本發明涉及一種抑制rock的化合物及其制備方法與應用。
背景技術：
rho屬于小分子單聚體gtpase超家族，是ras超家族的哺乳動物基因同系物，通過其下游最主要的效應分子rho激酶(rho-associatedcoiled-coilcontainingproteinkinase，rock)，來調節細胞肌動蛋白骨架的重組，從而廣泛參與細胞有絲分裂、細胞骨架調整、平滑肌細胞收縮、神經再生、腫瘤細胞浸潤、細胞凋亡的調節等一系列生物學過程。rho/rock激活后可以作用于多種底物，從而產生生物學過程。最主要的兩種底物是肌球蛋白輕鏈(mlc)和肌球蛋白輕鏈磷酸酶(mlcp)，mlc的磷酸化水平是決定平滑肌收縮程度的一個重要因素。肌球蛋白輕鏈激酶(mlck)磷酸化mlc的ser-19位點，導致平滑肌收縮；mlcp的抑制可以使mlc的磷酸化和平滑肌的收縮進一步增強。rock被激活以后，本身可以將mlc磷酸化而發生肌絲收縮作用；同時也能將mlcp磷酸化，使mlcp失活，導致細胞胞漿內mlc磷酸化程度增高，間接促進肌絲收縮。
青光眼及眼部高壓在我國是第二大眼科疾病，我國40歲以上人口中青光眼患者高達520萬，雙眼盲的患者已近100萬。青光眼是指眼內壓間斷或持續升高的一種眼病，持續的高眼壓可以給眼球各部分組織和視功能帶來損害，如不及時治療，視野可以全部喪失而至失明。rho/rock信號通路通過抑制mlc、mlcp的磷酸化水平，進而舒張眼部的小梁組織，減小房水流出通道的阻力，促進房水的流出，從而達到降低眼壓的療效；同時對rock2的抑制可以促進神經節細胞軸突的再生，增加視網膜神經節細胞的存活，顯示出對視網膜神經保護的作用。而青光眼患者致盲最主要的原因就是由于長期眼部房水流出受阻，眼壓過高導致視網膜受損。rock2的抑制劑在這兩個方面都能起到很好療效，為抗青光眼的研究開辟了新的機制。
在作為抗青光眼及眼部高壓的新靶點的同時，rock抑制劑在抗腫瘤，心血管疾病以及炎癥等疾病領域也有重要進展，多個化合物處于藥物發現或者已進入臨床階段。對rock靶點特異性抑制劑的相關研究將具有很好的藥物應用前景和社會價值。
目前已經研究開發的rock抑制劑可分為五大類：(1)異喹啉類：此類化合物結構特點是具有一個異喹啉結構和哌嗪環，兩者通過磺酰基相連。代表物有法蘇地爾(uehatam,ishizakit,satohh,etal.calciumsensitizationofsmoothmusclemediatedbyarho-associatedproteinkinaseinhypertension[j].nature,1997,389:990-994)、h-1152p(tamuram,nakaoh,yoshizakih,etal.developmentofspecificrho-kinaseinhibitorsandtheirclinicalapplication[j].biochimbiophysacta,2005,1754:245-252)；(2)4-氨基吡啶類：此類化合物結構除4-氨基吡啶母核外，在分子的中心位置還含有一個環己烷或苯環結構，在環己烷的4位具有側鏈結構。代表物有y-30141(takamia,iwakubom,okaday,etal.designandsynthesisofrhokinaseinhibitors[j].bioorgmedchem,2004,12:2115-2137)；(3)吲唑類：此類化合物將5-氨基或5-烷氧基-1h吲唑作為骨架；(4)酰胺和脲類：此類化合物具有一個鄰苯二甲酰亞胺和一個脲基構成的絞和結構。(5)其它類：其它不包含上述結構的rock抑制劑，代表物有rockout(yarrowjc,totsukawag,charrasgt,etal.screeningforcellmigrationinhibitorsviaautomatedmicroscopyrevealsarho-kinaseinhibitor[j].chembiol,2005,12:385-395)。
目前已上市的rock抑制劑藥物有asahikasei公司的eril(適用于腦血管痙攣的治療)和kowa公司的glanatec(適用于高眼壓癥和青光眼的治療)。其中glanatec僅在日本上市銷售。因此進行開發作用于rock的靶向小分子藥物研究，得到活性更好、選擇性更高、更低毒性和副作用、更經濟的抗青光眼藥物，具有十分重要的社會和經濟意義。
技術實現要素：
本發明的目的在于提供一種新結構的具有藥用價值的式ⅰ所示的化合物及其制備方法與應用，以及包含該化合物的藥物組合物，以便制備預防和/或治療與rock活性異常相關的疾病的藥物，為患者提供更多、更好的藥物選擇。
本發明提供了式ⅰ所示的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽、或其晶型、或其溶劑合物、或其同位素體：
其中，
y為s、o或nr12；
x1、x2、x3分別或同時為cr1或n；
每個r1獨立選自h、鹵素、c1～c6烷基或c1～c6烷氧基；
r4、r5、r6、r7、r12分別或同時為h、鹵素、c1～c6烷基或c1～c6烷氧基；
r8、r9分別或同時為h、c1～c6烷基、取代的c1～c6烷基、c3～c6環烷基、取代的c3～c6環烷基、3元～6元雜環基、取代的3元～6元雜環基、c5～c10芳基、取代的c5～c10芳基、5元～10元雜芳基或取代的5元～10元雜芳基；或者，r8與r9相連構成c3～c6環烷基、取代的c3～c6環烷基、3元～6元雜環基或取代的3元～6元雜環基；
r10、r11分別或同時為h、c1～c6烷基、取代的c1～c6烷基、c3～c6環烷基、取代的c3～c6環烷基、3元～6元雜環基、取代的c3～c6雜環基、c5～c10芳基、取代的c5～c10芳基、5元～10元雜芳基或取代的5元～10元雜芳基；或者，r10與r11相連構成3元～6元雜環基或取代的3元～6元雜環基。
進一步地，所述化合物結構如式ⅰa所示：
其中，
y為s或o；
x1、x2中至少有1個為n。
進一步地，r8與r9相連構成c3～c6環烷基、鹵素取代或c1～c6烷基取代的c3～c6環烷基；或者，r8、r9獨立選自h、c1～c4烷基、c1～c4烷氧基取代或芳基取代或雜芳基取代的c1～c4烷基、c3～c6環烷基、鹵素取代或c1～c6烷基取代的c3～c6環烷基、4元雜環基、苯基、取代苯基、6元雜芳基或取代的6元雜芳基，其中，r8、r9至少1個為h。
進一步地，所述取代的c3～c6環烷基中取代基為氟或甲基；所述取代的c1～c4烷基中取代基為甲氧基、苯基、取代苯基、吡啶基或取代吡啶基；所述的4元雜環基為氧雜環丁基；所述的6元雜芳基為吡啶基。
進一步地，所述取代苯基、取代的6元雜芳基、取代吡啶基中，取代基獨立選自鹵素、c1～c6烷基、鹵素取代的c1～c6烷基、c1～c6烷氧基或鹵素取代的c1～c6烷氧基；優選為氟、氯、甲基、三氟甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
進一步地，所述化合物結構如式ⅱ所示：
進一步地，r10、r11分別或同時為h或c1～c4烷基。
進一步地，所述的化合物為：
進一步地，所述化合物如式ⅱa所示：
a為0～6的整數；
r1a、r2a、r3a、r4a、r5a分別或同時為h、羥基、鹵素、c1～c6烷基、鹵素取代的c1～c6烷基、c1～c6烷氧基或鹵素取代的c1～c6烷氧基。
進一步地，a為0、1或2；r1a、r2a、r3a、r4a、r5a分別或同時為h、羥基、氟、氯、甲基、三氟甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
進一步地，式ⅱa所示的化合物為：
進一步地，所述的化合物如式ⅱb所示：
b為0～6的整數；
r1b、r2b、r3b、r4b、r5b、r6b、r7b分別或同時為h、羥基、鹵素、c1～c6烷基、鹵素取代的c1～c6烷基、c1～c6烷氧基或鹵素取代的c1～c6烷氧基。
進一步地，b為0、1或2；r1b、r2b、r3b、r4b、r5b、r6b、r7b分別或同時為h、氟、氯、甲基、三氟甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
進一步地，式ⅱb所示的化合物為：
進一步地，所述的化合物如式ⅱc所示：
c為0～6的整數；
xc、yc、zc獨立選自cr3c或n，其中至少1個為n；
r1c、r2c、每個r3c獨立選自h、羥基、鹵素、c1～c6烷基、鹵素取代的c1～c6烷基、c1～c6烷氧基或鹵素取代的c1～c6烷氧基。
進一步地，c為0、1或2；xc、yc中僅1個為n，zc為cr3c；r1c、r2c、每個r3c分
別或同時為h、氟、氯、甲基、三氟甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
進一步地，式ⅱc所示的化合物為：
進一步地，所述的化合物如式ⅱd所示：
d為1～6的整數；
r1d、r2d分別或同時為h、羥基、鹵素、c1～c6烷基、鹵素取代的c1～c6烷基、c1～c6烷氧基或鹵素取代的c1～c6烷氧基。
進一步地，d為1或2；r1d、r2d分別或同時為h或c1～c4烷基。
進一步地，式ⅱd所示的化合物為：
進一步地，r10為h，r11為c3～c6環烷基或取代的c3～c6環烷基。
進一步地，r11為c4～c6環烷基或取代的c4～c6環烷基；其中，所述的取代基為氟、甲基或乙基。
進一步地，所述的化合物為：
進一步地，r10為h，r11為3元～6元雜環基或取代的3元～6元雜環基。
進一步地，r11為4元～6元雜環基或取代的4元～6元雜環基；其中，所述的雜環基中僅有1個雜原子，所述雜原子為n或o；所述的取代基為甲基或乙基。
進一步地，所述的化合物為：
進一步地，所述的化合物如式ⅱg所示：
xg、yg獨立選自cr3g或n，其中至少1個為n；
r1g、r2g、r3g獨立選自h、羥基、鹵素、c1～c6烷基、鹵素取代的c1～c6烷基、c1～c6烷氧基或鹵素取代的c1～c6烷氧基。
進一步地，xg為n，yg為cr3g或n；r1g、r2g、r3g分別或同時為h、甲基、三氟甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
進一步地，式ⅱg所示的化合物為：
進一步地，所述的化合物如式ⅱh所示：
r1h、r2h、r3h、r4h、r5h、r6h分別或同時為h、羥基、鹵素、c1～c6烷基、鹵素取代的c1～c6烷基、c1～c6烷氧基或鹵素取代的c1～c6烷氧基；優選為h、氟、氯、甲基或三氟甲基。
進一步地，式ⅱh所示的化合物為：
進一步地，r10與r11相連構成6元雜環基或c1～c6烷基取代的6元雜環基。
進一步地，所述的雜環基中至多有2個雜原子，所述雜原子為n或o；所述取代的6元雜環基中取代基為甲基或三氟甲基。
進一步地，所述的化合物為：
本發明提供了一種所述化合物的制備方法，包括如下步驟：
步驟a：
化合物sm-1a與化合物sm-2a，加入酰胺縮合試劑和路易斯堿，在鹵烴類溶劑中反應，得化合物im-1a；其中，t1a為叔丁氧羰基、芐氧羰基或芴甲氧羰基；
步驟b：
化合物im-1a與路易斯酸或路易斯堿，在有機溶劑中反應，得化合物im-2a；
步驟c：
化合物im-2a與化合物sm-3a，加入酰胺縮合試劑和路易斯堿，在有機溶劑中反應，得化合物im-3a；其中，t2a為叔丁氧羰基、芐氧羰基或芴甲氧羰基；
步驟d：
化合物im-3a與路易斯酸或路易斯堿，在有機溶劑中反應，得化合物im-4a；
步驟e：
化合物im-4a與化合物sm-4a，加入酰胺縮合試劑和路易斯堿，在有機溶劑中反應，即得。
其中，步驟a于10℃～40℃反應1h～12h；
所述化合物sm-1a與化合物sm-2a的摩爾比為1：0.5～2；所述化合物sm-1a與酰胺縮合試劑的摩爾比為1：1～5；所述化合物sm-1a與路易斯堿的摩爾比為1：2～10；所述化合物sm-1a與鹵烴類溶劑的重量體積比為1：5～100g/ml；
所述酰胺縮合試劑選自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲六氟磷酸酯、o-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸鹽、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲四氟硼酸酯、o-苯并三氮唑-n,n,n’,n’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一種或兩種以上；所述路易斯堿選自二異丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一種或兩種以上；所述鹵烴類溶劑選自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一種或兩種以上；
步驟b于10℃～40℃反應0.5h～12h；
所述化合物im-1a與路易斯酸的重量體積比為1：2～20g/ml；所述化合物im-1a與路易斯堿的重量體積比為1：2～20g/ml；所述化合物im-1a與有機溶劑的重量體積比為1：20～100g/ml；
所述所述路易斯酸選自三氟乙酸、鹽酸或氫溴酸；所述路易斯堿選自哌啶、嗎啉或哌嗪；所述有機溶劑選自鹵烴類溶劑、酸類溶劑或兩者的混合溶劑，鹵烴類溶劑選自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一種或兩種以上，酸類溶劑選自甲酸、乙酸、丙酸、丁酸中的任意一種或兩種以上；
步驟c于10℃～40℃反應1h～12h；
所述化合物im-2a與化合物sm-3a的摩爾比為1：0.5～2；所述化合物im-2a與酰胺縮合試劑的摩爾比為1：1～5；所述化合物im-2a與路易斯堿的摩爾比為1：2～10；所述化合物im-2a與有機溶劑的重量體積比為1：5～100g/ml；
所述酰胺縮合試劑選自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲六氟磷酸酯、o-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸鹽、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲四氟硼酸酯、o-苯并三氮唑-n,n,n’,n’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一種或兩種以上；所述路易斯堿選自二異丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一種或兩種以上；所述有機溶劑選自鹵烴類溶劑或極性非質子溶劑，鹵烴類溶劑選自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一種或兩種以上，極性非質子溶劑選自n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、乙腈、吡啶中的任意一種或兩種以上；
步驟d于10℃～40℃反應0.5h～12h；
所述化合物im-3a與路易斯酸的重量體積比為1：2～20g/ml；所述化合物im-3a與路易斯堿的重量體積比為1：2～20g/ml；所述化合物im-3a與有機溶劑的重量體積比為1：20～100g/ml；
所述所述路易斯酸選自三氟乙酸、鹽酸或氫溴酸；所述路易斯堿選自哌啶、嗎啉或哌嗪；所述有機溶劑選自鹵烴類溶劑、酸類溶劑或兩者的混合溶劑，鹵烴類溶劑選自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一種或兩種以上，酸類溶劑選自甲酸、乙酸、丙酸、丁酸中的任意一種或兩種以上；
步驟e于10℃～40℃反應1h～12h；
所述化合物im-4a與化合物sm-4a的摩爾比為1：0.5～2；所述化合物im-4a與酰胺縮合試劑的摩爾比為1：1～5；所述化合物im-4a與路易斯堿的摩爾比為1：2～10；所述化合物im-4a與有機溶劑的重量體積比為1：5～100g/ml；
所述酰胺縮合試劑選自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲六氟磷酸酯、o-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸鹽、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲四氟硼酸酯、o-苯并三氮唑-n,n,n’,n’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一種或兩種以上；所述路易斯堿選自二異丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一種或兩種以上；所述有機溶劑選自鹵烴類溶劑或極性非質子溶劑，鹵烴類溶劑選自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一種或兩種以上，極性非質子溶劑選自n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、乙腈、吡啶中的任意一種或兩種以上。
進一步地，步驟a所述化合物sm-1a是由下述方法制備得到：
步驟a1：
將三氯氧磷與n,n-二甲基甲酰胺混合，加入二氯甲烷，再加入化合物a反應，得到化合物b；其中，t1a為叔丁氧羰基、芐氧羰基或芴甲氧羰基；
步驟a2：
化合物b、化合物c和路易斯堿，在鹵烴類溶劑中反應，得到化合物d；其中，t11a為c1～c6烷基；
步驟a3：
化合物d與路易斯堿在醇類溶劑和/或水中反應，即得化合物sm-1a。
其中，步驟a1于0℃～5℃將三氯氧磷與n,n-二甲基甲酰胺混合，加入二氯甲烷，室溫下攪拌2小時～5小時，再加入化合物a的二氯甲烷溶液，室溫下反應2小時～5小時，得到化合物b；
所述三氯氧磷與n,n-二甲基甲酰胺的摩爾比為1：0.5～2；所述三氯氧磷與二氯甲烷a的重量體積比為1：1～10g/ml；所述三氯氧磷與化合物a的摩爾比為1：0.5～2；所述化合物a與二氯甲烷b的重量體積比為1：1～10g/ml；
步驟a2于50℃～90℃反應2小時～24小時，得到化合物d；
所述化合物b與化合物c的摩爾比為1：0.5～2；所述化合物b與路易斯堿的摩爾比為1：2～10；所述化合物b與鹵烴類溶劑的重量體積比為1：1～10g/ml；
所述路易斯堿選自二異丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一種或兩種以上；所述鹵烴類溶劑選自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一種或兩種以上；
步驟a3于10℃～40℃反應1h～12h，即得化合物sm-1a；
所述化合物d與路易斯堿的摩爾比為1：5～15；所述化合物d與混合溶劑的重量體積比為1：5～100g/ml；所述的混合溶劑中，醇類溶劑與水的體積比為1：0.5～2；
所述路易斯堿選自氫氧化鉀、氫氧化鈉中的任意一種或兩種；所述醇類溶劑選自甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇中的任意一種或兩種以上。
