(CWr爭h).18:20-27(1999);BhartN.等，兒科研究(尸W/a化/ci").46:184188(1999);GebarowskaD.等，美國病理雜志(^m,j:尸a決o/.)160:307313(2002))。出于此目的，在一個可調整氧分壓的儀器中，將一只出生7天的小鼠留在氧分壓恒為75%的高氧環境5天后，再將其留在氧分壓為20%的標準氧分壓環境中。這時，每5天腹膜內給藥含RGD的肽(SEQIDNO:l,SEQIDNO:2)，觀察小鼠眼內的血管生成是否被誘導。為了觀察血管，將50毫克分子量為2Xl(f的FITC-葡聚糖溶于lml生理鹽水中，然后將得到的溶液經左心室注入。注射后，立即取出小鼠眼球。用生理鹽水清洗取出的眼球后，接著用濃度為4%的多聚曱醛固定4-24小時，然后從眼球上取出晶狀體。最后，將得到的小鼠視網膜平坦地鋪展在載玻片上并用甘油-明膠密封載玻片，接下來使用熒光顯微鏡進行觀察。觀察到在正常氧分壓下生長的小鼠的血管均勻分布在整個視網膜上(圖5的B)，而經高壓氧和然后鹽水處理的小鼠中大多數血管生成是異常的，并且產生了局部缺血(圖5的A)。此外，還觀察到與正常小鼠相比，利用高壓氧處理的小鼠視網膜在發育階段不能形成正常的血管組織；而且在作為對照的使用含RAD序列的多肽處理的小鼠中，視網膜血管也不能正常形成(圖6的A)。然而，顯示出每日用lfag/kg的含有RGD序列的多肽處理的小鼠中未觀察到異常血管生成(圖6的B和C),并且能觀察到正常血管而無任何異常血管生成。含有RGD序列的多肽起著幫助正常血管生長的作用，這是一個非常有意思的結果，這表明此多肽可能可用于治療如早產兒視網膜病之類的眼部疾病，因為在利用氧分壓變化誘導視網膜血管生成的小鼠模型中，含RGD序列的多肽能夠通過減少缺氧區而抑制病態的血管生成(morbidangiogenesis)，從而排除了血管生成的潛在病因。同樣，從利用熒光FITC-葡聚糖的滲漏試驗可以觀察到血液沒有發生滲漏，因為使用含RGD序列的多肽治療后血管結構得以穩定。例如FITC照片中熒光滲漏和播散的區域代表血液通過血管小孔出現滲漏的區域。因此，可以理解，本發明的肽減少了熒光擴散的事實意味著血管損傷的防止與熒光擴散的減少一樣多。由于視網膜血管中存在與腦血管的血腦屏障(BBBs)相同的血液^L網膜屏障(BRBs),因此大分子不容易通過視網膜血管。實-瞼證明以下事實，諸如FITC-葡聚糖的分子量較大的分子滲入視網膜意味著視網膜血管的微觀結構受到極大的損害，而含有RGD序列的多肽引起血管生成素的分泌則能防止視網膜血管的損害。因此，含有RGD序列的多肽可被用作為治療如糖尿病性視網膜病、老年性黃斑變性的疾病的治療劑，因為即使是由于血管中血液滲漏發展的疾病，所述多肽也能夠在疾病早期維持血管結構(在疾病早期，血管生成不被誘導)。實施例3:含RGD序列的多肽(SEQIDNO:6和SEQIDNO:7)在使用氧分壓誘導的視網膜血管生成小鼠模型中的效果在實施例3中，采用實施例2中描述的氧分壓誘導的人工視網膜血管生成小鼠才莫型證實了含RGD序列的多肽(SEQIDNO:6和SEQIDNO:7)的效果。已經證實，如實施例6(圖5的B)中描述的一樣，在標準氧分壓環境中生長的小鼠中血管均勻地分布在整個視網膜上，而經高壓氧及然后鹽水處理后的小鼠中絕大多數血管生成發生異常并且形成局部缺血(圖5的A)。顯示出每日用lpg/kg含有RGD序列的多肽處理的小鼠中，未觀察到異常血管生成(圖7的A和B)，并且能觀察到正常血管而無任何異常血管生成。正如實施例2描述的一樣，這意味著含RGD序列的多肽具有幫助正常血管生長的功能。