一種高純度輔酶q10的規模化制備方法

專利名稱：一種高純度輔酶q10的規模化制備方法
技術領域：
本發明涉及一種分離輔酶QlO的制備方法，特別涉及一種高純度輔酶QlO的規模化制備方法。
背景技術：
輔酶QlO又名維生素Q，是生物體內的細胞呼吸鏈中質子轉移和電子傳遞的主要成份，在人體中具有重要的生理和藥理作用，因此叫做維生素Q或維生素輔酶Q10，它在呼吸鏈中是一個和蛋白質結合不緊密的輔酶。在藥用方面可治療心臟病、壞血病、高血壓、 十二指腸潰瘍、胃潰瘍、壞死性牙周炎、病毒性肝炎；還具有抗腫瘤、治療圓形脫發和肺氣腫的功能；對聽覺障礙也有一定治療；對艾滋病和帕金森癥有顯著的輔助治療；可用于化妝品和保健品對延緩衰老和提高機體免疫力有著不可代替的作用。專利申請CN200810072112. 2公開了輔酶QlO清潔純化工藝，只提供了一種輔酶 QlO的層析方法。專利申請號CN200610048712. 6公開了一種純化輔酶QlO的方法，只提供了一種輔酶QlO的結晶方法。然而上述兩種方法均只涉及分離提純輔酶QlO的某段工藝而不是完整的提取分離方法。CN200710166132. 1涉及一種分離輔酶QlO的提純方法，雖然提供了一種以輔酶 QlO發酵產物為起始的分離輔酶QlO的提純方法，但工藝復雜、收率和純度較低、成本較高， 限制了其工業化應用。因此，雖然輔酶QlO應用廣泛，但既能獲得高純度的輔酶QlO并且能夠規模化生產的方法尚有待研究。

發明內容
本發明的目的是提供一種以微生物發酵產物為原料規模化生產高純度輔酶QlO 的方法，該方法工藝簡單、收率和純度高、得到的產品質量好、成本低廉、適于工業規模化生產。本發明的上述技術目的是通過以下技術方案得以實現的 一種高純度輔酶QlO的規模化制備方法，其包括以下步驟
(1)發酵液處理將含有輔酶QlO的發酵液分離得到濕菌體，烘干所得濕菌體后得干燥菌體，所得干燥菌體經二氧化碳超臨界萃取得到含有輔酶QlO的萃取液；
(2)萃取液處理將所得萃取液通過濃度為0.2 0. 5mol/L的堿液處理得到上柱液；
(3)上柱液處理將所得上柱液通過粒徑為200 300目的硅膠柱層析，再用醚、烷、醇、 酮、酯中的一種或兩種溶劑作為洗脫劑進行洗脫得到洗脫液；
(4)洗脫液處理將所得洗脫液濃縮并冷卻得第一晶體，在所得第一晶體中加乙醇溶解，然后用微孔濾膜過濾后得到濾液，將所得濾液降溫攪拌結晶后再離心分離，得到潮濕的第二晶體，再將所得第二晶體干燥、粉碎，得到純度大于99. 5%的輔酶Q10。本發明提供了一種以輔酶QlO發酵產物為起始的分離輔酶QlO的全段提純方法，采用二氧化碳超臨界萃取方法具有清潔、環保、安全、自動化等優點；洗脫溶劑可回收并循環利用；層析柱也可以洗脫再生并重復使用；所得輔酶QlO成品收率可達90%以上，所得輔酶QlO成品經HPLC檢測的純度可達99. 5%以上，產品質量高，生產成本降低，適于工業規模
化生產。作為本發明技術方案的一種優選，所述步驟(1)中干燥菌體的粒度為40 200目， 水分為5 15%，輔酶QlO的含量為10 40mg/g。作為本發明技術方案的一種優選，所述步驟(1)中二氧化碳超臨界萃取所用的夾帶溶劑為醇、酮、醚、酯、烷中的至少一種。本發明人經過反復實驗證明醇、酮、醚、酯、烷作為夾帶劑對提高溶質在二氧化碳超臨界流體中的溶解度具有明顯的作用。更優選地，所述的夾帶溶劑為醚和烷，最優選醚。更優選地，所述二氧化碳超臨界萃取的萃取條件為壓力20 ^MPa,溫度30 40°C，夾帶劑用量1 1. 5ml/g，萃取時間40 50min。采用該超臨界萃取條件，相比傳統的溶劑提取，提取率高2 3個百分點，同時具有效率高、成本低、安全、環保、無污染等優點。進一步優選地，所述二氧化碳超臨界萃取的萃取條件為壓力M.5MPa，溫度 35°C，夾帶劑用量1. 2ml/g，萃取時間45min。本發明采用該條件萃取后的萃取收率可大于98. 5%。作為本發明技術方案的一種優選，所述步驟(2)包括如下步驟
