一種環維黃楊星D鹽酸鹽的制備方法與流程

本發明屬于醫藥化工領域，具體涉及一種高純度高收率環維黃楊星D鹽酸鹽的制備方法。
背景技術：
：環維黃楊星D(CyclovirobuxineD)是從黃楊科植物小葉黃楊中提取的有效單體生物堿，是治療新血管疾病的藥物或作為新藥開發的前體可廣泛用于醫療領域。研究表明，采用傳統萃取和重結晶等方法得到的環維黃楊星D中，還含有與其結構極為相似的環黃楊堿D(Cyclobuxine)、環常綠黃楊堿C(Cyclovirobxine)和環原綠黃楊堿C(CycloprotobuxineC)等雜質成分，總雜質含量在7～8％左右，并且這些雜質用常規手段很難除去，其純度遠遠無法滿足環維黃楊星D作為原料藥制備單體藥物的要求。科研工作者們對分離純化方法作了深入研究并加以改進，但是仍然不能有效除去上述雜質。現有技術下，有多種檢測環維黃楊星D的純度的方法，各種方法檢測的純度存在差異。如徐新軍等研究采用柱前熒光衍生化RP-HPLC測定環維黃楊星D的含量，檢測結果發現環維黃楊星D非水滴定法含量均在98％以上，而HPLC含量只有87％左右(徐新軍等，柱前熒光衍生化RP-HPLC測定環維黃楊星D的含量，藥學通報，2002年第5期，359-361頁)。此外，徐新軍采用液-質聯用(HPLC-MS)對采用重結晶法和用柱層析法制備的環維黃楊星D進行了檢測后認為“重結晶難于提高環維黃楊星D的含量，而柱色譜法則為降低有關物質，提高環維黃楊星D含量的有效方法”(徐新軍等，HPLC/MA法與柱前衍生化HPLC/UV法測定環維黃楊星D有關物質的比較，中國藥科大學學報，2002，33(5)：408-411)。如CN1594355A公開一種環維黃楊星D一甲醇結晶體，兩次結晶后經干燥去除甲醇后，得到環維黃楊星D，經TLC檢測，其純度可達98.5％以上。然而由于受檢測方法本身所限，其產品實際上的HPLC純度僅為95％。并沒有達到真正意義上的98.5％的純度。雖然現有技術下公開了使用柱層析能夠提高環維黃楊星D的純度，然而柱層析的方法繁瑣，收率低，不適用工業化生產。現有技術下缺少簡便的高純度高收率環維黃楊星D及其鹽酸鹽的制備方法。技術實現要素：本發明提供了一種種環維黃楊星D鹽酸鹽的制備方法，將環維黃楊星D粗品，使用甲醇、乙醇、氯仿中的一種或幾種進行重結晶；將重結晶產物溶于有機溶劑，滴入1M稀鹽酸，室溫反應成鹽，將析出的鹽品過濾干燥后甲醇與乙醇的混合溶劑，加熱回流，溶清后緩慢自然降溫析晶，得到環維黃楊星D鹽酸鹽。本發明針對現有技術不足，將環維黃楊星D粗品重結晶后，經成鹽及再次重結晶，得到高純度高收率的環維黃楊星D鹽酸鹽。本發明具體技術方案如下：一種環維黃楊星D鹽酸鹽的制備方法，包括以下步驟：(1)取環維黃楊星D粗品，使用甲醇、乙醇、氯仿中的一種或幾種進行重結晶；(2)將重結晶產物溶于有機溶劑，滴入稀鹽酸，室溫反應成鹽，將析出的鹽品過濾、干燥；(3)將步驟(2)得到的環維黃楊星D成鹽品加入甲醇與乙醇的混合溶劑，加熱回流，溶清后緩慢自然降溫析晶，得到環維黃楊星D鹽酸鹽。優選的，所述步驟(1)使用甲醇進行重結晶。甲醇體積為環維黃楊星D重量的18～25倍，更優選20倍。重結晶次數為1-3次，母液回收套用。優選的，所述步驟(2)有機溶劑為甲醇、乙醇、二氯甲烷中的一種或幾種，更優選二氯甲烷，體積為環維黃楊星D重量的20-40倍，更優選40倍。優選的，所述步驟(2)優選1M稀鹽酸，稀鹽酸摩爾量為環維黃楊星D的2倍。優選的，所述步驟(3)甲醇與乙醇的體積比為1∶1～4，更優選1∶1。本發明一個優選的具體方案為：以環維黃楊星D市售品為例，作為待純化樣品，其液相純度約為55％。1)取環維黃楊星D市售品，加入20倍體積(W/V)甲醇，加熱攪拌至回流(65℃)、溶清，溶清后回流15min，停止加熱，緩慢自然降溫，攪拌析晶。參照此方法反復結晶3次。