專利名稱：一種制備高純枸杞酸的方法
技術領域：
本發明涉及植物藥提取制備方法,具體涉及一種從枸杞(Lyciumchinense)提取制備高純度枸杞酸的方法。
背景技術：
枸杞是作為對 人的健康有很多益處的食品，已被廣泛應用。隨著人們生活水平的日益提高，近年來相關枸杞的深加工產品也日益增多。但是，枸杞的原料產地來源多，質量也有較大的區別，進一步對制備枸杞提取物帶來影響，導致深加工產品質量無法控制。目前，對于枸杞提取物的要求，只是以枸杞提取物中的多糖成分作為質量指標。而實際上除此之外，還有一些其它成份，例如黃酮，枸杞酸，牛磺酸，甜菜堿等等，它們都有可能會影響枸杞提取物的質量。本發明人根據文獻報道[I] “枸杞酸”是一種目前僅在枸杞中發現的獨有的抗氧化有效成分，它是一種抗壞血酸的β葡萄糖苷，其化學名2-0-(β -D-glucopyranosyl)ascorbic acid (AA-2 β G)枸杞酸是枸杞中特有的標志性成分，檢測枸杞酸含量可以對枸杞原料質量進行鑒別同時也希望以此為基礎建立新的針對枸杞提取物的質量標準。由于目前未見枸杞酸有市售品，為此有必要以專利形式公布一種全新的制備方法。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是為了克服上述的不足之處，研究設計從枸杞(Lycium chinense)提取制備高純度枸杞酸的方法。本發明提供了一種制備高純枸杞酸的方法，該方法包括下列步驟( I)提取將枸杞原料用溶劑冷浸或加熱提取；(2)離心結合平板過濾將上述浸泡物料使用高速離心機去掉植物渣，再經板框過濾機濾得清液；(3)濃縮所得清液真空濃縮至不含有機溶媒；(4)大孔樹脂除雜濃縮液以I個柱體積量/小時的流量通過大孔吸附樹脂柱，收集全部通過的液體；(5)通過離子交換纖維將步驟(4)料液以I個柱體積量/小時的流速通過強堿性陰離子交換纖維，用反滲透純水洗至中性，交換纖維再用兩個柱體積O. 5%的甲酸溶液洗脫，以O. 5個柱體積量/小時的流速操作；(6)濃縮收集全部兩個柱體積的洗脫液真空濃縮并經加水再濃縮直至濃縮液中無甲酸(pH 7)；(7)中壓層析取上述濃縮液，上于中壓層析柱上，采用乙腈、甲醇，乙醇、丙醇或丙酮的水溶液作為洗脫劑，洗脫液用HPLC檢測，收集枸杞酸相對集中的餾分；(8)濃縮真空濃縮經HPLC檢測為枸杞酸相對集中的層析餾分；(9)將上述濃縮物重復步驟(7)進行再一次層析，收集枸杞酸高度集中的餾分；
(10)濃縮干燥真空濃縮上述枸杞酸高度集中的層析餾分至干即得。通過本發明方法制得的枸杞酸經HPLC鑒別純度達到959Γ97%。本發明可用中國寧夏、新疆、甘肅和河北等地產的枸杞為原料。本發明方法步驟(I)用于提取的溶劑可以是水、甲醇、乙醇、丙醇、乙腈或丙酮或是水與甲醇、乙醇、丙醇、乙腈或丙酮的(Γιοο%的混合液，優選純甲醇或者純乙腈。溶劑與枸杞的重量配比為1:8 1:16，優選1:14。冷浸溫度和時間是4 90V和Γ14小時，優選25°C和8小時。步驟(2)用轉速在8000轉/分鐘的高速離心機除去植物渣。步驟(4)中的除雜所用的大孔樹脂為非極性或低極性的D-101、AB-8、ADS-17或HP-20，優選 D-101。步驟(5)通過的強堿性陰離子交換纖維是ZB-2強堿性陰離子交換纖維。步驟(7、9)中所述的中壓層是指使用DIOL或RP8中壓層析預制柱為MERCKLiChroprep DIOL和MERCK LiChroprep RP8。層析流動相采用乙腈或者甲醇與水配制的梯度洗脫系統，梯度從甲醇與水的比例為1% (1:99V/V)起逐漸升高比例到50% (50:50V/V)止，流量為20毫升/分鐘。以紫外在線檢測器信號為準收集260nm監測下的枸杞酸出峰部位，自動收集儀收集枸杞酸高度集中的餾分。本發明方法制備的枸杞酸經光譜鑒定與抗壞血酸的β葡萄糖苷完全一致。高分辨質譜數據顯示Q-Tofu分子量是361. 0741，計算得出枸杞酸含鈉離子的分子式為Ci2H180nNa。那么枸杞酸的分子量應該是338,分子式是C12H18O1115再結合枸杞酸的核磁共振光譜碳氫數據的解讀推定枸杞酸的分子結構與已知的2-0-( β -D-glucopyranosyl)ascorbic acid 一致。
