一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法
【專利摘要】本發明公開了一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法，包括如下步驟：（1）吸附；（2）洗滌；（3）洗脫；（4）分離；（5）除蛋白質；（6）沉淀。本發明提供的制備方法以來源廣泛的豬小腸黏膜為原料，成本低廉。本發明使用聚丙烯腈膜進行分離，不僅可節約大量乙醇，降低生產成本，而且制備的肝素鈉精品純度高，保證了肝素的活性。
【專利說明】一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于化工領域，涉及一種肝素鈉的提取方法，具體涉及一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法。
【背景技術】
[0002]肝素主要從牛肺或豬小腸黏膜提取，是一種由葡萄糖胺、L-艾杜糖醛苷、N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸交替組成的黏多糖硫酸脂。肝素通過與抗凝血酶III結合使其暴露精氨酸反應中心，與活化的凝血因子結合使其滅活，主要滅活X a和II a因子。肝素主要用于預防和治療血栓栓塞性疾病，如心肌梗塞、肺栓塞、腦血管栓塞、外周靜脈血栓等，可防止血栓的形成和擴大。還可用于DIC的早期及其它體內外的抗凝。
[0003]目前，肝素鈉主要是從豬、羊小腸黏膜和牛肺、腌腸衣鹽水等中提取。其提取方法最常用的是鹽解或酶解-離子交換-乙醇沉淀法，但這兩種方法普遍存在回收率低、純度不高的問題。
【發明內容】
[0004]本發明所要解決的技術問題是提供一種設計合理、方法可靠的從豬小腸中提取肝素鈉的方法。
[0005]為解決以上技術問題，本發明一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法，包括如下步驟:
[0006](I)吸附:
[0007]稱取豬小腸黏膜置反應鍋中,加水稀釋,用30%氫氧化鈉溶液調節pH值至9.0~9.5，加熱至沸，保持10~15min，降溫至35°C~45°C，同時濾液虹吸至反應池中，加入5~10%樹脂，保溫攪拌吸附8~IOh ;
[0008](2)洗滌:
[0009]取步驟(1)吸附后的液體靜置30min后過濾，收集樹脂，并用水將樹脂漂洗干凈，浙干備用；
[0010](3)洗脫:
[0011]取步驟(2)的固體加入0.8~1.5mol/L氯化鈉洗滌I~3h，浙干后，加入3~5mol/L氯化鈉I~3倍量，攪拌洗脫5h，浙干后再洗脫2次，合并全部洗脫液；
[0012](4)分離:
[0013]將步驟(3)的洗脫液在攪拌的情況下使用聚丙烯腈膜進行分離，濾速保持在30~40ml/min，并使膜上部分占總體積的10~20%時，停止抽濾；
[0014](5)除蛋白質:
[0015]取膜上截留部分，加入DC-W，充分攪拌20min，室溫下靜置5h，濾除沉淀；
[0016](6)沉淀:
[0017]取步驟(5)的濾液，加入I~2倍的95%乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，虹吸上層醇液，沉淀分別用95%乙醇、丙酮脫水2次，真空干燥，得肝素鈉精品。
[0018]作為本發明的改進，步驟(1)中所述樹脂為D204樹脂。
[0019]上述步驟(3)中洗脫2次時，每次加入3~5mol/L氯化鈉溶液量減半，洗脫時間分別為2h、lh。
[0020]上述步驟(4)的聚丙烯腈膜為截留Mr3000~4000的聚丙烯腈膜。
[0021]與現有技術相比，本發明具有的有益效果為:
[0022]本發明提供的制備方法以來源廣泛的豬小腸黏膜為原料，成本低廉。本發明使用聚丙烯腈膜進行分離，不僅可節約大量乙醇，降低生產成本，而且制備的肝素鈉精品純度高，保證了肝素的活性。
【具體實施方式】
[0023]為便于理解本發明，本發明列舉實施例如下。本領域技術人員應該明了，所述實施例僅僅用于幫助理解本發明，不應視為對本發明的具體限制。
