大良姜栽培及質量控制方法

專利名稱：大良姜栽培及質量控制方法
技術領域：
本發明涉及姜科Zingiberaceae山姜屬植物紅豆蔻Alpinia galanga willd.的根莖大良姜的種菌繁育、移栽定植、田間管理、施肥、病蟲害防治栽培方法及大良姜的采收加工、包裝、運輸、貯藏和質量控制方法。

背景技術：
大良姜，又名大高良姜、良姜、山姜、山姜頭(廣東湛江)、廉姜(廣東、廣西)，見圖1，為姜科Zingiberaceae山姜屬植物的紅豆蔻Alpinia galangawilld.的根莖，其生物學特性如下 一、植物形態(見圖2、3、4、5、6、7) 1、習性多年生叢生草本，高1.5-2.5m。花期6-7月，果期7-10月。
2、根莖粗壯，圓形，有節，淡棕紅色并略有辛辣味，稍有香氣。
3、葉2列；無葉柄或極短；葉舌長5-10mm，先端鈍；葉片長圓形至寬披針形，長25-50cm，寬5-10cm，先端急尖，有短尖頭，基部漸狹，邊緣常棕白色，無毛或背面有長柔毛，干時邊緣淡褐色。
4、花序圓錐花序頂生，直立，密生多花，長14-32cm，徑4-8cm；花序軸上密生柔毛，分枝多而短，每一分枝上有花3～6朵；總苞片線形，長約20cm；小苞片披針形或狹長圓形，長1-2cm。
5、花綠白色，清香；花萼管狀，長7-10mm，先端不等的3淺裂，有緣毛；花冠管與萼略等長，裂片3，長圓形，長12-16mm，寬3-5mm，上方裂片稍寬，先端蔸狀；唇瓣倒卵形至長圓形，長2.5-3cm，寬8-12mm，先端深2裂至中部以下，基部收縮成爪狀，中央略加厚并有紅色條紋；雄蕊1，與唇瓣等長，花藥長圓形，先端無藥隔附屬物；退化雄蕊2枚，披針形，長6-10mm，著生于唇瓣的基部；雌蕊子房下位，無毛；花柱細長，柱頭突出于花藥的先端。
6、果實蒴果長圓形，不開裂，長11-16mm，徑7-9mm，中部略收縮，頂端有宿萼，熟時橙紅色。
7、種子多角形，棕黑色。
二、生長習性 大良姜(紅豆蔻)適應性強，喜溫暖濕潤的氣候環境，能耐短暫0℃左右的低溫，稍耐旱，怕澇，生于山野溝谷蔭濕林下或灌木叢中及草叢中，生長于熱帶、亞熱帶氣候地區，在我國主要分布于廣東、廣西、海南、臺灣、云南等省、區，見圖8、9。
一般年平均氣溫15℃以上均能正常生長，但以年平均氣溫22℃-28℃最為適宜；一般年降雨量1500-2000毫米、空氣相對濕度80％-90％、土壤含水量25％-30％時最適宜生長。土壤以疏松、肥沃、深厚、排水良好的壤土或粘土種植為好。
苗期在夏天時怕太陽直曬，冬天怕霜凍。
三、生長發育特征 1-5月能不斷抽生新筍，以4-5月居多，6-7月抽穗孕蕾，7-8月開花，8-9月結果，11-12月果實成熟。
大良姜(紅豆蔻)最早記載于《藥性論》。據后來的本草記載，古代已有把大良姜(紅豆蔻)與本屬植物(特別是與高良姜)混用的情況，本草多認為紅豆蔻與高良姜來源于同一植物，紅豆蔻為果，高良姜為根，如《開寶本草》曰“紅豆蔻生南海諸谷，高良姜子也......”，《證類本草》曰“紅豆蔻......云是良姜子......”等，以致《本草綱目》把紅豆蔻與高良姜合并為一項。
據考證，古代把大良姜(紅豆蔻)與本屬植物(特別是與高良姜)混用，古代的高良姜藥材(Rhizoma Alpiniae Officinarum)主要是今日之大良姜的根莖(Rhizoma Alpiniae Galanga)。現代有關調查還表明目前大良姜與喙花姜Rhynchanthus beesinanus、益智Alpinia oxyphyllaMiq.、距花姜A.calcarataRosc.的根莖常被一同混作高良姜應用。