本發明提供了一種所述化合物的制備方法，包括以下步驟：
步驟①：
化合物sm-1b與化合物sm-2b，加入酰胺縮合試劑和路易斯堿，在有機溶劑中反應，得化合物im-1b；其中，t1b為叔丁氧羰基、芐氧羰基或芴甲氧羰基；t11b為c1～c6烷基；
步驟②：
化合物im-1b和路易斯堿在醇類溶劑和/或水中反應，得化合物im-2b；
步驟③：
化合物im-2b與化合物sm-3b，加入酰胺縮合試劑和路易斯堿，在有機溶劑中反應，得化合物im-3b；
步驟④：
化合物im-3b與路易斯酸或路易斯堿，在有機溶劑中反應，得化合物im-4b；
步驟⑤：
化合物sm-4b與化合物im-4b，加入酰胺縮合試劑和路易斯堿，在有機溶劑中反應，即得。
其中，步驟①于10℃～40℃反應1h～12h，得化合物im-1b；
所述化合物化合物sm-1b與化合物sm-2b的摩爾比為1：0.5～2；所述化合物sm-1b與酰胺縮合試劑的摩爾比為1：1～5；所述化合物sm-1b與路易斯堿的摩爾比為1：2～10；所述化合物sm-1b與有機溶劑的重量體積比為1：5～100g/ml；
所述酰胺縮合試劑選自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲六氟磷酸酯、o-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸鹽、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲四氟硼酸酯、o-苯并三氮唑-n,n,n’,n’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一種或兩種以上；所述路易斯堿選自二異丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一種或兩種以上；所述有機溶劑選自鹵烴類溶劑或極性非質子溶劑，鹵烴類溶劑選自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一種或兩種以上，極性非質子溶劑選自n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、乙腈、吡啶中的任意一種或兩種以上；
步驟②于10℃～40℃反應1h～12h，得化合物im-2b；
所述化合物im-1b與路易斯堿的摩爾比為1：5～15；所述化合物im-1b與混合溶劑的重量體積比為1：5～100g/ml；所述的混合溶劑中，醇類溶劑與水的體積比為1：0.5～2；
所述路易斯堿選自氫氧化鉀、氫氧化鈉中的任意一種或兩種；所述醇類溶劑選自甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇中的任意一種或兩種以上。
步驟③于10℃～40℃反應1h～12h，得化合物im-3b；
所述化合物化合物im-2b與化合物sm-3b的摩爾比為1：0.5～2；所述化合物im-2b與酰胺縮合試劑的摩爾比為1：1～5；所述化合物im-2b與路易斯堿的摩爾比為1：2～10；所述化合物im-2b與有機溶劑的重量體積比為1：5～100g/ml；
所述酰胺縮合試劑選自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲六氟磷酸酯、o-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸鹽、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲四氟硼酸酯、o-苯并三氮唑-n,n,n’,n’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一種或兩種以上；所述路易斯堿選自二異丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一種或兩種以上；所述有機溶劑選自鹵烴類溶劑或極性非質子溶劑，鹵烴類溶劑選自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一種或兩種以上，極性非質子溶劑選自n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、乙腈、吡啶中的任意一種或兩種以上；
步驟④于10℃～40℃反應0.5h～12h，得化合物im-4b；
所述化合物im-3b與路易斯酸的重量體積比為1：2～20g/ml；所述化合物im-3b與路易斯堿的重量體積比為1：2～20g/ml；所述化合物im-3b與有機溶劑的重量體積比為1：20～100g/ml；
所述所述路易斯酸選自三氟乙酸、鹽酸或氫溴酸；所述路易斯堿選自哌啶、嗎啉或哌嗪；所述有機溶劑選自鹵烴類溶劑、酸類溶劑或兩者的混合溶劑，鹵烴類溶劑選自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一種或兩種以上，酸類溶劑選自甲酸、乙酸、丙酸、丁酸中的任意一種或兩種以上；
步驟⑤于10℃～40℃反應1h～12h，即得；
所述化合物sm-4b與化合物im-4b的摩爾比為1：0.5～2；所述化合物sm-4b與酰胺縮合試劑的摩爾比為1：1～5；所述化合物sm-4b與路易斯堿的摩爾比為1：2～10；所述化合物sm-4b與有機溶劑的重量體積比為1：5～100g/ml；
所述酰胺縮合試劑選自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲六氟磷酸酯、o-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸鹽、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲四氟硼酸酯、o-苯并三氮唑-n,n,n’,n’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一種或兩種以上；所述路易斯堿選自二異丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一種或兩種以上；所述有機溶劑選自鹵烴類溶劑或極性非質子溶劑，鹵烴類溶劑選自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一種或兩種以上，極性非質子溶劑選自n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、乙腈、吡啶中的任意一種或兩種以上。
本發明提供了一種所述化合物的制備方法，包括以下步驟：
步驟i：
化合物sm-1c與化合物sm-2c，加入酰胺縮合試劑和路易斯堿，在有機溶劑中反應，得化合物im-1c；其中，t11c為c1～c6烷基；
步驟ii：
化合物im-1c與路易斯堿在醇類溶劑和/或水中反應，得化合物im-2c；
步驟iii：
化合物sm-3c與化合物sm-4c，加入酰胺縮合試劑和路易斯堿，在有機溶劑中反應，，得化合物im-3c；其中，t1c為叔丁氧羰基、芐氧羰基或芴甲氧羰基；
步驟iv：
化合物im-3c與路易斯酸或路易斯堿在有機溶劑中反應，得化合物im-4c；
步驟v：
化合物im-2c與化合物im-4c，加入酰胺縮合試劑和路易斯堿，在有機溶劑中反應，即得。
其中，步驟i于10℃～40℃反應1h～12h，得化合物im-1c；
所述化合物化合物sm-1c與化合物sm-2c的摩爾比為1：0.5～2；所述化合物sm-1c與酰胺縮合試劑的摩爾比為1：1～5；所述化合物sm-1c與路易斯堿的摩爾比為1：2～10；所述化合物sm-1c與有機溶劑的重量體積比為1：5～100g/ml；
所述酰胺縮合試劑選自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲六氟磷酸酯、o-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸鹽、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲四氟硼酸酯、o-苯并三氮唑-n,n,n’,n’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一種或兩種以上；所述路易斯堿選自二異丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一種或兩種以上；所述有機溶劑選自鹵烴類溶劑或極性非質子溶劑，鹵烴類溶劑選自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一種或兩種以上，極性非質子溶劑選自n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、乙腈、吡啶中的任意一種或兩種以上；
步驟ii于10℃～40℃反應1h～12h，得化合物im-2c；
所述化合物im-1c與路易斯堿的摩爾比為1：1～10；所述化合物im-1c與混合溶劑的重量體積比為1：5～100g/ml；所述的混合溶劑中，醇類溶劑與水的體積比為1：0.5～2；
所述路易斯堿選自氫氧化鉀、氫氧化鈉中的任意一種或兩種；所述醇類溶劑選自甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇中的任意一種或兩種以上；
步驟iii于10℃～40℃反應1h～12h，得化合物im-3c；
所述化合物化合物sm-3c與化合物sm-4c的摩爾比為1：0.5～2；所述化合物sm-3c與酰胺縮合試劑的摩爾比為1：1～5；所述化合物sm-3c與路易斯堿的摩爾比為1：2～10；所述化合物sm-3c與有機溶劑的重量體積比為1：5～100g/ml；
所述酰胺縮合試劑選自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲六氟磷酸酯、o-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸鹽、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲四氟硼酸酯、o-苯并三氮唑-n,n,n’,n’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一種或兩種以上；所述路易斯堿選自二異丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一種或兩種以上；所述有機溶劑選自鹵烴類溶劑或極性非質子溶劑，鹵烴類溶劑選自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一種或兩種以上，極性非質子溶劑選自n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、乙腈、吡啶中的任意一種或兩種以上；
步驟iv于10℃～40℃反應0.5h～12h，得化合物im-4c；
所述化合物im-3c與路易斯酸的重量體積比為1：2～20g/ml；所述化合物im-3c與路易斯堿的重量體積比為1：2～20g/ml；所述化合物im-3c與有機溶劑的重量體積比為1：20～100g/ml；
所述所述路易斯酸選自三氟乙酸、鹽酸或氫溴酸；所述路易斯堿選自哌啶、嗎啉或哌嗪；所述有機溶劑選自鹵烴類溶劑、酸類溶劑或兩者的混合溶劑，鹵烴類溶劑選自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一種或兩種以上，酸類溶劑選自甲酸、乙酸、丙酸、丁酸中的任意一種或兩種以上；
步驟v于10℃～40℃反應1h～12h，即得；
所述化合物im-2c與化合物im-4c的摩爾比為1：0.5～2；所述化合物im-2c與酰胺縮合試劑的摩爾比為1：1～5；所述化合物im-2c與路易斯堿的摩爾比為1：2～10；所述化合物im-2c與有機溶劑的重量體積比為1：5～100g/ml；
所述酰胺縮合試劑選自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲六氟磷酸酯、o-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸鹽、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲四氟硼酸酯、o-苯并三氮唑-n,n,n’,n’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一種或兩種以上；所述路易斯堿選自二異丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一種或兩種以上；所述有機溶劑選自鹵烴類溶劑或極性非質子溶劑，鹵烴類溶劑選自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一種或兩種以上，極性非質子溶劑選自n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、乙腈、吡啶中的任意一種或兩種以上。
本發明提供了所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽、或其晶型、或其溶劑合物、或其同位素體在制備rock抑制劑類藥物中的應用。
進一步地，所述的藥物為rock1和/或rock2抑制劑。
進一步地，所述的藥物為治療和/或預防心血管疾病、高眼壓癥、青光眼或者癌癥的藥物。
本發明提供了一種藥物組合物，它是以所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽、或其晶型、或其溶劑合物、或其同位素體為活性成分，加上藥學上可接受的輔料或輔助性成分制備得到的制劑。
進一步地，所述的制劑為滴眼劑、口服給藥制劑、舌下給藥制劑、頰給藥制劑、透皮吸收制劑或注射制劑。
本發明中提供的化合物和衍生物可以根據iupac(國際純粹與應用化學聯合會)或cas(化學文摘服務社，columbus，oh)命名系統命名。
關于本發明的使用術語的定義：除非另有說明，本文中基團或者術語提供的初始定義適用于整篇說明書的該基團或者術語；對于本文沒有具體定義的術語，應該根據公開內容和上下文，給出本領域技術人員能夠給予它們的含義。
“取代”是指分子中的氫原子被其它不同的原子或分子所替換。
碳氫基團中碳原子含量的最小值和最大值通過前綴表示，例如，前綴ca～cb烷基表明任何含“a”至“b”個碳原子的烷基。因此，例如，c1～c4烷基是指包含1～4個碳原子的烷基；取代的c1～c6烷基是指烷基中包含1～6個碳原子，不將取代基的碳原子數計算在內。
術語“雜環基”是指具有環雜原子的非芳香族環系的基團，可以是飽和的也可以是部分不飽和的。
術語“藥學上可接受的”是指某載體、運載物、稀釋劑、輔料，和/或所形成的鹽通常在化學上或物理上與構成某藥物劑型的其它成分相兼容，并在生理上與受體相兼容。
術語“鹽”和“可藥用的鹽”是指上述化合物或其立體異構體，與無機和/或有機酸和堿形成的酸式和/或堿式鹽，也包括兩性離子鹽(內鹽)，還包括季銨鹽，例如烷基銨鹽。這些鹽可以是在化合物的最后分離和純化中直接得到。也可以是通過將上述化合物，或其立體異構體，與一定數量的酸或堿適當(例如等當量)進行混合而得到。這些鹽可能在溶液中形成沉淀而以過濾方法收集，或在溶劑蒸發后回收而得到，或在水介質中反應后冷凍干燥制得。本發明中所述鹽可以是化合物的鹽酸鹽、硫酸鹽、枸櫞酸鹽、苯磺酸鹽、氫溴酸鹽、氫氟酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、丁二酸鹽、草酸鹽、蘋果酸鹽、琥珀酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、酒石酸鹽或三氟乙酸鹽。
術語“立體異構體”包括立體中心(例如帶有4個不同取代基的碳)、軸不對稱例如有關鍵、平面不對稱及其混合物的存在。
本發明的某些實施方式中，本發明包括了同位素標記的化合物，所述同位素標記化合物是指與本文中所列化合物相同，但是其中的一個或多個原子被另一個原子取代，該原子的原子質量或質量數不同于自然界中常見的原子質量或質量數。可以引入式(i)化合物中的同位素包括氫、碳、氮、氧、硫，即2h,3h、13c、14c、15n、17o、18o、35s。含有上述同位素和/或其它原子同位素的式(i)的化合物及其立體異構體，以及該化合物、立體異構體的可藥用的鹽均應包含在本發明范圍之內。
術語“同位素體”是指其中天然同位素豐度的至少一個原子被不同于天然豐度的同位素富集形式置換的化合物的任何形式。同位素體可以氫置換為氘和/或氚為基礎。同樣地，天然豐度的12c可被13c或14c置換、天然豐度的14n可被15n置換，天然豐度的16o被17o或18o置換等或任何組合。同位素體可包括化合物內的任何數目的原子被同位素富集形式置換。可實現同位素富集到任何程度。
本發明中的關鍵中間體和化合物進行分離和純化，所使用的方式是有機化學中常用的分離和純化方法且所述方法的實例包括過濾、萃取、干燥、旋干和各種類型的色譜。可選擇地，可以使中間體不經純化即進行下一步反應。
在某些實施方式中，本發明的一種或多種化合物可以彼此聯合使用。也可選擇將本發明的化合物與任何其它的活性試劑結合使用，用于制備調控細胞功能或治療疾病的藥物或藥物組合物。如果使用的是一組化合物，則可將這些化合物同時、分別或有序地對受試對象進行給藥。
本發明提供了一類結構新穎的化合物。活性檢測結果表明，本發明化合物可顯著抑制rock的活性，為臨床治療和/或預防心血管疾病、高眼壓癥、青光眼或者癌癥提供了一種新的用藥選擇。
顯然，根據本發明的上述內容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離本發明上述基本技術思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發明的上述內容再作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發明上述內容所實現的技術均屬于本發明的范圍。
具體實施方式
本發明具體實施方式中使用的原料、設備均為已知產品，通過購買市售產品獲得。
實施例1、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-苯基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
1、1-芐氧羰基-4-氯-5-甲酰-3,6-二氫-2h-哌啶的制備
