一種密花核果木莖提取物的制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種密花核果木莖提取物的制備方法，是在密花核果木莖的干燥粉末中加入溶劑提取；提取液經過濾、減壓濃縮得到總提取物，加水混懸，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，減壓回收分別得到石油醚部分、氯仿部分、乙酸乙酯部分和正丁醇部分，所得石油醚部分包括3個三萜類化合物、7個甾醇類化合物和1個甘油酯衍生物。本發明制得的提取物得率高，工藝流程簡單，成本低廉，適合較大規模的制備，提取物具有很好的抗腫瘤活性，可以應用于預防和治療腫瘤藥物中。
【專利說明】一種密花核果木莖提取物的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于天然植物有效成分的提取分離【技術領域】，涉及一種密花核果木莖提取物的制備方法。
【背景技術】
[0002]大戟科(Euphorbiaceae)核果木屬(Drypetes)植物全世界約200種,分布于亞洲、美洲和非洲中西部等熱帶、亞熱帶地區。該屬植物在非洲民間為傳統藥材，主要用于治療淋病、惡性腫瘤、黑熱病、類風濕、支氣管炎等癥，藥用史由來已久。核果木屬植物作為惡性腫瘤的傳統治療藥物，對其開展抗腫瘤活性研究具有極大的開發潛力。
[0003]中藥的抗腫瘤作用得到廣泛關注。許多臨床及實驗證實，很多中藥的作用明顯，且毒副作用小。而紫杉醇、喜樹堿、長春堿及長春新堿等的研發成功進一步佐證了天然產物作為抗腫瘤藥物研究戰略的可行性。因此，從中藥中尋找高效低毒的抗腫瘤藥物已成為該類藥物研究的一個重要方向。
[0004]雖然核果木屬植物作為惡性腫瘤的傳統治療藥物由來已久，但目前國內外尚未對該屬植物進行抗腫瘤方面的相關研究。密花核果木(Drypetes congestiflora)分布于海南、廣東、云南等省的山地疏林中，是一新擬種，為海南主要經濟林木，國內外未見其化學成分和藥理活性的研究報道。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是針對現有技術的不足而提供一種密花核果木莖提取物的制備方法，利用簡單的提取分離方法對密花核果木莖不同極性部位進行抗腫瘤活性篩選，找到活性部位,經多次柱層析,闡明活性部位的化學成分。
[0006]一種密花核果木莖提取物的制備方法，其步驟如下:
[0007]1、在密花核果木莖的干燥粉末中加入溶劑提取，溶劑為85~95%的乙醇或甲醇。
[0008]2、將密花核果木莖提取液經過濾、減壓濃縮得到總提取物，加水混懸，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，減壓回收分別得到石油醚部分、氯仿部分、乙酸乙酯部分和正丁醇部分。
[0009]3、石油醚部分經反復柱層析，得到3個三萜類化合物、7個留醇類化合物和I個甘油酯衍生物。
[0010]上述方法中，所述密花核果木莖干燥粉末是將密花核果木的莖經陰干后粉碎得到。
[0011]上述方法中，所述提取方法包括室溫浸泡、加熱或超聲提取。
[0012]上述方法中，密花核果木莖藥材與溶劑的體積比為1:1~1:10。
[0013]上述方法中，柱層析用填料為柱層析用硅膠或葡聚糖凝膠。
[0014]上述方法中，3個三萜類化合物、7個留醇類化合物和I個甘油酯衍生物，分別為β -香樹酯、3 α -羥基齊墩果酸、木栓酮、麥角留-6，22- 二烯-3 β，5 α，8 α -三醇、豆甾醇-7-酮、7 β -羥基豆留醇、7 α -羥基豆留醇、6 β -羥基-豆留-3-酮、豆留_4_烯_3，6_ 二酮、β-谷甾醇和正十六碳酸α-甘油酯。
[0015]本發明的提取物具有抗腫瘤活性，可以廣泛應用于預防和治療腫瘤藥物中。
[0016]本發明的優點在于:
[0017]I)利用簡單的提取分離方法，對密花核果木莖不同極性部位進行抗腫瘤活性篩選，找到活性部位，經多次柱層析，闡明活性部位的化學成分。
[0018]2)本發明所得提取物的化學成分明確。
[0019]3)所得提取物具有很好抗腫瘤活性，可以廣泛用于預防和治療腫瘤藥物中。
[0020]4)本法明制得的提取物得率高，工藝流程簡單，成本低廉，適合較大規模的制備。
【具體實施方式】
[0021]下面結合實施例，對本發明的【具體實施方式】作進一步詳細描述。以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，或按照制造廠商所建議的條件。
[0022]密花核果木莖提取物的制備方法步驟如下:
[0023]I)將粉碎后的密花核果木莖藥材(過20-80目篩)中加入85-95%的乙醇或甲醇，室溫浸泡、加熱或超聲提取，提取時間為60分鐘至7天，料液比為1:1~1:10 ;
[0024]2)將密花核果木莖藥材提取液過濾、減壓回收得到總提取物，加水混懸，加水混懸，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，減壓回收分別得到石油醚部分、氯仿部分、乙酸乙酯部分和正丁醇部分；
