具有分析試劑的分析模塊及其制備和使用方法

專利名稱：：具有分析試劑的分析模塊及其制備和使用方法
技術領域：
：本發明涉及分析模塊例如分析板、盒、多孔分析板、反應容器，以及用于實施化學分析、生物化學分析、和/或生物學分析的方法。本發明也涉及向這些模塊內摻入干燥的試劑和/或所述干燥的試劑在這些方法中的用途。
背景技術：
：已經開發出了多種用于實施化學分析、生物化學分析和/或生物學分析的方法和系統。這些方法和系統在包括醫學診斷、食品和飲料檢驗、環境監測、產品質量控制、藥物開發和基礎科學研究的各種應用中都是重要的。根據應用的不同，分析方法和系統需要具有ー種或多種以下特性i)高通量；ii)高敏感度；iii)大的動態范圍；iv)高精度和/或準確度；v)低價格；vi)低試劑消耗；vii)與現有用于樣品加工處理的設備的兼容性出結果時間短；ix)多路處理能力；和X)對干擾物和復雜樣品基質不敏感。在多種應用中也需要用容易實施的、能夠自動化的、和/或使用穩定干燥的試劑的分析格式來獲得這些性能優勢。具有這些特征的新的分析方法和系統是非常有價值的。已經開發出了多種提供了用于分析的干燥的穩定形式的試劑的方法。美國專利5，413，732描述了某些能夠溶解于溶液的干燥的試劑球。美國專利6，429，026描述了某些使用干燥的試劑和時間分辨熒光檢測的免疫分析法。捕獲抗體被固定于微滴定孔的表面上。在孔底捕獲抗體的上方干燥含有碳水化合物和/或蛋白的隔離層。在隔離層的上方加入少量的標記抗體并干燥。用能夠被解離增強鑭系熒光免疫分析(DELFIA)技術檢測到的鑭系螯合物標記抗體。加入樣品和常用的分析緩沖液來啟動免疫分析。在容許發生抗體反應之后，洗滌孔數次，加入DELFIA增強緩沖液，并實施熒光壽命測定。美國申請2003/0108973描述了ー種三明治免疫分析法，其采用了含有凍干混合物的試管，所述凍干混合物包括固定于2.8μm可磁化聚苯こ烯珠上的捕獲抗體和經電化學發光標記物標記的檢測抗體。混合物也包括減少檢測抗體和珠在凍干過程中的非特異性結合的封閉劑。加入含有感興趣的分析物的樣品造成了在珠上形成三明治復合物。然后將珠懸浮液吸入到可重復使用的流動池內，其中所述珠被聚集到電極上并用點化學發光(ECL)檢測技術進行分析。Wohlstadter等的美國專利6，673，533描述了使用干燥的試劑的基于ECL的三明治免疫分析法。捕獲抗體被固定于復合電極上。通過加入并凍干含有與ECL標記相連接的檢測抗體、磷酸、三丙胺、牛血清白蛋白、蔗糖、氯こ烯胺和TRITONX-100的溶液可以將檢測所用的其他試劑都干燥于電極表面上。通過向電極上被干燥的試劑中加入樣品、溫育溶液、向電極施加電能以誘導ECL來實施免疫分析。不需要洗滌步驟。已經開發出了各種用于増加分析通量的技木。多孔分析板(也稱作微量滴定板或微量板)的應用容許對分布于板的多個孔內的多個樣品進行平行處理和分析。多孔分析板可以取不同的形式、尺寸和形狀。為了便利起見，用于處理用于高通量分析的樣品的設備已經形成了ー些標準。多孔分析板通常被制成標準的尺寸和形狀，具有標準的孔排列。孔排列包括在96孔板(12x8孔陣列)、384孔板(24x16孔陣列)以及1536孔板(48x32孔陣列)中所見的孔排列。生物分子篩選學會已經發表了多種板格式的推薦的微量板規范(見http://www.sbsonlme.orgノ。Wohlstadter等的美國出版物2004/0022677和2005/0052646以及美國申請10/185，274和10/185，363分別描述了用于在多孔板格式中進行單路和多路ECL分析的溶液。它們包括板，所述板包括具有形成孔的孔壁的通孔的板頂以及密封住板頂以便形成孔底的板底。板底具有圖案化(patterned)的導電層，所述導電層提供了具有電極表面的孔，所述電極表面既用作結合反應的固相支持物又用作誘導ECL的電極。導電層也可以包括用于給電極表面施加電能的電觸點。盡管已經具有了這些已知的用于實施分析的方法和系統，但是仍然需要改良的用于實施化學分析、生物化學分析、和/或生物學分析的分析模塊。
發明內容本發明涉及分析模塊(例如分析板、盒、或多孔分析板、反應容器等)，所述分析模塊具有預裝于分析模塊的孔、室或分析區內的分析試劑。在某些實施方式中，存放干燥狀態的這些檢測試劑。此外，分析模塊還可以包括用于將這些分析試劑保持在穩定干燥狀態的干燥劑材料。提供了用于制備這種分析模塊的方法以及在分析中使用所述分析模塊的方法。本發明提供多孔板，其包括至少ー個具有以下特征的孔(1)具有固定化于其上的第一結合試劑的結合表面，和(2)至少ー種額外的干燥的試劑，其中至少ー種額外的干燥的試劑不接觸結合表面。多孔板可以具有整合于多孔板的其中至少ー個孔內的結合表面和電極表面。本發明提供多孔分析板，其包括具有如在此限定的多個孔的板體，所述多個孔包括具有固定化于其上的捕獲試劑的結合表面以及可重建的(reconstitutable)干燥的試齊U。任選地，可以選擇出適合用作電化學分析或電化學發光分析中的電極的結合表面。此夕卜，可以用可重建的保護層涂覆結合表面。干燥的試劑可以是標記檢測試劑，其可以是獨立存在的或者可以位于孔中不與結合表面重疊的表面上。在ー個具體的實例中，結合表面位于孔底，可重建的干燥的試劑位于孔壁，任選地位于孔壁的試劑存放用架狀物(shelf)上。在另ー個實例中，結合表面和可重建的干燥的試劑可以位于孔底面的非重疊區。在另ー個具體的實例中，可重建的干燥的試劑是獨立存在的丸。多孔分析板還可以包括可重建的干燥的分析對照分析物，其可以對固定化的捕獲試劑和/或標記檢測試劑(如果存在)具有結合親和力。在特定的實施方式中，對照分析物可以對孔內的固定化的捕獲試劑和/或標記檢測試劑具有親和力，但是對照分析物以不與結合表面或標記檢測試劑相接觸的未結合形式存在。多孔分析板還可包括一種或多種額外的固定化的捕獲試劑。捕獲試劑和額外的捕獲試劑在結合表面上被圖案化，以便在結合表面上形成結合區陣列。這些結合區/捕獲試劑可以對結合配偶體具有不同的特異性或親和力。另外，孔可以具有多種不同的可重建的干燥的標記檢測試劑，所述試劑對結合配偶體具有不同的特異性或親和力。可以在實施分析的方法中使用上述的多孔板，包括向板的一個或多個包括固定化的捕獲試劑和可重建的干燥的標記檢測試劑的孔內加入樣品；重建這些孔內可重建的干燥的材料，以便形成反應混合物；在能夠促進所述捕獲試劑和檢測試劑與相應的結合配偶體結合的條件下溫育反應混合物，以及測定出包括固定化的捕獲試劑和標記的結合試劑的復合物的形成。通過選擇合適的捕獲試劑和檢測試劑，這些方法可以包括三明治結合分析法和競爭性結合分析法。本發明提供制備用于分析法中的多孔分析板的方法，包括在板的至少兩個孔內實施以下步驟將捕獲試劑固定于所述板的孔表面上，以便形成結合表面；將包括標記檢測試劑的液體試劑分配到不與結合表面重疊的孔表面；干燥液體試劑以形成可重建的干燥的檢測試劑。方法還可以包括將保護試劑分配到結合表面上，并干燥保護試劑，以便在結合表面上形成可重建的干燥的保護層。例如，在分配包括標記檢測試劑的液體試劑之前分配并干燥保護試劑。在特定的具體實施方式中，結合表面位于孔底，液體試劑被分配到非重疊的孔底面或孔壁上并干燥。任選地，孔壁包括液體存放用架狀物，以及液體試劑被(i)分配到架狀物上并干燥或(ii)分配到孔壁的架狀物上方的某個位置，使得可以收集沿著孔壁流下的液體試劑，隨后所述試劑在架狀物上被干燥。用于制備板的方法還包括固定ー種或多種額外的捕獲試劑，使得在結合表面上形成對結合配偶體具有不同的特異性或親和カ的結合區陣列。同樣，液體試劑可以包括ー種或多種對結合配偶體具有不同的特異性或親和カ的額外的標記檢測試劑。