在0℃下，將三氯氧磷(52.6g343mmol)緩慢滴加入攪拌的干燥nn-二甲基甲酰胺(31.3g,429mmol,33.3ml)中,滴加完待混合液完全固化，加入二氯甲烷(100ml)，升至室溫，繼續攪拌兩個小時,然后將溫度降至0℃。將n-芐氧羰基-4-哌啶酮(50.0g,214mmol，德默試劑)溶于二氯甲烷(100ml)后緩慢滴入反應液中，升至室溫繼續攪拌反應2小時后，攪拌下將反應混合液倒入加冰的醋酸鈉水溶液中，攪拌半個小時，用二氯甲烷(100ml×3)萃取，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑得粗品1-芐氧羰基-4-氯-5-甲酰-3,6-二氫-2h-哌啶(60.0g，產率100％)。
ms(esi)m/z280(m+1)+。
2、5-芐基2-乙基6,7-二氫噻吩[3,2-c]并吡啶-2,5(4h)-二羧酸的制備
在室溫下,將1-芐氧羰基-4-氯-5-甲酰-3,6-二氫-2h-哌啶(60.0g,214mmol)和巰基乙酸乙酯(41.2g,343mmol，德默試劑),溶入二氯甲烷(200ml)中，攪拌下，緩慢滴加三乙胺(43.3g,429mmol,59.3ml)，滴加后溫度升至60℃回流過夜后，加入水，用二氯甲烷(100ml×3)萃取，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑得粗品，層析柱純化得5-芐基2-乙基6,7-二氫噻吩[3,2-c]并吡啶-2,5(4h)-二羧酸(18.0g,44.3mmol,產率21％)。
ms(esi)m/z346(m+1)+。
3、5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸
在室溫下,將5-芐基2-乙基6,7-二氫噻吩[3,2-c]并吡啶-2,5(4h)-二羧酸(2.00g,5.79mmol)溶解在甲醇(30.0ml)和氫氧化鉀水溶液(30.0ml,2m)中，然后攪拌2小時后，減壓蒸除甲醇，用乙酸乙酯(50ml×3)萃取出雜質，調節ph至5～6，用乙酸乙酯(50ml×3)萃取，萃取液用飽和食鹽水(50ml×2)洗滌，無水硫酸鈉干燥，濾出萃取液，減壓蒸除溶劑得5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸(1.30g,4.10mmol,產率71％)。
ms(esi)m/z318(m+1)+。
4、2-(苯基氨基甲酰基)-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4h)-羧酸芐酯的制備
將5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸(500mg,1.58mmol)和n,n-二異丙基乙胺(814mg,6.31mmol,1.14ml)溶于二氯甲烷(10.0ml)中，然后加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(822mg,1.58mmol)，室溫下攪拌15分鐘，加入苯胺(147mg,1.58mmol)繼續攪拌反應1～2小時后直接旋干得粗品，柱層析純化得2-(苯基氨基甲酰基)-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-5-(4h)-羧酸芐酯(460mg,1.17mmol,產率74％)。
ms(esi)m/z393(m+1)+。
5、n-苯基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
將2-(苯基氨基甲酰基)-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-5-(4h)-羧酸芐酯(460mg,1.17mmol,)溶于含30％溴化氫的乙酸溶液(10.0ml)中，室溫攪拌1小時后直接旋干并用乙酸乙酯洗滌得白色固體n-苯基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(302mg,1.17mmol,產率100％)。
ms(esi)m/z259(m+1)+。
6、(r)-(1-氧代-1-(2-(苯基氨基甲酰基)-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4h)-基]丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯的制備
將(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸(267mg,1.32mmol，江蘇鱷魚試劑化工有限公司)和n,n-二異丙基乙胺(680mg,5.27mmol,919μl)溶于二氯甲烷(10.0ml)中，然后加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲六氟磷酸酯(502mg,1.32mmol)，室溫下攪拌15分鐘，加入n-苯基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(302mg,1.17mmol)繼續攪拌反應1～2小時后直接旋干得粗品，柱層析純化得(r)-(1-氧代-1-(2-(苯基氨基甲酰基)-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4h)-基]丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(300mg,677μmol，產率58％)。
ms(esi)m/z444(m+1)+。
7、(r)-5-(2-氨基丁酰基)-n-苯基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
將(r)-(1-氧代-1-(2-(苯基氨基甲酰基)-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4h)-基]丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(300mg,677μmol)溶于三氟乙酸(2.00ml)和二氯甲烷(10.0ml)中，室溫攪拌1小時后直接旋干得(r)-5-(2-氨基丁酰基)-n-苯基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(209mg,609μmol,產率90％)。
ms(esi)m/z344(m+1)+。
8、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-苯基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
將(r)-5-(2-氨基丁酰基)-n-苯基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(209mg,609μmol),1h-吲唑-5-羧酸(142mg,874μmol)和n,n-二異丙基乙胺(452mg,3.50mmol,610μl)溶于dmf(10.0ml)中,然后加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲六氟磷酸酯(332mg,874μmol)，室溫下攪拌反應1～2小時后直接旋干得粗品,柱層析及制備高效液相純化得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-苯基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(76.5mg,157μmol,產率26％)。
ms(esi)m/z488(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.28(m,1h),10.15(s,1h),8.65-8.63(m,1h),,8.42-8.37(d,1h),8.21-8.18(m,1h),7.91-7.89(m,1h),7.80(s,1h),7.72-7.70(m,2h),7.58-7.55(m,1h),7.36-7.11(m,2h),7.11-7.07(m,1h)4.97-4.95(m,1h),4.80-4.76(m,1.4h),4.49-4.45(m,0.6h),3.85-3.84(m,2h),2.90-2.85(m,2h),1.80-1.76(m,2h),0.99-0.92(m,3h)。
實施例2、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(2-氟吡啶-4-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、2-氟吡啶-4-胺(江蘇鱷魚試劑化工有限公司)、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-5-羧酸(上海德默醫藥有限公司)為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(2-氟吡啶-4-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率1.7％)。
ms(esi)m/z＝507(m+1)+。
1hnmr(400mhz):δ＝13.00(1h,s),10.83(1h,s),8.60-8.62(1h,m),8.42-8.34(1.3h,m),8.21-8.13(1.9h,m),7.90-7.83(2h,m),7.60-7.51(3h,m),4.96-4.95(1h,m),4.82-4.74(1.4h,m),4.50-4.45(0.6h,m),4.00-3.86(0.7h,m),3.85-3.82(1.3h,m),2.98-2.87(2h,m),1.82-1.74(2h,m),0.98-0.90(3h,m)。
實施例3、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-苯乙基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、苯乙胺、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-苯乙基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率1.6％)。
ms(esi)m/z＝516(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.30(s,1h),8.64-8.62(m,1h),8.50-8.47(m,1h),8.42-8.8.35(m,1h),8.21-8.19(d,1h),7.91-7.89(m,1h),7.57-7.56(m,1h),7.47-7.46(d,1h),7.31-7.27(m,3h),7.23-7.20(m,3h),4.94(m,1h),4.73-4.69(m,1.4h),4.43(m,0.6h),3.83.-3.81(m,2h),3.45-3.40(m,2h),2.91-2.77(m,4h),1.79-1.35(m,2h),0.98-0.90(m,3h)。
實施例4、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(四氫呋喃-3-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基))-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、四氫呋喃-3-胺(上海韶遠化學科技有限公司)、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(四氫呋喃-3-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率5.2％)。
ms(esi)m/z＝482(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.28(m,1h),8.7-8.30(m,3h),,8.45(m,1h),7.54-7.75(m,1h),7.50-7.52(m,2h)5.6-4.25(m,4h),4.0-3.8(m,5h),3.75(m,2h),3.0-2.75(m,2h),2.3-2.1(m,1h),1.75-1.65(m,3h),0.98-0.90(m,3h)。
實施例5、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(1-甲基-1h-吡唑-3-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、1-甲基-1h-吡唑-3-胺(上海德默醫藥有限公司)、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(1-甲基-1h-吡唑-3-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率2.7％)。
ms(esi)m/z＝492(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.28(m,1h),10.85-10.83(m,1h),8.65-8.56(m,1h),8.41-8.36(m,1h),8.20-8.18(m,1h),7.90-7.84(m,2h),7.59-7.53(m,2h),6.50-6.49(m,1h),4.95-4.92(m,1h),4.75-4.69(m,1h),4.44-4.40(m,1h),4.00-3.97(m,1h),3.82-3.80(m,1h),3.76(s,3h),2.92-2.82(m,2h),1.84-1.70(m,2h),0.98-0.91(m,3h)。
實施例6、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(1-甲基哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、1-甲基哌啶-4-胺(上海韶遠化學科技有限公司)、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(1-甲基哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率12％)。
ms(esi)m/z＝509(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.30(s,1h),8.63-8.57(m,2h),8.41-8.33(m,1h),8.29(s,1h),8.20-8.18(m,2h),7.89-7.81(m,1h),7.57-7.53(m,2h),4.96-4.87(m,1h),4.72-4.63(m,1h),4.42-4.38(m,1h),3.99-3.95(m,1h),3.81-3.78(m,2h),2.89-2.79(m,4h),2.20(s,3h),2.08-1.98(m,2h),1.81-1.73(m,2h),1.57-1.55(d,j＝8hz,2h),0.97-0.89(m,3h)。
實施例7、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(2-氟苯基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、2-氟苯胺、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(2-氟苯基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率4.2％)。
ms(esi)m/z＝506(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso)δ＝13.30(s,1h),10.06(s,1h),8.66(d,j＝0.8hz,0.6h),8.59(d,j＝0.8hz,0.4h),8.43(s,0.6h),8.37(s,0.4h),8.22(s,0.6h),8.20(s,0.4h),7.86–7.92(m,1h),7.79(s,1h),7.53-7.59(m,2h),7.19–7.32(m,3h),4.92–5.00(m,1h),4.72–4.84(m,1.32h),4.47(d,j＝1.6hz,0.66h),3.98–4.04(m,0.65h),3.81–3.86(m,1.39h),2.86-3.02(m,2h),1.69–1.89(m,2h),0.93–1.00(m,3h)。
實施例8、5-(1-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)-環丙烷)-n-甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、甲胺、1-((叔丁氧基羰基)氨基)環丙甲酸(江蘇鱷魚試劑化工有限公司)和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得5-(1-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)-環丙烷)-n-甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率5.8％)。
ms(esi)m/z＝424(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.35-13.33(t,j＝3.8hz,1h),9.09(s,,1h),8.33-8.31(t,j＝4.8hz,2h),8.21(s,1h),7.81-7.78(d,j＝8.8hz,1h),7.58-7.55(dj＝8.4hz,1h),7.41(s,1h),4.48-4.46(t,j＝4.4hz,2h),3.92-3.88(m,2h),2.71-2.70(d,j＝4.4hz,5h),1.29(s,2h),1.06-1.03(m,2h)。
實施例9、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-芐基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、芐胺、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-芐基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率5.1％)。
