專利名稱：取代的異噁唑基噻吩化合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及新的取代的異噁唑基噻吩化合物和含有這種化合物作為活性組分的藥用組合物，該化合物有利于強化細胞分化誘導因子的作用。
已報道能通過強化存在于或給投到活體中的細胞分化誘導因子的作用從而起抗骨病或神經病療效或預防效果的化合物包括在WO98/09958中公開的稠合噻吩衍生物，但是該報道中沒有記載本發明的化合物。
本發明人通過廣泛研究并發現一些取代的異噁唑基噻吩化合物能有效地治療或預防骨病或神經病，并最終完成了本發明。
更具體地說，本發明涉及一種式(Ⅰ)所示的取代的異噁唑基噻吩化合物或其鹽 其中R1和R2各自代表1-5個碳原子的烷基，R3代表氰基或基團CONR5R6(其中R5和R6各自代表H或1-10個碳原子的烷基)，R4代表1-5個碳原子的烷基或苯基，n為0-2的整數。
本文中所用的1-5個碳原子的烷基意思是直鏈或支鏈烷基并包括，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基和正戊基。
本文中所用的1-10個碳原子的烷基意思是直鏈或支鏈烷基并包括，如甲基、乙基、正丙基、并丙基、正丁基、異丁基、正戊基、正己基和正辛基。
本文中所用的鹽可以包括具有藥用上可接受的酸(例如鹽酸、硫酸、硝酸、酒石酸、檸檬酸、馬來酸、富馬酸等)的鹽，及其水合物。
本發明還可以包括在給藥之后能夠通過體內新陳代謝產生本發明的活性化合物的化合物、或者能通過體內新陳代謝產生由本發明的化合物的新陳代謝產生的活性化合物本身的化合物。
本發明的化合物(Ⅰ)可以根據例如下面的方法制備1)其中R3為氰基并且n為0的化合物(Ⅰ)可以根據例如反應路線1所述的方法制備。
反應路線1 在反應路線1中，R1和R2具有如上所述的相同含義，并且R7為基團COCH3、COCH2R4或CH2COR4(其中R4具有如上所述的相同含義)。
反應路線1詳述如下。
1)-(1)可以使用R7代表COCH3的二酮化合物(Ⅱ)作原料制備本化合物(Ⅰa)和(Ⅰb)。 更具體地說，可以在有堿的情況下將R7代表COCH3的二酮化合物(Ⅱ)與二硫化碳(CS2)縮合，然后通過來自二硫化碳的一個硫原子與如氯乙腈或溴乙腈的鹵代乙腈以及剩余硫原子與R2-X1(其中R2具有如上所述相同的含義，X1為例如鹵原子的離去基團，如氯原子或溴原子或者甲硫氧基)的硫醚化作用，同時進行分子內環化反應，將該縮合產物轉換成R7代表COCH3的噻吩化合物(Ⅲ)。
可用于本反應中的堿可以包括堿金屬氫氧化物(氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀等)、堿金屬的碳酸鹽(碳酸鋰、碳酸鈉、碳酸鉀等)、堿金屬的碳酸氫鹽(碳酸氫鈉、碳酸氫鉀等)、堿金屬的氫化物(氫化鈉、氫化鉀等)、無機堿(金屬鈉、金屬鉀、氨化鈉等)、堿金屬的醇化物(甲醇鈉、乙醇鈉、叔丁醇鉀等)、有機堿(三乙胺、二異丙基乙胺、三正丁胺、1,5-二氮雜二環[4.3.0]-5-壬烯、1,8-二氮雜二環[5.4.0]-7-十一碳烯、吡啶、N,N-二甲基氨基吡啶等)、有機金屬化合物(正丁基鋰、仲丁基鋰、叔丁基鋰、二異丙基氨基鋰、二(三甲基甲硅烷基)氨化鈉等)等。
該反應可以在有或者沒有溶劑的情況下進行。可以使用的溶劑包括甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、叔丁醇、二噁烷、四氫呋喃、乙醚、石油醚、正己烷、環己烷、苯、甲苯、二甲苯、氯苯、吡啶、乙酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、水等。