2)取環維黃楊星D3次結晶品，加入40倍體積(W/V)二氯甲烷，室溫攪拌溶清，滴入1M稀鹽酸，稀鹽酸摩爾量為環維黃楊星D的2倍。室溫反應成鹽，反應結束后，可直接將析出成鹽產品濾出，40℃減壓干燥后得到白色成鹽產品。3)取環維黃楊星D成鹽品，加入20倍體積(W/V)甲醇乙醇(1∶1)混合，65℃加熱攪拌至回流(65℃)、溶清，溶清后回流15min，停止加熱，緩慢自然降溫，攪拌析晶。與現有技術相比，本發明方法具有以下優點：1)純度高。本發明方法純化后的環維黃楊星D鹽酸鹽HPLC純度大于99％；2)成本低。無需特殊儀器、溶劑，所需溶劑、儀器均為實驗室常用耗材，使用操作方便，價格低廉；3)操作簡便。環維黃楊星D結晶、成鹽、蒸餾、干燥等操作均比較簡單，沒有繁瑣操作和特殊操作；4)易于放大生產。本發明操作簡單，具有較好的重現性，能夠實現工業化大生產；5)收率高。本發明收率高，成鹽反應收率在90％以上；另一方面，本發明提供了環維黃楊星D含量的高效液相檢測方法：色譜條件：色譜柱：月旭C18(250mm×4.6mm，5μm)，流動相A：0.01M庚烷磺酸鈉與0.01MKH2PO4等量混合溶液(含0.2％三乙胺，用磷酸調pH至3.50)，流動相B：乙腈，流速：1ml/min，波長：206nm，柱溫：30℃，流動相A-B(77∶23)，采集時間：60min，等度測樣。附圖說明圖1為環維黃楊星D市售品HPLC檢測結果。圖2為現有技術精制環維黃楊星D二次結晶品HPLC檢測結果。圖3為本發明技術方案精制環維黃楊星D鹽酸鹽HPLC檢測結果。具體實施方式在本發明中所使用的術語，除非另有說明，一般具有本領域普通技術人員通常理解的含義。下面結合具體實施例并參照數據進一步詳細描述本發明。應理解，該實施例只是為了舉例說明本發明，而非以任何方式限制本發明的范圍。在以下實施例中，未詳細描述的各種過程和方法是本領域中公知的常規方法。下面結合具體實施例對本發明進一步說明。實施例1以環維黃楊星D市售品(南京世州醫藥科技有限公司)作為原料，采用CN1594355A公開的方法進行精制，制得環維黃楊星D二次結晶品，分別采用TLC色譜系統以及HPLC測定純度。TLC色譜系統：薄層板：硅膠G薄層板；展開劑：氯仿∶己烷∶甲醇∶氨水＝2.5∶4∶1∶0.1；顯色劑；稀碘化必鉀試劑；點樣量；100～250μg)。測定結果顯示，采用CN1594355A公開的方法制得的環維黃楊星D二次結晶品的TLC純度為96％。高效液相系統：色譜柱：月旭C18(250mm×4.6mm，5μm)，流動相A：0.01M庚烷磺酸鈉與0.01MKH2PO4等量混合溶液(含0.2％三乙胺，用磷酸調pH至3.50)，流動相B：乙腈，流速：1ml/min，波長：206nm，柱溫：30℃，流動相A-B(77∶23)，采集時間：60min，等度測樣。測定結果顯示，環維黃楊星D市售品的HPLC液相純度約為55％(結果如圖1和表1所示)。表1峰保留時間面積面積％高度分離度拖尾因子17.13431670.293270.00.0027.46674970.687301.10.00318.92139207635.731447523.81.05423.134139371.275096.61.18524.64597610.893342.30.77625.37896060.884261.31.29727.52959811054.51128922.71.40830.535342333.128392.60.97934.157288722.636032.91.11總計1097262100.0031136采用CN1594355A公開的方法制得的環維黃楊星D二次結晶品的HPLC純度為94％左右(結果如圖2，表2所示)，不能達到98.5％以上。