[0024]如無具體說明，本發明的各種原料均可以通過市售得到；或根據本領域的常規方法制備得到。除非另有定義或說明，本文中所使用的所有專業與科學用語與本領域技術熟練入員所熟悉的意義相同。此外任何與所記載內容相似或均等的方法及材料皆可應用于本發明方法中。
[0025]除非另有定義或說明，本文中所使用的所有專業與科學用語與本領域技術熟練人員所熟悉的意義相同。此外任何與所記載內容相似或均等的方法及材料皆可應用于本發明方法中。
[0026]實施例1
[0027]—種從豬小腸中提取肝素鈉的方法，包括如下步驟:
[0028](I)吸附:
[0029]稱取豬小腸黏膜500kg置反應鍋中，加水稀釋,用30%氫氧化鈉溶液調節pH值至9.0~9.5，加熱至沸，保持15min，降溫至35°C，同時濾液虹吸至反應池中，加入10% D204樹脂樹脂，保溫攪拌吸附IOh;
[0030](2)洗滌:
[0031]取步驟(1)吸附后的液體靜置30min后過濾，收集樹脂，并用水將樹脂漂洗干凈，浙干備用；
[0032](3)洗脫:
[0033]取步驟(2)的固體加入lmol/L氯化鈉洗滌I~3h，浙干后，加入4mol/L氯化鈉I~3倍量，攪拌洗脫5h，浙干后再洗脫2次，每次加入4mol/L氯化鈉溶液量減半，洗脫時間分別為2h、lh，合并全部洗脫液。
[0034](4)分離:
[0035]將步驟(3)的洗脫液在攪拌的情況下使用Mr3000~4000的聚丙烯腈膜進行分離，濾速保持在30ml/min，并使膜上部分占總體積的15%時，停止抽濾；
[0036](5)除蛋白質:
[0037]取膜上截留部分，按DC — W: TQ= 1.0:50.0~1.0:80.0的比例加入DC-W，充分攪拌20min，室溫下靜置5h，濾除沉淀；[0038](6)沉淀:
[0039]取步驟(5)的濾液，加入1.5倍的95%乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，虹吸上層醇液，沉淀分別用95%乙醇、丙酮脫水2次，真空干燥，得肝素鈉精品。
[0040]本發明的提取方法與常規的鹽解-離子交換-乙醇沉淀法相比較，節約乙醇85%左右，回收率要提高20%以上，回收率比本行業常規使用的膜分離法提高1%以上。
[0041]實施例2
[0042]一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法，包括如下步驟:
[0043](I)吸附:
[0044]稱取豬小腸黏膜500kg置反應鍋中，加水稀釋,用30%氫氧化鈉溶液調節pH值至9.0，加熱至沸，保持15min，降溫至45°C，同時濾液虹吸至反應池中，加入10% D204樹脂樹月旨，保溫攪拌吸附IOh ；
[0045](2)洗滌:
[0046]取步驟(1)吸附后的液體靜置30min后過濾，收集樹脂，并用水將樹脂漂洗干凈，浙干備用；
[0047](3)洗脫:
[0048]取步驟(2)的固體加入0.8mol/L氯化鈉洗滌3h，浙干后，加入4mol/L氯化鈉3倍量，攪拌洗脫5h，浙干后 再洗脫2次，每次加入4mol/L氯化鈉溶液量減半，洗脫時間分別為2h、lh，合并全部洗脫液。
[0049](4)分離:
[0050]將步驟(3)的洗脫液在攪拌的情況下使用Mr3000~4000的聚丙烯腈膜進行分離，濾速保持在30ml/min，并使膜上部分占總體積的10%時，停止抽濾；
[0051](5)除蛋白質:
[0052]取膜上截留部分，按DC — W: TQ= 1.0:50.0~1.0:80.0的比例加入DC-W，充分攪拌20min，室溫下靜置5h，濾除沉淀；
[0053](6)沉淀:
[0054]取步驟(5)的濾液，加入1.5倍的95%乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，虹吸上層醇液，沉淀分別用95%乙醇、丙酮脫水2次，真空干燥，得肝素鈉精品。
[0055]實施例3
[0056]一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法，包括如下步驟:
[0057](I)吸附:
[0058]稱取豬小腸黏膜500kg置反應鍋中，加水稀釋,用30%氫氧化鈉溶液調節pH值至
9.5，加熱至沸，保持15min，降溫至35°C，同時濾液虹吸至反應池中，加入10% D204樹脂樹月旨，保溫攪拌吸附IOh ；
[0059](2)洗滌:
[0060]取步驟(1)吸附后的液體靜置30min后過濾，收集樹脂，并用水將樹脂漂洗干凈，浙干備用；
[0061](3)洗脫:
[0062]取步驟(2)的固體加入1.5mol/L氯化鈉洗滌I~3h，浙干后，加入4mol/L氯化鈉2倍量，攪拌洗脫5h，浙干后再洗脫2次，每次加入4mol/L氯化鈉溶液量減半，洗脫時間分別為2h、Ih，合并全部洗脫液。
[0063](4)分離:
[0064]將步驟(3)的洗脫液在攪拌的情況下使用Mr3000~4000的聚丙烯腈膜進行分離，濾速保持在30ml/min，并使膜上部分占總體積的20%時，停止抽濾；
[0065](5)除蛋白質:
[0066]取膜上截留部分，按DC — W: TQ= 1.0:50.0~1.0:80.0的比例加入DC-W，充分攪拌20min，室溫下靜置5h，濾除沉淀；
[0067](6)沉淀:
[0068]取步驟(5)的濾液，加入2倍的95%乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，虹吸上層醇液，沉淀分別用95%乙醇、丙酮脫水2次，真空干燥，得肝素鈉精品。
[0069] 申請人:聲明，所屬【技術領域】的技術人員在上述實施例的基礎上，將上述實施例某組分的具體含量點值，與
【發明內容】
部分的技術方案相組合，從而產生的新的數值范圍，也是本發明的記載范圍之一， 本申請為使說明書簡明，不再羅列這些數值范圍。
【權利要求】
1.一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法，其特征在于包括如下步驟: (1)吸附: 稱取豬小腸黏膜置反應鍋中，加水稀釋，用30%氫氧化鈉溶液調節pH值至9.0~9.5，加熱至沸，保持10~15min,降溫至35°C~45°C,同時濾液虹吸至反應池中，加入5~10%樹脂，保溫攪拌吸附8~IOh; (2)洗漆: 取步驟(1)吸附后的液體靜置30min后過濾，收集樹脂，并用水將樹脂漂洗干凈，浙干備用; (3)洗脫: 取步驟(2)的固體加入0.8~1.5mol/L氯化鈉洗漆I~3h,浙干后,加入3~5mol/L氯化鈉I~3倍量，攪拌洗脫5h，浙干后再洗脫2次，合并全部洗脫液； (4)分離: 將步驟(3)的洗脫液在攪拌的情況下使用聚丙烯腈膜進行分離，濾速保持在30~40ml/min，并使膜上部分占總體積的10~20%時，停止抽濾； (5)除蛋白質: 取膜上截留部分，加入DC-W，充分攪拌20min，室溫下靜置5h，濾除沉淀； (6)沉淀: 取步驟(5)的濾液，加入I~2倍的95%乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，虹吸上層醇液，沉淀分別用95%乙醇、丙酮脫水2次，真空干燥，得肝素鈉精品。
2.按照權利要求1所述一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法，其特征在于:步驟(1)中所述樹脂為D204樹脂。
3.按照權利要求1所述一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法，其特征在于:所述步驟(3)中洗脫2次時，每次加入3~5mol/L氯化鈉溶液量減半，洗脫時間分別為2h、lh。
4.按照權利要求1所述一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法，其特征在于:所述步驟(4)的聚丙烯腈膜為截留Mr3000~4000的聚丙烯腈膜。
【文檔編號】C08B37/10GK103588901SQ201310532605
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年10月31日 優先權日:2013年10月31日
【發明者】方蕊 申請人:安徽工貿職業技術學院