此外，方法可以包括分配并干燥額外的液體試劑，所述試劑包括對捕獲或標記檢測試劑具有結合親和力的分析對照分析物，額外的液體試劑可以被分配并干燥，使得它們不會接觸捕獲試劑或標記檢測試劑。在上述方法的特定的實施方式中，省略了分配并干燥包括標記檢測試劑的液體試劑的步驟，而是加入了獨立形式例如獨立丸的可重建的干燥的標記檢測試劑。優選地，在加入檢測試劑之前，在結合表面上分配并干燥保護試劑，以便形成可重建的保護層。方法也可以包括固定ー種或多種額外的捕獲試劑，使得在所述結合表面上形成對結合配偶體具有不同的特異性或親和カ的結合區陣列。同樣，可重建的干燥的試劑可以包括一種或多種對結合配偶體具有不同的特異性或親和カ的額外的標記檢測試劑。此外，方法可以包括向孔內加入額外的獨立存在的干燥的試劑，所述干燥的試劑包括對捕獲或標記檢測試劑具有結合親和カ的分析對照分析物。本發明提供了多孔板，其包括板體，所述板體具有限定于其中的多個孔，其包括a)多個帶有可重建的第一干燥的試劑的第一試劑孔和b)多個帶有第二干燥的試劑的第二試劑孔，其中第一和第二試劑是用于實施分析的相匹配的試劑。提供在這些板內實施分析的方法，包括a)向ー個第一試劑孔內加入樣品，b)重建第一試劑孔內的可重建的干燥的標記檢測試劑，以便形成反應混合物，c)將測試用量(aliquot)的反應混合物轉移到ー個或多個第二試劑孔內，和d)溫育第二試劑孔內的反應混合物，以便對所述樣品實施所述分析。在一個實施方式中，多孔分析板被分成了多個由第一試劑孔和ー個或多個第二試劑孔組成的孔組，所述方法還包括在每個孔組中重復(a)-(d)的過程。在具有第一和第二試劑孔的多孔板的ー個具體的實施方式中，按規則的ニ維模式排列第一試劑孔，所述第一試劑孔具有孔底和孔壁，所述孔壁具有內壁表面和外壁表面。此夕卜，第二試劑孔具有孔底和孔壁，檢測孔的外壁表面以及連接相鄰檢測孔的外壁表面的肋狀元件限定出孔壁。任選地，第一試劑孔可以具有圓形的開ロ周界，和/或按8x12方形陣列排列第一試劑孔。本發明提供了多孔分析板，其包括板體，所述板體具有限定于其中的多個孔，其包括a)多個檢測孔，每個檢測孔包括具有固定化于其上的捕獲試劑的結合表面，和b)多個試劑重建孔，每個試劑重建孔包括可重建的標記檢測試劑，其中，至少ー個檢測孔和ー個試劑孔包括用于測定感興趣的分析物的相匹配的捕獲試劑和檢測試劑。任選地，可以選擇出適合用作電化學或電化學發光分析中的電極的結合表面。在一個實施方式中，檢測和試劑重建孔可以被成組為多個由ー個試劑重建孔和ー個或多個檢測孔組成的分析組，一個組內的試劑重建孔和檢測孔包括用于測定感興趣的分析物的相匹配的捕獲試劑和檢測試劑。這些組可以由ー個試劑重建孔和ー個檢測孔組成。具有檢測孔和試劑重建孔的多孔板的ー個具體的實施方式包括a)多個檢測孔，其中所述檢測孔i)具有孔底和孔壁，所述孔壁具有內壁表面和外壁表面；ii)按規則的ニ維模式排列；和iii)在每個所述檢測孔的內表面上包括具有固定化于其上的捕獲試劑陣列的結合表面；b)多個試劑重建孔，其中所述試劑重建孔i)具有孔底和孔壁，由所述檢測孔的外壁表面以及連接相鄰檢測孔的外壁表面的肋狀元件限定出孔壁，和ii)每個試劑重建孔包括可重建的干燥的標記檢測試劑。任選地，檢測孔的孔ロ周界沒有凹陷的角或彎曲(例如圓形開ロ周界)，而試劑重建孔的孔ロ周界具有凹陷的角或彎曲。具有檢測孔和試劑重建孔的多孔板的檢測或試劑重建孔還可以包括可重建的干燥的分析對照分析物。檢測孔也可以包括ー個或多個額外的固定化的捕獲試劑。在這個實施方式中，捕獲試劑被圖案化形成結合表面上的對結合配偶體具有不同的特異性或親和カ的圖案化的結合區陣列。此外，可重建的干燥的試劑還可以包括ー個或多個額外的標記檢測試劑，檢測試劑和額外的檢測試劑對結合配偶體具有不同的特異性或親和力。本發明提供了在具有檢測孔和試劑重建孔的多孔板內實施分析的方法。一個實施方式包括a)向一個試劑重建孔內加入樣品；b)在重建孔內重建可重建的干燥的標記檢測試劑，以形成反應混合物；c)將測試用量的反應混合物轉移到ー個或多個檢測孔內；c)在促進捕獲試劑和檢測試劑與它們相應的結合配偶體結合的條件下溫育檢測孔內的反應混合物；和d)測定包括固定化的捕獲試劑和標記的結合試劑的復合物的形成。任選地，多孔板可以被分成多個包括ー個試劑孔和ー個或多個第二試劑孔的孔組，以及方法還包括在每個孔組內重復(a)-(d)的過程。本發明提供了多孔分析板，其具有多個限定于其中的孔的板體，所述孔具有孔底以及從所述孔底延伸到所述孔底上方高度hw處的孔壁，所述孔被成型為能夠提供高度為hs的架狀元件(shelfelement)，其中O<hs<hw。可以按標準的多孔板格式排列孔，包括排列在方形格子中的4x6、8xl2、16x24、和32x48的孔陣列。在特定的實施方式中，hs大于或等于O.02hw、0.05hw或O.Ihw，但小于或等于O.lhw、0.25hw或O.5hw。在其他實施方式中，hs大于或等于約O.lmm、0.2mm、0.5mm、或1mm,但小于或等于約lmm、2mm、或5mm。可以用架狀元件存放干燥的試劑。因此，另ー個實施方式是具有架狀物上的可重建的干燥的試劑的板。本發明提供了用于制備用于檢測的板的方法，包括將液態試劑分配到具有架狀元件的多孔板的孔內，干燥的試劑以便形成可重建的干燥的試劑，其中試劑被分配到架狀物上并干燥或者可以被分配到架狀物上方的孔壁上并干燥，使得在架狀物上收集沿著孔壁流下的液體試劑并在架狀物上干燥。在具有帶架狀元件的孔的板的特定的實施方式中，板體是單片注射成型件。在其他的實施方式中，板體包括具有多個限定出孔壁的通孔的板頂和密封所述板頂并限定出孔底的板底。任選地，板底提供了暴露于孔的內容積中的導電電極表面的并且可以用作電化學分析或電化學發光分析中的電極。本發明提供了多孔板，其包括a)具有多個限定于其中的孔的板體，包括i)多個包括干燥的分析試劑的分析孔；和ii)多個包括干燥劑的干燥劑孔；和b)密封所述板體的板蓋，據此將所述的多個孔與外周環境分開。任選地排列板，使得孔處于標準的孔排列(例如排列于方形格子中的4x6、8xl2、16x24或32x48孔陣列)。合適的分析孔構型包括但不限于具有如在上面的實施方式中所述的干燥的試劑(例如捕獲試劑和/或檢測試劑)的孔。有利地，可以用干燥管路連接干燥劑孔和分析孔，管路容許水蒸汽從分析孔彌散到干燥劑孔，還在分析孔的干燥的分析試劑位置上方的高度處與孔相交。在一個實施方式中，通過用板蓋密封板體頂面上的連接分析孔與干燥劑孔的凹槽可以提供這樣的管路。在某些實施方式中，所述板的孔被分成了多個包括至少ー個分析孔和至少ー個干燥劑孔的分析小組(panel)。在這些實施方式中，分析小組中的孔經干燥管路彼此相互連接，但并不與其他分析小組中的孔相連接。在ー個具體的實施方式中，分析小組包括ー個分析孔和ー個干燥劑孔。在具有分析孔和干燥劑孔的多孔板的一個實施方式中，分析孔包括具有固定化于其上的捕獲試劑的結合表面以及可重建的干燥的標記檢測試劑。分析孔還可以包括ー個或多個額外的固定化的捕獲試劑，捕獲試劑和額外的捕獲試劑在所述結合表面上形成圖案化的結合區陣列，所述結合區對結合配偶體具有不同的特異性或親和力。另外，可重建的干燥的試劑還可以包括ー個或多個額外的標記檢測試劑，檢測試劑和額外的檢測試劑可以對結合配偶體具有不同的特異性或親和カ。任選地，結合表面適合用作電化學發光分析中的電扱。在具有分析孔和干燥劑孔的多孔板的特定的實施方式中，板體是單片注射成型件。或者，板體包括具有多個限定出孔壁的通孔的板頂和密封所述板頂并限定出孔底的板底。所述通孔和板底可以限定出所有的孔或者僅僅一部分孔，例如僅僅限定出所述的分析孔或僅僅限定出所述的干燥劑孔。板底可以任選地提供暴露于孔的內容積中的導電電極表面。本發明也提供了多孔板，包括a)具有多個限定于其中的含有干燥的分析試劑的孔的板體，所述板體包括具有多個限定出孔壁的通孔的板頂以及密封所述板頂并限定出孔底的板底。