專利名稱：蠶桑產品降血糖效果的體外檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種生物產品降血糖效果的體外檢測方法，特指一種蠶桑產品對2型糖尿病降血糖效果的體外檢測方法。
背景技術：
降血糖效果的檢測方法有多種，如經典的檢測血液中胰島素的含量(對1型糖尿病)；體內糖尿病檢測(CN96195689.5)；可用肉眼觀察的血糖檢測條(CN99117739.8)；無創激光血糖檢測儀(CN200510020410.3)。研究證實蠶桑產品如全蠶粉，蠶蛹粉，桑葉粉，桑根粉，桑椹等具有降血糖效果，并逐漸開發出相關產品。目前，檢驗這些蠶桑產品降血糖的效果，主要是通過高血糖動物(實驗鼠)的體內驗證。動物實驗不僅周期長，需要相當的人力和財力，而且程序煩瑣。根據對蠶桑產品對2型糖尿病降血糖作用為抑制α-葡萄糖苷酶活性的作用機理，建立體外檢測方法，即省時、省力，又可實行科學規范操作，有利于產品質量和生產的標準化。
發明內容
本發明的目的是提供一種蠶桑產品對2型糖尿病降血糖的體外檢測方法。實現上述目的的技術方案的制備步驟是(1)蠶桑產品降血糖有效成分的提取將蠶桑樣品粉碎，按1∶1體積比與浸提緩沖液混勻，置4-8℃環境下浸提、過濾、分離；(2)麥芽糖糖苷酶的制備取小鼠小腸粘膜，磨碎并重懸于磷酸緩沖液中，離心分離麥芽糖糖苷酶；
(3)α-糖苷酶抑制劑活性測定將麥芽糖糖苷酶溶液，上述浸提液37℃預溫5-10分鐘，加入桑蠶粉浸提液后繼續水浴，用Na2CO3終止反應；取20ul溶液測定葡萄糖含量；(4)降血糖效果的評估(計算)抑制劑活力單位定義為在相同的條件下降低1個酶活力單位所需的抑制劑量，抑制百分比＝(抑制劑活力/酶活力)×100％。
本發明的體外檢測方法操作簡便，周期短，2天內可出檢測結果；準確率高，可達到為陽性對照的96.95％。
本發明通過對蠶桑樣品降血糖有效成分的分離，運用生物化學的方法檢測α-葡萄糖苷酶的抑制效果，經與高血糖動物實驗的檢測及臨床實驗比較，具有較好的一致性。
本發明的優點1.操作簡便根據蠶桑產品對2型糖尿病降血糖為抑制α-葡萄糖苷酶活性的作用機理，測定分析蠶桑產品對α-葡萄糖苷酶的抑制效果。
2.省時、省力一個檢測周期在2天內可出結果，常規分析試劑。
3.有利于產品質量和生產的標準化根據對α-葡萄糖苷酶的抑制效果，評估產品的質量標準。
具體實施例方式
本發明的制備步驟如下1、蠶桑產品降血糖有效成分的提取按1∶1的比例將蠶桑產品如全蠶粉，蠶蛹粉，桑葉粉，桑根粉，桑椹等與浸提緩沖液混勻，置4-8℃環境下浸提24小時；然后，過濾、分離浸提液。
2、麥芽糖糖苷酶的制備取小鼠小腸粘膜，磨碎并重懸于磷酸緩沖液(PH7.2～7.6)中，4000RPM 4℃離心10分鐘，再10000RPM離心20分鐘，取上清作麥芽糖糖苷酶。
3、α-糖苷酶抑制劑活性測定50ul麥芽糖糖苷酶溶液中，加水50ul，再加100ul底物0.028M麥芽糖/0.1M馬來酸PH6.8，37℃預溫水酶混合物5分鐘，加入即蠶桑產品浸提液后37℃水浴，用2.6M Na2CO340ul終止反應。取20ul溶液測定葡萄糖含量。
4、降血糖效果的評估(計算)酶活力單位定義為在37℃，pH 6.8的條件下，1min內水解麥芽糖釋放1μmol葡萄糖所需的酶量。抑制劑活力單位定義為在相同的條件下降低1個酶活力單位所需的抑制劑量。抑制百分比＝(抑制劑活力/酶活力)×100％。
運用上述方法檢測經生物轉化、超低溫冷凍干燥制備的全蠶粉對α-葡萄糖苷酶的抑制效果，50mg/ml劑量全蠶粉和拜糖平的抑制效果分別為79％和81.6％。高血糖動物實驗，按1mg/天的劑量，罐胃全蠶粉和拜糖平20天后空腹血糖值分別降低35.37％和35.02％；30天后餐后2小時的血糖值分別降低了15.68％和18.29％。
檢測不同方法制備的全蠶粉對α-葡萄糖苷酶抑制效果的體外實驗表明經生物轉化、超低溫冷凍干燥制備的全蠶粉為93.93％，經防氧化處理后再經冷凍干燥制成的全蠶粉(CN95115559.8)為93.35％，將鮮活健康蠶直接經真空冷凍干燥得到的全蠶粉(CN03116235.5)為91.91％，而陽性對照(拜糖平)為94.80％。
權利要求
1.一種蠶桑產品對2型糖尿病降血糖效果的體外檢測方法，其特征是(1)蠶桑產品降血糖有效成分的提取將蠶桑樣品粉碎，與浸提緩沖液混勻，置4-8℃環境下浸提、過濾、分離；(2)麥芽糖糖苷酶的制備取小鼠小腸粘膜，磨碎并重懸于磷酸緩沖液中，離心分離麥芽糖糖苷酶；(3)α-糖苷酶抑制劑活性測定將麥芽糖糖苷酶溶液、底物在37℃下預溫，加入蠶桑樣品浸提液后繼續水浴，用Na2CO3終止反應，測定葡萄糖含量；(4)進行降血糖效果的評估計算。
全文摘要
本發明涉及一種蠶桑樣品對2型糖尿病降血糖效果的體外檢測方法。其采取將蠶桑樣品粉碎，與浸提緩沖液混勻，置4－8℃環境下浸提、過濾、分離；再取小鼠小腸粘膜，磨碎并重懸于磷酸緩沖液中，離心分離麥芽糖糖苷酶；將麥芽糖糖苷酶溶液、底物在37℃下預溫，加入蠶桑樣品浸提液后繼續水浴，用Na
文檔編號G01N31/00GK1866024SQ200610040720
公開日2006年11月22日 申請日期2006年5月30日 優先權日2006年5月30日
發明者桂仲爭, 侯成香 申請人:江蘇科技大學