據文獻資料記載，中國醫學科學院藥物研究所陳敏亨等研究發現，國產紅豆蔻Alpinia galanga willd.與國外同種植物相比較，我國產的唇瓣深裂，果實中部收縮較明顯；而國外的唇瓣多淺裂，果實中部不收縮或不明顯。
根據陳敏亨等在廣西所采集的標本，發現紅豆蔻Alpinia galanga willd.有兩種類型，一種是葉背和花序軸有柔毛的類型，被定為變種毛紅豆蔻Alpiniagalanga willd.Var.pytamidata(Blume)k.Schum.；另一種是藥的先端有長約4-7mm、呈披針形的藥隔附屬體，被定為變種附尖紅豆蔻Alpinia galangawilld.Var.appendiculata Y.H.Chen，nov.var.ined。從數量上看，這兩個變種均不多，分布亦不廣。至于這兩個變種的根莖在生藥學、質量、產量等方面尚無研究和報道。
在我國，除了少量用于采收果實作“紅豆蔻”外，大良姜主要被民間用于飲食調料的制作。近年來對大良姜的研究報道顯示，大良姜提取物具有抗病毒、抗腫瘤、抗結核、抗潰瘍、抗菌等藥理作用，可能成為新的藥用植物資源，但目前未見人工種植，主要依靠野生資源，也沒有規范的采收加工方法和質量控制方法，因而常與易混淆品如益智、高良姜、距花山姜等混用，使大良姜作為藥用植物的應用受到限制。
發明目的 本發明的目的在于公開一種大良姜規范化栽培和采收加工、包裝、運輸、貯藏方法及質量控制方法，使大良姜野生植物資源成為人工栽培的產品，為大良姜的生藥學研究及開發新的藥用植物資源提供依據。


發明內容
為達到上述目的，本發明通過采用種菌繁育、移栽定植、田間管理、施肥、病蟲害防治等方法栽培大良姜，并根據大良姜的用途選擇采收時間，采收方法和產地加工、包裝、貯藏等方法以及大良姜質量控制方法。
具體實施的方式 一、種苗繁育 1、育苗地選擇 育苗地通常選擇在有一定蔭蔽條件的山坡、溪邊，排灌方便、向陽背風、土壤肥沃的緩坡地段。砍除雜木、雜草并就地燒成灰作基肥，開墾后每畝施入經腐熟的農家肥2000-2500公斤，起畦平整既可植入作種苗用的根莖或播入種子。
2、育苗方法 (1)根莖繁殖 ①選擇根莖 選2-3年生粗壯、帶5-6個芽、無病蟲害、較肥碩的嫩根狀莖，剪成長約15厘米、帶有2-3節的小段。
②繁殖季節 通常在春秋兩季，結合采收大良姜時進行。
③繁殖方法 在整好的土地上，按株行距30×25厘米開穴種植，每穴種1-2段，覆土后稍壓實，澆定根水。每畝用根莖約100公斤。
(2)種子繁殖 ①選擇留種母株 選擇果粒大、飽滿、味濃、產量高的無病蟲害的植株為留種母株。
②采種及種子處理 大良姜的種子一般在10-12月陸續成熟，當果皮變為紅色時，分批采收。選取粒大、飽滿、呈橙紅色而無病蟲害的鮮果，剝去果皮，混入等量的細沙揉搓至種子與果瓤分開，種皮可有輕微的損傷，以增加種子的通透性，利于種子發芽出苗。用清漂洗細沙及果瓤，撈出種子，晾干水分(種子不易曝曬)備用。
③播種期 播種期4-5月最好，可分批進行播種。
④播種方法 在整好的苗床上，以20厘米的行距橫向開溝，深約2厘米，寬6厘米，將處理好的種子均勻撒在溝內，覆土略高于畦面，晴天澆水保濕，蓋草。一般育苗需半年后，才可移植。
(3)組織培養 以新鮮大良姜為外植體，消毒后接種在MS+6-BA 2.0～10.0mg/L+NAA0.05～0.5mg/L培養基中進行幼芽的誘導，長芽后及時轉入MS+6-BA 1.0～3.0mg/L+NAA0.05～0.3mg/L培養基中誘導叢芽，最后轉入MS+NAA0.01～0.5mg/L培養中誘導生根后進行種苗繁育。
(4)育苗地管理 ①遮蔭 大良姜嫩苗不適應強光照，要求有一定的蔭蔽條件。因此，育苗初期，可蓋草遮蔭。種子播種后，應保持畦面土壤濕潤。發芽后，應及時揭去蓋草，并適當搭設蔭棚遮蔭，并注意經常淋水。