(a)將所得萃取液與0.2 0. 5mol/L的堿液混合，機械攪拌30 50min ；
(b)靜置分層2 3h，分取其中的有機相作為第一有機相；
(c)將所述第一有機相與水混合，機械攪拌5 15min，所用水的體積為所述萃取液體積的0. 5 1倍；
(d)靜置分層20 30min，分取其中的有機相作為第二有機相；
(e)將所述第二有機相經脫水處理，得到上柱液。經過本發明的堿液處理，可以去除萃取液中60%以上雜質，使萃取液中的輔酶QlO 更加富集和純化。更優選地，所述步驟(e)所述的脫水處理是使用干燥劑為氯化鈣、無水硫酸鈉中的至少一種為干燥劑，每升所述第二有機相的干燥劑用量為0. 01 0. 03千克。由于所用層析硅膠是正相填料，水的存在對其影響很大，會大大減低其分離效果， 甚至失效，所以脫除上柱液中的水分能保證層析分離效果。作為本發明技術方案的一種優選，所述步驟(3)所用的洗脫劑選自含1 5% (V/ V)乙醇的石油醚溶液、含1 5% (V/V)乙醇的正己烷溶液、含1. 5 4% (V/V)乙酸乙酯的石油醚溶液、含1. 5 4% (V/V)乙酸乙酯的正己烷溶液、含1. 5 4. 5% (V/V)丙酮的石油醚溶液、含1. 5 5% (V/V)乙醇的環己烷溶液、含1. 5 3% (V/V)異丙醚的環己烷溶液中的一種或多種。作為本發明技術方案的一種優選，所述步驟(3)中硅膠填料的重量是輔酶QlO重量的5 10倍。更優選地，所述步驟(3)中的硅膠填料使用醇、酮、酯中的至少一種或其中兩種作為在線清洗溶劑進行在線清洗。本發明上柱液處理時所用的洗脫劑可循環利用，并且可回收用作所述的在線清洗溶劑，使用該在線清洗溶劑清洗后的硅膠柱又可重復使用15 20次，進一步降低了生產成本。作為本發明技術方案的一種優選，所述步驟(4)具體為將所得洗脫液濃縮至相對密度0. 750 0. 850 (60°C 70°C)，冷卻1 2小時，得第一晶體Xg，在所得第一晶體中加15X 30Xml的乙醇在50°C 70°C下溶解，然后用孔徑為0. 22 0. 45 μ m的微孔濾膜過濾后得到濾液，將所得濾液以3 10min/°C的速率降溫、并以10 90RPM的攪拌速率攪拌結晶后再離心分離，離心轉速為5000 6000RPM，離心時間為60 120min，得到潮濕的第二晶體，再將所得第二晶體在溫度為35 38°C、真空度為-0. 06 0. 09Mpa的真空條件下干燥，然后粉碎，得到純度大于99. 5%的輔酶QlO ；其中，所述X是指第一晶體中的輔酶 QlO的質量。所述的相對密度是相對水而言的。使用該方案所得的第一晶體的純度大于99%、含量大于80%、收率大于95%。綜上所述，本發明具有以下有益效果
1、本發明提供了一種以輔酶QlO發酵產物為起始的分離輔酶QlO的全段提純方法，不同于現有技術僅公開其中的某段工藝；
2、洗脫溶劑可回收并循環利用，層析柱也可以洗脫再生并重復使用，生產成本降低；
3、所得輔酶QlO成品收率可達90%以上，所得輔酶QlO成品經HPLC檢測的純度可達 99. 5%以上，產品質量高；
4、適于工業規模化生產。


圖1是實施例一所得輔酶QlO成品的色譜圖； 圖2是實施例二所得輔酶QlO成品的色譜圖。
具體實施例方式
以下結合附圖對本發明作進一步詳細說明。實施例一
輔酶QlO干燥菌體10kg，含量26. 81mg/g、粒度80 120目，水分5. 6%。在壓力 24. 5Mpa，溫度35 °C，夾帶劑(正己烷)用量1. 3ml/g下經CO2超臨界萃取45min，得到2. 5L 萃取液，含量106. 54 mg/ml。加入1. 5L濃度為0. 35mol/L的氫氧化鈉溶液攪拌40 min，靜置2. 5hr,待完全分層后，放掉下層，再加入2L純化水攪拌10 min,靜置30分鐘，放掉下層， 上層經干燥器(無水硫酸鈉25g)脫水，得到上柱液2. 3L，含量113. 30mg/ml。