b)密封所述板體的板蓋，據此將所述的多個孔與外周環境分開；和c)干燥劑材料。任選地排列板，使得孔處于標準的孔排列(例如排列于方形中的4x6、8xl2、16x24或32x48孔陣列)。板底可以任選地提供暴露于孔的內容積中的導電電極表面。合適的分析孔構型包括但不限于具有如在上面的實施方式中所述的干燥的試劑(例如捕獲試劑和/或檢測試劑)的孔。在特定的實施方式中，板蓋、板蓋和板頂之間的襯墊層、板頂、板頂和板底之間的襯墊層和/或板底包括干燥劑。例如，干燥劑可以被摻入(impregnate)到這些組件內或者可以是在這些組件的涂層內。或者，板體可以限定出一個或多個帶有干燥劑的附加孔。在一個實施方式中，分析孔包括具有固定化于其上的捕獲試劑的結合表面和可重建的干燥的標記檢測試劑。任選地，結合表面適合用作電化學或電化學發光分析中的電極。分析孔還可以包括ー種或多種額外的固定化的捕獲試劑，捕獲試劑和額外的捕獲試劑在所述結合表面上形成圖案化的結合區陣列，所述結合區對結合配偶體具有不同的特異性或親和力。另外，可重建的干燥的試劑還可以包括ー個或多個額外的標記檢測試劑，檢測試劑和額外的檢測試劑可以對結合配偶體具有不同的特異性或親和力。圖Ia-Ie顯示了包括干燥的試劑的多孔板的一些實施方式的不依比例的示意圖。圖2a_2j顯示了具有帶架狀元件的孔壁的孔的ー些實施方式的不依比例的俯視圖和橫截面圖，所述架狀元件包括可以用于支持干燥的試劑的壁架(ledge)(圖2a_2f)、橋狀物(圖2g-2h)和臺狀物(圖2i-2j)。圖3a_3c顯示了具有檢測孔和試劑重建孔的多孔板的示意圖。圖4a_4b顯不了具有檢測孔和試劑重建孔的板的一個實施方式的俯視圖和橫截面圖，試劑重建孔可以位于檢測孔之間的間隙內。圖5a_5f顯示了具有分析孔和干燥劑孔的多孔板500(圖5a_5b)、520(圖5c_5d)和540(圖5e-5f)的示意圖。圖6是多孔分析板的一個實施方式的立體示意圖。圖7a_7c顯示了三個被構造成實施基于陣列的多路電化學發光分析的多孔板的示意圖。圖8顯示了具有干燥的試劑壁架和每孔7個點的方形孔板的一個實施方式。圖9顯示了具有干燥的試劑壁架、每孔7個點和相鄰孔對之間的干燥管路的方形孔板的一個實施方式。圖10顯示了將干燥劑孔整合到分析板內對存放于板中的干燥的試劑的穩定性的影響。具體實施方式我們描述了具有預裝于分析模塊的孔、室或分析區內的分析試劑的分析模塊(例如分析板、盒、多孔分析板、反應容器等)。在特定的實施方式中，存放干燥狀態下的這些分析試劑。此外，分析模塊可以包括用于將所述分析試劑保持在干燥狀態的干燥劑材料。預裝有分析試劑的分析模塊可以極大地提高速度并減少分析測定的復雜性，同時保持存放期間的極好的穩定性。我們也描述了用于制備這些分析模塊的方法以及在分析中使用這些模塊的方法。干燥的分析試劑可以是任何一種可以被干燥、然后在用于分析之前被重建的分析試劑。這些分析試劑包括但不限于結合分析中所用的結合試劑、酶、酶底物、指示劑染料和其他可以用于檢測感興趣的分析物的反應化合物。分析試劑也可以包括不直接參與檢測機制但在分析中起到輔助作用的物質，所述物質包括但不限于封閉齊、穩定劑、去污齊、鹽、pH緩沖劑、防腐劑等。試劑可以是游離形式或者是受固相支持的，所述固相包括分析模塊的隔室(例如室、管路、流動池、孔)的表面或者膠體、珠或其他微粒支持物的表面。在特定的實施方式中，所包括的干燥的試劑(例如可重建的干燥的試劑)包括磷酸銨作為緩沖組分，包括其他銨鹽，和/或包括小于約I%(w/w)或小于約0.1%(w/w)的鈉離子或鉀離子。描述了帶有用于結合分析的干燥的捕獲試劑和檢測試劑的多孔板的多個實施方式，其中按照使得它們不會彼此相互接觸的方式將捕獲試劑和檢測試劑存放于板上。但是，本領域人員要明白這些實施方式可以被更廣泛地應用于按照使得它們在使用之前不會彼此接觸的方式存放任何數目不同的干燥的分析試劑(無論它們是固定的或未固定的、標記的或未標記的結合試劑等等)。同樣，雖然多個圖都用“Y”符號表示試劑或結合試劑，但是使用這個符號不應當被解釋為將這些試劑限定為抗體，除非有特別的說明。也要明白的是，實施方式可以被更廣泛地應用于存放在非孔的其他類型的隔室(例如室、管路、流動池等)中的分析試劑。術語“可重建的干燥的”可以用于表示干燥的試劑是可重建的干燥的試劑以及標記檢測試劑或者干燥的可重建的保護層等。該名詞用來表示通過加入樣品或溶劑形成溶液或懸浮液來重建的干燥的試劑。優選地，它們是水溶性的或者通過加入水性樣品后可被重建的。相反地，術語“固定化的”試劑在此表示在實施分析期間加入樣品之后仍正常地保持在表面上的試劑，盡管可以用特殊的條件將其從表面脫離下來。可以在分析模塊的隔室內(例如多孔分析板的孔內)原位制備出可重建的干燥的試劑。例如，可以將ー份液態試劑分配到孔或其他隔室內并干燥(例如經空氣干燥、真空干燥、冷凍干燥等)形成可重建的干燥的試劑。通過添加少量仍被限定在隔室的分離的表面(例如孔的底部或孔壁上的分離的位置)上的試劑，所形成的干燥的試劑可以仍然固定地限定在所述位置。或者，可以加入足以擴散到整個底面或者足以填滿隔室的體積的試劑，以便形成布滿整個連續表面上的干燥的試劑層。可以在分析模塊外制備出可重建的干燥的試劑，并將干燥形式的所述試劑(例如干粉末或者獨立存在的干丸)加入到模塊的隔室內(例如多孔板的孔內)。丸在此表示緊密的干燥的物質例如壓縮的干片劑或凍干的干珠(例如美國專利5,413,732)。—些實施方式包括或采用了可以用于實施結合分析的干燥的結合試劑。可以用于分析模塊或方法中的結合試劑包括但不限于抗體、受體、配體、半抗原、抗原、表位、模擬表位(minitopes)、適體、雜交配偶體和嵌入劑(intercalaters)。合適的結合試劑組合物包括但不限于蛋白、核酸、藥物、類固醇、激素、脂質、多糖、及其組合。已經證實核酸和蛋白(特別是抗體)對于結合分析是特別有用的。本領域人員能夠鑒定出用于特殊應用中的合適的結合試劑。術語“抗體”在此包括完整的抗體分子(包括通過在體外重新組合抗體亞基裝配出的雜交抗體)、包括抗體的抗原結合區的抗體片段和重組蛋白構建體(例如Porter&ffeir,J.Cell.Physiol.,61(Suppl.I):51-64,1966和Hochmanetal.Biochemistry12:1130-1135,1973所述)。該術語也包括已經被化學修飾例如通過引入標記修飾的完整抗體分子、抗體片段和抗體構建體。術語核酸在此將被廣泛地用于不僅包括DNA和RNA,還包括參與與DNA或RNA序列的特殊的Watson-Crick或Hoogstein雜交反應的類似物(例如肽核酸或硫代磷酸酯連接的核酸)，也包括已經被化學修飾例如通過弓I入標記修飾的核酸和類似物。術語“捕獲試劑”在此表示被固定于表面上以形成用于固相結合分析中的結合表面的結合試劑。分析模塊和方法也可以采用或包括另ー種結合試劑。可以測定出參與結合表面上的結合反應的“檢測試剤”。通過測定試劑的內在特性例如顔色、發光度、放射性、磁場、電荷、折光率、質量、化學活性等可以測定出檢測試劑。或者，可以用可檢測的標記物標記檢測試劑，并通過測定標記的特性測定出檢測試劑。合適的標記包括但不限于選自由電化學發光標記、發光標記、熒光標記、磷光標記、放射性同位素、酶標記、電活性標記、磁性標記和光散射標記組成的組中的標記。可以實施的分析包括“三明治分析”，其采用了可以同時結合于感興趣的分析物的固定化的捕獲試劑和檢測試劑，使得具有隔離結合表面上的檢測試劑的作用。因此，通過測定檢測試劑在表面上的蓄積可以測定出分析物的存在。分析也可以包括“競爭性分析”，其i)采用了與分析物競爭性結合檢測試劑的固定化的捕獲試劑，或者ii)與分析物競爭性結合固定化的捕獲試劑的檢測試劑。對于競爭性分析而言，分析物的存在造成了結合表面上檢測試劑量的可測定的減少。捕獲試劑或檢測試劑可以直接地結合(或競爭性結合)感興趣的分析物，或者可以通過一個或多個橋接配體間接的相互作用。因此，干燥的分析試劑可以包括這些橋接配體。例如，通過采用生物素標記的結合或競爭性結合感興趣的分析物的橋接試劑可以將抗生物素鏈菌素或抗生物素蛋白用作捕獲或檢測試劑。同樣，通過采用半抗原標記的結合或競爭性結合感興趣的分析物的結合試劑可以將抗半抗原抗體用作捕獲或檢測試劑。在另一個實例中，抗種類抗體或Fe受體(例如蛋白A、G或L)通過其結合分析物特異性抗體的能力可以用作捕獲試劑或檢測試劑。這些技術在結合分析領域是已知的，本領域一般熟練人員能夠容易地鑒定出用于特殊應用的橋接配體。分析模塊/板的特定實施方式包括固定化于模塊/板的表面上的捕獲試劑，以便形成結合表面。利用固相結合分析