所用的堿和溶劑以及是否使用溶劑應根據反應中所用的反應物和反應參數經過適當選擇。
然后，將R7為基團COCH3的噻吩化合物(Ⅲ)中的R7與R4-OOOH(其中R4具有如上所述的相同含義)所代表的活化羧酸衍生物，例如甲酯或乙酯的烷基酯或酰基鹵或酸酐縮合，從而將R7轉換成基團COCH2COR4。接下來使用羥胺或其衍生物的縮合環化反應可以生產本發明的化合物(Ⅰa)或(Ⅰb)。
該縮合反應優選在有堿的情況下進行。可用于該反應中的堿包括堿金屬氫氧化物(氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀等)、堿金屬的碳酸鹽(碳酸鋰、碳酸鈉、碳酸鉀等)、堿金屬的碳酸氫鹽(碳酸氫鈉、碳酸氫鉀等)、堿金屬的氫化物(氫化鈉、氫化鉀等)、無機堿(金屬鈉、金屬鉀、氨化鈉等)、堿金屬的醇化物(甲醇鈉、乙醇鈉、叔丁醇鉀等)、有機堿(三乙胺、二異丙基乙胺、三正丁胺、1,5-二氮雜二環[4.3.0]-5-壬烯、1,8-二氮雜二環[5.4.0]-7-十一碳烯、吡啶、N,N-二甲基氨基吡啶等)、有機金屬化合物(正丁基鋰、叔丁基鋰、二異丙基氨化鋰、二(三甲基甲硅烷基)氨化鈉等)等。
該反應可以在有或者沒有溶劑的情況下進行。可以使用的溶劑包括甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、叔丁醇、二噁烷、四氫呋喃、乙醚、石油醚、正己烷、環己烷、苯、甲苯、二甲苯、氯苯、吡啶、乙酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、水等。
用于縮合環化反應的羥胺可以為鹽酸、硫酸等的鹽的形式，并且反應優選在有堿的情況下進行。可用于本反應的堿包括堿金屬氫氧化物(氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀等)、堿金屬的碳酸鹽(碳酸鋰、碳酸鈉、碳酸鉀等)、堿金屬的碳酸氫鹽(碳酸氫鈉、碳酸氫鉀等)、堿金屬的氫化物(氫化鈉、氫化鉀等)、無機堿(金屬鈉、金屬鉀、氨鈉等)、堿金屬的醇化物(甲醇鈉、乙醇鈉、叔丁醇鉀等)、有機堿(三乙胺、二異丙基乙胺、三正丁胺、1,5-二氮雜二環[4.3.0]-5-壬烯、1,8-二氮雜二環[5.4.0]-7-十一碳烯、吡啶、N,N-二甲基氨基吡啶等)、有機金屬化合物(正丁基鋰、叔丁基鋰、二異丙基氨化鋰、二(三甲基甲硅烷基)氨化鈉等)等。
該反應可以在有或者沒有溶劑的情況下進行。可以使用的溶劑包括甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、叔丁醇、二噁烷、四氫呋喃、乙醚、石油醚、正己烷、環己烷、苯、甲苯、二甲苯、氯苯、吡啶、乙酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、水等。
所用試劑和溶劑以及是否使用溶劑應針對每一反應根據所用的反應物和反應參數經過適當選擇。
1)-(2)可以根據反應路線1使用R7代表COCH2R4或CH2COR4的二酮化合物(Ⅱ)作原料制備本發明的化合物(Ⅰc-Ⅰf)。 更具體地說，可以根據1)-(1)的方法使用R7代表基團COCH2R4或(CH2COR4的二酮化合物(Ⅱ)制備R7代表COCH2R4或CH2COR4的噻吩化合物(Ⅲ)。
通過將R7代表基團COCH2R4或CH2COR4的噻吩化合物(Ⅲ)的R7轉換成甲酰基、鹵代亞甲基、烷氧基亞甲基或氨基亞甲基，接著使用羥胺或其衍生物進行縮合環化反應，可制得本發明的化合物(Ⅰc-Ⅰf)。
