本發明屬于煙草醇化發酵技術領域，具體涉及一種洞穴動球菌在提升煙葉品質中的應用。
背景技術：
煙草是我國財政的重要支柱之一，對我國的社會和經濟發展作出了巨大貢獻。要推進我國煙草進程，實現卷煙工業可持續發展，就必須走煙草科技創新之路。煙葉的品質直接影響著卷煙的內在吸味。國家煙草專賣局明確指出，要“攻克影響煙葉香氣質、香氣量的關鍵技術”，縮小與國外煙葉質量差距，以提高國內外市場競爭力。
煙葉發酵是煙草加工過程中的主要工藝環節。在醇化發酵過程中,煙葉主要化學成分會發生相應的變化,青雜氣和刺激性逐漸降低,香氣顯露,吃味醇和,色澤均勻并加深，故而煙葉醇化發酵對煙葉質量的改變起著非常重要的作用。改進煙葉發酵技術，增進煙葉的香吃味質量，已成為卷煙工業提高加工工藝技術水平的重要手段。
微生物種類豐富，長期以來，人們利用純培養技術對環境中的微生物進行調查研究和開發利用。隨著科學技術的發展，微生物資源在科技研究及生物產業中的重要性日益凸顯。世界上許多國家都在搜集、保存各種微生物資源，其不斷豐富將為我國生物技術的發展奠定堅實的物質基礎。國內外煙草工作者在煙草微生物分離和利用微生物發酵改善煙草品質、改進煙葉發酵進程、縮短煙葉發酵周期等方面做了很多工作,特別是通過施加選育的微生物及制劑于煙草中,通過微生物的代謝活動降低煙堿等有害成分,增加煙草香吃味,提高煙草質量等。但所涉及的微生物多限于產香酵母。
本發明提供的洞穴動球菌為首次被分離得到，經鑒定為微生物新種，目前未有任何關于所述洞穴動球菌及其用途的公開報道。
技術實現要素：
本發明的目的在于針對現有技術的不足，提供一種洞穴動球菌在提升煙葉品質中的應用。
本發明的目的通過以下技術方案予以實現。
除非另有說明，本發明所采用的百分數均為質量百分數。
洞穴動球菌在提升煙葉品質中的應用，其特征在于：所述的洞穴動球菌分類命名為(kineococcuscavernaesp).sysuzl-1，該菌于2016年12月9日保藏于中國典型培養物保藏中心cctcc，保藏編號m2016738；將該菌株制成菌劑后與煙葉共同發酵，能夠提升煙葉品質。
所述的應用具體為：將該菌擴大發酵培養后制成菌劑，稱取預先平衡水分至13％的煙絲，噴施洞穴動球菌菌劑，以煙絲重量計，每1000克煙絲噴施菌劑量為10～30ml，然后將處理后的煙絲置于22℃，濕度60％的恒溫恒濕環境中發酵7d，120℃烘干煙絲。
本發明的洞穴動球菌(kineococcuscavernaesp).sysuzl-1，由下述方法篩選得到：
從云南省石林縣印象煙莊煙田土壤中分離得到，固體培養過程中，發現絕大部分的微生物具有產生揮發性物質的能力，經液體發酵后產生的氣息明顯不同。在獲得的純培養分離菌株中，篩選得到可在含有簡單碳氮源的培養基上產生揮發性、且為特殊香味氣息的菌株sysuzl-1。gc-ms鑒定結果顯示，菌株sysuzl-1產生幾類主要揮發性化合物，苯甲醛及土味素、欖香烯、欖香醇、a-桉葉醇。其中，苯甲醛具有香味氣息，微生物中較常見，但產量不高；土味素為放線菌產生的常見化合物，本身有腥味。欖香烯具有抑制癌細胞的作用，是目前一類上市抗癌藥中的主要成分，具有較高經濟價值，特別是微生物自主代謝產生。欖香醇常用作香精原料。桉葉醇本身具有一定香味，且可做定香劑來使用。
經過微生物學特性分析和16srrna基因序列分析表明，所述的洞穴動球菌sysuzl-1是一種新的細菌，其16srrna基因核苷酸序列如序列表所示。
本發明的有益效果是：
1.微生物學特性分析和16srdna基因序列分析表明，所述的洞穴動球菌sysuzl-1一種新的細菌，實驗證明該菌株能有效提高烤煙內在品質、增加煙葉香氣。本發明成功地將生物技術引入煙草生產中，是煙草生產技術的一個重要突破。
2.通過改善煙葉品質，大大提高煙葉可用性。加速煙葉發酵，提高煙葉等級質量，使煙葉可溶性還原糖含量增加，而蛋白質、纖維素、總氮、煙堿含量下降，內在化學成分更為協調，煙葉抽吸品質得到明顯提升。
3.工藝簡單，操作容易，成本低，適于推廣應用，對促進卷煙工業健康發展具有積極意義。
保藏生物材料的說明
本發明的菌株，已于2016年12月9日，保藏于中國典型培養物保藏中心(cctcc)，該中心地址：中國湖北省武漢市武昌區八一路珞珈山武漢大學內，該菌株分類命名為：洞穴動球菌(kineococcuscavernaesp).sysuzl-1，保藏編號cctccno：m2016738。
具體實施方式
為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下通過實施例對本發明作進一步的詳細說明。此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不是對本發明技術方案的限定。
實施例1
——洞穴動球菌sysuzl-1在提升煙葉品質中的應用，具體步驟如下：