技術領域：
熟知的固定化技術可以實施所述固定化，例如已知用于實施ELISA分析或基于陣列的結合分析的技木。在一個實例中，結合試劑可以被非特異性地吸附到多孔板的孔底表面。表面可以是未經處理過的或者已經處理過的(例如用血漿或帶電荷的聚合物處理過的)以便增強表面的吸附性能。在另ー個實例中，表面可以具有活性的化學官能團，使得能夠容許共價偶聯結合試劑。在固定試劑之后，表面可以任選地接觸試劑，所述試劑包括用于封閉表面上的未涂覆部位的封閉劑。為了進行多路測定，可以使用有著不同捕獲試劑陣列的結合表面。各種用于形成捕獲試劑陣列的技術在基于陣列的分析
技術領域：
都是熟知的。任選地用可重建的干燥的保護層涂覆結合表面。可以用保護層穩定結合表面，以便預防結合表面在生產或存放期間接觸到檢測試劑，或者只是簡單地作為存放檢測試劑例如橋接劑、封閉劑、PH緩沖劑、鹽、去污劑、電化學發光共反應劑等的場所。保護層中可見的穩定劑包括但不限于糖(蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇等)、多糖和糖聚合物(葡聚糖、FICOLL等)、聚合物(聚こニ醇、聚こ烯吡咯烷酮等)、兩性離子滲透劑(甘氨酸、甜菜堿等)和其他穩定滲透劑(三甲胺-N-氧化物等)。封閉劑是阻止分析組分特別是檢測試劑與結合表面的非特異結合的物質，包括蛋白(例如血清白蛋白、伽瑪球蛋白、免疫球蛋白、奶粉或純化酪蛋白、明膠等)、聚合物(例如聚環氧こ烷和聚環氧丙烷)和去污劑(例如已知商品名為BRIJ、TRITON、TWEEN、THESIT,LUBROL,GENAPOL、PLURONIC、TETRONIC、和SPAN的非離子型去污劑或表面活性劑)。在特定的實施方式中，引入保護層，其包括磷酸銨作為緩沖組分，包含其他銨鹽，和/或包含低于1%或O.1%(w/w)鈉離子或鉀離子。一個實施方式是多孔板，其包括至少ー個具有(I)第一干燥的分析試劑和(2)第ニ干燥的分析試劑的孔，其中所述第一和第二干燥的試劑中的一種或兩種試劑是可重建的干燥的試劑，其中所述第一和第二干燥的試劑不會彼此相互接觸。孔還可以包括一種或多種額外的干燥的試劑。包括一種或多種不會接觸第一和/或第二干燥的試劑的額外的可重建的干燥的試劑。實施方式也包括用于在這些板中進行感興趣的分析物的分析的方法，包括將液體樣品加入到板的ー個或多個孔內，重建孔內的可重建的干燥的試劑并測定出分析物依賴的分析信號，以便測定出樣品中的分析物。本領域人員根據分析
技術領域：
的知識能夠容易地選出用于測定各種分析物的試劑和檢測方法。可以被測定到的可檢測信號包括但不限于光學吸光度、光致發光(例如熒光)、化學發光、電流或電能、催化活性、化學活性、光散射、凝集、放射活性、電化學發光、磁性、折光率變化、和其他已經用于分析測定中的信號。另ー個實施方式是多孔板，其包括至少ー個具有(I)具有固定化于其上的第一結合試劑的結合表面，和(2)至少ー種額外的干燥的試劑的孔，其中至少ー種額外的干燥的試劑是不會接觸結合表面的可重建的干燥的試劑。多孔板可以具有整合于多孔板中的至少ー個孔內的電極表面和結合表面。圖Ia-Ie顯示了多孔板的孔100的一些實施方式的不依比例的示意圖。用孔底120和孔壁110限定出孔。底120和壁110可以是由單ー連續的材料組成，或者可以是拼接在一起的分離的組分(例如板頂和板底)。孔100也可以含有位于底120上的第一干燥的試劑130，如圖所示，所述干燥的試劑130可以是固定于底120上并形成結合表面的ー種或多種捕獲試劑。第一干燥的試劑130可以包括多個固定化的捕獲試劑(例如試劑130a、130b和130c)，其被圖案化成多個分離的結合區(例如陣列)。有利地，結合試剤/區可以對結合配偶體具有不同的親和カ或特異性；這些結合區可以被用于實施多路的基于陣列的測定。可重建的保護層140覆蓋干燥的試劑130。可以省略保護層140，例如當不需要物理地分離試劑130和150時。孔100也包括第二干燥的試劑150，其是可重建的干燥的試劑。第二干燥的試劑150可以包括檢測試劑例如標記檢測試劑160。任選地，第二干燥的試劑150包括多個在其與結合配偶體結合的結合親和力或特異性方面有所不同的檢測試劑。孔100也可以包括任選的、額外的可重建的干燥的試劑170，其包括分析對照分析物180(如圖Ic-Ie所示)。也顯示了板蓋190。板蓋190可以被省略，其蓋住了孔110的頂面，以便阻止干燥的試劑接觸到環境。圖Ia顯示了一個實施方式，其中用可重建的保護層140涂覆第一干燥的試劑130。將第二干燥的試劑150鋪層在保護層140的上方，所述保護層阻止了第二干燥的試劑150接觸到第一干燥的試劑層130。在本實施方式的一個實例中，通過將液體形式的第二干燥的試劑150分配到保護層140上進行所述試劑的鋪層；選出具有足夠厚度或質量的保護層140，使得它能夠吸收這種液體且不會容許其接觸干燥的試劑130。然后液體被干燥形成第ニ干燥的試劑150。在另ー個實例中，引入液體形式的保護層140，并將其在孔內冷凍形成第一冷凍層。然后引入液體形式的試劑150,并在第一冷凍層之上冷凍成第二冷凍層。凍干兩個冷凍層提供了分層的干燥的試劑結構。圖Ib顯示了一個實施方式，其中試劑130和150都被固定地位于底120的非重疊區。額外的干燥的試劑例如檢測對照試劑(未顯示)可以位于底120的其他非重疊區。利用圖案化的試劑裝配或分配的標準技術可以實現試劑在底120的選定區域內的定位。任選地，底120具有由相對疏水性區域圍繞的相對親水性區域，使得分配到親水性區域上的合適體積的試劑能夠滲入到由疏水性區域限定出的明確界線。在這個和其他的實施方式中，其中可重建的干燥的試劑位于表面，可以用封閉劑預處理表面，以便阻止試劑吸附于表面，和/或試劑組合物包括有封閉劑。圖Ic顯示了一個實施方式，其中第二干燥的試劑150以ー個或多個干燥的試劑丸的形式被固定地定位于壁110上。例如通過將一滴或多滴試劑(液體形式)分配到壁110上并將其干燥形成干燥的試劑丸就可以形成所述丸。圖Ic也顯示了被固定地定位于壁110上的另ー個非重疊區的任選的額外的干燥的試劑170以及對照分析物180。圖Id顯示了與圖Ic所示類似的實施方式，除了試劑150和170位于壁110的架狀物115上。通過將其分配到架狀物115上并干燥或者將其分配到架狀物115的上方使得它們順著壁110流到它們所要被干燥的架狀物115上就可以由液體試劑形成干燥的試劑150和170。或者，獨立存在的干燥的試劑丸可以被放置在架狀物115上。最后，圖Ie顯示了一個實施方式，其中試劑150和任選的試劑170都是獨立的干燥的試劑丸。也包括孔100的實施方式，其中有著ー些孔底、孔壁、孔架狀物上的和/或獨立形式的可重建的干燥的試劑的組合。在另ー個實施方式中，采用了ー些固定定位的和獨立存在的可重建的干燥的試劑的組合。