可以通過如下方法進行所述甲酰化反應第一種方法是在有堿的情況下縮合例如甲酸甲酯或甲酸乙酯的甲酰酯或者一氧化碳，或者第二種方法是將R7的羰基轉換至具有仲胺如二甲胺、吡咯烷或嗎啉的烯胺上，接著在有碳酰氯、磷酰氯、草酰氯或類似物的情況下與例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基甲酰胺二甲基乙縮醛或叔丁氧基(二甲氨基)甲烷的N,N-二甲基甲酰胺衍生物反應。
可以使用例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基甲酰胺二甲基乙縮醛或叔丁氧基(二甲氨基)甲烷的N,N-二甲基甲酰胺衍生物進行氨亞甲基形成反應。
可以通過將R7的羰基轉換至具有仲胺如二甲胺、吡咯烷或嗎啉的烯胺上，接著在有堿的情況下與例如氯仿的鹵仿反應來進行鹵代亞甲基形成反應。
可以通過在有例如原甲酸甲酯或原甲酸乙酯的原甲酸烷基酯和乙酸酐存在的情況下加熱來進行烷氧基亞甲基形成反應。
可以使用例如N,N-二甲基甲酰胺二甲基乙縮醛或叔丁氧基(二甲氨基)甲烷的N,N-二甲基甲酰胺衍生物進行氨亞甲基形成反應。
可用于甲酰化和鹵代亞甲基形成反應中的堿包括堿金屬氫氧化物(氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀等)、堿金屬的碳酸鹽(碳酸鋰、碳酸鈉、碳酸鉀等)、堿金屬的碳酸氫鹽(碳酸氫鈉、碳酸氫鉀等)、堿金屬的氫化物(氫化鈉、氫化鉀等)、無機堿(金屬鈉、金屬鉀等)、堿金屬的乙酸鹽(乙酸鈉等)、堿金屬的醇化物(甲醇鈉、乙醇鈉、叔丁醇鉀等)、有機堿(三乙胺、二異丙基乙胺、三正丁胺、1,5-二氮雜二環[4.3.0]-5-壬烯、1,8-二氮雜二環[5.4.0]-7-十一碳烯、吡啶、N,N-二甲基氨基吡啶等)、有機金屬化合物(正丁基鋰、仲丁基鋰、叔丁基鋰、二異丙基氨化鋰、二(三甲基甲硅烷基)氨化鈉等)等。
所述甲酰化反應、鹵代亞甲基形成反應、烷氧基亞甲基形成反應和氨基亞甲基形成反應可以在有或者沒有溶劑的情況下進行。可以使用的溶劑包括甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、叔丁醇、二噁烷、四氫呋喃、乙醚、石油醚、正己烷、環己烷、苯、甲苯、二甲苯、氯苯、吡啶、乙酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、水等。
在每個反應中所用的試劑和溶劑以及是否使用該溶劑應所用的反應物和反應參數經過適當選擇。
2)本發明的化合物(Ⅰg)，為R3代表基團CONR5R6(其中R5和R6具有如上所述的相同含義)且n為0的化合物(Ⅰ)，可以通過在酸性或堿性條件下水解化合物(Ⅰa-Ⅰf)的氰基制成。 本反應中的所述水解反應可以按照水解氰基的常規反應進行，例如單獨使用或任選組合地使用鹽酸、硫酸、乙酸、磷酸、多磷酸等的酸水解，以及使用氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鋰、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、氨水等的堿水解。
該反應可以在有或者沒有溶劑的情況下進行。可以使用的溶劑包括甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、叔丁醇、二噁烷、四氫呋喃、乙醚、石油醚、正己烷、環己烷、苯、甲苯、二甲苯、氯苯、吡啶、乙酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、水等。