因此，含有RGD序列的多肽(SEQIDNO:6和SEQIDNO:7)可^皮用作為治療如糖尿病性視網膜病、老年性黃斑變性的疾病的治療劑，因為即使是由于血管中血液滲漏發展的疾病，所述多肽也能夠在疾病早期維持血管結構(在疾病早期，血管生成不被誘導)。實施例4:含RGD序列的多肽(SEQIDNO:8)在使用氧分壓誘導的視網膜血管生成小鼠模型中的效果在實施例4中，采用實施例2中描述的氧分壓誘導的人工視網膜血管生成小鼠模型證實了含RGD序列的多肽(SEQIDNO:8)的效果。顯示出每日用^g/kg含有RGD序列的多肽處理的小鼠中，未觀察到異常血管生成，并且能觀察到正常血管而無任何異常血管(圖8)。正如實施例2描述的一樣，這意味著含RGD序列的多肽具有幫助正常血管生長的功能。因此，含有RGD序列的多肽可被用作為治療如糖尿病性視網膜病、老年性黃斑變性的疾病的治療劑，因為即使是由于血管中血液滲漏發展的疾病，所述多肽也能夠在疾病早期維持血管結構(在疾病早期，血管生成不被誘導)。實施例5:鋸鱗肽(SEQIDNO:9)和蝮蛇毒素(SEQIDNO:10)在使用氧分壓誘導的視網膜血管生成小鼠模型中的效果在實施例5中，采用實施例2描述的氧分壓誘導的人工視網膜血管生成小鼠模型證實了含RGD序列的多肽鋸鱗肽和蝮蛇毒素的效果。已經證實，正如實施例2所述(圖5的B),在標準氧分壓下生長的小鼠中血管均勻分布在整個視網膜上，而經高壓氧后又經鹽水處理的小鼠的大多數血管生成發生異常并產生局部缺血(圖5的A)。顯示出每日用1(ig/kg鋸鱗肽和蝮蛇毒素處理的小鼠中，未觀察到異常血管生成，并且能觀察到正常血管而無任何異常血管(圖9)。正如實例2描述的一樣，這意味著含RGD序列的多肽具有幫助正常血管生長的功能。實施例6:含RGD序列的多肽(SEQIDNO:6和SEQIDNO:8)在使用氧分壓誘導的視網膜血管生成小鼠模型的組織學照片中的效果在實施例6中，采用實施例2中描述的氧分壓誘導的人工視網膜血管生成小鼠模型通過利用組織染色證實了含RGD序列的多肽(SEQIDNO:6和SEQIDNO:8)的效果。如實施例2所述，在一個可調整氧分壓的儀器中，將一只出生7天的小鼠C57BL/6留在氧分壓恒為75%的高氧環境5天后，再將其留在氧分壓為20%的正常氧分壓環境中5天。這時，每五天分別腹膜內給藥含有RGD序列的多肽(SEQIDNO:6或SEQIDNO:8)—次，然后從所述C57BL/6小鼠的眼睛中取出視網膜，用石蠟固定，切成6卞m的石蠟橫切片，用H&E染色劑對其進行組織學染色，接下來使用顯微鏡觀察染色的石蠟橫切片。結果顯示正常小鼠視網膜的內部神經節細胞層維持正常細胞厚度而沒有任何肥大(圖IO的A)。而在陰性對照中，氧分壓差異導致視網膜的內部神經節細胞層異常肥大(圖10的B)。與陰性對照相比，用含有RGD序列的多肽(SEQIDNO:6和SEQIDNO:8)治療的小鼠的內部神經節細胞層的厚度維持在與正常小鼠一樣的正常水平而無任何肥大(圖10的C和D)。正如實施例3和實施例4所述，這意味著含RGD序列的多肽具有幫助正常血管生長的功能，同時也能通過維持內部神經節細胞層厚度在正常水平且無任何肥大而使視網膜保持在正常水平。作為另外一個結果，其表明含有RGD序列的多肽(SEQIDNO:6和SEQIDNO:8)可被用作為治療如糖尿病性視網膜病、老年性黃斑變性的疾病的治療劑，因為即使是由于血管中血液滲漏發展的疾病，所述多肽也能夠在疾病早期保持血管結構(在疾病早期，血管生成不被誘導)。實施例7:含RGD序列的多肽和單核細胞(MNC)在使用氧分壓誘導的視網膜血管生成小鼠模型中的效果單核細胞群的制備為了分離單核細胞群，先從C57BL/6小鼠的兩條腿中分離股骨和脛骨，再將其放入到含50單位肝素的DMEM培養基中。