Η% Η
HOOrn^l/\4’
6 H M0H
Ho^Vf。入。)
I Rho
HO碳氫數據
NuH-NMR (ppm D20)C-NMR (ppm D20)---
I------------178.29
權利要求
1.一種制備高純枸杞酸的方法，其特征在于，該方法包括下列步驟 (1)提取將枸杞原料用溶劑冷浸或加熱提取； (2)離心結合平板過濾將上述浸泡物料使用高速離心機去掉植物渣，再經板框過濾機濾得清液； (3)濃縮所得清液真空濃縮至不含有機溶媒； (4)大孔樹脂除雜濃縮液以I個柱體積量/小時的流量通過大孔吸附樹脂柱，收集全部通過的液體； (5)通過離子交換纖維將步驟(4)料液以I個柱體積量/小時的流速通過強堿性陰離子交換纖維，用反滲透純水洗至中性，交換纖維再用兩個柱體積O. 5%的甲酸溶液洗脫，以O.5個柱體積量/小時的流速操作； (6)濃縮收集全部兩個柱體積的洗脫液真空濃縮并經加水再濃縮直至濃縮液中無甲酸 pH 7 ; (7)中壓層析取上述濃縮液，上于中壓層析柱上，采用乙腈、甲醇，乙醇、丙醇或丙酮的水溶液作為洗脫劑，洗脫液用HPLC檢測，收集枸杞酸相對集中的餾分； (8)濃縮真空濃縮經HPLC檢測為枸杞酸相對集中的層析餾分； (9)將上述濃縮物重復步驟(7)進行再一次層析，收集枸杞酸高度集中的餾分； (10)濃縮干燥真空濃縮上述枸杞酸高度集中的層析餾分至干即得。
2.根據權利要求I所述的一種制備高純枸杞酸的方法，其特征在于，步驟(I)用于提取的溶劑為水、甲醇、乙醇、丙醇、乙腈或丙酮或是水與甲醇、乙醇、丙醇、乙腈或丙酮的(Γιοο%的混合液，優選純甲醇或者純乙腈；溶劑與枸杞的重量配比為1:8 1:16，優選1:14。
3.根據權利要求I所述的一種制備高純枸杞酸的方法，其特征在于，所述步驟(I)冷浸溫度和時間為4 90。。，4 14小時；優選25°C，8小時。
4.根據權利要求I所述的一種制備高純枸杞酸的方法，其特征在于，所述步驟(2)用轉速在8000轉/分鐘的高速離心機除去植物渣。
5.根據權利要求I所述的一種制備高純枸杞酸的方法，其特征在于，所述步驟(4)中的除雜所用的大孔樹脂為非極性或低極性的D-101、AB-8、ADS-17或HP-20，優選D-101。
6.根據權利要求I所述的一種制備高純枸杞酸的方法，其特征在于，所述步驟(5)通過的強堿性陰離子交換纖維為ZB-2強堿性陰離子交換纖維。
7.根據權利要求I所述的一種制備高純枸杞酸的方法，其特征在于，所述步驟(7)或(9)中所述的中壓層是指使用DIOL或RP8中壓層析預制柱為MERCK LiChroprep DIOL或MERCK LiChroprep RP8 ;層析流動相采用乙腈或者甲醇與水配制的梯度洗脫系統，梯度從甲醇與水的比例為1%1:99V/V起逐漸升高比例到50%50:50V/V止，流量為20毫升/分鐘；以紫外在線檢測器信號為準收集260nm監測下的枸杞酸出峰部位，自動收集儀收集枸杞酸高度集中的餾分。
8.根據權利要求I所述的一種制備高純枸杞酸的方法，其特征在于，制得的枸杞酸經HPLC鑒別純度達到95% 97%。
全文摘要
本發明公開了一種高純枸杞酸制備方法。包括將枸杞原料用溶劑冷浸或加熱提取、過濾、濃縮、大孔樹脂除雜、通過離子交換纖維富集以及兩次中壓層析。通過本發明方法制備得到高純枸杞酸，由高效液相色譜檢測枸杞酸含量可達95%以上。本發明公開的枸杞酸是枸杞中獨有的標志性成分，可作為枸杞深加工產品的真偽鑒別指標，若同時對枸杞酸進行含量測定又可以起到保證枸杞深加工產品質量的作用。本發明將對枸杞提取物加工品質的提高，對造福于人類健康具有積極作用。
文檔編號C07H1/08GK102942606SQ201210532800
公開日2013年2月27日 申請日期2012年12月11日 優先權日2012年12月11日
發明者殷夢龍, 楊延超, 董慧燕, 李旭孟 申請人:上海諾德生物實業有限公司