②淋水 播種后，根據天氣情況，可適當澆水，以保持濕潤。
③除草 及時拔除雜草，做到苗床無雜草。
④間苗 當苗長出3-6厘米時，去弱留強，使株間距為4厘米。
⑤施肥 幼苗出土后約一個月，以0.5公斤尿素兌水100公斤混合施入，追施草木灰；入冬前則可施腐熟的豬牛糞以提高幼苗的耐寒能力。
二、移栽定植 1、選地與整地 因大良姜喜熱帶、亞熱帶氣候，耐早不耐霜凍。要求土層深厚、疏松、肥沃的酸性或微酸性砂質壤土。故宜選排灌方便、土層深厚、肥沃、疏松的坡地或緩坡地進行種植。也可在防護林下，或果木林下種植。隔年冬季清除雜物，把雜草灌木除凈，拾凈石塊、樹根、草根，深翻30厘米以上，讓土壤熟化，并下足基肥，每畝施入2000-2500千克的腐熟的農家肥作基肥，不需作畦。翌年種植前再碎土整平。
2、定植時間 宜在3-4月的晴天早晨或陰雨天進行。
3、種植密度 大良姜種植的株行距以100×100厘米為宜。
4、定植方法 在整好的畦上按株行距開穴，穴的規格為40×40×30厘米。當種子苗高20厘米以上時出圃定植，每穴種2-3株幼苗，或每穴種1個根狀莖，芽頭向上，邊放邊填土，種后覆土壓實，然后再覆細土5-6厘米厚。
三、田間管理 1、中耕、除草和培土 前期在沒封行時每月除草1次，封行后夏秋各除草1次。除草時順便松土，利于新根的萌發和生長。種植后第2年在植株周圍，用犁或鋤開溝松土，同時進行培土；或在秋末冬初結合清園用土雜肥和表土培壅在植株基部，對促進生長，加速萌發有利。
2、灌排水 干旱時澆水或灌溉，以保持土壤濕潤，促進植株分蘗和根莖生長。
四、施肥 施肥是大良姜規范化種植過程關鍵的環節之一，應針對各基地的土壤特點、土壤的肥力評估狀況以及大良姜本身的生長特點、生理需求、入藥部位，以不污染植株、不使土壤和大良姜重金屬含量超標為原則。
1、土壤肥力的評估 可采用“隨機多點取樣法”，按中國土壤學會農業化學專業委員會制訂的《土壤農業常規分析方法》，對規范化種植基地的土壤進行基本肥力的測定；并進一步采用改進的內梅羅(Nemoro)綜合指數法，計算出綜合肥力系數P，進行土壤肥力的綜合評價。(見表1、2) 表1.土壤肥力檢測指標及方法 表2.土壤肥力系數P與土壤肥力關系表 2、制訂施肥方案 根據土壤的肥力狀況和大良姜不同生育時期的養分需求特點，參照《中藥材規范化生產允許使用的肥料種類和使用原則》，制定苗期、整個生長周期具體的施肥方案。
在選擇肥料時，可通過開展不同肥料種類的施肥試驗，研究觀察不同肥料種類對大良姜生長的影響、對植株養分積累的影響、對根莖礦質養分積累的影響、對植株生長和產量的影響等。
五、病蟲害防治 調查結果表明，大良姜的病蟲害較少，主要的病害為根莖腐病，主要蟲害為扁蝸牛。
1、根莖腐病 又稱爛根病，見圖10。
(1)癥狀 主要危害根部。支根和須根染病根變黑腐爛。且向主根擴展。主根染病初在根皮上產生不規則黑斑，且不斷擴展，致大部分根變黑，向木質部擴展，造成全部根腐爛，病株生長衰弱，葉小發黃，植株萎蔫直至枯死。本病多發生在高溫季節或多雨季節，在積水多的條件下也容易發病。連作時發生頗為嚴重，病原菌可在土壤及病根越冬，土壤帶菌可以傳播蔓延。也可經由種植污染的農具或灌溉水等為媒介而傳播。
(2)病原Fusarium solani(Mart.)Sacc.稱茄類鐮孢，屬半知菌亞門真菌。
(3)發病規律 病菌以菌核、厚垣孢子在病殘根上或土壤中或進入肥料中越冬，病菌經蟲傷、機械傷、線蟲傷等傷口侵入。
(4)防治方法 農業綜合防治，加強田間管理，改善周圍環境，做好通風、透光、排水等工作，提高植株自身的抗病能力，減少病蟲害的發生。發病初期，拔除病株，并用石灰粉消毒，盡量避免病菌傳播。同時，用0.2～0.4波美度的石硫合劑(波爾多液)灌根防治。