ms(esi)m/z＝502(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.34(s,1h),9.09(s,1h),8.98-8.95(t,j＝6hz,2h),8.64-8.62(m,1h),8.41-8.34(d,1h),8.20-8.18(d,j＝8.8hz,1h),7.90-7.87(m,1h),7.57-7.55(m,2h),7.34-7.23(m,5h),4.95-4.93(m,1h),4.73-4.69(m,1h),4.42-4.39(m,3h),3.82-3.79(m,2h),2.92-2.80(m,2h),1.78-1.74(m,2h),0.97-0.89(m,3h)。
實施例10、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n，n-二甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、二甲胺、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n，n-二甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率7.6％)。
ms(esi)m/z＝440(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.34(s,1h),8.64-8.52(m,1h),8.41-8.34(m,1h),8.20-8.19(m,1h),7.90-7.82(m,1h),7.57-7.53(t,j＝8.4hz,1h),7.31-7.25(d,j＝20.8hz,1h),,4.95-4.93(m,1h),4.74-4.68(m,1h),4.44-4.39(d,1h),3.99-3.81(m,2h),3.06-2.80(m,8h),1.81-1.72(m,2h),0.97-0.89(m,3h)。
實施例11、(r)-5-(2-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、甲胺、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率16％)。
ms(esi)m/z＝426(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝11.98(s,1h),8.75-8.60(m,2h),.8.50-8.35(m,2h),7.56-7.44(m,2h),6.56-6.53(m,1h),4.95-4.93(m,1h),4.74-4.68(m,1h),4.44-4.39(d,1h),3.99-3.82(m,2h),2.90-2.79(m,2h),1.81-2.72(m,2h),0.97-0.90(m,3h)。
實施例12、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(3-氟芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、3-氟芐胺、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(3-氟芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率17％)。
ms(esi)m/z＝520(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.34(s,1h),9.01-8.99(t,j＝6hz,1h),8.64-8.62(m,1h),8.41-8.35(d,1h),8.20-8.18(m,1h),7.90-7.87(m,1h),7.57-7.55(m,1h),7.39-7.33(m,1h),7.13-7.07(m,3h),4.95-4.93(m,1h),4.74-4.68(m,1h),4.44-4.39(m,3h),3.82-3.81(m,2h)2.91-2.79(m,2h),1.76-1.74(m,2h),0.97-0.90(m,3h)。
實施例13、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(3-甲基芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、3-甲基芐胺、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(3-甲基芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率6.0％)。
ms(esi)m/z＝516(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.30(s,1h),8.93(s,1h),8.64-8.62(m,1h),,8.44-8.41(m,2h),8.21-8.18(d,1h),7.91-7.89(m,1h),7.57-7.56(m,2h),7.20-7.18(m,1h),7.09-7.05(m,3h),4.90(m,1h),4.75-4.38(m,4h),3.83-3.81(m,2h),2.91-2.81(m,2h),2.28(s,3h),1.77-1.75(m,2h),0.99-0.92(m,3h)。
實施例14、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(2,3-二氫-1h-茚-4-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、2,3-二氫-1h-茚-4-胺(江蘇鱷魚試劑化工有限公司)、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(3-甲基芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率5.8％)。
ms(esi)m/z＝528(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.28(s,1h),9.82(s,1h),8.42(m,1h),8.35(m,1h),8.21(m,1h),7.74-7.73(d,1h),7.58-7.56(m,2h),7.15-7.08(m,3h),5.00-4.50(m,3h),4.00-3.75(m,2h),2.92-2.77(m,6h),2.0-1.97(m,2h),1.75(m,2h),0.99-0.94(m,3h)。
實施例15、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(2,3-二甲基苯基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、2,3-二甲基苯胺、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(2,3-二甲基苯基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率5.1％)。
ms(esi)m/z＝516(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.30(m,1h),9.86(s,1h),8.65-8.63(m,1h),,8.45-8.35(m,1h),8.21-8.18(d,1h),7.91-7.89(m,1h),7.57-7.56(m,1h),7.09-7.06(m,3h),4.99-4.49(m,4h),3.86-3.34(m,2h),2.95-2.84(m,2h),2.27(s,3h),2.08-2.04(d,3h),1.8-1.79(m,2h),0.99-0.92(m,3h)。
實施例16、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(2-氟芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、2-氟芐胺、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(2-氟芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率9.3％)。
ms(esi)m/z＝520(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.34(s,1h),8.95-8.92(t,j＝6hz,1h),8.64-8.62(m,1h),8.41-8.35(d,1h),8.20-8.18(m,1h),7.90-7.87(m,1h),7.57-7.55(m,1h),7.39-7.33(m,1h),7.13-7.07(m,3h),4.95-4.93(m,1h),4.74-4.68(m,1h),4.44-4.39(m,3h),3.82-3.81(m,2h)2.91-2.79(m,2h),1.76-1.74(m,2h),0.97-0.90(m,3h)。
實施例17、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(2-氟-3-(三氟甲基)芐基)-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、2-氟-3-三氟甲基芐胺(上海德默醫藥有限公司)、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(2-氟-3-(三氟甲基)芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率5.0％)。
ms(esi)m/z＝588(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.26(m,1h),9.05-9.02(t,j＝5.6hz,1h),8.65-8.63(m,1h),,8.42-8.35(d,1h),8.21-8.18(m,1h),7.91-7.89(m,1h),7.69-7.67(m,2h),759-7.67(m,2h),7.59-7.56(m,2h),7.41-7.37(m,1h),4.75-4.44(m,4h),3.83-3.30(m,2h),2.81-2.50(m,2h),1.77-1.75(m,2h),0.98-0.90(m,3h)。
實施例18、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(3-甲氧基芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、3-甲氧基芐胺、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(3-甲氧基芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率3.8％)。
ms(esi)m/z＝532(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.30(s,1h),8.93(s,1h),8.64-8.62(m,1h),,8.44-8.41(m,2h),8.21-8.18(d,1h),7.91-7.89(m,1h),7.57-7.56(m,2h),7.20-7.18(m,1h),7.09-7.05(m,3h),4.90(m,1h),4.75-4.38(m,4h),3.83-3.81(m,2h),2.91-2.81(m,2h),2.28(s,3h),1.77-1.75(m,2h),0.99-0.92(m,3h)。
實施例19、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(仲丁基)-4,5,6,7-四氫噻吩[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、仲丁胺、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(仲丁基)-4,5,6,7-四氫噻吩[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率14％)。
ms(esi)m/z＝468(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.30(s,1h),8.41(m,1h),.8.21(m,1h),8.08-8.06(d,1h),7.80(m,1h),7.55(m,2h),3.82-3.81(m,3h),2.51-2.49(m,2h),1.75(m,2h),1.48-1.47(m,2h),1.11-1.08(m,3h),0.98-0.92(m,3h),0.86-0.81(m,3h)。
實施例20、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(2-氯-5-氟芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、2-氯-5-氟芐胺、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(2-氯-5-氟芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率2.9％)。
ms(esi)m/z＝554(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.31(s,1h),9.01-8.99(m,1h),8.65-8.63(m,1h),8.8.42-8.36(m,1h),8.21-8.19(m,1h),7.91-7.89(m,1h),7.63(s,1h),7.57-7.50(m,2h),7.19-7.11(m,2h),4.76-4.47(m,5h),3.83(m,2h),2.93-2.92(m,2h),1.77-1.76(m,2h),0.98-0.91(m,3h)。
實施例21、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(四氫-2h-吡喃-4-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
1、(r)-5-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯的制備
將(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸(1.73g,8.50mmol)和n,n-二異丙基乙胺(4.39g,34.0mmol,6.00ml)溶于二氯甲烷(10.0ml)中,然后加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲六氟磷酸酯(3.22g,8.50mmol)),室溫下攪拌15分鐘,加入4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯(1.79g,8.50mmol)繼續攪拌反應1～2小時后直接旋干得粗品,柱層析純化得(r)-5-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯(2.46g,6.21mmol,產率73％)。
ms(esi)m/z397(m+1)+。
2、(r)-5-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸的制備
將(r)-5-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯(2.46g,6.21mmol)溶解在甲醇(30.0ml)和氫氧化鉀水溶液(30.0ml,2.0m)中，室溫攪拌2小時后，減壓蒸除甲醇，用乙酸乙酯(50mlx3)萃取出雜質，調節ph至5～6，用乙酸乙酯(50mlx3)萃取，萃取液用飽和食鹽水(50mlx2)洗滌，無水硫酸鈉干燥，濾出萃取液，減壓蒸餾得(r)-5-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸(2.28g,6.20mmol,產率99％)。
ms(esi)m/z369(m+1)+。
3、(r)-(1-氧-1-(2-((四氫-2h-吡喃-4-基)氨基甲酰基)-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4h)基)丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯的制備
將(r)-5-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸(600mg,1.63mmol)和n,n-二異丙基乙胺(421mg,3.26mmol,569μl)溶于二氯甲烷(20.0ml)中，然后加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲六氟磷酸酯(619mg,1.63mmol)，室溫下攪拌15分鐘，加入四氫-2h-吡喃-4-胺(165mg,1.63mmol)繼續攪拌反應1～2小時后直接旋干得粗品，柱層析純化得(r)-(1-氧-1-(2-((四氫-2h-吡喃-4-基)氨基甲酰基)-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4h)基)丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(723mg,1.60mmol,產率98％)。
ms(esi)m/z452(m+1)+。
4、(r)-5-(2-氨基丁酰基)-n-(四氫-2h-吡喃-4-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
將(r)-(1-氧-1-(2-((四氫-2h-吡喃-4-基)氨基甲酰基)-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4h)基)丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(723mg,1.60mmol)溶于三氟乙酸(2.00ml)和二氯甲烷(10.0ml)中，室溫攪拌1小時后直接旋干得(r)-5-(2-氨基丁酰基)-n-(四氫-2h-吡喃-4-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(498mg,1.42mmol，產率88％)。
ms(esi)m/z352(m+1)+。
5、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(四氫-2h-吡喃-4-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
