一種核酸適配體bc15的核心序列及其類似物和應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種核酸適配體BC15的核心序列及其類似物和應用，具體涉及一種 特異性識別腫瘤組織切片的核酸適配體BC15核心序列及其類似物，屬于生物醫藥領域。
【背景技術】
[0002] 目前，腫瘤已經成為威脅人類健康的頭號疾病，腫瘤的診斷和治療一直是人們致 力于研究的方向。由于在臨床應用上，腫瘤標志物普遍特異性差，絕大多數不僅存在于惡性 腫瘤中，也存在于良性腫瘤、胚胎組織、甚至正常組織中，因此獲得高度特異性的腫瘤生物 標志物則是研究的重點和難點之一。
[0003] SELEX篩選技術的出現為腫瘤標志物的尋找帶來新的思路。通過體外SELEX篩選 而得到的單鏈寡核苷酸片段能形成靈活多變的空間三維結構，理論上可以同各種靶分子結 合。與蛋白質類抗體相比，核酸適配體具有更多的優勢，如不受免疫條件限制、無免疫原性、 識別能力精確、分子小易滲透、可體外人工合成修飾、變性與復性可逆、有利于長期保存和 室溫運輸等，為其在腫瘤疾病的診斷和治療領域發展提供了良好的基礎。
[0004] 適配體BC15是一條通過臨床腫瘤組織切片采用SELEX技術篩選得到的DNA寡核 苷酸。經鑒定，BC15能識別多種癌癥組織切片，包括乳腺癌、肝癌、肺癌等等，而與癌旁組織 無結合。實驗證明BC15識別的靶蛋白是hnRNPA1，對于hnRNPA1，目前已有報道證實可 在多種腫瘤組織，如肝癌、乳腺癌、肺癌等腫瘤中高表達，有望成為新的腫瘤標志物。而且 hnRNPA1通過參與RNA轉錄前和轉錄后水平的調節，促進端粒延長、抑制細胞凋亡和促進 細胞凋亡增殖，是潛在的抗癌作用靶點。因此BC15在臨床腫瘤的診斷和治療方面上具有廣 闊的應用前景，適用于臨床腫瘤的輔助診斷和篩查。但由于天然寡核酸的缺陷性，目前利用 SELEX技術篩選到的核酸適配體，無論是用于臨床診斷還是疾病治療，要對它們進行改造才 能應用。通常改造的第一步多是盡量減少有效堿基數量，在盡可能保留其生物功能的同時 縮短配基長度。這樣既可以降低合成寡核苷酸配基的成本，同時也提高合成的質量，更重要 的是利于化學修飾。由文獻調研的結果發現：BC15的靶標蛋白hnRNPA1能夠與具有G4結 構的端粒DNA結合。而從隨機文庫中篩選出來的長度為74nt的BC15配基的中間有一段富 含G的序列，推測此段為BC15識別靶蛋白的關鍵位點。
[0005] 由于體內代謝和性質多變不可控，體內半衰期短，易滲漏，核酶降解等問題使得天 然的核酸適配體在臨床應用中受到很大的局限。因此，本發明在確定BC15核心序列的基礎 上，采用異核苷作為化學修飾策略，通過被修飾部位局部構象的改變，來改變核酸適配體與 靶標的空間位置，提高其親和能力，進而提高生物活性。這樣進行結構優化后的核酸適配體 作為分子探針能夠直接應用于臨床腫瘤檢測和治療，具有重要的臨床應用價值。
【發明內容】
[0006] 本發明的目是一種核酸適配體BC15的核心序列及其類似物和應用，具體涉及一 種特異性識別腫瘤組織切片的核酸適配體BC15核心序列及其類似物。
[0007] 通過對BC15進行一系列不同長度截短序列和堿基相似的端粒序列的考察和比 較，確定BC15-31和BC15-27序列是BC15的核心序列，BC15-31和BC15-27序列的核苷酸 序列分別為SEQNo. 1和SEQNo. 2。
[0008] 本發明利用異核苷對BC15的核心序列BC15-31進行化學修飾，在BC15-31序列5' 端的3位、15位、22位、24位、26位、28位或30位，其中一位或者多位上摻入化學式I或化 學式II所示的異核苷化合物以代替天然核苷化合物在相應位置進行偶聯。
[0009]
【主權項】
1. 一種核酸適配體BC15的核心序列，其特征在于，BC15的核心序列為BC15-31和 BC15-27,其核苷酸序列分別為SEQ No. 1和SEQ No. 2。
2. -種核酸適配體BC15的核心序列BC15-31的類似物，其特征在于，在BC15-31序列 5'端的3位、15位、22位、24位、26位、28位或30位，其中一位或者多位上摻入化學式I或 化學式II所示的異核苷化合物以代替天然核苷化合物在相應位置進行偶聯，
3. 權利要求1所述的核酸適配體BC15的核心序列在制備診斷或治療腫瘤藥物中的應 用。
4. 權利要求2所述的核酸適配體BC15的核心序列BC15-31的類似物在制備診斷或治 療腫瘤藥物中的應用。
【專利摘要】本發明涉及一種核酸適配體BC15的核心序列，BC15的核心序列為BC15-31和BC15-27，其核苷酸序列分別為SEQ No.1和SEQ No.2。本發明中核酸適配體BC15的核心序列BC15-31的類似物，即在BC15-31序列5’端的3位、15位、22位、24位、26位、28位或30位，其中一位或者多位上摻入異核苷化合物以代替天然核苷化合物在相應位置進行偶聯。本發明適配體BC15的核心序列BC15-31和BC15-27及其BC15-31的類似物能夠識別肝癌組織切片，與靶蛋白有更強的親和能力，以及對腫瘤細胞生長增殖的抑制能力，使得本發明在腫瘤的診斷和治療領域具有廣泛的應用價值和市場前景。
【IPC分類】A61P35-00, A61K48-00, C12N15-115, C12Q1-68
【公開號】CN104651368
【申請號】CN201310576245
【發明人】楊振軍, 李理宇, 邵寧生, 蔡報斌, 李少華, 李昆峰, 丁紅梅, 李慧
【申請人】北京大學, 中國人民解放軍軍事醫學科學院基礎醫學研究所
【公開日】2015年5月27日
【申請日】2013年11月15日