2、扁蝸牛 (1)學名 Bradybaena similaris(Ferussac) (2)為害癥狀 為雜食性軟件動物，喜食植株幼嫩組織，如嫩葉、新芽、根端等部位，造成不規則之傷痕或孔洞。
(3)發生規律 春暖時即開始活動，喜歡陰濕有遮陰的環境，于夜晚冷涼或陰雨潮濕白天出沒，尤其夏季高溫多雨期活動最頻繁，生長較迅速。
(4)防治方法 加強田間管理，清理栽培環境，注意周遭衛生，清除雜草。可參照《中藥材規范化生產允許和禁止使用的農藥種類和使用原則》(見附件4)，選擇合適的農藥進行防治，例如6％甲萘威-四聚乙醛。
六、采收加工 1、采收 (1)采收時間 根據大良姜單位面積產量、有效成分的積累動態，參考傳統采收經驗、季節變換等因素，研究確定出其采收期，確定采收的時間為2～3月。
(2)采收方法 選擇晴天，先割除地上部分莖、葉，把根狀莖逐一挖起進行收集。
2、產地加工 將收獲的根莖，除去地上部分、泥土、須根及鱗片，鮮用或截成5～6厘米的小段、洗凈、切段、曬干。
七、大良姜質量控制 (一)性狀 大良姜的干燥根莖呈圓柱狀，多分枝，長8-12cm，直徑1.2-3.0cm。表面紅棕色或暗紫色，具縱皺，有波浪行的淡黃色葉痕，形成環節，節間長1-3cm，根莖下側有須根痕。質堅韌，不易折斷，斷面纖維性，淡黃色，皮部占2/3，內皮層明顯，維管束星點可見。木部常與皮部分離，色較深。氣芳香，味微辛辣。
(二)鑒別 1、顯微鑒別 (1)根莖橫切面 ①表皮細胞1列，類方形，外被角質層，有的含棕色物，見圖11。
②皮層寬廣，為多列薄壁細胞，散有多數維管束及葉(根)跡維管束，見圖11、12。
③維管束外韌型，導管2～7個，維管束鞘纖維2～4列；葉(根)跡維管束呈放射狀通至鱗葉或須根，見圖14、12。
④內皮層細胞1列，方形，排列整齊，見圖15。中柱維管束外韌型，較多，靠內皮層處密集成環，中部散列，見圖16。薄壁組織中散有類多角形分泌細胞，內含棕色物，見圖13。薄壁細胞含有淀粉粒。
(2)粉末 ①粉末淺紅棕色，氣香，味微辛辣。
②淀粉粒眾多，單粒，長圓形、長卵形；大小懸殊，臍點及層紋不明顯，見圖17。
③纖維碎片多見，壁厚，上有斜紋孔，側面觀壁呈連珠狀，見圖18、19。
④薄壁細胞類圓形至長圓形，見圖20。
⑤分泌細胞類多角形，內含棕色物，見圖21。
⑥表皮細胞類多角形，壁略連珠狀，可見紋孔，有的含棕色物，見圖22。
⑦導管多梯紋、網紋，見圖23、24。
2、理化鑒別 (1)供試品溶液制備 取大良姜細粉1g，置50ml帶塞三角錐瓶中，加乙醚20ml，冰浴超聲提取15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷10ml使溶解，作為供試品溶液A。濾渣晾干，連同濾紙一并置50ml帶塞三角錐瓶中，加95％乙醇20ml，超聲提取20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇2ml使溶解，作為供試品溶液B。
(2)化學法鑒別 ①取供試品溶液B 0.5ml，蒸干，加濃硫酸1滴與香草醛1粒，顯紫色。
②取供試品溶液B 1ml，加少許鎂粉振搖，加濃鹽酸2滴，放置15分鐘，顯深紅色。
③取供試品溶液B點于濾紙上，晾干，置紫外光燈(365nm)下觀察，顯淡黃綠色。氨熏后，再噴以1％AlCl3試液，晾干，置紫外光燈(365nm)下觀察，顯黃綠色。
(3)紫外分光光度法鑒別 ①取供試品溶液A 1ml，用水稀釋至100ml，搖勻，照分光光度法測定，在256nm、295nm的波長處有最大吸收峰，見圖25。