將(r)-5-(2-氨基丁酰基)-n-(四氫-2h-吡喃-4-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(498mg,1.42mmol),1h-吲唑-5-羧酸(230mg,1.42mmol)和n,n-二異丙基乙胺(368mg,2.84mmol,497μl)溶于dmf(10.0ml)中,然后加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲六氟磷酸酯(343mg,1.42mmol)，室溫下攪拌反應1～2小時后直接旋干得粗品,柱層析和制備高效液相純化得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(四氫-2h-吡喃-4-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(119mg,241μmol,產率17％)。
ms(esi)m/z496(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.30(s,1h),8.52-8.55(m,1h),,8.34(m,1h),8.50-8.45(m,2h),7.9-7.88(m,1h),7.91-7.89(m,1h),7.57-7.56(m,2h),4.74-4.43(m,3h),3.88-3.80(m,5h),3.38-3.34(m,2h),2.91-2.90(m,2h),1.76-1.51(m,6h),0.92(m,3h)。
實施例22、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-((2-氟吡啶-4-基)甲基)-4,5,6,7-四氫噻吩[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、(2-氟吡啶-4-基)甲胺(上海泰坦科技股份有限公司)和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-((2-氟吡啶-4-基)甲基)-4,5,6,7-四氫噻吩[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率3.5％)。
ms(esi)m/z＝521(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.28(d,1h),9.11-9.08(m,1h),8.66–8.58(m,1h),8.42-8.34(m,3h),8.21-8.19(m,2h),7.91-7.83(m,1h),7.60-7.53(m,2h),7.26-7.22(m,1h)，7.03(s,1h),4.96-4.91(m,1h),4.76-4.72(m,1.4h),4.50-4.41(m,2.6h),4.01-3.81(m,2h),2.96-2.82(m,2h),1.82-2.72(m,2h),0.98-0.91(m,3h)。
實施例23、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-環己基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、環己胺和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-環己基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率13％)。
ms(esi)m/z＝494(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.29(s,1h),8.64-8.66(m,1h),8.59-8.61(d,j＝14.2,1h),8.21-8.24(m,2h),7.83-7.90(m,1h),7.53-7.58(m,2h),4.73-4.95(m,1h),4.42-4.71(m,1.41h),3.83-4.38(m,0.63h),3.66-3.68(m,0.63h),3.66-3.67(m,1.39),3.64-3.66(s,1h),2.89-2.90(d,j＝15.1,2h),1.77-1.81(m,6h),1.73-1.75(s,1h),1.57-1.72(m,4h),1.27-1.29(m,1h),1.22-1.29(m,1h)。
[α]d＝-58°(c＝0.4g/100ml,dmf)
實施例24、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-環丁基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、環丁胺和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-環丁基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率15％)。
ms(esi)m/z＝466(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.32(s,1h),8.64-8.35(m,3h),,8.21-8.18(m,1h),7.88(m,1h),7.58-7.54(m,2h),5.0-4.3(m,4h),4.0-3.75(m,2h),2.85-2.75(m,2h),2.05-2.0(m,4h),1.80-1.64(m,4h),0.98-0.90(m,3h)。
實施例25、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(氧雜環丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、氧雜環丁烷-3-胺(江蘇鱷魚試劑化工有限公司)和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(氧雜環丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率2.2％)。
ms(esi)m/z＝468(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.27(m,1h),9.04-9.03(m,1h),8.64-8.62(m,1h),8.41-8.33(m,1h),8.21-7.18(m,1h),7.90-7.88(m,1h),7.60-7.56(m,2h)4.95-4.92(m,2h),4.76-4.45(m,6h),3.82-3.81(m,2h),2.82-2.89(m,2h),1.77(m,2h),0.98-0.90(m,3h)。
實施例26、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-環戊基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、環戊胺和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-環戊基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率14％)。
ms(esi)m/z＝480(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.29(s,1h),8.64-8.66(m,1h),8.35-8.42(d,j＝7.9,2h),8.19-8.20(m,2h),7.83-7.91(m,1h),7.53-7.58(m,2h),4.68-4.73(s,1h),4.38-4.42(m,1.42h),4.11-4.13(m,0.62h),3.82-4.11(m,1h),3.81-3.82(m,0.65h),3.80-3.81(m,1.4h),2.79-2.90(md,j＝9.8,2h),1.77-1.86(m,6h),1.68-1.77(m,4h),1.50-1.67(m,3h)。
實施例27、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、4-氟苯胺和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率2.0％)。
ms(esi)m/z＝506(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.28(s,1h),10.21(s,1h),8.64-8.66(m,1h),8.36-8.42(m,1h),8.21-8.36(m,1h),8.18-8.21(m,1h),7.91-8.18(m,1h),7.89-7.91(m,2h),7.78-7.89(m,1h),7.17-7.56(m,2h),4.76(s,1h),4.49-4.76(m,2h),3.83-3.85(m,2h),1.55-1.67(m,2h),0.91-0.99(m,3h)。
實施例28、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(3-氟苯基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、3-氟苯胺和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(3-氟苯基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率3.2％)。
ms(esi)m/z＝506(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.29(s,1h),10.32(s,1h),8.65-8.66(m,1h),8.37-8.42(m,1h),8.29-8.36(m,1h),8.18-8.21(m,1h),7.85-8.08(m,1h),7.91-7.91(m,2h),7.71-7.89(m,1h),7.12-7.56(m,2h),4.76(s,1h),4.49-4.76(m,2h),3.80-3.85(m,2h),1.55-1.67(m,2h),0.93-0.98(m,3h)。
實施例29、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-((5-氟吡啶-3-基)甲基)-4,5,6,7-四氫噻吩[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、(5-氟吡啶-3-基)甲胺(江蘇鱷魚試劑化工有限公司)和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-((5-氟吡啶-3-基)甲基)-4,5,6,7-四氫噻吩[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率13％)。
ms(esi)m/z＝521(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.27(m,1h),9.060-9.03(m,1h),8.64-8.36(m,3h),,8.21-8.19(m,1h),7.9-7.84(m,1h),7.61-7.53(m,3h),4.96-4.95(m,1h),4.94-4.92(m,1.4h)4.49-4.40(m,2.6h),3.97-3.80(m,2h),2.92-2.81(m,2h),1.80-1.73(m,2h),0.99-0.92(m,3h)。
實施例30、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(1-甲基吡咯烷-3-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、1-甲基吡咯烷-3-胺(江蘇鱷魚試劑化工有限公司)和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(1-甲基吡咯烷-3-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率7.3％)。
ms(esi)m/z＝495(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.27(m,1h),8.65-8.18(m,5h),7.90-7.88(m,1h),,7.6-7.55(m,2h),5.0(m,1h),4.71-4.69(m,1h),4.34-4.33(m,2h),3.96-3.78(m,2h),2.91-2.69(m,1h),2.48(m,2h),2.31(s,3h),2.2(m,1h)1.78-1.72(m,2h),0.99-0.92(m,3h)。
實施例31、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-((2-甲氧基吡啶-4-基)甲基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、(2-甲氧基吡啶-4-基)甲胺(江蘇鱷魚試劑化工有限公司)和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-((2-甲氧基吡啶-4-基)甲基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率5.9％)。
ms(esi)m/z＝533(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.30(s,1h),9.03-9.05(m,1h),8.66-9.02(m,1h),8.36-8.42(m,1h),8.19-8.21(m,1h),8.08-8.09(m,1h),7.89-7.91(m,1h),7.54-7.59(m,2h),6.86-6.89(m,1h),6.67(s,1h),4.94-4.96(m,1h),4.38-4.75(m,4h),3.81-3.83(m,5h),2.82-2.93(m,2h),1.74-1.80(m,2h),0.93-0.98(m,3h)。
實施例32、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(2-二甲胺基乙基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、2-二甲胺乙胺(江蘇鱷魚試劑化工有限公司)和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(2-二甲胺基乙基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率1.5％)。
ms(esi)m/z＝483(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.29(s,1h),8.63-8.65(m,1h),8.35-8.41(m,2h),8.19-8.21(m,2h),7.88-7.90(m,1h),7.50-7.58(m,2h),4.69-4.73(m,1h),4.45-4.69(m,2h),3.61-3.90(m,2h),3.40-3.51(m,2h),2.75-2.90(m,2h),2.31-2.41(m,6h),2.21-2.31(m,2h),1.65-1.82(m,2h),0.85-0.95(m,3h)。
實施例33、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(4-羥基芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、4-羥基芐胺和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(4-羥基芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率7.7％)。
ms(esi)m/z＝518(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.28(m,1h),9.27(s,1h),8.65-8.63(m,1h),,8.42-8.37(d,1h),8.21-8.18(m,1h),7.91-7.89(m,1h),7.80(s,1h),7.72-7.70(m,2h),7.58-7.55(m,1h),7.36-7.11(m,2h),7.11-7.07(m,1h)4.97-4.95(m,1h),4.80-4.76(m,1.4h),4.49-4.45(m,0.6h),3.85-3.84(m,2h),2.90-2.85(m,2h),1.80-1.76(m,2h),0.98-0.90(m,3h)。
實施例34、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(5-氟2-甲苯基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、5-氟2-甲苯胺(北京百靈威化學技術有限公司)和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(5-氟2-甲苯基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率4.6％)。
ms(esi)m/z＝520(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.27(m,1h),9.80(m,1h),8.64-8.62(m,1h),,8.42-8.37(m,1h),8.21-8.18(d,1h),7.91-7.89(m,1h),7.61-7.56(m,2h),7.20-7.18(m,1h),7.0-6.97(m,2h),4.75-4.71(m,1h),4.45-4.36(m,3h),3.62.3.33(m,2h),2.92(m,2h),2.20-2.08(s,2h),1.77(m,2h),0.99-0.92(m,3h)。
實施例35、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(2-甲胺基乙基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、2-甲胺基乙胺(北京伊諾凱科技有限公司)和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(2-甲胺基乙基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率20％)。