用于該反應中的試劑和溶劑以及是否使用所述溶劑應根據所用的反應物和反應參數經過適當選擇。
所述化合物(Ⅰg)可以根據以下方法制備上面1)-(1)中，通過用例如溴乙酸甲酯或溴乙酸乙酯的鹵代乙酸酯代替在制備化合物(Ⅰa-Ⅰf)的中間噻吩化合物(Ⅲ)的步驟中來自二硫化碳的一個硫原子的硫醚化作用所用的例如氯乙腈或溴乙腈的鹵代乙腈可以制備烷氧羰基代替氰基的噻吩化合物(Ⅲ)。
然后，在酸性或堿性條件下將所述噻吩化合物(Ⅲ)的烷氧羰基水解成羧基，接著使用羥胺進行縮合環化反應，從而制備羧基代替了上面1中的氰基的化合物(Ⅰa-Ⅰf)。
上述的水解可以通過水解酯的常規反應進行，例如單獨使用或任選組合地使用鹽酸、硫酸、乙酸、磷酸、多磷酸等的酸水解，以及使用氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鋰、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、氨水等的堿水解。
該反應可以在有或者沒有溶劑的情況下進行。可以使用的溶劑包括甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、叔丁醇、二噁烷、四氫呋喃、乙醚、石油醚、正己烷、環己烷、苯、甲苯、二甲苯、氯苯、吡啶、乙酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、水等。
用于該反應中的試劑和溶劑以及是否使用溶劑應根據所用的反應物和反應參數經過適當選擇。
HNR5R6(其中R5和R6具有如上所述的相同含義)所示氨基化合物酰胺化羧基可以最終得到本發明的化合物(Ⅰg)。
酰胺化作用包括與胺的酯基轉移作用、得自水解羧酸與胺的縮合反應等。縮合劑包括，例如，如亞硫酰氯的酰基鹵、如氯碳酸乙酯的氯碳酸烷基酯、如二環己基碳二亞胺、1-乙基-3-(3-二甲氨基)丙基碳二亞胺的碳二亞胺、如甲磺酰氯的磺酰氯化合物、如亞磷酸二苯酯、二苯基磷酰氯、三苯膦-氮雜二羧酸二乙酯的含磷化合物、N,N’-碳二咪唑。
該反應可以在有或者沒有溶劑的情況下進行。可以使用的溶劑包括甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、叔丁醇、二噁烷、四氫呋喃、乙醚、石油醚、正己烷、環己烷、苯、甲苯、二甲苯、氯苯、吡啶、乙酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、水等。
用于該反應中的試劑和溶劑以及是否使用溶劑應根據所用的反應物和反應參數經過適當選擇。
3)通過常規氧化反應將化合物(Ⅰa-Ⅰg)中烷硫基(-S-R2)的硫原子氧化成亞砜或砜，可以制備n為1或2的本發明化合物(Ⅰ)。可用于該氧化反應的氧化劑包括例如，過氧化氫、叔丁基過氧化物、間氯過苯甲酸、過乙酸、間過碘酸鈉、亞溴酸鈉鹽、次氯酸鈉、全碘苯等。
該反應可以在有或者沒有溶劑的情況下進行。可以使用的溶劑包括甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、叔丁醇、二噁烷、四氫呋喃、乙醚、石油醚、正己烷、環己烷、苯、甲苯、二甲苯、氯苯、吡啶、乙酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、水等。
用于該反應中的試劑和溶劑以及是否使用所述溶劑應根據所用的反應物和反應參數經過適當選擇。