將該上柱液按 (有效量填料)1:10上硅膠層析柱，用2.5% (V/V)乙酸乙酯的正己烷溶液洗脫，通過TLC 色譜得到主段洗脫液。同時，前段及后段洗脫液分別收集處理，可制備輔酶QlO同系物及異構體。將主段洗脫液減壓濃縮至相對密度0. 775 (60°0，冷卻65!^11，得到327. 8g第一晶體，含量為768. 52mg/g，純度為99. 1%。將該第一晶體溶于3800ml乙醇中，用0. 22 μ m微孔濾膜過濾，以5°C /min的速度降溫，攪拌速度30rpm，降溫至15°C，停止攪拌，陳化lOmin， 5500rpm離心80min，得到潮濕的第二晶體，然后減壓干燥，溫度36°C，真空度-0. 04Mpa,得到245. Ig輔酶QlO成品，含量為997. 05mg/g,純度為99. 7%，見圖1。
實施例二
輔酶QlO干燥菌體100kg，含量30. 13mg/g,粒度130 200目，水分5%。在壓力 20. 5Mpa，溫度30°C，夾帶劑(乙醚)用量1. 5ml/g下經CO2超臨界萃取30min，得到25. 76L萃取液，含量115. 65 mg/ml。加入26. 25L、0. 2mol/L的氫氧化鈉溶液攪拌40 min，靜置2hr, 待完全分層后，放掉下層，再加入20L純化水攪拌10 min，靜置30分鐘，放掉下層，上層經干燥器脫水(無水硫酸鈉^g)，得到上柱液24. 4L，含量119. 70mg/ml。將該上柱液按(有效量填料)1:5上層析柱，用1.5% (V/V)異丙醚的石油醚溶液洗脫，通過TLC色譜得到主段洗脫液。同時，分別收集處理前段及后段洗脫液，可制備輔酶QlO同系物及異構體。將主段洗脫液減壓濃縮至相對密度0. 810 (65°C)，冷卻60min，得到3525. 4g第一晶體，含量為 798. 41mg/g,純度為98. 9%。將第一晶體溶于5. 6L乙醇中，用0. 3 μ m微孔濾膜過濾，以3°C / min的速度降溫，攪拌速度45rpm，降溫至15°C，停止攪拌，陳化lOmin，5000rpm離心60min， 得到潮濕的第二晶體，然后減壓干燥，溫度35°C，真空度-0. 06Mpa，得到2745. 5g輔酶QlO 成品，含量為996. 51mg/g，純度為99. 6%，見圖2。實施例三
將實施例一的層析柱用2 3倍的乙醇洗脫，再用1 2倍的石油醚平衡，待用。輔酶QlO干燥菌體20kg，含量16. 50mg/g、粒度60 100目，水分6%。在壓力 27. OMpa，溫度33°C，夾帶劑(石油醚)用量1. 0ml/g下經CO2超臨界萃取50min，得到3. 8L萃取液，含量85. 79 mg/ml。加入2. 5L濃度為0. 25mol/L的氫氧化鈉溶液攪拌40 min，靜置 2.證！·，待完全分層后，放掉下層，再加入2. 5L純化水攪拌10 min，靜置30分鐘，放掉下層， 上層經干燥器(無水硫酸鈉38g)脫水，得到上柱液3. 7L，含量86. 10mg/ml。將該上柱液加入到已平衡好的層析柱中，用1.0% (V/V)乙醇的石油醚溶液洗脫，通過TLC色譜得到主段洗脫液。同時，前段及后段(通過TLC色譜)洗脫液分別收集處理，可制備輔酶QlO同系物及異構體。將主段洗脫液減壓濃縮至相對密度0. 795(67°C)，冷卻70min，得到382. 8g第一晶體，含量為808. 52mg/g，純度為98. 9%。將該第一晶體溶于7740ml乙醇中，用0. 45 μ m微孔濾膜過濾，以10°C /min的速度降溫，攪拌速度90rpm，降溫至20°C，停止攪拌，陳化lOmin， 6000rpm離心120min，得到潮濕的第二晶體，然后減壓干燥，溫度35°C，真空度0. 09Mpa得到301. 4g輔酶QlO成品，含量為995. 00mg/g，純度為99. 5%，譜圖測試方法同實施例一，省略譜圖。實施例四