為了從分離的股骨和脛骨中獲得骨髓細胞，將分離骨的頭部和骺(epiphyses)切下以暴露髓腔，使用針22G向暴露的髓腔中注入10ml的DMEM培養基以分離骨髓細胞。為使脂肪和肌肉組織從分離到的骨髓細胞中分離，使用70pm尼龍網眼細胞過濾器過濾骨髓細胞懸液。向骨髓細胞混懸液中加入其體積1.5倍的菲科帕克(Ficoll-Paque)Plus(密度為1.077mg/ml),并在室溫條件下以3，000rpm的速度離心處理20分鐘，進而分離處于Ficoll-Paque和培養基分界面的單核細胞群。將分離的單核細胞群用DMEM培養基洗滌兩次，然后使之懸浮在lml含2%胎牛血清和ImMHEPES的DMEM培養基中。分離的單核細胞群具有1.1-3.2乂106細胞/小鼠的密度，使用Hoechst33342對單核細胞進行染色，然后進行觀察(圖11的A)。誘導視網膜血管生成的試驗在實施例7中，采用了實施例2中描述的氧分壓誘導的人工視網膜血管生成小鼠模型，在下表1中列出的條件下，在出生20天(PN20)和27天(PN27)的小鼠中證實了單核細胞群和/或含有RGD序列的多肽(SEQIDNO:5)的效果。表1用于誘導視網膜血管生成測試中的單核細胞的細胞數量<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>正如表1所列，顯示出與單獨使用單核細胞群或單獨使用含有RGD序列的多肽處理的小鼠相比(圖12、圖13的C)，同時使用單核細胞群和含有RGD序列的多肽處理的小鼠(圖12、圖13的B),出生后20天(PN20)和出生后27天(PN27)都未觀察到異常血管生成，但能觀察到正常血管而無任何異常血管。因此，可以看出，如果干細胞同含有RGD序列的多肽一起使用，得到的混合物可被用作為治療如糖尿病性視網膜病、老年性黃斑變性的疾病的治療劑，因為即使是由于血管中血液滲漏發展的疾病，所述多肽也能夠在疾病早期維持血管結構(在疾病早期，血管生成不被誘導)。實施例8:含有RGD序列的多肽對小鼠傷口愈合的效果為了檢驗含有RGD序列的多肽治愈傷口的效果，從距小鼠身體約0.5-1.0cm的尾部背側切開了一個10x3mm的全層皮膚傷口(圖14)。對傷口施壓以止血，利用噴涂膜法預防傷口感染。同時，為了確定多肽的功效，每天一次通過兩種給藥途徑以lpg/kg的濃度給藥多肽，共給藥四周。一種給藥途徑為直接將含多肽溶液滴在外傷上，另一種給藥途徑為腹膜內注射含多肽的溶液。為了確認試驗結果，每周對小鼠尾部傷口的大小進行測量，并且每兩周從小鼠尾部取一次組織樣品，并將其包埋在石蠟塊中，然后用HE染色以便觀察組織變化。結果，從照片可證實，與對照相比(圖14)，不論經何種給藥途徑將多肽施用給小鼠，給藥所述多肽的小鼠的傷口在腹膜內給藥三周后顯著減小，小鼠傷口的減小被量化并顯示在圖表中(圖15)。此外，通過HE染色觀察組織的變化時，與在對照傷疤下的組織中只發現少量纖細的毛細血管相比，給藥所述多肽兩周后的小鼠組織中觀察到大量厚血管(圖16)。可以預料含RGD序列的多肽可能具有療效通過穩定血管生成進而形成正常毛嚢，從而治療脫發、灰發癥；預防和治療肥胖相關的動脈硬化及心"幾梗塞，并愈合損傷或燒傷以及治療和預防諸如褥瘡和慢性潰瘍的疾病。實施例9:含RGD序列的多肽誘導的纖維肉瘤細胞系內的血管生成素-1的分泌纖維肉瘤細月包培養在37。C下，在二氧化>5灰為5%的孵育器中用補充了10%FBS的MEM孵育纖維肉瘤細胞(人)。此處使用的纖維肉瘤細胞在培養皿中至少要長到90%融合。分泌的血管生成素-1的測量使用0-10(Vg/ml含RGD序列的多肽處理在6孔板內生長至密度為2xl05的纖維肉瘤細胞。處理后，誘導血管生成素-1的分泌12小時。此時，利用蛋白質印跡法(westernblottingmethod)來測量分泌的血管生成素-l的量(圖17)。