②取供試品溶液B 0.1ml，蒸干，殘渣加0.1％NaOH乙醇溶液溶解并轉移至50ml量瓶中，加0.1％NaOH乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法測定，在220nm、235nm、250nm、292nm的波長處有最大吸收峰，見圖26。
(4)薄層色譜法 照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗，吸取取供試品溶液A 4μl，點于硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(85∶15)為展開劑，展開9cm，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置日光下檢視，顯藍黑色斑點，見圖27。
3.大良姜與混淆品的鑒別 (1)原植物形態鑒別 大良姜與混淆品的原植物形態鑒別見表3。 表3.大良姜與混淆品的植物形態鑒別 (2)性狀鑒別見表4。 表4.大良姜與混淆品性狀鑒別 (3)顯微特征鑒別見表5。
表5.大良姜與混淆品顯微特征鑒別 (4)理化鑒別見表6。
①揮發油顯色反應各樣品的乙醚提取液加濃硫酸及香草醛，即有顯色反應。
②黃酮類熒光反應各樣品的乙醇提取液滴于濾紙上，滴加三氯化鋁試液，在波長為365nm的紫外光下，有或無黃酮類的熒光反應。表6.大良姜與混淆品的理化鑒別 (5)紫外光譜鑒別 分別稱取大良姜、高良姜、益智、距花山姜粉末各0.5g，加乙醚5ml浸漬4h，過濾。濾液用乙醚配成3mg/ml的溶液，以同批溶劑為空白對照，于紫外分光光度計上，在200～400nm波長范圍內掃描，結果見表7。 表7.大良姜與混淆品紫外光譜鑒別 (6)氣相色譜指紋圖譜鑒別 大良姜及混淆品高良姜、益智、草豆蔻、距花山姜的根莖都含揮發油，鑒別單一化學成分不能全面評價大良姜的質量，因此建立氣相色譜指紋圖譜鑒別大良姜的真實性非常重要。方法如下 供試品溶液的制備取大良姜及混淆品各20g，按中國藥典2005年版一部附錄X D揮發油測定法甲法提取揮發油，提取的揮發油用乙酸乙酯稀釋20倍，作為供試品溶液。
色譜條件色譜柱Supelco Simplicty-wa×330m×320μm×0.25μm；柱溫載氣N2 1mL/min；分流比50∶1；氣化室溫度250℃；檢測器溫度280℃；進樣量1μL。
依上述條件測定并記錄大良姜及各混淆品樣品揮發油的氣相色譜圖。
結果，各種類揮發油的氣相色譜指紋圖譜分別具有各自的特征峰，可以此特征峰有效地鑒別大良姜，見圖28。
(三)檢查 1、雜質 照中國藥典2005年版一部附錄IX A雜質檢查法檢查。
2、水分 照中國藥典2005年版一部附錄IX H水分測定法測定。
3、灰分 照中國藥典2005年版一部附錄IX K灰分測定法測定。
4、農藥殘留量 照中國藥典2005年版一部附錄IX Q農藥殘留量測定法測定。
5、重金屬 照中國藥典2005年版一部附錄IX E重金屬檢查法檢查。
6、砷鹽 照中國藥典2005年版一部附錄IX F砷鹽檢查法檢查。
(四)含量測定 照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI D)測定大良姜中1’-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯的含量，見圖29。
色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(50∶50)為流動相；檢測波長為254nm。理論板數按1’-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯峰計算應不低于3000。