輔酶QlO干燥菌體10kg，含量10mg/g、粒度40 80目，水分15%。在壓力20Mpa，溫度 300C，夾帶劑(乙醇)用量1. 8ml/g下經(X)2超臨界萃取40min，得到2. 3L萃取液，含量100. 36 mg/ml。加入1. 5L濃度為0. 5mol/L的氫氧化鈉溶液攪拌50 min，靜置!3hr，待完全分層后， 放掉下層，再加入1.5L純化水攪拌5 min，靜置20分鐘，放掉下層，上層經干燥器(氯化鈣 25g)脫水，得到上柱液2. 1L，含量46. 19mg/ml。將該上柱液按(有效量填料)1:6上200 250目的硅膠層析柱，用5% (V/V)乙醇的正己烷溶液洗脫，通過TLC色譜得到主段洗脫液。 同時，前段及后段洗脫液分別收集處理，可制備輔酶QlO同系物及異構體。將主段洗脫液減壓濃縮至相對密度0. 75 (70°C)，冷卻lOOmin，得到158. 2g第一晶體，含量為596. 21mg/g, 純度為98. 6%。將該第一晶體溶于1395ml乙醇中，用0. 18 μ m微孔濾膜過濾，以8V /min 的速度降溫，攪拌速度lOrpm，降溫至15°C，停止攪拌，陳化lOmin，4000rpm離心80min，得到潮濕的第二晶體，然后減壓干燥，溫度36°C，真空度-0. OSMpa,得到91. 4g輔酶QlO成品，含量為994. 05mg/g，純度為99. 4%。譜圖測試方法同實施例一，省略譜圖。實施例五
輔酶QlO干燥菌體10kg，含量40mg/g、粒度80 120目，水分7.8%。在壓力^Mpa, 溫度40°C，夾帶劑(丙酮)用量1. lml/g下經CO2超臨界萃取50min，得到2. 8L萃取液，含量 96. 54 mg/ml。加入1. 5L濃度為0. 2mol/L的氫氧化鈉溶液攪拌30 min，靜置》ir，待完全分層后，放掉下層，再加入1. 2L純化水攪拌15 min，靜置25分鐘，放掉下層，上層經干燥器 (氯化鈣30g)脫水，得到上柱液2. 6L，含量133. 48mg/ml。將該上柱液按(有效量填料)1:8 上200 250目的硅膠層析柱，用4. 5%(V/V)丙酮的石油醚溶液溶液洗脫，通過TLC色譜得到主段洗脫液。同時，前段及后段洗脫液分別收集處理，可制備輔酶QlO同系物及異構體。 將主段洗脫液減壓濃縮至相對密度0. 885 (62°C)，冷卻池，得到498. 5g第一晶體，含量為 756. 7%ig/g，純度為98. 4%。將該第一晶體溶于11136ml乙醇中，用0. 3 μ m微孔濾膜過濾， 以15°C /min的速度降溫，攪拌速度llOrpm，降溫至15°C，停止攪拌，陳化30min，7000rpm離心80min，得到潮濕的第二晶體，然后減壓干燥，溫度38°C，真空度-0. IMpa，得到366. 2g輔酶QlO成品，含量為993. 56mg/g，純度為99. 3%。譜圖測試方法同實施例一，省略譜圖。實施例六
輔酶QlO干燥菌體10kg，含量8mg/g、粒度120 150目，水分12%。在壓力18Mpa，溫度^°C，夾帶劑(乙酸乙酯)用量2. lml/g下經(X)2超臨界萃取65min，得到3. 5L萃取液，含量88. 88 mg/ml ο加入1. 5L濃度為0. 15mol/L的氫氧化鈉溶液攪拌10 min，靜置1. 5hr, 待完全分層后，放掉下層，再加入4L純化水攪拌20 min，靜置15分鐘，放掉下層，上層經干燥器(氯化鈣38g)脫水，得到上柱液3. 2L，含量23. 75mg/ml。將該上柱液按(有效量填料) 1:4上200 300目的硅膠層析柱，用1. 5% (V/V)乙酸乙酯的正己烷溶液洗脫，通過TLC色譜得到主段洗脫液。同時，前段及后段洗脫液分別收集處理，可制備輔酶QlO同系物及異構體。將主段洗脫液減壓濃縮至相對密度0. 85(66°C)，冷卻50min，得到169. 6g第一晶體，含量為444. 8mg/g,純度為98. 11將該第一晶體溶于740. 8ml乙醇中，用0. 5 μ m微孔濾膜過濾，以2°C /min的速度降溫，攪拌速度60rpm，降溫至15°C，停止攪拌，陳化lOmin，5000rpm 離心80min，得到潮濕的第二晶體，然后減壓干燥，溫度33°C，真空度0. 04Mpa,得到73. 4g輔酶QlO成品，含量為992. 21mg/g，純度為99. 譜圖測試方法同實施例一，省略譜圖。對比實施例一