ms(esi)m/z＝469(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.27(m,1h),8.65-8.60(m,2h),8.41-8.36(m,1h),,8.21-8.20(m,2h),7.90-7.84(m,1h),7.58-7.50(m,2h),4.95-4.92(m,1h),4.75-4.71(m,1.4h),4.43-4.39(m,0.6h),4.1-3.80(m,2h),3.49-3.46(m,2h),3.06-3.01(m,2h),2.94-2.82(m,2h),2.58(s,3h)1.82-1.72(m,2h),0.99-0.90(m,3h)。
實施例36、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)-3-甲基丁酰基)-n-甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、甲胺和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)-3-甲基丁酰基)-n-甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率13％)。
ms(esi)m/z＝440(m+1)+。
1hnmr(400mhz,meod):δ＝8.41(s,1h),8.21-8.19(m,1h),7.92-7.89(m,1h),7.81-7.78(m,1h),7.63-7.60(d,j＝9.2hz,1h),5.03-4.99(m,1h),4.84-4.76(t,j＝16.8hz,1h),4.61-4.57(d,j＝16.4hz,1h),4.16-4.07(m,2h),3.08-2.88(m,2h),2.82(s,2h),2.32-2.26(m,1h),1.18-0.98(m,4h)。
實施例37、(r)-5-(2-環丙基-2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)乙酰基)-n-甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-環丙乙酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、甲胺和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-環丙基-2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)乙酰基)-n-甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率27％)。
ms(esi)m/z＝438(m+1)+。
1hnmr(400mhz,meod):δ＝8.40(s,1h),8.27(s,1h),8.19-8.16(d,j＝11.2hz,1h),7.93-7.80(m,1h),7.62-7.56(m,1h),7.38(s,1h),7.30(s,1h),4.83-4.58(m,3h),4.12-3.82(m,2h),3.21-2.77(m,2h),2.82(s,3h),1.42-1.41(m,1h),0.70-0.48(m,4h)。
實施例38、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-n-(5-氟-2-甲基芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、5-氟2-甲基芐胺和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-n-(5-氟-2-甲基芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率3.6％)。
ms(esi)m/z＝562(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.29(s,1h),8.88-8.91(m,1h),8.35-8.40(d,j＝13.5,1h),7.85-8.19(m,2h),7.81-7.83(m,1h),7.79-7.91(m,1h),7.61-7.79(m,1h),7.51-7.56(m,1h),6.95-7.00(m,2h),5.05-5.12(m,1h),4.80-4.85(d,j＝9.8,1.36h),4.34-4.38(m,3h),3.82-4.34(m,1.45h),2.80-2.93(d,j＝14.2,2h),2.49(s,1h),1.02-1.07(m,9h)。
實施例39、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-n-(5-氟-2-甲氧基苯基)-4,5,6,7-四氫噻吩[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、5-氟2-甲氧基苯胺(江蘇鱷魚試劑化工有限公司)和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-n-(5-氟-2-甲氧基芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率22％)。
ms(esi)m/z＝564(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.28(s,1h),9.36-9.36(d,j＝14.6,1h),8.64-8.66(m,1h),8.42-8.64(m,1h),8.21-8.36(m,1h),8.18-8.21(m,1h),7.91-8.18(m,1h),7.89-7.91(m,1h),7.56-7.58(m,1h),7.10-7.11(m,1h),6.99-7.07(m,1h),4.94-4.97(s,1h),4.74-4.78(m,1.42h),4.45-4.49(m,0.65h),3.85-3.88(m,5h),2.95-2.96(d,j＝13.1,2h)1.76-1.80(m,2h),0.92-0.99(m,3h)。
實施例40、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)-3-甲氧基丙酰基)-n-(5-氟-2-甲基芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、5-氟2-甲基芐胺和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)-3-甲氧基丙酰基)-n-(5-氟-2-甲基芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率20％)。
ms(esi)m/z＝550(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.29(s,1h),8.86-8.88(m,1h),8.75-8.85(m,1h),8.21-8.41(d,j＝8.8,1h),8.19-8.21(m,1h),7.87-8.08(m,1h),7.56-7.61(m,2h),7.18-7.22(m,1h),6.96-7.00(m,2h),4.66-4.70(m,1h),4.35-4.39(m,2h),4.34-4.35(m,2h),3.64-3.82(m,2h),3.26-3.29(m,2h),3.25-3.26(m,3h),2.89-2.90(d,j＝13.1,2h),2.08(s,3h)。
實施例41、(r)-5-(2-(6-甲氧基-1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(5-氟-2-甲基芐基)-4,5,6,7-四氫并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、5-氟2-甲基芐胺和6-甲氧基-1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(6-甲氧基-1h-吲唑-5-甲酰氨基)-3-甲氧基丙酰基)-n-(5-氟-2-甲基芐基)-4,5,6,7-四氫并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率20％)。
ms(esi)m/z＝564(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.06(s,1h),8.93-8.95(m,1h),8.67-8.92(m,1h),8.63-8.68(m,1h),7.63-8.07(m,1h),7.22-7.63(s,1h),7.18-7.22(m,2h,6.96-7.00(m,2h),5.08-5.10(m,1h),4.51-4.76(m,2h),4.38-4.51(m,2h),3.82-3.94(m,5h),2.93-2.97(d,j＝11.3,2h),2.27(s,3h),1.61-1.72(m,2h),0.85-0.93(m,3h)。
實施例42、(r)-5-(2-(6-甲氧基-1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-苯基-4,5,6,7-四氫并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、苯胺和6-甲氧基-1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(6-甲氧基-1h-吲唑-5-甲酰氨基)-3-甲氧基丙酰基)-n-苯基-4,5,6,7-四氫并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率22％)。
ms(esi)m/z＝518(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.03(s,1h),10.16-10.22(m,1h),8.65-8.67(m,1h),8.22-8.28(d,j＝13.6,1h),8.15-8.20(m,2h),7.81-7.83(m,2h),7.71-7.73(m,2h),7.06-7.11(m,2h),5.09-5.11(m,1h),4.50-4.80(m,2h),3.84-3.97(m,5h),2.98-3.00(d,j＝11.2,2h),1.65-1.81(m,2h),0.87-0.92(m,3h)。
實施例43、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(3-氯苯基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、3-氯苯胺和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(3-氯苯基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率19％)。
ms(esi)m/z＝522(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.29(s,1h),10.31(s,1h),8.65-8.67(m,1h),8.43-8.65(m,1h),8.37-8.43(m,1h),8.18-8.22(m,1h),7.91-8.18(m,1h),7.89-7.90(m,1h),7.40-7.66(m,2h),7.36-7.40(m,1h),7.14-7.16(m,1h),4.95-4.97(m,1h),4.45-4.81(m,2h),3.34-3.87(m,2h),1.76-1.81(m,2h),0.92-0.99(m,3h)。
實施例44、(r)-5-(2-(3-氟-1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-苯基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、苯胺和3-氟-1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(3-氟-1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-苯基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率10％)。
ms(esi)m/z＝506(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝12.79(1h,s),10.16-10.14(1h,m),8.76-8.70(1h,m),8.40-8.32(1h,m),7.98-7.92(1h,m),7.80-7.79(1h,m),7.72-7.68(2h,m),7.55-7.48(1h,m),7.36-7.32(2h,m),7.10-7.07(1h,m),4.98-4.92(1h,m),4.81-4.73(1.3h,m),4.49-4.45(0.7h,m),4.02-3.97(0.6h,m),3.87-3.80(1.4h,m),2.96-2.94(1h,m),2.85-2.83(1h,m),1.82-1.73(2h,m),0.99-0.91(3h,m)。
實施例45、(r)-5-(2-(6-氟-1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-苯基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、苯胺和6-氟-1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(6-氟-1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-苯基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率5.1％)。
ms(esi)m/z＝506(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso)：δ＝13.90(1h,s),10.18-10.16(1h,m),8.75-8.69(1h,m),8.42(1h,s),8.38-8.23(2h,m),7.81(0.7h,s),7.73-7.66(2.3h,m),7.36-7.32(2h,m),7.10-7.07(1h,m),4.98-4.90(1h,m),4.81-4.69(1.3h,m),4.49-4.45(0.7h,m),4.10-3.98(0.7h,m),3.88-3.80(1.3h,m),3.00-2.90(1h,m),2.84(1h,s),1.82-1.76(2h,m),0.99-0.91(3h,m)。
實施例46、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(2,4,5-三氟芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、2,4,5-三氟芐胺和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(2,4,5-三氟芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率6.2％)。
ms(esi)m/z＝574(m+1)+。
1hnmr(400mhz,meod):δ＝8.38-8.39(s,1h),8.15-8.25(m,1h),7.81-7.93(d,1h),7.56-7.63(m,1h),7.42-7.48(d,1h),7.19-7.23(m,1h),7.16-7.17(m,1h),5.12-5.14(m,1h),4.74-4.82(t,1h),4.57-4.61(d,1h),4.52-4.54(d,2h),4.46-4.48(d,1h),4.08-4.12(m,1h),3.71-3.99(d,1h)，3.04-3.51(m,1h),2.95-3.03(m,1h),1.90-1.96(m,1h).1.86-1.89(s,1h),1.02-1.11(m,3h)。
實施例47、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(2-三氟甲基芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、2-三氟甲基芐胺(江蘇鱷魚試劑化工有限公司)和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(2-三氟甲基芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率4.7％)。
ms(esi)m/z＝570(m+1)+。
1hnmr(400mhz,meod):δ＝8.25-8.40(d,1h),8.16-8.19(d,1h),7.79-7.93(dd,1h),7.52-7.66(m,5h),7.43-7.48(d,1h),5.07-5.05(m,1h),4.60-4.82(t,1h),4.58-4.61(d,2h),4.07-4.11(m,1h),3.69-3.99(m,1h),3.02-3.03(m,1h),2.97-2.98(m,1h),1.88-1.99(m,2h),1.02-1.11(m,3h)。
實施例48、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-((2-甲基吡啶-4-基)甲基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、(2-甲基吡啶-4-基)甲胺和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-((2-甲基吡啶-4-基)甲基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率11％)。
ms(esi)m/z＝517(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.28(s,1h),9.04-9.01(m,1h),8.66–8.58(m,1h),8.41-8.34(m,1h),8.20-8.17(m,1.5h),7.90-7.83(m,1h),7.58-7.53(m,2h),7.11-7.03(m,2h),4.97-4.90(m,1h),4.79-4.67(m,1h),4.44-4.38(m,3h),4.00-3.97(m,1h),3.83-3.78(m,1h),2.92-2.81(m,2h),2.43(s,3h),1.83-1.73(m,1h),0.98-0.91(m,3h)。