如圖I中的實施方式所示，多孔板包括那些具有多種、物理分離的、干燥的試劑的孔的多孔板。同樣，為了在不同的孔內進行不同的分析，不同的孔可以有著不同的干燥的試齊U。例如為了質量控制的目的，需要確保板的孔內有著正確的干燥的試劑。因此，干燥的試劑可以包括指示物(例如染料或熒光團)，使得它們可以被用于對板的光學觀察。通過在不同的干燥的試劑中使用不同的可區別的指示物，使得能夠光學觀察板，以確保在板的合適的孔內的合適位置上有著正確的試劑。圖2顯示了ー些具有架狀元件的孔的實施方式的不依比例的示意圖，其中在架狀元件上，可以保留并干燥液體試劑和/或可以在孔底部的上方支持獨立的干燥的試劑。架狀元件可以包括如下所述的壁架、橋狀物或臺狀物。圖2a是顯示出孔底200和孔壁210的孔200的橫截面，孔壁具有能夠支持干燥的試劑的壁架例如壁架230和235。壁架230具有一個與正好在壁架上方的壁有著基本上90°或小于90°的角，使得合適體積的試劑可以被分配到壁架230，并在壁架230上聚集，而不會向下流到孔底200。壁架也可以具有有助于含有試劑的其他特點例如壁架235上的ロ緣240。架狀元件例如壁架235可以位于高出孔底240(hb=O)并低于孔高(hw)的任何高度處CO。在一些實施方式中，hs大于或等于O.02hw、0.05hw或O.Ihw,但小于或等于O.lhw、O.25hw或O.5hw。在其他實施方式中，hs大于或等于約O.lmm、0.2mm、0.5mm或1mm,但小于或等于約lmm、2mm、或5_。通過在檢測期間正確選擇架狀物高度和添加的樣品/試劑的體積，可以控制分析反應的順序或時機。在一個實例中，選擇架狀物高度和樣品體積，使得加入到孔內的樣品所提供的液體高度既能夠接觸到孔底部的試劑，同時也重建ー個或多個架狀物上的試劑。或者，也可以選擇架狀物高度，使得加入給定體積的第一液體能夠接觸到孔底部的干燥的試劑(重建底部的可重建的試劑和/或容許反應進行到涉及存放于底部的試劑的過程)，但是不會達到ー個或多個架狀物的高度。可以在稍晚的時候通過加入有效量的第二液體的體積開始涉及架狀物上的試劑的反應，使得液體水平達到架狀物的高度，以便重建架狀物上的干燥的試劑。在實施反應的時候，被測定的樣品可以是第一液體、第二液體或兩者。圖2b_2f顯示了孔200的一些實施方式的俯視圖，并顯示出孔ロ可以是各種不同的形狀，包括但不限于方形(圖2b-2d)和圓形(圖2e-2f)。此外，架狀元件可以圍繞著孔的周界延伸，例如圖2b和2e所示，或者可以是僅僅部分繞壁延伸的一個或多個分離的架狀元件，如圖2c-2d和2f所示。孔也可以包括孔內的不同高度上的多個架狀元件。圖2g-2h分別顯示了孔290的橫截面和俯視圖，其中架狀元件是橫跨孔的橋狀物250。圖2i-2j分別顯示了孔295的橫截面和俯視圖，其中架狀元件I是從孔底220的某個部分垂直延伸的臺狀物260。本發明提供了多孔板，其包括板體，所述板體具有限定于其中的多個孔，所述多個孔包括a)多個帶有可重建的第一干燥的試劑的第一試劑孔和b)多個帶有第二干燥的試劑(其可以是可重建的干燥的試劑或固定化的試劑)的第二試劑孔，其中第一和第二試劑是用于實施分析的相匹配的試劑(即它們都被用于實施相關的分析)。試劑可以以獨立存在的丸或粉末等形式位于孔的不同位置例如孔底、孔壁、架狀元件。本發明提供了用于在這些板內實施分析的方法，包括a)向ー個第一試劑孔內加入樣品，b)重建第一試劑孔內的可重建的干燥的標記檢測試劑，以形成反應混合物，c)將測試用量的反應混合物轉移到其中一個或多個第二試劑孔內；和d)溫育第二試劑孔內的反應混合物，以便在所述樣品中實施所述分析。在一個實施方式中，多孔分析板可以被分成多個由第一試劑孔和ー個或多個第二試劑孔組成的孔組，方法還包括在每個孔組內重復過程(a)-(d)。圖3a是ー個實施方式的(不依比例的)示意圖，顯示了多孔板300的兩個孔的橫截面。孔302是包括一種或多種可重建的干燥的試劑的試劑重建孔，其可以包括標記檢測試劑(例如包括標記檢測試劑360的干燥的試劑350)或分析對照分析物(例如包括分析對照分析物380的干燥的試劑370)。這些干燥的試劑可以包括額外的試劑組分例如封閉齊U、穩定劑、防腐劑、鹽、PH緩沖劑、去污劑、橋接劑、ECL共反應劑等。試劑可以位于孔底、孔底的特殊位置、孔壁、架狀元件之上或者可以是獨立存在的(例如圖I和2部分所討論的那樣)。孔301是包括一種或多種干燥的試劑的檢測孔，其可以包括可重建的干燥的試劑或固定的干燥的試劑。如圖所示，孔301包括固定化的捕獲試劑330，其被圖案化成三個結合區330a、330b和330c，以便形成結合表面。孔301也包括可以被省略的可重建的保護層340。在檢測的一個實施方式中，向試劑重建孔內加入樣品，其中重建出可重建的干燥的試劑。然后將樣品轉移到檢測孔內，其中實施分析測定。或者，可以用可重建的緩沖劑重建試劑重建孔內的試劑；然后混合重建緩沖液和檢測孔內的樣品。圖3a也顯示了密封孔301和302的開ロ的板蓋390，以保護孔內容物不接觸外界環境。多孔板的檢測和試劑重建孔可以被成組為多個由ー個試劑重建孔和ー個或多個檢測孔組成的檢測組，組內的試劑重建孔和檢測孔包括用于測定感興趣的分析物的相匹配的捕獲試劑和檢測試劑。圖3b顯示了排列，其中ー組具有一個試劑重建孔302和3個檢測孔301。在分析期間，將加入到孔302中的樣品分配到3個相關的檢測孔301內，以便進行多個重復或者在檢測孔帶有不同的試劑時進行多個不同的分析。圖3c顯示了排列，其中一組具有一個試劑重建孔302和ー個檢測孔301。試劑重建孔和檢測孔可以是相似的大小和形狀或者可以具有不同的大小和/或形狀。在一些實施方式中，標準多孔板中的孔被分成了兩種類型。圖4顯示了孔排列的不依比例的示意圖。圖4a顯示了具有檢測孔440的多孔板400的俯視圖，所述孔按規則的ニ維模式排列并且具有檢測孔壁430，所述孔壁具有內壁表面和外壁表面。多孔板也具有位于檢測孔之間的間隙內的試劑重建孔460。試劑重建孔460具有由檢測孔壁430的外孔表面和連接相鄰孔的孔壁430的外表面(在最外面的孔中，是板框壁410的內表面)的肋狀元件450限定出的孔壁。如圖所示，檢測孔可以被成型為沒有凹陷(即向內突出)的彎曲或角，而間隙孔可以具有凹陷的彎曲和/或角。圖4b顯示了沿著圖4a的虛線的橫截面圖，以及顯示了兩種類型的孔的底面(其可以是在板體的不同高度上)。板可以是由単一的連續材料形成的。在另ー個實施方式中，板是由沿著圖4b所示的虛線相匹配的板頂405和板底420組成的。有利地，圓形孔以及由孔壁和肋狀元件限定出的間隙孔的陣列的基本排列是許多注射成型的96孔板和板頂的常見特點，并容許這些組件被用于形成如圖4所示的干燥的試劑板。本發明提供了多孔板，包括a)具有多個限定于其中的孔的板體i)多個包括干燥的分析試劑的分析孔；和ii)多個包括干燥劑的干燥劑孔，和b)密封所述板體的板蓋，據此分開所述的多個孔和外周環境。在一些實施方式中，分析孔包括用于在分析孔內實施分析的必要的試劑。也包括實施方式，其中干燥劑孔經干燥管路與分析孔相連接，所述管路容許水蒸汽從分析孔彌散到干燥劑孔，但是在分析孔的干燥的試劑位置上方的某個高度處與孔相交。除了含有干燥的試劑和干燥劑的多孔板，還提供了板本身(即沒有干燥的試劑和干燥劑)，特別是具有適用于連接干燥劑孔和具有干燥的試劑的分析孔的組的管路和槽元件(如下面所述的圖5所示)的板。圖5顯示了具有分析孔501和干燥劑孔502的多孔板500的不依比例的示意圖(沒有顯示出干燥劑和干燥的試劑)。圖5a是俯視圖，顯示了孔壁510和連接干燥劑孔和ー個(如A列所示)或多個(如B列所示)分析孔的管路508。圖5b顯示了沿著圖5a的虛線的橫截面圖，其與圖5a—起顯示了封閉板體頂面的槽的板蓋515是如何形成管路508的。