對照品溶液的制備 精密稱取1’-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯對照適量，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取大良姜粉末(過3號篩)約1g，精密稱定，置索氏提取器中，加乙醇適量，加熱回流提取2小時，收集提取液，用等量的正己烷-乙酸乙酯(10∶1)溶液分三次萃取，合并萃取液，減壓回收萃取劑，萃取物用硅膠層析柱(3cm×50cm層析柱分離，20倍量硅膠)以正己烷-乙酸乙酯(10∶1)為洗脫液洗脫純化，收集洗脫液，水浴蒸干，殘渣置10ml量瓶中，加甲醇適量，超聲使溶解，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。
測定法分別精密取對照品溶液和供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算1’-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯的含量，即得。
八、大良姜包裝運輸及貯藏 (一)包裝 大良姜曬干后，用專用袋包裝。按照《中藥材生產質量管理規范》的要求，包裝前應再次抽查、清除劣質品和雜質，包裝器材應無污染，要清潔干凈、干燥、無破損；包裝袋上應有包裝記錄，內容應包括品名、批號、規格、重量、產地、工號、日期等。
(二)運輸 大良姜批量運輸時，注意不能與其他有毒、有害的物質混裝；要防止吸潮、防止曝曬。
(三)貯藏 1、貯藏條件 因大良姜含有揮發油，應存放于陰涼、干燥的藥材倉庫，并防回潮、防蟲蛀。存放溫度在30℃以下，相對濕度控制在70％～75％，商品安全水分為10％～13％。按照國家有關規定，儲存保管定額損耗率三個月、六個月、一年及一年以上的庫房損耗分別為1％、1.3％、1.6％、2％以內。
2、防蟲蛀 大良姜的芳香辛辣氣味可防蟲，故蟲蛀現象較少，但潮濕環境中仍易被蟲蛀。
常見的倉庫害蟲有藥材甲、煙草甲、褐粉蠹、黑毛皮蠹、暗褐郭公蟲等，被蛀蝕的藥材表面可見蛀孔，包裝外現棕紅色蛀末。因此，應保持倉庫干燥、清潔，經常清除灰塵、雜物，定期進行消毒。發現蟲蛀，應立即外移晾曬、翻垛通風。將倉庫密閉，抽去空氣，填回氮氣進行貯藏。
3、防受潮霉變 在潮濕環境中，大良姜易受潮霉變。如發現藥材已受潮，可在陽光下曝曬，或用水將霉洗凈，后曝曬。但不宜經常曝曬，以免揮發油散失，表面干縮，色澤暗淡，影響其質量。在霉雨季節應每隔15天檢查1次，發現問題及時處理，保證大良姜的外部和內在質量。
取得的效果 采用本發明方法規范化栽培的大良姜見圖30。
1.種苗繁育效果見表8。
表8.種苗繁育效果 2.質量檢測結果 (1)性狀采用本發明方法栽培的大良姜與野生大良姜的性狀一致。
(2)顯微鑒別采用本發明方法栽培的大良姜與野生大良姜的顯微鑒別結果一致。
(3)化學鑒別采用本發明方法栽培的大良姜與野生大良姜供試品溶液化學鑒別法均呈陽性反應。
(4)紫外光譜鑒別采用本發明方法栽培的大良姜與野生大良姜的乙醚提取物及95％乙醇提取物在相同波長處均有相同的最大吸收峰。
(5)薄層色譜鑒別采用本發明方法栽培的大良姜與野生大良姜供試品溶液在相同位置均顯相同顏色的斑點。
(6)氣相色譜指紋圖譜鑒別采用本發明方法栽培的大良姜與野生大良姜的揮發油提取物顯相同特征的氣相色譜指紋峰。
(7)采用本發明方法栽培的大良姜與野生大良姜的雜質、水分、灰分、農藥殘留量、重金屬、砷鹽檢查結果無明顯差異。