[0025]3)對已確定具有廣泛抗腫瘤活性的石油醚部分進行反復柱層析:石油醚:乙酸乙酯(20:1)硅膠柱層析分別得到化合物(I)、(3)和(10);石油醚:丙酮(20:1)接著是石油醚:乙酸乙酯(10:1)硅膠柱層析分離得到化合物(2)和(4);氯仿:乙酸乙酯(20:1)硅膠柱層析接著是氯仿:甲醇(1:1)葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱層析分離得到化合物(5)，重結晶得到化合物(9);石油醚:乙酸乙酯(8:1)和石油醚:丙酮(10:1)硅膠柱層析分離得到化合物(6)和(7);氯仿:乙酸乙酯(8:1)以及石油醚:丙酮(5:1)硅膠柱層析得到化合物
(8);氯仿:乙酸乙酯(6:1)硅膠柱層析以及氯仿:甲醇(I:1)葡聚糖凝膠S^hadex LH-20柱層析分離得到化合物(11)。
[0026]4)綜合應用多種光譜波譜技術(包括IR、UV、MSUD/2D NMR)結合相關文獻參考，對純化得到的單體化合物進行結構鑒定，分別為3個三萜類化合物、7個留醇類化合物和I個甘油酯衍生物，具體結構為0-香樹酯(1)、3^-羥基齊墩果酸(2)、木栓酮(3)、麥角甾-6，22- 二烯-3 β，5 α，8 α -三醇(4)、豆甾醇_7_酮(5)、7 β -羥基豆甾醇(6)、7 α -羥基豆甾醇(7)、6 β -羥基-豆甾-3-酮(8)、豆甾-4-烯-3，6- 二酮(9)、β -谷甾醇(10)和正十六碳酸ct -甘油酯(11)，測定結構可靠。
[0027]下面結合實施例對本發明作詳細說明。
[0028]實例一密花核果木莖有效部位的制備
[0029] 密花核果木莖(20Kg)，室溫下采用95%乙醇室溫浸泡3次，7天/次，合并提取液，減壓濃縮得總提取物(1.0Kg)，加水懸浮分散，分別用石油醚，氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得石油醚部分(80g)，氯仿部分(120g),乙酸乙酯部分(15g)和正丁醇部分(450g)。[0030]石油醚部分經過反復硅膠、葡聚糖凝膠(S印hdex LH-20)柱層析，得到3個三萜類化合物、7個留醇類化合物和I個甘油酯衍生物，分別為石油醚:乙酸乙酯(20:1)硅膠柱層析分別得到β -香樹酯(I) 30mg、木栓酮(3) 47mg和β -谷甾醇(10) 356mg ;石油醚:丙酮(20:1)接著是石油醚:乙酸乙酯(10:1)硅膠柱層析分離得到3 α -羥基齊墩果酸(2) 17mg和麥角甾_6，22- 二烯-3 β，5 α，8 α -三醇(4) 8mg ;氯仿:乙酸乙酯(20:1)硅膠柱層析接著是氯仿:甲醇(1:1)葡聚糖凝膠S印hadex LH-20柱層析分離得到豆留醇_7_酮(5)26mg，重結晶得到豆甾-4-烯-3，6-二酮(9) 17mg;石油醚:乙酸乙酯(8:1)和石油醚:丙酮(10:
I)硅膠柱層析分離得到7 β -羥基豆甾醇(6) 6mg和7 α -羥基豆甾醇(7) 3mg ;氯仿:乙酸乙酯(8:1)以及石油醚:丙酮(5:1)硅膠柱層析得到6 β -羥基-豆甾-3-酮(8) 16mg ;氯仿:乙酸乙酯(6:1)硅膠柱層析以及氯仿:甲醇(1:1)葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱層析分離得到正十六碳酸α-甘油酯(ll)26mg。化學結構如下:
[0031]
【權利要求】
1.一種密花核果木莖提取物的制備方法，其特征在于，其步驟如下: 1)、在密花核果木莖的干燥粉末中加入溶劑提取，溶劑為85~95%的乙醇或甲醇； 2)、將密花核果木莖提取液經過濾、減壓濃縮得到總提取物，加水混懸，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，減壓回收分別得到石油醚部分、氯仿部分、乙酸乙酯部分和正丁醇部分； 3)、石油醚部分經反復柱層析，得到3個三萜類化合物、7個留醇類化合物和I個甘油酯衍生物。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于:所述密花核果木莖干燥粉末是將密花核果木的莖經陰干后粉碎得到。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于:所述提取方法包括室溫浸泡、加熱或超聲提取。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于:密花核果木莖藥材與溶劑的體積比為1:1 ~1:10。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于:柱層析用填料為柱層析用硅膠或葡聚糖凝膠。
【文檔編號】C07J63/00GK103923157SQ201410134367
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2014年4月4日 優先權日:2014年4月4日
【發明者】陳文豪, 陳光英, 宋小平, 惠陽 申請人:海南師范大學