板蓋515封閉住這些槽以及孔頂，以便形成經管路相互連接并與環境和其他孔組分開的分析孔和干燥劑孔的組。因此，一個或多個孔組可以被開封并用于分析，剩下的孔組仍被保留在受干燥環境保護的環境中。板500可以是由単一連續的材料形成的。在另ー個實施方式中，板500是由沿著圖5b所示的虛線相匹配的板頂505和板底512組成的，板底512限定出了其中至少ー些孔的底部。板500的分析孔或孔組可以包括ー個或多個上面所述的例如圖I到4描述的任一含干燥的試劑的孔，以及可以包含分析孔和試劑重建孔。用于干燥劑孔的干燥劑可以選自己知的干燥劑材料，包括但不限于ニ氧化硅、活性鋁、活性粘土、分子篩和其他沸石、吸水性鹽(例如無水的硫酸鈣、硫酸鎂、硫酸鈉、氫氧化鈉和氯化鋰)、吸水性溶液(例如氯化鋰的濃縮溶液)和水反應性材料例如五氧化磷。在一些實施方式中，干燥劑是游離的干粉末或顆粒材料。在其他實施方式中，干燥劑是干丸，例如壓縮片劑或摻入干燥劑的聚合物材料。在其他實施方式中，干燥劑存在于水蒸汽可通透的袋子或容器(例如商品化的ニ氧化硅包)內。有利地，丸形式或預裝容器內的干燥劑可以被“壓縮符合干”干燥劑孔，以避免其在轉送或使用期間在孔內的移動。圖5c_5d顯不了具有分析孔和干燥劑孔的多孔板520的一個實施方式的俯視圖和橫截面圖。板520具有按規則的ニ維模式排列的分析孔521(其可以含有干燥的分析試劑)以及具有內壁表面和外壁表面的分析孔壁523。也可以具有位于間隙內的干燥劑孔522(或者，孔521被用作干燥劑孔和孔522被用作分析孔)。干燥劑孔522具有由分析孔壁523的外孔表面和連接相鄰孔的孔壁523的外表面(在最外面的孔中，是板框壁526的內表面)的肋狀元件525限定出的孔壁。當與板蓋相匹配時，凹陷到孔壁523頂部內的槽524提供了水蒸汽從分析孔移動到干燥劑孔的通路。如圖所示，分析孔可以被成型為沒有凹陷(即向內突出)的彎曲或者角，而間隙孔可以具有凹陷的彎曲和/或角。圖5d顯示了沿著圖5c的虛線的橫截面圖，以及顯示了與板頂相匹配并形成了經管路524連接的但與其他孔和環境分開的分析孔和干燥劑孔的組的板蓋527。板520可以是由単一的連續材料形成的。在另一個實施方式中，板520是由沿著圖5d所示的彎曲相匹配的板頂528和板底529組成的。圖5e顯示了具有分析孔(其可以含有干燥的試劑)和干燥劑孔的多孔板的另ー個實施方式的示意圖，以及顯示了具有經板體的槽542連接成了孔組的分析孔541和干燥劑孔543的板540。多孔板540與圖5a_5b所描述的板500的實施方式基本類似，除了在板540中，干燥劑孔542比分析孔來得更淺以及面積更小,這容許更多的板足跡(footprint)可以被用作分析測定的孔。圖5f顯示了沿著圖5e的虛線的橫截面圖以及也顯示了密封板頂形成相連的分析孔和干燥劑孔的組的板蓋544。板540可以是由単一的連續材料形成的。在另ー個實施方式中，板540是由沿著圖5f所示的虛線相匹配的板頂545和板底546組成的，板底546也限定出了分析孔541的底面。圖6是多孔分析板的一個實施方式的立體示意圖。多孔分析板600包括板頂610以及限定出孔壁的通孔615。板頂610經襯墊625密封板底620，使得板底620限定出了孔底。任選地，板頂610直接密封板底620，并省略了襯墊625。通過常用的密封技術例如粘合剤、溶劑焊接、熱封、離子焊接等都可以實現密封。在另ー個任選的實施方式中，板頂610完全限定出了孔的側面和底面，可以省略板底620和襯墊625。通過用板蓋630直接或經任選的襯墊635密封板頂610(通過傳統的密封技術)可以將孔內容物與外周環境分開，所述孔包括被配置成含有如上所述的干燥的試劑和/或干燥劑的孔。板600的組分可以是由各種不同的材料制成的，所述材料包括但不限于塑料、金屬、陶瓷、橡膠、玻璃或其組合。根據所用的特殊檢測技術對板的要求，被選出的一些組分或所有組分都是透明的、有顔色的、不透明的、或者高度光散射的。在一個實施方式中，板頂610是注射成型的塑料例如注射成型的聚苯こ烯、聚丙烯、或環烯烴共聚物(COC)。任選地，一種或多種組分可以是由具有低水蒸汽滲透率的材料制成的或者包括所述材料(例如涂層的形式)，所述低水蒸汽滲透率例如是滲透100μm厚度為小于每天lg/m2的水蒸汽滲透率。低水蒸汽滲透率材料包括但不限于玻璃、金屬或金屬膜(例如鋁膜)、C0C、聚偏ニ氯こ烯(PvDC)、聚丙烯、聚氯三氟こ烯(PCTFE)和液晶聚合物(LCP)。板600可以含有如上所述的干燥劑孔。再者或另外，干燥劑可以被直接整合到板底610、板底620、板蓋630、襯墊625和/或襯墊635內。例如Hekal等的美國專利6，174，952描述了含有干燥劑的聚合摻和物可以被成模、澆鑄成襯圈或成型為薄膜、薄層、珠或片。在一些實施方式中，板底620具有促進試劑在孔底圖案化的特點(例如受疏水性區域包圍的圖案化的親水特點)和/或導電層，這提供了暴露于板600的孔的內容積中的電極，使得可以實施電化學或電極誘導的發光檢測(例如電化學發光分析)。板底620也可以包括電極接片，以便容許外在裝置給電極施加電能/電流。Wohlstadter等的美國出版物2004/0022677和2005/0052646中所述的那些方法、配置和組成包括這些特點、導電層和電極接片的合適的方法、配置和組成。可以被用于利用分析模塊實施ECL測量的合適的裝置和方法包括在分別為美國申請10/185，274和10/185，363的美國出版物2004/0022677和2005/0052646、美國申請10/238，391的美國出版物2003/0113713、美國申請10/980，198的美國出版物2005/0142033、以及剛剛提交的Clinton等的題為“分析裝置、方法和試劑”的美國申請11/，中所述的裝置和方法。圖7提供了ー個具體的實施方式的示意圖，其包括ー些上面所述的關于被配置成實施基于陣列的多路電化學發光分析的多孔板的發明概念。圖7a顯示了多孔板700的一部分，所述多孔板具有多個包括干燥的試劑的分析孔710和多個包括干燥劑的干燥劑孔720。板700頂面上的槽725連接每個干燥劑孔和分析孔。任選地，可以省略干燥劑孔720和槽725。分析孔710可以具有壁架712，其可以被用于支持可重建的干燥的試劑(例如包括檢測對照和/或ECL標記檢測試劑的干燥的試劑)。分析孔也具有覆蓋有圖案化的電介質層716的工作電極表面714，使得暴露出多個被暴露的電極表面或“點”(用孔內的圓圈表示)。另外，提供了另ー電極718，以提供完整的電化學電路。任選地，電介質層716的表面相對于電極表面714是疏水性的，使得在點上被圖案化的少量試劑可以被保持局限于所述點內。不同的點可以具有固定化于其上的不同的捕獲試劑，以便形成具有在其與結合配偶體(例如感興趣的分析物)結合的結合特異性或親和カ方面有所不同的結合區陣列的結合表面。或者，ー些點可以具有限定于其上的可重建的干燥的試劑，例如可以含有分析對照物和/或ECL標記檢測試劑。分析孔還可以包括覆蓋在結合表面上的可重建的保護層。圖7b提供了沿著圖7a的虛線的剖面圖，并顯示了ー種形成分析孔710中的電極/電介質層的方法。多孔板包括限定出干燥劑孔720的板頂730以及具有限定出分析孔710的孔壁和壁架712的通孔。板頂730也具有槽725，但當板蓋750密封板頂730的頂面時，所述槽725形成了分析孔710和干燥劑孔720之間的管路。在一個非限制性的實例中，板頂730是由具有低水蒸汽滲透率的塑料所成模的注射成型件。在另ー個非限制性的實例中，板蓋750是包括低水蒸汽滲透性的塑料或金屬箔(例如鋁箔)的可熱封的膜。圖7b也顯示了密封板頂730并限定出分析孔710的孔底的板底740。板底740包括支持為電極714和718提供的圖案化的導電層的基層715。