(8)含量采用本發明方法栽培的大良姜中1′-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯的提取收率為1.2％～2.8％，純度為82％～96％；野生大良姜的提取收率為1.5％～2.7％，純度為85％～91％。
3.藥理活性成分 采用本發明方法栽培的大良姜與野生大良姜用水、醇、醚溶劑提取及超臨床界萃取均得到以下具有藥理活性的成分，見表9。
表9.大良姜提取物活性成分表 說明書


附圖1為大良姜Alpinia galanga willd. 附圖2為大良姜植株 附圖3為大良姜花 附圖4為大良姜根莖 附圖5為大良姜圓錐花序 附圖6為大良姜果實 附圖7為大良姜葉舌 附圖8為在草叢中生長的野生大良姜 附圖9為在山野溝谷蔭濕林下生長的野生大良姜 附圖10為大良姜根莖腐病 附圖11為大良姜根莖橫切面的表皮及皮層細胞 附圖12為大良姜根莖橫切面的根跡維管束 附圖13為大良姜根莖橫切面的皮層分泌細胞 附圖14為大良姜根莖橫切面的皮層維管束及纖維束鞘 附圖15為大良姜根莖橫切面的內皮層及中柱維管束 附圖16為大良姜根莖橫切面的中柱維管束及纖維束鞘 附圖17為大良姜粉末的淀粉粒 附圖18為大良姜粉末的纖維束 附圖19為大良姜粉末的纖維側面觀 附圖20為為大良姜粉末的薄壁細胞 附圖21為大良姜粉末的分泌細胞 附圖22為大良姜粉末的表皮細胞 附圖23為大良姜粉末的梯紋導管 附圖24為大良姜粉末網紋導管 附圖25為大良姜乙醚提取物紫外吸收光譜 附圖26為大良姜95％乙醇提取物紫外吸收光譜 附圖27為大良姜乙醚提取物薄層色譜圖 附圖28為大良姜氣相色譜指紋圖譜 附圖29為大良姜中1’-乙酰氧基胡椒酚醋酸酯HPLC圖 附圖30為采用本發明方法規范化栽培的大良姜
權利要求
1.大良姜栽培方法，其特征在于它是種苗繁育、移栽定植、田間管理、施肥、病蟲害防治、采收加工技術在姜科Zingiberaceae山姜屬植物紅豆蔻Alpiniagalanga Willd.的根莖大良姜栽培中的應用。
2.權利要求1所述的大良姜栽培方法，其特征在于它是采用根莖、種子繁殖技術進行大良姜種苗繁育的方法。
3.權利要求1所述的大良姜栽培方法，其特征在于它是采用組織培養技術，以新鮮大良姜為外植體，消毒后接種在培養基中進行幼芽、叢芽誘導和生根誘導技術進行大良姜種苗繁育的方法。
4.權利要求1所述的大良姜栽培方法，其特征在于它的移栽定植是在熱帶、亞熱帶氣候地區3～4月間的晴天早晨或陰雨天進行大良姜種苗的移栽定植，要求土層深厚、疏松、肥沃的酸性或微酸性砂質壤土，種植密度株行距為100×100厘米，在整好的畦上按株行距開穴，穴的規格為40×40×30厘米；當種子苗高20厘米以上時出圃定植，每穴種2～3株幼苗，或每穴種1個根狀莖，芽頭朝上，邊放邊填土，種后覆土壓實，然后再覆5～6厘米厚的細土的大良姜種苗移栽定植方法。
5.權利要求1所述的大良姜栽培方法，其特征在于它是前期在沒封行時每月除草1次，封行后夏秋各除草1次，除草時順便松土；種植后第2年在株植周圍開溝松土，同時進行培土；或在秋末冬初結合清園用土雜肥和表土培壅在植株基部，保持土壤濕潤，促進植株分蘗和根莖生長的大良姜栽培田間管理方法。
6.權利要求1所述的大良姜栽培方法，其特征在于它的施肥是根據土壤肥力狀況和大良姜不同生長時期的養分需求特點，以及不污染植株、不使土壤和大良姜重金屬含量超標為原則施以鈣、鎂、有機質、微量元素、氮、鉀、磷肥的大良姜栽培施肥方法。
7.權利要求1所述的大良姜栽培方法，其特征在于它的病害防治方法是用0.2～0.4波美度的石硫合劑灌根防治根莖腐病；蟲害防治方法是用6％甲萘威-四聚乙醛防治扁蝸牛。