表2峰保留時間面積面積％高度分離度拖尾因子18.69166180.962520.01.92218.75053910.7829218.70.88322.738140832.055227.41.11426.62464863694.29164024.42.59528.429131821.925492.11.02總計687909100.0018018實施例2取環維黃楊星D市售品，加入20倍體積(W/V)甲醇，加熱攪拌至回流(65℃)、溶清，溶清后回流15min，停止加熱，緩慢自然降溫，攪拌析晶。參照此方法反復結晶4次，得到四次結晶產物。母液反復利用，四次結晶后，收率達70％左右。四次結晶結果如下：表3.環維黃楊星D市售品在甲醇中結晶結果環黃楊堿D(％)最大單雜(％)總雜(％)純度(％)環維黃楊星D未純化35.733.1245.4954.51一次結晶產物4.612.138.7391.27二次結晶產物0.782.055.7194.29三次結晶產物未檢出1.692.9197.01四次結晶產物未檢出2.112.5697.44如表3所示，表中依次為環維黃楊星D粗品以及粗品1至4次結晶的數據。第1次結晶效果尤為顯著。環維黃楊星D純度從54.51％上升至91.27％。然而，其后3次結晶效果不甚顯著，4次結晶后環維黃楊星D純度最高為97.44％，尤其第3次和第4次結晶，其結果幾乎不變。結果證明用反復重結晶無法顯著提高產物純度。若要制備得到99.5％以上的環維黃楊星D，還需進一步增加精制手段。實施例3以實施例2環維黃楊星D三次結晶品為原料，作為待成鹽樣品，其液相純度約為97％。取環維黃楊星D三次結晶品30g平均分成三分，分別溶于40倍體積(W/V)水、40倍體積(W/V)甲醇和40倍體積(W/V)二氯甲烷，室溫下進行成鹽反應。而后室溫滴入2eq1M稀鹽酸攪拌成鹽。用水做溶劑成鹽后室溫下無法析出晶體或析出晶體較少，將溫度降至4℃左右析晶；用甲醇做溶劑成鹽后，產物和甲醇呈膏狀，很難過濾處理；用二氯甲烷做溶劑，成鹽反應結束后，產物直接析出，過濾極為方便。三種溶劑成鹽結果如下：表4.環維黃楊星D市結晶品在不同溶劑中成鹽結果編號環黃楊堿D(％)最大單雜(％)總雜(％)純度(％)收率(％)環維黃楊星D三次結晶品未檢出1.692.9197.01/水中成鹽未檢出1.221.7898.2255甲醇中成鹽未檢出1.291.8698.1480二氯甲烷中成鹽未檢出1.892.2497.7695如表4所示，在以上三種溶劑中進行成鹽反應所得環維黃楊星D鹽酸鹽純度相當，差別很小。水中成鹽所得產品純度最高為98.504，但收率僅為55％。甲醇中成鹽后得到鹽酸鹽純度為97.862％，收率為80％。二氯甲烷中成鹽后得到鹽酸鹽純度為97.5624％，收率為95％。從純度、收率以及操作便利方面綜合考慮，選用二氯甲烷作為最優成鹽溶劑。實施例4以實施例3得到的環維黃楊星D二氯甲烷中制得的鹽酸鹽作為待精制樣品，其液相純度約為97％。取環維黃楊星D鹽酸鹽30g，平均分成三份，分別用10倍體積水(W/V)、10倍體積甲醇(W/V)，20倍體積甲醇乙醇(1∶1)混合液(W/V)進行結晶。攪拌加熱至取環維黃楊星D鹽酸鹽溶清，溶清后停止加熱，自然降溫至室溫析晶，過濾干燥后即得環維黃楊星D鹽酸鹽精制品。三種溶劑結晶結果如下：表5.環維黃楊星D市結晶品在不同溶劑中精制結果表6峰保留時間面積面積％高度127.6520.7680.5531.678229.873138.12299.44759.894總計138.890100.0061.572如表5所示，環維黃楊星D鹽酸鹽在水、甲醇以及甲醇乙醇混合液(1∶1)中結晶后所得精制品純度相當，分別為99.52％、99.35％、99.45％。三種溶劑結晶后，收率卻相差甚大，分別為35％、60％、85％。綜合純度和收率因素，更優選甲醇乙醇(1∶1)混合液為環維黃楊星D鹽酸鹽精制溶劑(HPLC液相檢測結果如圖3，表6所示)。當前第1頁1 2 3