電極上圖案化的電介質層716限定了暴露的電極點。可以提供各種材料的基層、導電層和電介質層(見例如美國出版物2004/0022677和2005/0052646)。在一個非限制性的實例中，基層是塑料膜(由例如聚酯例如MYLAR、聚氯こ烯、或低水蒸汽滲透性材料例如COC制成的)，導電層是網版印刷的可導電性油墨(例如網版印刷碳油墨)以及電介質層是網版印刷絕緣油墨。也如圖7b所示，作為基層715底面上的導電層的電極接片780和785為電極714和718提供了連接性(例如通過基層上的導電通孔)。通過網版印刷的導電墨水也可以提供電極接片，其在印刷期間可以填充基層715上的孔，這可以提供導電通孔。有利地，導電通孔可以直接位于孔壁的下面，以限制水蒸汽滲透過孔。另外，任選的底部密封層790可以密封基層715的底部。底部密封層790是由低水蒸汽滲透性材料制成的，并覆蓋了基層715的大部分底面，除了密封層790上的給定開ロ，所述開ロ位于容許板閱讀裝置接觸電極接片780和785的位置上。圖7c顯示了板700的一個實施方式的更詳細的傾斜圖，并顯示了被加壓到干燥劑孔720內的干燥劑丸722。可以檢測各種可以包含感興趣的分析物或活性的樣品。在一個實施方式中，將樣品引入到分析板或具有預裝的可重建的干燥的試劑的分析板的ー個或多個孔內，因此重建這些檢測試劑并測定出檢測信號，以便測定(定量或定性)出樣品中分析物的數量。試劑可以包括發光劑、電化學發光劑、化學分光計、和/或氧化還原活性物。因此，檢測信號優選地是發光或電化學的信號。可以被實施的檢測格式包括均質的或異質的方法。可以被實施的檢測包括采用固相支持物使得能夠將測量分析物或活性與將標記試劑分成液相或固相支持部分結合在一起的格式。實例包括固相結合分析，其測定材料及其特異的結合配偶體(對中的ー個被固定或者能夠被固定在固相支持物上)的復合物的形成、三明治復合物的形成(包括被固定或者能夠被固定在固相支持物上的捕獲試劑)、兩種競爭物與結合配偶體(結合配偶體或者其中一個競爭物被固定或者能夠被固定在固相支持物上)的競爭作用、對來自固定在或者能夠被固定在固相支持物上的試劑的標記(或標記材料)的酶裂解或化學裂解以及標記(或標記材料)與固定或者能夠被固定在固相支持物上的試劑的酶或化學的連接。術語“能夠被固定”在此指的是可以參與溶液中的反應以及隨后在檢測期間或之前被固相捕獲的橋接劑。例如，利用被固定在固相上的試劑的特異的結合配偶體可以捕獲試劑。或者，試劑可以連接于被固定在固相上的捕獲基序以及捕獲基序的特異性結合配偶體。有用的捕獲基序結合配偶體對的實例包括生物素-杭生物素鏈菌素(抗生物素蛋白)、抗體-半抗原、受體-配體、核酸-互補核酸等。在固相支持物上實施的檢測中，利用i)表面選擇技木；ii)溶液選擇技術和/或iii)兩相分離之后，通過測定固相支持物和/或溶液中的標記的量可以確定出分析物或活性的量。在電化學發光法中，固相支持物也可以是用于誘導與固相結合的標記的電化學發光的工作電極。電化學發光法可以包括在加入ECL共反應劑(例如叔胺如三丙胺或哌嗪-1，4-ニ(2-こ基磺酸))之前進行洗滌以便去除未結合的電化學發光標記的試劑，并施加電能以便誘導出未結合標記的ECL。或者，由于電化學發光測量的表面選擇性，可以在沒有洗滌的情況下實施所述方法。有利地，在未洗滌的分析中，可以向分析孔內預先加入可重建的干燥的試劑或保護層形式的ECL共反應劑。另ー個實施方式涉及用于實施分析的試劑盒，包括分析模塊/多孔板。試劑盒可以包括ー個或多個容器內的ー個或多個額外的試劑，所述額外的試劑包括但不限于分析校準劑、分析對照物、分析稀釋劑、ECL共反應劑、和洗滌緩沖劑。在一個實施方式中，試劑盒包括一個或多個板孔內的ー種或多種分析組分，優選的是干燥形式的分析組分。在一個優選的實施方式中，試劑盒包括分析板，所述分析板具有固定在分析模塊內的ー個或多個工作電極上的結合試劑以及ー種或多種直接安放在孔內(優選的在空間上不同于工作電極的位置上)或者安放在ー個或多個間隙孔內的干珠、片劑或丸形式的額外的檢測試劑。試劑盒的孔優選地包含有任何液體。實施例下面的實施例是對本發明的范圍之內的ー些方法和裝置的舉例說明。它們當然不能作為對本發明的任何形式的限制。本領域一般熟練人員在無需過多試驗的情況下可以對本發明進行多種改變和修飾。材料和方法標記的檢測抗體用NHS酯(MesoScaleDiscovery,Gaithersburg,MD)(一種基于釕-三-ニ批啶的磺酸衍生物的電化學發光標記)(下面繪出的化合物I)標記物標記的檢測抗體。用SEPHADEXG-50(Pharmacia)的分子排阻色譜法純化出標記抗體。r—ffSOjIJmmxNへJ1INaO3S凍干的檢測抗體丸由包含Iμg/mL每種標記抗體、2%牛血清白蛋白和20%蔗糖的磷酸緩沖鹽的溶液制成包括一種或多種標記的檢測抗體的丸。通過將20μL溶液液滴放置在液氮中形成這個溶液的冷凍滴。將冷凍滴轉移到放置在ADVANTAGEXL凍干器(Virtis)的架狀物上被冷凍了的(<_78°C)鋁盤上。在引入鋁盤之前，凍干器的架狀物被預先冷卻到<_45°C，并用導電糊提高架狀物和含有珠的鋁盤之間的熱傳遞。在經典的凍干方案中，將凍干器室腔抽成真空，架狀物溫度在約24小時內逐漸增加到-78で、-20°C、-15°C、最后增加到+20°C(室溫)。保持每個水平的溫度足夠長的時間，以便容許平衡，同時控制室壓為O.01托耳。對凍干珠的KarlFisher滴定通常顯示水含量小于4%重量。通過在干燥劑中延長存放可以將水含量降低到不足2%。用于電化學發光測量的多孔板利用特殊設計的具有整合的用于實施電化學發光測量的網版印刷碳油墨電極的多孔板(多陣列或多點板，MesoScaleDiscovery,MesoScaleDiagnostics的分部，LLC,Gaithersburg，MD)實施電化學發光測量。在每個孔底部的工作電極上圖案化的電介質層暴露出了工作電極上的ー個或多個區域或“點”。在一些試驗中，在將抗體固定在電極表面之前先用含氧血漿處理所述電極表面。通過利用納升分配器(Bio-Dot公司)將抗體溶液微分配到點上可以將不同的捕獲抗體固定在不同的點上。選定分配到點上的體積，使得它們可以擴散到電介質層所限定出的界線，但仍限定在點上，因此容許將每種抗體固定(經被動吸附)在工作電極的給定區域內；如果電極表面是未經血漿處理過的，向成點溶液中加入少量TRITONX-100去污劑，以便增強擴散。容許進行吸附至少2個小時，之后用穩定的洗滌緩沖液(2%蔗糖、185mM磷酸氫ニ銨、13mM磷酸ニ氫銨、O.1%TWEEN20和KATHONCG/ICPII防腐剤)洗滌板，干燥，并存放在干燥劑中。通過控制在干燥之前殘留在孔內的洗滌緩沖液的量(一般在5-20μL之間)，可以將具有不同厚度的蔗糖膜覆蓋在工作電極的表面。電化學發光測量裝置利用Sector(R)Imager6000讀板器或Sector(R)PR400讀板器(兩者都來自MesoScaleDiscovery,MesoScaleDiagnostics的分部，LLC,Gaithersburg,MD)在MULTI-SPOT板內誘導并測定電化學發光。Sector(R)Imager6000裝置給板內的工作電極施加電能，并顯像出所形成的ECL。采用圖形分析算法區分并定量出從孔內的每個點所發出的光。Sector(R)PR400裝置在一定時間內給板的一列孔的工作電極施加電能。用光電ニ極管陣列測定了出從所述列的孔中發出的ECL。實施例I:利用凍干珠上的標記的檢測抗體進行的多路細胞因子檢測如上制備出具有抗7種不同的人細胞因子(TNF-α、ILl-β、IL2、IL5、IL6、IL8、IL12、和GM-CSF)的捕獲抗體的7點陣列的高結合力多點板以及含有抗相同的7種細胞因子的標記的檢測抗體的凍干珠。