8.權利要求1所述的大良姜栽培方法，其特征在于它是在2～3月采收，將采收的根莖除去地上部分、泥土、須根及鱗片，并截成5～6厘米的小段、洗凈、切段、干燥制成大良姜藥材的方法和在溫度低于30℃、相對濕度為70％～75％的條件下貯藏大良姜藥材的方法，控制大良姜藥材的水分為10％～13％。
9.大良姜質量控制方法，其特征在于它是紫外分光光度、薄層色譜法、氣相色譜指紋圖譜法在大良姜定性鑒別中的應用以及高效液相色譜法在測定大良姜中活性成分1’-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯含量中的應用。
10.權利要求9所述的大良姜質量控制方法，其特征在于它的紫外分光光度法定性鑒別方法是大良姜乙醚提取物在256nm和295nm的波長處有最大吸收峰；大良姜95％乙醇提取物在220nm、235nm、250nm、292nm的波長處有最大吸收峰的紫外光譜鑒別方法。
11.權利要求9所述的大良姜質量控制方法，其特征在于它的薄層色譜定性鑒別方法是大良姜乙醇提取物溶液點于硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置日光下檢視，顯藍色斑點的薄層色譜鑒別方法。
12.權利要求9所述的大良姜質量控制方法，其特征在于它的氣相色譜指紋圖譜鑒別方法是用Supelco Simplicity-wax 30m×320μm×0.25μm色譜柱；柱溫80℃～230℃，柱溫升溫速度為每分鐘10℃；載氣N2 1ml/min；分流比為50∶1；氣化室溫度為250℃；檢測器溫度為280℃；取大良姜揮發油提取物，用乙酸乙酯稀釋20倍，進樣1μl，記錄氣相色譜圖，檢測特征峰的氣相色譜指紋圖譜鑒別方法。
13.權利要求9所述的大良姜質量控制方法，其特征在于它是采用高效液相色譜法測定大良姜中成分1’-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯含量的方法以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水為流動相；檢測波長為254nm。以每1ml含20μg 1’-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯對照品的甲醇溶液為對照品溶液；將大良姜用乙醇加熱回流提取，提取液用正己烷-乙酸乙酯萃取，萃取物用硅膠層析柱分離，用正己烷-乙酸乙酯洗脫純化，收集洗脫純化液，水浴蒸干，殘渣加甲醇，超聲使溶解，濾過，取續濾液作為供試品溶液。分別精密取對照品溶液和供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算大良姜中成分1’-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯含量的方法。
全文摘要
本發明涉及姜科Zingiberaceae山姜屬植物紅豆蒄Alpinia galanga Willd.的根基大良姜的栽培方法，包括根莖、種子繁殖技術和組織培養技術在大良姜種苗繁育中的應用，種苗的移栽定植、田間管理、施肥、病蟲害防治方法以及大良姜藥材采收時間、采收加工方法、包裝運輸和貯藏方法；本發明還涉及紫外分光光度法、薄層色譜法、氣相色譜指紋圖譜法對大良姜的定性鑒別和高效液相色譜法測定大良姜中成分1’－乙酰氧基胡椒酚乙酸酯含量的質量控制方法。
文檔編號G01N30/90GK1947488SQ200610146148
公開日2007年4月18日 申請日期2006年11月11日 優先權日2006年11月11日
發明者劉孝樂, 朱丹, 朱曉洪 申請人:南昌弘益科技有限公司