本發明的化合物具有有效強化骨生成的活性，并且可單獨或與骨修復用的載體混合用作修復或移植骨或牙槽骨的骨生成強化劑。
本發明的化合物，當其用作骨生成強化劑時，可以片劑、粉劑、溶液、注射液、栓劑等劑量形式經口或腸胃外給藥。還可以直接施加到已經手術除去的骨頭上。可以通過綜合考慮患者的年齡、性別、體重等來選擇最佳劑量。
本發明的化合物，當其與骨修復用的載體混合使用時，可以粘附在由金屬、陶瓷或聚合物制成的人造骨上或包含其中。優選將所述人造骨制成具有多孔表面，以便當將所述骨頭移植到骨頭的缺損部分時將根據本發明的成骨細胞分化強化劑釋放到活組織中。
通過以下實施例和測定實施例更全面地解釋本發明。
然后將所得殘余物溶于N,N-二甲基甲酰胺(80ml)，加入無水碳酸鉀(12.1g,87.6mmol)并在室溫下將該混合物攪拌10小時。向反應溶液中加入水，將沉淀物過濾出，沖洗(用水)，干燥，然后從乙酸乙酯-正己烷中重結晶，獲得3-甲基-5-甲硫基-4-丙酰噻吩-2-甲酸乙酯(7.3g,31％)無色晶體。
熔點114.0-115.0℃b)3,4’-二甲基-4-(異嚼唑-5-基)-5-(甲硫基)噻吩-2-甲酸向用正己烷(5ml)沖洗了3次的60％氫化鈉(2.14g,53.6mmol)中于室溫下依次加入甲酸乙酯(22ml)和在四氫呋喃(54ml)中的3-甲基-5-甲硫基-4-丙酰噻吩-2-甲酸乙酯(7.0g,25.7mmol)溶液，然后在80℃下邊攪拌邊將該混合物加熱1小時。將反應溶液冷卻到室溫，并通過加入氯化銨的飽和水溶液使其呈酸性，用乙酸乙酯萃取，并將有機層用水沖洗，干燥(在無水硫酸鎂上)并在減壓下濃縮。
向所得殘余物中加入乙醇(22ml)和6N氫氧化鈉水溶液(7.3ml)，在60℃下邊攪拌邊將該混合物加熱1小時。將所得反應溶液冷卻到室溫，通過加入3N鹽酸使其為酸性，用乙酸乙酯萃取，并將有機層用水沖洗，干燥(在無水硫酸鎂上)并在減壓下濃縮。
向所得殘余物中加入吡啶(11ml)和羥胺鹽酸鹽(1.83g,26.4mmol)并在80℃下邊攪拌邊將混合物加熱1小時。將反應溶液冷卻，用水稀釋，然后加入12N鹽酸使其呈酸性并用乙酸乙酯萃取。將有機層沖洗(依次用水和氯化鈉的飽和水溶液)，干燥(在無水硫酸鎂上)，并在減壓下濃縮，得到粗晶體，然后在乙酸乙酯-正己烷中再結晶，獲得3,4’-二甲基-4-(異噁唑-5-基)-5-(甲硫基)噻吩-2-甲酸(5.56g,80％)無色晶體。
熔點190.0-191.5℃c)3,4’-二甲基-4-(異噁唑-5-基)-5-(甲硫基)噻吩-2-甲酰胺在室溫下向含3,4’-二甲基-4-(異噁唑-5-基)-5-(甲硫基)噻吩-2-甲酸(4.13g,15.3mmol)的四氫呋喃(15ml)中加入N,N-二甲基甲酰胺(0.5ml)和亞硫酰氯(2.0g,16.9mmol)。將混合物攪拌20分鐘之后，向其中加入25％的氨水(10ml)并將反應溶液用乙酸乙酯萃取。然后將有機層沖洗(依次用水和氯化鈉的飽和水溶液)，干燥(在無水硫酸鎂上)，并在減壓下濃縮。這樣獲得的殘余物通過硅膠柱色譜法提純(展開劑正己烷/乙酸乙酯=1∶1)，并在乙醚-正己烷中重結晶，從而獲得3,4’-二甲基-4-(異噁唑-5-基)-5-(甲硫基)噻吩-2-甲酰胺(2.19g,53％)無色晶體。