實施例49、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-((3-甲基吡啶-4-基)甲基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、(3-甲基吡啶-4-基)甲胺(江蘇鱷魚試劑化工有限公司)和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例21中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-((2-甲基吡啶-4-基)甲基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率3.6％)。
ms(esi)m/z＝517(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.29(s,1h),8.99-8.97(m,1h),8.66–8.58(m,1h),8.42-8.34(m,3h),8.21-8.19(m,1.5h),7.91-7.83(m,1h),7.62-7.53(m,2h),7.15-7.10(m,1h),4.96-4.93(m,1h),4.76-4.72(m,1h),4.42-4.40(m,3h),4.01-3.97(m,1h),3.84-3.80(m,1h),2.94-2.82(m,2h),2.29(s,3h),1.84-1.72(m,1h),0.98-0.91(m,3h)。
實施例50、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(5-氟-2-甲基芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
1、(r)-甲基2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酯的制備
將(r)-2-氨基丁酸甲酯(2.00g,12.3mmol)和5-甲酸-1h-吲唑(1.44g,12.3mmol)、二異丙基乙胺(4.78g,37.0mmol,6.46ml)溶于dmf(25.0ml)中，向反應液中加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲六氟磷酸酯(4.69g,12.3mmol)。反應液室溫攪拌1小時后，濃縮除去溶劑，粗產品經過制備液相純化得到(r)-2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酸甲酯(2.80g,10.7mmol,產率87％)。
ms(esi)m/z262(m+1)+。
2、(r)-2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酸的制備
將(r)-2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酸甲酯(2.80g,10.7mmol)和氫氧化鉀(1.20g,21.4mmol)溶于甲醇(10.0ml)和水(10.0ml)中。反應液室溫攪拌2小時后，濃縮除去溶劑，正丁醇萃取(50ml×3)。合并有機相，濃縮除去溶劑得到(r)-2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酸(2.50g,10.1mmol,產率94％)。
ms(esi)m/z248(m+1)+。
3、叔丁基2-((5-氟-2-甲基芐基)氨基甲酰基)-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4h)-羧酸酯的制備
將5-(叔丁氧基羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸(800mg,2.82mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲六氟磷酸酯(1.13g,2.96mmol)、二異丙基乙胺(729mg,5.64mmol,206μl)溶于二氯甲烷(10.0ml)中，向反應液中加入(5-氟-2-甲基苯基)甲胺(392mg,2.82mmol)。反應液室溫攪拌1小時后，濃縮除去溶劑，粗產品經過中壓制備液相純化得到叔丁基2-((5-氟-2-甲基芐基)氨基甲酰基)-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4h)-羧酸酯(1.00g,1.98mmol,產率70％)。
ms(esi)m/z405(m+1)+。
4、n-(5-氟-2-甲基芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
將叔丁基2-((5-氟-2-甲基芐基)氨基甲酰基)-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4h)-羧酸酯(1.00g,2.47mmol)和三氟乙酸(2ml)溶于二氯甲烷(10ml)中，反應液室溫攪拌0.5小時后，濃縮除去溶劑，粗產品經過中壓制備液相純化得到n-(5-氟-2-甲基芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(560mg,1.75mmol,產率71％,)。
ms(esi)m/z305(m+1)+。
5、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(5-氟-2-甲基芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
將(r)-2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酸(244mg,986μmol)和n-(5-氟-2-甲基芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(300mg,986μmol)、二異丙基乙胺(382mg,2.96mmol,516μl)溶于dmf(10.0ml)中，向反應液中加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲六氟磷酸酯(393mg,1.03mmol)。反應液室溫攪拌1小時后，濃縮除去溶劑，粗產品經過柱層析和制備高效液相純化得到(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(5-氟-2-甲基芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(30.0mg,55.1μmol,產率5.6％)。
ms(esi)m/z534(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.27(m,1h),8.8(m,1h),8.64-8.62(m,1h),,8.42-8.37(m,1h),8.21-8.18(d,1h),7.91-7.89(m,1h),7.61-7.56(m,2h),7.20-7.18(m,1h),7.0-6.97(m,2h),4.75-4.71(m,1h),4.45-4.36(m,4h),3.62.3.33(m,2h),2.92(m,2h),2.27(s,3h),1.77(m,2h),0.99-0.92(m,3h)。
實施例51、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(萘-1-基甲基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以(r)-2-氨基丁酸甲酯、5-甲酸-1h-吲唑、5-(叔丁氧基羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸和萘-1-基甲胺(上海德默醫藥有限公司)為原料，按照實施例50中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(萘-1-基甲基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率6.3％)。
ms(esi)m/z＝552(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.34(s,1h),8.99-8.98(d,j＝6hz,1h),8.64-8.62(m,1h),8.41-8.35(d,1h),8.21-8.13(m,2h),7.97-7.85(m,2h),7.60-7.47(m,6h),4.90-4.89(m,3h),4.72-4.44(m,2h),3.82-3.81(m,2h)2.91-2.79(m,2h),1.76-1.74(m,2h),0.97-0.90(m,3h)。
實施例52、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丙酰基)-n-甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、甲胺、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丙酰基)-n-甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率3.8％)。
ms(esi)m/z＝412(m+1)+。
1hnmr(400mhz,meod):δ＝8.40(s,0.6h),8.26(s,1.4h),7.93(d,j＝8.8hz,0.7h),7.83(d,j＝8.8hz,0.5h),7.59(dd,j＝15.0,8.8hz,1h),7.39(s,0.6h),7.31(s,0.5h),5.20(dq,j＝17.7,6.9hz,1h),4.84(d,j＝16.4hz,1h),4.70(d,j＝16.0hz,1h),4.54(d,j＝16.6hz,1h),4.13–4.04(m,1h),3.96–3.84(m,1h),3.17–3.07(m,1h),3.04–2.81(m,5h),1.52(d,j＝7.0hz,2h),1.45(d,j＝6.9hz,1h)。
實施例53、5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)乙酰基)-n-甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、甲胺、2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)乙酰基)-n-甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率3.2％)。
ms(esi)m/z＝398(m+1)+。
1hnmr(400mhz,meod):δ＝8.40(d,j＝10.9hz,1h),8.20(s,1h),7.93(t,j＝7.8hz,1h),7.63(d,j＝8.8hz,1h),7.40(d,j＝6.8hz,1h),4.70(d,j＝9.7hz,2h),4.44(s,1h),4.39(s,1h),3.97(t,j＝5.7hz,1h),3.92(q,j＝5.7hz,1h),3.05(t,j＝5.3hz,1h),2.93(t,j＝5.5hz,1h),2.89(s,3h)。
實施例54、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)-3-苯基丙酰基)-n-甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-羧酸、甲胺、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-苯基丙酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)-3-苯基丙酰基)-n-甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率2.1％)。
ms(esi)m/z＝488(m+1)+。
1hnmr(400mhz,meod):δ＝8.31(d,j＝28hz,1h),8.18(d,j＝5.2hz,1h),7.79-7.87(m,1h),7.58(t,j＝8.4hz,1h),7.03-7.33(m,6h),5.33-5.38(m,1h),4.28-4.63(m,2h),3.63-4.04(m,2h),3.14-3.28(m,2h),2.69-2.88(m,5h)。
實施例55、5-(1-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)環丁酰基)-n-甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、甲胺、1-((叔丁氧羰基)氨基)環丁酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得5-(1-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)環丁酰基)-n-甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率2.0％)。
ms(esi)m/z＝438(m+1)+。
1hnmr(400mhz,meod):δ＝8.39(s,1h),8.22(s,1h),8.10(d,j＝23.3hz,1h),7.88(d,j＝8.2hz,0h),7.62(d,j＝8.2hz,1h),7.48(d,j＝8.6hz,0h),7.36(s,0h),7.09(s,0h),4.60(d,j＝29.6hz,2h),3.94(s,1h),3.81(s,1h),2.87(s,4h),2.72(s,2h),2.47(s,2h),2.07(s,1h),1.95(d,j＝8.6hz,1h)。
實施例56、5-(1-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)環戊酰基)-n-甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、甲胺、1-((叔丁氧羰基)氨基)環戊酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得5-(1-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)環戊酰基)-n-甲基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率1.7％)。
ms(esi)m/z＝452(m+1)+。
1hnmr(400mhz,meod):δ＝8.35(s,0.5h),8.17(d,j＝32.9hz,1.0h),7.91(d,j＝55.2hz,1h),7.48(dd,j＝59.5,43.3hz,2h),6.92(s,0.5h),4.68(d,j＝33.5hz,2h),3.96(s,2h),2.97–2.61(m,5h),2.49(s,2h),2.16(s,2h),1.94–1.74(m,4h)。
實施例57、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(5-氟-2-甲氧基苯基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、5-氟-2-甲氧基苯胺、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(5-氟-2-甲氧基苯基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率3.3％)。
ms(esi)m/z＝536(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.28(d,1h),9.36-9.38(d,1h),8.64-8.66(m,1h),8.42-8.36(m,1h),8.20-8.18(m,1h),7.91-7.89(m,1h),7.81-7.78(d,1h),7.71-7.69(m,1h),7.58-7.56(t,1h),7.11-7.07(m,1h),7.01-6.98(m,1h),4.97-4.94(m,1h),4.78-4.45(m,2h),4.03-3.97(m,2h),3.85(s,3h)2.85-2.96(m,2h),1.80-1.74(m,2h),0.99-0.92(m,3h)。
實施例58、(r)-n-(1-(2-(嗎啉-4-羰基)-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4h)-基)-1-氧代丁-2-基)-1h-吲唑-5-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、嗎啉、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-n-(1-(2-(嗎啉-4-羰基)-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4h)-基)-1-氧代丁-2-基)-1h-吲唑-5-甲酰胺(總產率2.7％)。
ms(esi)m/z＝482(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.3(s,1h),8.54-8.66(dd,j＝8hz,j＝39.2hz,1h),8.44(d,15.6hz,1h),8.26(d,56hz,1h),8.21(s,1h),δ＝7.82-7.91(dd,j＝8.8hz,j＝27.2hz,1h),7.56(t,j＝8.0hz,1h),7.23(d,22.4hz,1h),4.88-4.98(m,1h),4.64-4.80(m,1h),4.42(d,j＝16hz,1h),3.89-4.00(m,1h),3.78-3.85(m,1h),3.70-3.76(m,1h),3.61-3.63(m,7h),2.89-2.93(m,1h),2.80-2.83(m,1h),1.71-1.83(m,2h),0.91-0.98(m,3h)。
實施例59、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(吡咯烷-3-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、吡咯-3-胺、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(吡咯烷-3-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率2.9％)。