輔酶QlO發酵液20L，效價1672 μ g/ml，經過過濾出去液體，得濕菌體3 . ^ig,加20L 無水乙醇，在55°C條件下攪拌30分鐘，過濾得濾液20. 5L，效價796μ g/ml。然后照同樣方法再浸泡一次，得濾液20. 2L，效價684 μ g/ml。混合兩次的浸泡液，效價740 μ g/ml，體積40. 7L，在70°C條件下真空濃縮到12L，加水2. 5L、正己烷2. 5L，攪拌10分鐘，靜置分層 M小時。分離出正己烷層，得上柱液2. 5L，效價11擬6 μ g/ml。取IL上柱液，通過孔徑為 1 μ m的濾芯過濾后上硅膠柱，柱體積為200ml，上柱流速為300ml/hr，上完后用200ml的正己烷洗滌，流速為400ml/hr。后用含洲(V/V)甲醇的正己烷溶液洗脫，流速為100ml/hr， 得洗脫液910ml，效價12895yg/ml。將洗脫液減壓濃縮至干，加乙醇結晶，過濾烘干得輔酶Q109. 5g，主組分HPLC峰面積比例98. 1%,見CN200710166132. 1實施例四。對比實施例二取對比實施例一所得的IL上柱液，通過孔徑為1 μ m的濾芯過濾后上硅膠柱，柱體積為 200ml，上柱流速為350ml/hr，上完后用200ml的正己烷洗滌，流速為300ml/hr。后用含m (V/V)甲醇的正己烷溶液洗脫，流速為400ml/hr，再用3% (V/V)甲醇的正己烷溶液洗脫到最后，流速為200ml/hr，得洗脫液890ml，效價13102 μ g/ml。將洗脫液減壓濃縮至干，加乙醇結晶，過濾烘干得輔酶Q109. 7g，主組分HPLC峰面積比例98. 3%,見CN200710166132. 1 實施例五。對比實施例三
取對比實施例一所得的IL上柱液，通過孔徑為1 μ m的濾芯過濾后上硅膠柱，柱體積為 200ml，上柱流速為400ml/hr，上完后用200ml的正己烷洗滌，流速為350ml/hr。后用含3% (V/V)甲醇的正己烷溶液洗脫，流速為300ml/hr，得洗脫液880ml，效價12740 μ g/ml。將洗脫液減壓濃縮至干，加乙醇結晶，過濾烘干得輔酶Q109. lg，主組分HPLC峰面積比例98. 0%, 見 CN200710166132. 1 實施例六。
表1各實施例的輔酶Qio制備的總收率
項目總收率(％)實施例一90. 87實施例二90. 38實施例三90. 42實施例四90. 35實施例五90. 33實施例六90. 26對比實施例一78. 17對比實施例二79. 95對比實施例三74. 78
本具體實施例僅僅是對本發明的解釋，其并不是對本發明的限制，本領域技術人員在閱讀完本說明書后可以根據需要對本實施例做出沒有創造性貢獻的修改，但只要在本發明的權利要求范圍內都受到專利法的保護。
權利要求
1.一種高純度輔酶QlO的規模化制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)發酵液處理將含有輔酶Qio的發酵液分離得到濕菌體，烘干所得濕菌體得干燥菌體，所得干燥菌體經二氧化碳超臨界萃取得到含有輔酶QlO的萃取液；(2)萃取液處理將所得萃取液通過濃度為0.2 0. 5mol/L的堿液處理得到上柱液；(3)上柱液處理將所得上柱液通過粒徑為200 300目的硅膠柱層析，再用醚、烷、醇、 酮、酯中的一種或兩種溶劑作為洗脫劑進行洗脫得到洗脫液；(4)洗脫液處理將所得洗脫液濃縮并冷卻得第一晶體，在所得第一晶體中加乙醇溶解，然后用微孔濾膜過濾后得到濾液，將所得濾液降溫攪拌結晶后再離心分離，得到潮濕的第二晶體，再將所得第二晶體干燥、粉碎，得到純度大于99. 5%的輔酶Q10。