熔點140.0-141.0℃實施例23-乙基-4-(4-甲基異噁唑-5-基)-5-(甲硫基)噻吩-2-腈a)3-乙基-5-甲硫基-4-丙酰噻吩-2-腈在冰冷卻下向在二甲亞砜(100ml)中含有2,4-庚二酮(10.0g,78.0mmol)的溶液中依次滴加含有氫氧化鉀(10.3g,156.0mmol)的85％水溶液(10ml)和二硫化碳(5.9g,78.0mmol)，然后在該溫度下將該混合物攪拌30分鐘。接著，在冰冷卻下在5分鐘內滴加在二甲亞砜(10ml)中含有氯乙腈(5.3g,70.2mmol)的溶液，在該溫度下將混合物攪拌20分鐘。然后加入碳酸鉀(10.8g,78.0mmol)和碘代甲烷(12.2g,85.8mmol)，并將所述混合物再攪拌30分鐘。用乙酸乙酯萃取反應溶液，并將有機層沖洗(依次用水和飽和氯化鈉水溶液)、干燥(在無水硫酸鎂上)、過濾并在減壓下濃縮。這樣獲得的殘余物通過硅膠柱色譜法提純(展開劑正己烷/乙酸乙酯=10∶1)，并將如此獲得的結晶用正己烷沖洗，獲得3-乙基-5-甲硫基-4-丙酰噻吩-2-腈(14.8g,88％)無色棱晶。
熔點66.0-67.0℃b)3-乙基-4-(4-甲基異噁唑-5-基)-5-(甲硫基)噻吩-2-腈于室溫下向苯(20ml)中含有甲醇鈉(1.08g,20.0mmol)的懸浮液中依次加入甲酸乙酯(1.48g,20.0mmol)和在苯(20ml)中的3-乙基-5-甲硫基-4-丙酰噻吩-2-甲酸乙酯(2.39g,10.0mmol)溶液，然后在室溫下將該混合物攪拌30分鐘。然后加入四氫呋喃(20ml)中含有甲酸乙酯(1.48g,20.0mmol)的溶液并將所述混合物再攪拌16小時。將反應溶液沖洗(依次用3N鹽酸、水和氯化鈉飽和水溶液)，干燥(在無水硫酸鎂上)并在減壓下濃縮。
向所得殘余物中加入吡啶(20ml)和羥胺鹽酸鹽(0.76g,11.0mmol)并在80℃下邊攪拌邊將混合物加熱45分鐘。將反應溶液冷卻到室溫，用水稀釋，然后用乙酸乙酯萃取。將有機層沖洗(依次用水和氯化鈉的飽和水溶液)，干燥(在無水硫酸鎂上)，并在減壓下濃縮，如此獲得的殘余物通過硅膠柱色譜法提純(展開劑正己烷/乙酸乙酯=4∶1-3∶1)，從而獲得3-乙基-4-(4-甲基異噁唑-5-基)-5-(甲硫基)噻吩-2-腈(0.87g,33％)，為黃色油狀物。NMR(200MHz,CDCl3)δ:1.08(t,3H,J=7.5Hz),2.01(s,3H),2.55(s,3H),2.66(q,2H,J=7.5Hz),8.22(s,1H)
熔點93.5-94.5℃
熔點105.0℃
熔點120.0-121.0℃(重結晶溶劑乙酸乙酯-正己烷)
熔點108.0-109.0℃(重結晶溶劑乙醚-正己烷)
熔點136.5-138.0℃(重結晶溶劑乙醚)
熔點111.5-112.5℃(重結晶溶劑乙醚)
4-(4-苯基異噁唑-5-基)-5-甲硫基-3-(1-丙基)-噻吩-2-甲酰胺按照實施例1中所述的方法，只是使用1-苯基-2,4-戊二酮代替2,4-己二酮作原料，制得的標題化合物為無色結晶。
熔點140.0-141.0℃(重結晶溶劑乙醚)
熔點76-77℃(重結晶溶劑乙醚-正己烷)b)3-甲基-5-甲硫基-4-(3-氧代丁酰基)噻吩-2-甲酸乙酯于室溫下向四氫呋喃(5ml)中含有60％氫化鈉(0.64g,15.9mmol)和乙酸乙酯(8.16g,92.9mmol)的懸浮液中依次加入在四氫呋喃(10ml)中含有4-乙酰基-3-甲基-5-(甲硫基)噻吩-2-甲酸乙酯(2.0g,7.7mmol)和乙醇(0.5ml)的溶液和在四氫呋喃(5ml)中含有二苯并-18-冠醚-6(0.04mg)的溶液，在回流下將所述混合物加熱2小時。將反應溶液冷卻到室溫，通過加入3N鹽酸使其呈酸性，用乙酸乙酯萃取。將有機層沖洗(依次用水和氯化鈉飽和水溶液)，干燥(在無水硫酸鎂上)并在減壓下濃縮。這樣獲得的殘余物通過硅膠柱色譜法提純(展開劑正己烷/乙酸乙酯=20∶1)，從而獲得3-甲基-5-甲硫基-4-(3-氧代丁酰基)噻吩-2-甲酸乙酯(1.91g,82％)，為黃色晶體。