實施例10:含RGD序列的多肽(SEQIDNO:5)誘導的小鼠血漿中血管生成素-1的分泌為測定含有RGD序列的多肽誘導小鼠時血漿中血管生成素-1的分泌，所述實驗使用以下原理實施，即將出生早期階段的小鼠置于高氧(75%)環境后回復到標準氧分壓時自發誘導異常的血管生成(HigginsRD.等，Cwt五;;eWes.18:20-27(1999);BhartN.等，/W/咖'cL46:184-188(1999);GebarowskaD.等，」w./尸"決o/.160:307-313(2002))。為此目的，在一個可調整氧分壓的儀器中，將一只出生7天的小鼠留在氧分壓恒為75%的高氧環境5天后，再將其留在氧分壓為20%的正常氧分壓環境中。這時，將l嗎/kg含RGD序列的多肽腹膜內給藥以誘導血管生成素-1的分泌。然后，在預定時間點分離血漿，接著采用Western印跡法測量血管生成素-1的量(圖18)。實施例ll:含KGD序列的多肽(SEQIDNO:4)誘導的纖維肉瘤細胞系中血管生成素-1的分泌培養纖維肉瘤細月包在37。C下，在二氧化碳為5%的孵育器中用補充了10%FBS的MEM孵育纖維肉瘤細胞(人)。此處使用的纖維肉瘤細胞在培一中至少要長到90%融合。分泌的血管生成素-1的測量使用0-100|ig/ml含RGD序列的多肽處理6孔板內生長至密度為2x105的纖維肉瘤細胞。處理后，誘導血管生成素-1的分泌12小時。此時，利用Western印跡法來測量分泌的血管生成素-1的量(圖19)。實施例12:含RGD序列的多肽抑制血小板中PDGF(血小板衍生的生長因子)表達的效果血小板的制備從健康獻血者身上抽取全血并裝入含有3.8%的檸檬酸鈉作為抗凝劑的真空容器內，然后以1,200rpm的速度離心以分離富含血小板的血漿(PRP)。在存在lmM前列腺素El的情況下，以1200rpm的速度離心處理富含血小板的血漿(PRP)以得到血小板沉淀(pellet)。再次使血小板沉淀重懸在改良的Tyrode's-HEPES緩沖液中(140mM氯化鈉、2.9mM氯化鉀、lmM氯化鎂、5mM葡萄糖、10mMHEPES、pH7.4)。用膠原激活血小板被洗滌一次的血小板懸液(2xl08/ml)在室溫條件下經過含有RGD序列的多肽(SEQIDNO:5)和/或不經過此多肽的預處理IO分鐘后，通過用膠原(2pg/ml)處理而激活該血小板懸液。在室溫下使血小板懸液活化2小時后，在4。C下以1500rpm離心處理5分鐘。收集離心后的上清液，然后使用EIA法測量分泌的血小板衍生的生長因子(PDGF)的量。結果證實所述多肽處理顯著降低了分泌的血小板衍生生長因子的量(圖20)。近年來，據報道血管生成素-1是在血小板中分泌的，這是血小板活化對血管生成起重要作用的眾多證據之一。含RGD序列的多肽對PDGF分泌的抑制可以說與通過防止血小板凝固以抑制血管生成的解聚素的內在功能有關，另外還認為由于用低密度的含RGD序列的多肽處理血小板時，多肽抑制血小板凝固引發的血小板間的相互作用，因此血管生成素-1也被認為是為誘導正常血管生成而分泌的。工業實用性依據本發明，除了主要依賴常規外科手術的治療血管生成相關眼部疾病的治療方法之外，提出了使用治療劑的新治療方法。外科手術費用昂貴，并且難預防視力衰退的新紀元。本發明中含有特殊氨基酸序列的多肽誘導分泌的血管生成素-1不影響現存的正常血管和發育階段新生的正常血管。相反，由于在發育階段血管生成素-1的分泌能夠幫助正常血管的形成，因此血管生成素-1的分泌對患有早產兒視網膜病的初期患者非常有效。此外，已知干細胞而非造血干細胞與含Xaa-Gly-Asp序列的多肽一起作用以形成正常血管。