2.根據權利要求1所述的一種高純度輔酶QlO的規模化制備方法，其特征在于所述步驟(1)中干燥菌體的粒度為40 200目，含水量為5 15%，輔酶QlO的含量為10 40mg/go
3.根據權利要求1或2所述的一種高純度輔酶QlO的規模化制備方法，其特征在于 所述步驟(1)中二氧化碳超臨界萃取所用的夾帶溶劑為醇、酮、醚、酯、烷中的至少一種。
4.根據權利要求3所述的一種高純度輔酶QlO的規模化制備方法，其特征在于所述二氧化碳超臨界萃取的萃取條件為壓力24. 5MPa，溫度35°C，夾帶劑用量1. aiil/g，萃取時間 45min。
5.根據權利要求1所述的一種高純度輔酶QlO的規模化制備方法，其特征在于所述步驟(2)包括如下步驟(a)將所得萃取液與0.2 0. 5mol/L的堿液混合，機械攪拌30 50min ；(b)靜置分層2 3h，分取其中的有機相作為第一有機相；(c)將所述第一有機相與水混合，機械攪拌5 15min，所用水的體積為所述萃取液體積的0. 5 1倍；(d)靜置分層20 30min，分取其中的有機相作為第二有機相；(e)將所述第二有機相經脫水處理，得到上柱液。
6.根據權利要求5所述的一種高純度輔酶QlO的規模化制備方法，其特征在于所述步驟(e)所述的脫水處理是使用氯化鈣、無水硫酸鈉中的至少一種為干燥劑，每升所述第二有機相的干燥劑用量為0. 01 0. 03千克。
7.根據權利要求1所述的一種高純度輔酶QlO的規模化制備方法，其特征在于所述步驟(3)所用的洗脫劑選自含1 5% (V/V)乙醇的石油醚溶液、含1 5% (V/V)乙醇的正己烷溶液、含1. 5 4% (V/V)乙酸乙酯的石油醚溶液、含1. 5 4% (V/V)乙酸乙酯的正己烷溶液、含1. 5 4. 5% (V/V)丙酮的石油醚溶液、含1. 5 5% (V/V)乙醇的環己烷溶液、 含1. 5 3% (V/V)異丙醚的環己烷溶液中的一種或多種。
8.根據權利要求1或7所述的一種高純度輔酶QlO的規模化制備方法，其特征在于 所述步驟(3)中硅膠填料的重量是輔酶QlO重量的5 10倍。
9.根據權利要求8所述的一種高純度輔酶QlO的規模化制備方法，其特征在于使用醇、酮、酯中的至少一種或其中兩種作為在線清洗溶劑進行在線清洗所述步驟(3)中的硅膠填料。
10.根據權利要求1所述的一種高純度輔酶QlO的規模化制備方法，其特征在于所述步驟(4)具體為將所得洗脫液濃縮至相對密度0. 750 0. 850 (60°C 70°C)，冷卻1 2 小時，得第一晶體Xg，在所得第一晶體中加入15X 30Xml的乙醇在50°C 70°C下溶解，然后用孔徑為0. 22 0. 45 μ m的微孔濾膜過濾后得到濾液，將所得濾液以3 10min/°C的速率降溫、并以10 90RPM的攪拌速率攪拌結晶后再離心分離，離心轉速為5000 6000RPM， 離心時間為60 120min，得到潮濕的第二晶體，再將所得第二晶體在溫度為35 38°C、真空度為-0. 06 0. 09Mpa的真空條件下干燥，然后粉碎，得到純度大于99. 5%的輔酶Q10。
全文摘要
本發明涉及一種分離輔酶Q10的制備方法，特別涉及一種高純度輔酶Q10的規模化制備方法。所述方法包括將含有輔酶Q10的干燥菌體經超臨界萃取得到萃取液，萃取液經堿處理得到上柱液，上柱液上柱層析，得到洗脫液，洗脫液濃縮，用乙醇結晶得到大于99.5%的高純度輔酶Q10。通過此種方法生產輔酶Q10，總收率大于90%，成本低廉，適于工業化生產。
文檔編號C07C50/28GK102391092SQ201110286019
公開日2012年3月28日 申請日期2011年11月22日 優先權日2011年11月22日
發明者周建仁, 梅云云, 毛海明, 王維, 蔣風 申請人:杭州華東醫藥集團康潤制藥有限公司