熔點51-52℃c)3,3’-二甲基-4-(異噁唑-5-基)-5-(甲硫基)噻吩-2-甲酸向3-甲基-5-甲硫基-4-(3-氧代丁酰基)噻吩-2-甲酸乙酯(1.13g,3.76mmol)中加入吡啶(11ml)和羥胺鹽酸鹽(0.29g,4.14mmol)并邊攪拌邊將所述混合物在80℃下加熱1小時。將反應溶液冷卻，用水稀釋并用乙醚萃取。將有機層沖洗(依次用水、3N鹽酸和氯化鈉飽和水溶液)，干燥(在無水硫酸鎂上)并在減壓下濃縮。于室溫下向溶于四氫呋喃-乙醇(1∶1)的所得殘余物溶液(7.4ml)中加入20％氫氧化鈉水溶液(3.7ml)，并且邊攪拌邊將所述混合物在80℃下加熱1小時。
將反應溶液冷卻到室溫，通過加入3N鹽酸使其呈酸性，將沉淀物過濾回收并用水沖洗。將如此獲得的粗結晶溶于四氫呋喃(200ml)中，干燥(在無水硫酸鎂上)并在減壓下濃縮。這樣獲得的殘余物從乙醚-正己烷中重結晶，從而獲得3,3’-二甲基-4-(異噁唑-5-基)-5-(甲硫基)噻吩-2-甲酸(0.90g,88％)，為黃色結晶。
熔點248.0-249.0℃d)3,3’-二甲基-4-(異噁唑-5-基)-5-(甲硫基)噻吩-2-甲酰胺按照實施例1-c)中所述的方法進行酰胺化，從而得到標題化合物，為淺黃色到無色的針狀物。
熔點208.5-209.0℃(重結晶溶劑四氫呋喃-正己烷)
熔點98-99.5℃(重結晶溶劑乙醚)
熔點152.0-153.0℃
熔點182.0-183.0℃試驗實施例1測定本發明的化合物用于誘導堿性磷酸酶在來自大鼠胎兒頂骨的成骨細胞中產生的強化活性。測定化合物以2.5μg/ml的濃度用于誘導堿性磷酸酶產生的強化活性，當與沒有測定化合物時的活性比較時，分別為，實施例1為195％、實施例3為155％，實施例7為187％和實施例9為134％。試驗實施例2測定本發明的化合物用于在來自大鼠胎兒頂骨的成骨細胞中小結誘導的強化活性。結果分別為實施例1中以1.0μg/ml時為342％、實施例3中以2.5μg/ml時為501％、實施例7中以2.5μg/ml時為576％和實施例9中以2.5μg/ml時為550％。
本發明能夠提供一種低分子量化合物，它通過特定強化體內存在的細胞分化誘導因子的作用可用于治療或預防各種骨病或神經病。具體地說，本發明的化合物可用作骨質疏松癥的預防或治療劑或者作為骨質疏松癥中修復或移植骨或牙槽骨的強化劑。
權利要求
1．下式所示的取代的異噁唑基噻吩化合物或其鹽 其中R1和R2各自代表1-5個碳原子的烷基，R3代表氰基或基團CONR5R6，其中R5和R6各自代表H或1-10個碳原子的烷基，R4代表1-5個碳原子的烷基或苯基，n為0-2的整數。
2．一種化合物，能在給藥之后通過體內新陳代謝產生權利要求1中所述化合物、或者能通過體內新陳代謝產生由權利要求1中所述化合物的新陳代謝產生的活性化合物本身相同的化合物。
3．一種藥用組合物，含有權利要求1中所述的化合物或其鹽作為活性組分。
4．一種強化細胞分化誘導因子的作用的試劑，含有權利要求1中所述的化合物或其鹽作為活性組分。
5．權利要求1中所述的化合物作為藥物的用途。
6．權利要求1中所述的化合物用于生產強化細胞分化誘導因子的藥物的用途。
全文摘要
本發明提供了一種下式所示的取代的異噁唑基噻吩化合物或其鹽:其中R
文檔編號C07D413/04GK1321156SQ99811631
公開日2001年11月7日 申請日期1999年9月29日 優先權日1998年9月30日
發明者原田真宏, 武田順子, 中村年男, 齋藤秀次 申請人:大正制藥株式會社