如果多肽抑制所有的血管生成，那么就不能用它治療早產兒視網膜病。因此，含Xaa-Gly-Asp序列的多肽和/或干細胞作為治療劑能夠非常有效地治療早產兒視網膜病。此外，可以看出，含Xaa-Gly-Asp序列的多肽能夠通過保護糖尿病性視網膜病早期的血管結構，進而從根本上治療糖尿病性視網膜病。并且，通過幫助血管結構正常化，含Xaa-Gly-Asp序列的多肽能夠抑制老年性黃斑變性中異常血管的生長。權利要求1.一種用于治療血管相關疾病的藥物組合物，其包含具有Xaa-Gly-Asp序列的肽作為有效成分。2.根據權利要求1所述的用于治療血管相關疾病的藥物組合物，其中，所述肽的氨基酸Xaa是精氨酸或賴氨酸。3.根據權利要求1或2所述的用于治療血管相關疾病的藥物組合物，其中，所述肽包括SEQIDNO:l或SEQIDNO:2所列出的序列。4.根據權利要求1或2所述的用于治療血管相關疾病的藥物組合物，其中，所述肽包括SEQIDNO:4所列出的序列。5.根據權利要求1或2所述的用于治療血管相關疾病的藥物組合物，其中，所述肽包括選自由SEQIDNO:6至SEQIDNO:IO所列出的肽序列所組成的組中的一個肽序列。6.根據權利要求1或2所述的用于治療血管相關疾病的藥物組合物，其中，所述血管相關疾病指由于血管壁血液滲漏、血管損傷或異常血管生成引起的水腫和/或局部缺血。7.根據權利要求6所述的用于治療血管相關疾病的藥物組合物，其中，所述局部缺血性血管相關疾病是選自由糖尿病性視網膜病、早產兒視網膜病、老年性黃斑變性和青光眼所組成的組中的眼部疾病。8.根據權利要求6所述的用于治療血管相關疾病的藥物組合物，其中，所述局部缺血性血管相關疾病選自由糖尿病足潰瘍、肺動脈高壓、局部缺血心肌病、心力衰竭、急性后肢局部缺血、人工皮膚及移植的血管治療劑、局部缺血所組成的組中。9.根據權利要求6所述的用于治療血管相關疾病的藥物組合物，其中，所述血管相關疾病選自由損傷、灼傷、褥瘡、慢性潰瘍、脫發或正常毛細血管形成下的灰發癥、肥胖相關的心血管疾病所組成組中。10.根據權利要求1或2所述的用于治療血管相關疾病的藥物組合物，其中，所述肽誘導血管生成素-1的分泌。11.根據權利要求1或2所述的用于治療血管相關疾病的藥物組合物，所述組合物還進一步包含干細胞。12.根據權利要求11所述的用于治療血管相關疾病的藥物組合物，其中，所述干細胞至少具有分化成血管內皮細胞的能力。13.根據權利要求11或12所述的用于治療血管相關疾病的藥物組合物，其中，所述血管相關疾病指由于血管壁血液滲漏、血管損傷或異常血管生成造成的水腫和/或局部缺血。14.根據權利要求11或12所述的用于治療血管相關疾病的藥物組合物，其中，局部缺血血管疾病是選自由糖尿病性視網膜病、早產兒視網膜病、老年性黃斑變性、青光眼所組成的組中的一種眼部疾病。15.根據權利要求11或12所述的用于治療血管相關疾病的藥物組合物，其中，局部缺血性血管相關疾病是選自由糖尿病足潰瘍、肺動脈高壓、缺血性心肌病、心力衰竭、急性足部缺血、人造皮膚及移植的血管治療劑、局部缺血所組成的組中的一種或多種疾病。16.根據權利要求11或12所述的用于治療血管相關疾病的藥物組合物，其中，血管相關疾病是指選自損傷、灼傷、褥瘡、慢性潰瘍、脫發或正常毛細血管形成下的灰發癥、肥胖相關的心血管疾病所組成的組中的一種或多種疾病。全文摘要本發明公開了一種通過分泌血管生成素(angiopoictins)的方式作用于異常血管生成來治療血管疾病的組合物。文檔編號C07K14/435GK101379082SQ200780002554公開日2009年3月4日申請日期2007年1月19日優先權日2006年1月19日發明者俞元一,張鎮旭,權五雄,權垂美,林亨駿,趙良濟,金斗植申請人:愛吉恩公司