ms(esi)m/z＝481(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.31(s,1h),8.91(s,2h),8.41-8.67(m,2h),8.33-8.41(m,1h),8.19-8.21(m,1h),7.84-7.90(m,1h),7.53-7.58(m,1h),4.91-4.95(m,1h),4.39-4.76(m,2h),3.82-4.02(m,2h),3.32-3.45(m,2h),3.24-3.28(m,2h),3.10-3.13(m,2h),2.81-2.93(m,2h),2.15-2.19(m,1h),1.94-1.97(m,3h),0.90-1.05(m,3h)。
實施例60、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、哌啶4-胺、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率3.9％)。
ms(esi)m/z＝495(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.32(s,1h),8.61-8.77(m,2h),8.21-8.34(m,2h),8.19-8.21(d,1h),7.83-7.90(m,1h),7.53-7.60(m,2h),4.91-4.95(m,1h),4.38-4.75(m,2h),3.80-4.00(m,3h),3.30-3.33(d,2h),2.80-3.02(m,4h),1.92-1.95(d,2h),1.67-1.81(m,4h),0.98-0.90(m,3h)。
實施例61、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(1-甲基哌啶-3-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、1-甲基哌啶-3-胺、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(1-甲基哌啶-3-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率3.6％)。
ms(esi)m/z＝509(m+1)+。
1hnmr(400mhz,meoh):δ＝8.15-8.46(m,3h),7.73-7.92(m,1h),7.55-7.62(m,1h),7.39-7.49(m,1h),5.06-5.13(m,1h),4.84-4.87(d,1h),4.52-4.71(m,1h),4.08-4.21(m,2h),3.80-3.97(m,1h),3.47-3.50(m,1h),3.11-3.26(m,3h),2.97-3.03(m,1h),2.87-2.92(m,1h),2.80-2.82(d,3h),1.77-2.14(m,6h),1.02-1.11(m,3h)。
實施例62、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(吡啶-4-基甲基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、4-氨甲基吡啶、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(吡啶-4-基甲基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率3.3％)。
ms(esi)m/z＝503(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.29(s,1h),9.09(d,j＝5.9hz,1h),8.70–8.46(m,3h),8.38(d,j＝33.0hz,1h),8.21(d,j＝9.1hz,1h),8.14(s,0.23h),7.92–7.81(m,1h),7.57(dd,j＝17.5,8.4hz,2h),7.30(d,j＝9.0hz,2h),4.99–4.88(m,1h),4.81–4.66(m,1.5h),4.44(dd,j＝14.1,7.1hz,2.5h),4.04–3.95(m,0.5h),3.89–3.75(m,1.5h),3.03–2.78(m,2h),1.78(ddd,j＝25.6,16.5,9.6hz,2h),1.02–0.89(m,3h)。
實施例63、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-((6-氟4-甲基吡啶-3-基)甲基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、6-氟-4-甲基-3-氨甲基吡啶、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-((6-氟4-甲基哌啶-3-基)甲基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率3.8％)。
ms(esi)m/z＝535(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.29(b,1h),9.03-9.00(m,1h),8.67-8.59(m,1h),8.41-8.36(m,1h),8.00(s,1h),7.90-7.84(m,1h),7.63-7.53(m,2h),6.86-6.85(m,1h),4.95-4.92(m,1h),4.76-4.72(m,1h),4.45-4.42(m,3h),4.01-3.80(m,2h),2.92-2.81(m,2h),2.26(s,3h),1.83-1.70(m,2h),0.97-0.93(m,2h)。
實施例64、(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(1-乙基哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、4-氨基乙基哌啶、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(1-乙基哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率3.5％)。
ms(esi)m/z＝523(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.30(s,1h),8.63(dd,j＝18.1,8.0hz,1h),8.38(d,j＝29.9hz,1h),8.30–8.24(m,1h),8.22(s,1h),8.19(s,1h),7.92–7.82(m,1h),7.56(dd,j＝12.0,7.4hz,2h),4.94(dt,j＝16.6,8.4hz,1h),4.69(dd,j＝22.4,16.8hz1.5h),4.41(d,j＝16.7hz,0.5h),4.03–3.94(m,0.5h),3.87–3.67(m,2.5h),2.94(dd,j＝71.4,24.7hz,4h),2.53(dd,j＝11.2,3.5hz,2h),2.23(t,j＝10.9hz,2h),1.87–1.69(m,4h),1.60(dd,j＝23.2,11.5hz,2h),1.06(t,j＝7.1hz,3h),1.00–0.88(m,3h)。
實施例65、5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(5-氟-2-甲基芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、5-氟-2-甲基氨甲苯、2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得5-(2-(1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-(5-氟-2-甲基芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率3.3％)。
ms(esi)m/z＝534(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝13.29(b,1h),8.90-8.87(m,1h),8.64-8.55(m,1h),8.41-8.35(m,1h),8.20-8.18(m,1h),7.90-7.83(m,1h),7.60-7.52(m,2h),7.21-7.17(m,1h),6.99-6.96(m,2h),4.95-4.92(m,1h),4.74-4.70(m,1h),4.44-4.37(m,3h),3.96-3.87(m,2h),2.29-2.80(m,2h),2.26(s,3h),1.84-1.70(m,2h),0.97-0.90(m,2h)。
實施例66、(r)-5-(2-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-甲酰胺基)丁酰基)-n-苯基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、苯胺、2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-甲酰胺基)丁酰基)-n-苯基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率2.8％)。
ms(esi)m/z＝488(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝11.91(s,11h),10.15(s,1h),8.80–8.64(m,2h),8.56–8.41(m,1h),7.81(d,j＝3.0hz,1h),7.72(d,j＝8.3hz,2h),7.59–7.47(m,1h),7.40–7.29(m,2h),7.09(t,j＝7.4hz,1h),6.60–6.49(m,1h),5.02–4.89(m,1h),4.87–4.69(m,1.5h),4.48(d,j＝16.4hz,0.5h),3.94(dd,j＝65.7,9.9hz,2h),3.01–2.82(m,2h),1.89–1.70(m,2h),0.96(dt,j＝14.7,7.4hz,3h)。
實施例67、(r)-5-(2-(3-氟-1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-環戊基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、環戊胺、(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吲唑-3-氟-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(3-氟-1h-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-n-環戊基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率2.6％)。
ms(esi)m/z＝498(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso):δ＝12.86(s,1h),8.69-8.75(m,1h),8.30-8.39(d,1h),8.17-8.22(m,1h),7.90-7.98(m,1h),7.49-7.55(m,2h),4.90-4.97(m,1h),4.66-4.73(m,1h),4.39-4.62(m,1h),4.10-4.16(m,1h),3.81-3.99(m,2h),2.79-2.90(m,2h),1.71-1.86(m,6h),1.66-1.67(m,4h),1.42-1.53(m,3h)。
實施例68、(r)-5-(2-(1h-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-甲酰胺基)丁酰基)-n-苯基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-甲酰胺的制備
以5-((芐氧基)羰基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、苯胺、2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1h-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-羧酸為原料，按照實施例1中的類似步驟制得(r)-5-(2-(1h-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-甲酰胺基)丁酰基)-n-苯基-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(總產率3.6％)。
ms(esi)m/z＝499(m+1)+。
1hnmr(400mhz,dmso)δ13.88(d,j＝14.4hz,1h),10.14(d,j＝6.2hz,1h),9.00(dd,j＝19.1,1.9hz,1h),8.85(dd,j＝16.0,7.9hz,1h),8.80–8.70(m,1h),8.28(d,j＝19.3hz,1h),7.81(s,1h),7.71(t,j＝8.7hz,2h),7.37–7.29(m,2h),7.10(t,j＝7.4hz,1h),5.03–4.93(m,1h),4.84–4.71(m,1.5h),4.49(d,j＝16.6hz,0.5h),4.06–3.83(m,2h),2.93(dd,j＝39.0,10.0hz,2h),1.88–1.71(m,2h),1.05–0.91(m,3h)。
為了說明本發明的有益效果，本發明提供以下試驗例：
試驗例1、檢測化合物酶學活性
1、rock2抑制活性的檢測
rock2能夠磷酸化s6k(krrrlaslr)多肽底物，將atp轉化成adp。在激酶反應后，加入adp-glotm試劑，使激酶反應終止，并消耗完剩余的atp。加入激酶檢測試劑，它在使adp轉化成atp的同時，atp再被ultra-glotm螢光素酶轉化成光發光信號，發光信號與激酶活性正相關。
對于實施例1～實施例68所得的最終化合物，按以下步驟進行rock2抑制活性的檢測：
1、assaybuffer:40mmtrisph7.5，20mmmgcl2，0.1％bsa(w/v)，50μmdtt；
2、加12μl2.5x0.1μg/mlrock2工作液進入96孔pcr板；
3、加6μl6x化合物工作液進入96孔pcr板混勻，25℃預孵育10min；
4、加入12μl2.5x37.5μg/mls6k底物和12.5μmatp混合工作液，30℃孵育60min；
5、取25μl反應混合物到一個新96孔pcr板，并加入25μladp-glotm試劑混勻，25℃孵育40min終止反應；
6、取40μl終止反應混合物到一個新96孔pcr板，并加入40μl激酶檢測試劑混勻，25℃孵育40min；
7、讀取luminescence(冷光)信號值，計算抑制率。
2、rock1抑制活性的檢測
rock1能夠磷酸化s6k(krrrlaslr)多肽底物，將atp轉化成adp。在激酶反應后，加入adp-glotm試劑，使激酶反應終止，并消耗完剩余的atp。加入激酶檢測試劑，它在使adp轉化成atp的同時，atp再被ultra-glotm螢光素酶轉化成光發光信號，發光信號與激酶活性正相關。
對于實施例1～實施例68所得的最終化合物，按以下步驟進行rock1抑制活性的檢測：
1、assaybuffer:40mmtrisph7.5，20mmmgcl2，0.1％bsa(w/v)，50μmdtt；
2、加12μl2.5x5μg/mlrock1工作液進入96孔pcr板，
3、加6μl6x化合物工作液進入96孔pcr板混勻，25℃預孵育10min；
4、加入12μl2.5x37.5μg/mls6k底物和12.5μmatp工作液，30℃孵育60min；
5、取25μl反應混合物到一個新96孔pcr板，并加入25μladp-glotm試劑混勻，25℃孵育90min終止反應；
6、取40μl終止反應混合物到一個新96孔pcr板，并加入40μl激酶檢測試劑混勻，25℃孵育40min；
7、讀取luminescence(冷光)信號值，計算抑制率。
按照上述方法進行去rock1、rock2抑制活性檢測，試驗結果見表1，其中測定各化合物的ic50按照說明分類，表1中：
“+”表示rock的ic50測定大于500nm；
“++”表示rock的ic50小于500nm大于100nm；
“+++”表示rock的ic50小于100nm
表1、化合物對rock1和rock2的抑制活性
nd：尚未進行檢測分析。
試驗結果表明，本發明的化合物具有良好的rock抑制活性，可以用于預防和/或治療與rock活性異常相關的疾病。
試驗例2、檢測化合物細胞活性
1、免疫熒光檢測微絲和粘著斑的改變
使用原代豬小梁網細胞。rock2通過磷酸化肌球蛋白輕鏈等底物，促進組裝微絲和粘著斑，引起細胞形態的改變。將豬小梁網細胞細胞接種入多孔板，培養條件為含10％fbs的dmem。過夜培養后，將細胞與化合物一起溫育1小時。4％多聚甲醛和0.1％tritonx-100固定和通透細胞后，使用vinculin特異性抗體和羅丹明分別標記微絲和粘著斑。分別在488nm和549nm熒光下觀察細胞。
實施例化合物1-3、11、23、24、27-28、31、34、63引起細胞微絲和粘著斑解聚的作用均強于或等于對照化合物ripasudil(glanatec)。
2、免疫印跡檢測肌球蛋白輕鏈磷酸化
使用大鼠平滑肌細胞系a7r5。rock2通過磷酸化肌球蛋白輕鏈t18/s19兩個氨基酸位點導致細胞骨架的改變。將a7r5細胞接種入多孔板，培養條件為含10％fbs的dmem。過夜培養后，血清饑餓4小時，在無血清培養基中將細胞與化合物一起溫育1小時。使用phspho-mlc-t18/s19特異性抗體和第二檢測抗體，通過免疫印跡檢測肌球蛋白輕鏈磷酸化水平。dmso處理的細胞和ripasudil處理的細胞作為對照。
實施例化合物1-2、23、24、26-28、31、34抑制肌球蛋白輕鏈磷酸化的作用均強于或等于對照化合物ripasudil(glanatec)。
綜上所述，本發明提供的式ⅰ所示的新化合物，表現出了良好的rock抑制活性，為臨床預防和/或治療與rock活性異常相關的疾病提供了一種新的藥用可能。