(1)斜面培養：培養基：葡萄糖0.5g；酵母膏0.5g；蛋白胨0.5g；酸水解酪蛋白0.5g；可溶性淀粉0.5g；丙酮酸鈉0.3g；磷酸氫二鉀0.3g；硫酸鎂0.05g；瓊脂15g；蒸餾水1000ml，ph7.2；培養溫度為28℃，培養時間為7d。
(2)種子培養：從斜面挑取部分菌絲體接入種子液中，搖瓶培養36小時。種子培養基：糊精120g；大豆粉40g；酵母膏2g；色氨酸0.5g；β-丙氨酸5g；硫酸鎂0.5g；磷酸銨0.2g；蒸餾水1000ml，ph7.2，培養溫度為28℃。
(3)發酵培養：按10％的接種量接到發酵培養基中，搖瓶培養6天。培養基：大豆粉10g；葡萄糖10g；蛋白胨3g；氯化鈉2.5g；碳酸鈣2g；蒸餾水1000ml，ph7.2，培養溫度為28℃，培養時間為6d。
取培養液1l，以3500r/min離心10min，去上清，用無菌水洗滌沉淀、離心，去上清，重復2次，最后用100ml無菌水振蕩均勻，使用時稀釋10倍即為菌劑。
(4)煙葉發酵
本研究采用昆明k326b2f和昆明紅大c2f煙葉為處理對象。處理濃度為每1000克煙絲噴施菌劑量10ml，對照組噴施等量無菌水，三次重復。將處理后的煙葉樣品放入22℃，濕度60％的恒溫恒濕箱內發酵7天，取樣品測其主要化學成分，測得數據取平均值進行分析。
——樣品處理及煙葉主要化學成分分析
1)樣品處理：取煙葉樣品，先用旋風磨粉碎，煙末樣品在40℃下干燥約3h(含水率6％-8％)，過40目篩，裝入樣品瓶，蓋緊瓶蓋，常溫下避光貯存。
2)煙葉主要化學成分分析：nicoletantaris型傅立葉變換近紅外光譜儀,配備tqanalyst6.2定量分析軟件(美國thermonicolet公司)。
——化學成分測定結果
煙葉的化學成分檢測結果如下(詳見表1，2)，實驗結果表明，從單一化合物看，經菌劑處理的煙葉內在化學成分發生了明顯變化。總糖、還原糖含量比對照增加較大，總氮、纖維素、蛋白質、煙堿含量與對照相比均有所下降。糖氮比、糖堿比、氮堿比均有所改善。系統的試驗數據說明，經菌劑處理的各類煙絲各項指標均優于對照，煙絲內各成分趨于平衡。有利于改善煙葉內在品質，提高煙葉香氣。
表1菌劑對煙葉主要化學成分含量的影響
表2菌劑對煙葉的糖/氮、糖/煙堿、氮/煙堿比值的影響
——處理煙樣感官評吸
將處理組和對照組的煙絲分別卷制成煙支，放入恒溫恒濕箱內，在濕度60％，溫度22℃條件下平衡24h后，由12位卷煙專業評吸專家組成的評吸小組進行評吸。專家評吸認為：利用洞穴動球菌sysuzl-1處理后的煙葉樣品，具有明顯提調煙香、減少雜氣、降低刺激的良好效果，結果見表3。
表3菌劑對感官評吸的影響
實施例2
重復實施1，有以下不同點：處理濃度為每1000克煙絲噴施菌劑量20ml。
——化學成分測定結果
煙葉的化學成分檢測結果如下(詳見表4，5)，實驗結果表明，從單一化合物看，經菌劑處理的煙葉內在化學成分發生了明顯變化。總糖、還原糖含量比對照增加較大，總氮、纖維素、蛋白質、煙堿含量與對照相比均有所下降。糖氮比、糖堿比、氮堿比均有所改善。系統的試驗數據說明，經菌劑處理的各類煙絲各項指標均優于對照，煙絲內各成分趨于平衡。有利于改善煙葉內在品質，提高煙葉香氣。
表4菌劑對煙葉主要化學成分含量的影響
表5菌劑對煙葉的糖/氮、糖/煙堿、氮/煙堿比值的影響
——處理煙樣感官評吸
將處理組和對照組的煙絲分別卷制成煙支，放入恒溫恒濕箱內，在濕度60％，溫度22℃條件下平衡24h后，由12位卷煙專業評吸專家組成的評吸小組進行評吸。專家評吸認為：利用洞穴動球菌sysuzl-1處理后的煙葉樣品，具有明顯提調煙香、細膩醇和煙氣、降低刺激、提升津甜感的良好效果，結果見表6。
表6菌劑對感官評吸的影響
實施例3
重復實施1，有以下不同點：處理濃度為每1000克煙絲噴施菌劑量30ml。
——化學成分測定結果
煙葉的化學成分檢測結果如下(詳見表7，8)，實驗結果表明，從單一化合物看，經菌劑處理的煙葉內在化學成分發生了明顯變化。總糖、還原糖含量比對照增加較大，總氮、纖維素、蛋白質、煙堿含量與對照相比均有所下降。糖氮比、糖堿比、氮堿比均有所改善。系統的試驗數據說明，經菌劑處理的各類煙絲各項指標均優于對照，煙絲內各成分趨于平衡。有利于改善煙葉內在品質，提高煙葉香氣。
表7菌劑對煙葉主要化學成分含量的影響
表8菌劑對煙葉的糖/氮、糖/煙堿、氮/煙堿比值的影響
——處理煙樣感官評吸
將處理組和對照組的煙絲分別卷制成煙支，放入恒溫恒濕箱內，在濕度60％，溫度22℃條件下平衡24h后，由12位卷煙專業評吸專家組成的評吸小組進行評吸。專家評吸認為：利用洞穴動球菌sysuzl-1處理后的煙葉樣品，具有明顯提升香氣量、增加香氣豐富性，降低刺激，提升津甜感的良好效果，結果見表9。
表9菌劑對感官評吸的影響
洞穴動球菌sysuzl-116srrna
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