每個孔內都放置一個珠，并將板存放在有干燥劑的地方，直到使用為止。通過向板的孔內引入預定濃度的細胞因子溶液(每孔40μI在加有10%胎牛血清的RPMI細胞培養基中制備出的溶液)，并在搖板器上室溫下溫育板2個小時可以實施多路細胞因子檢測。向孔內加入2χ濃度的MSDREADBUFFERP(MesoScaleDiscovery)(ー種含叔銨ECL共反應劑的溶液)(110μI/孔)，并在Sector(R)Imager6000裝置中分析板。對于10和10000pg/ml之間的所有7種細胞因子而言，每個點上所形成的信號都顯示出了較好的線性關系。信號的標準差通常小于平均信號的10%。背景信號和計算敏感性與當向孔內加入液體溶液形式的抗體時得到的那些結果相似。實施例2:利用在覆蓋捕獲表面上的保護層上干燥的標記的檢測抗體進行的細胞因子測量這個分析使用具有每孔單個點的小點多陣列板。如材料和方法部分所述的那樣，用含有抗人TNF-α捕獲抗體的溶液處理點，以便將抗體固定在點表面上。然后用75μI加有7%FICOLL(高分支的親水性的蔗糖聚合物)的4xMSD(R)READBUFFERP填充孔，并將板冷卻到冷凍，并凍干過夜，以便提供孔底面上的保護性“蛋糕”層。將小滴(35nL)標記的抗人TNF-α檢測抗體的濃縮溶液分配到蛋糕的表面上。然后將板真空干燥5分鐘，然后存放在有干燥劑的地方，直到使用。通過向孔內加入150μI含有預定濃度的人TNF-α的加有10%胎牛血清的RPMI細胞培養基的溶液并搖晃2個小時來實施分析。然后在Sector(R)Imager6000裝置上分析板。計算出的檢測限為5_6pg/mL，這與在利用液態的檢測抗體溶液的未洗滌的分析中觀察到的結果相當。實施例3:利用在多孔板的孔的側面上干燥的標記的檢測抗體進行的細胞因子測量這個檢測使用具有每孔單個點的小點多陣列板。如在材料和方法部分所述的那樣，用抗人TNF-α捕獲抗體涂覆點。將24μΙ/mL檢測抗體的4.8%蔗糖溶液的液滴(IuL)分配到孔的內側壁上，并容許干燥。將板存放在有干燥劑的地方，直到被用于檢測。檢測方案包括向每個孔內加入80μLTNF-α溶液，在室溫下搖晃板30分鐘，洗滌板，加入150μLlxMSD(R)READBUFFERT(MesoScaleDiscovery)，并在Sector(R)Imager6000裝置上分析板。將板在室溫或4°C下存放18天，得到的檢測限小于lpg/mL，這與在采用液態的檢測抗體溶液的洗滌分析中觀察到的結果相當。實施例4:利用具有經含蛋白的保護層涂覆的捕獲層以及孔壁上的干燥的標記的檢測抗體的多孔板進行的細胞因子測量這個檢測使用具有每孔單個點的小點多陣列板。用抗生物素鏈菌素(抗生物素鏈菌素MULTI-ARRAY板，MesoScaleDiscovery)預先涂覆姆個孔內的工作電極。根據下面的方案將抗IL-Iβ單克隆抗體固定在工作電極上。用PBS洗滌孔3次，然后用20μI的3^8/!^生物素標記的抗1レ10溶液處理孔。容許在搖板器的搖晃下進行固定2個小吋。然后用PBS洗滌孔3次。向孔內加入20μI體積的BSA和蔗糖的緩沖液，然后將其在真空下干燥，以便在板的底面上形成干膜。根據下面的方案在孔壁上形成SULF0-TAG標記的抗IL-Iβ多克隆抗體的干丸。利用BIO-DOT微分配器(Bio-Dot，Inc.)以及傾斜的尖頭將IOOnL的482μg/mL標記抗體溶液的微滴分配到每個孔壁上。液滴被保留在孔壁上，其中其被容許在干燥劑室內干燥30分鐘。然后用板熱封密封住孔。在一些試驗中，向檢測抗體溶液中加入低濃度的熒光素。通過鑒定所有孔內是否有檢測抗體沿孔壁流下或者飛濺到孔底部可以用熒光素熒光提供質控檢查。熒光素不會影響分析性能。通過向孔內加入125μI含有已知量的IL-Ιβ的溶液并在搖晃板的同時溫育板37分鐘來實施IL-Iβ的檢測。然后用PBS洗滌板3次。加入MSDREADBUFFERT，并在Sector(R)PR400裝置上分析板。以與使用液態檢測抗體溶液的檢測相當的模式進行利用板和干燥檢測抗體的檢測。實施例5:使用干燥的試劑的多孔板分析干燥的標記抗體在孔的臺狀物上的存放這個檢測使用如圖8所示的那樣配置的多點板。這個板與圖7所示的板相似，除了使用7點模式以及省略了干燥劑孔720、管路725、干燥劑丸722以及底密封層790。板頂是注射成型的聚丙烯。通過在單個點上分配抗肉毒毒素A(BotA)、ニ硝基苯基(DNP)、蓖麻毒素、葡萄球菌腸毒素B(SEB)、委內瑞拉馬腦炎(VEE)、和鼠疫耶爾森菌(YP)的抗體可以固定捕獲抗體。將未免疫的小鼠IgG固定在剰余的點上，用作陰性對照。通過分配75nL包括100-500μg/mL之間的抗體、750μg/mLBSA和O.03%TRITONX-IOO的溶液可以實施固定。其中ー個例外是BotA捕獲抗體，其是被生物素化的，以及在其預先結合1200μg/mL抗生物素蛋白之后將其固定，在沒有BSA的條件下將其固定。未免疫的IgG不應當參與三明治復合物并且對于所有的樣品應當都只能給出低信號。如果這個信號高出了選定的范圍，應當被認為是測量偽象造成了與檢測抗體的非特異性結合的増加的指示，這就有假陽性結果的危險。更一般的，可以使用不與相應的檢測試劑配對的任ー結合試劑。任選地，可以選擇共享有測試的捕獲試劑的結構特征的結合試齊U，例如在免疫分析中，其可以包括來自其他捕獲抗體所來源的一種或多種物種的免疫球蛋白。抗DNP點被用作陽性對照。孔也包括干燥的SULF0-TAG標記的抗熒光素(FL)抗體以及給定量的經DNP和FL標記的干BSA(DNP-FL-BSA)。陽性對照信號因此應當給出給定量的DNP-FL-BSA的恒定的陽性信號指示。如果該信號降低到選定的范圍之下，將被用作為樣品干擾結合反應或信號生成的指示，因此這帶來了假陰性結果的危險。更普遍的，陽性對照可以是對可以被插入到反應混合物中的任一分析物的檢測。優選地，在相關樣品中發現該分析物的可能性是低的。捕獲抗體溶液被容許在干燥環境中干燥30分鐘，然后在真空下干燥30到60分鐘。用在材料和方法部分所述的含蔗糖的穩定的洗滌緩沖液洗滌孔，用5%BSA封閉45分鐘，并再用穩定洗滌緩沖液洗滌一次。加入穩定/封閉溶液(20μL的305mM磷酸銨、IOOmM氯化銨、O.02%TRITONX-100、2%蔗糖、2%BSA、和O.02%KATHON防腐剤，pH7.4)，并在真空下干燥孔內的溶液，以便在孔底形成干燥的試劑蛋糕。將STAG標記的檢測抗體(O.5μL濃度在40-240μg/mL的抗BotA、FL、蓖麻毒素、SEB、VEE和YP抗體的穩定/封閉溶液的混合物)的混合物分配(利用帶傾斜分配尖頭的BIO-DOT分配器)到正好處于干燥的試劑壁架的孔壁上，并容許所述溶液向下流到壁架上。將含有80ng/mL陽性對照分析物(DNP-FL-BSA)的溶液分配到對面的孔壁上。檢測抗體和對照溶液被容許在真空下干燥30到60分鐘。然后將板與干燥劑包裝在一起，直到使用。用這些板實施分析的方案是加入80yL樣品(給定量的O.1%TRITONX-100磷酸緩沖液(PBS)中的一種或多種靶向分析物)，搖晃下溫育I個小時，用PBS洗滌，加入150yL的IxMSDREADBUFFERT(MesoScaleDiagnostics，LLC)，并用MSDSector(R)Imager6000裝置分析板。用照射滅活該檢測所用的VEE和YP。用福爾馬林滅活該分析所用的BotA。下面的表顯示出了在每個點上觀察到的不含分析物(_)的樣品或者含有10ng/mLBotA、lng/mL蓖麻毒素、50ng/mLSEBU000ng/mLVEE、或10，000CFU/mLYP的樣品的信號。表顯示了靶向分析物的檢測敏感性和特異性以及陽性和陰性對照點的合適的性能。權利要求1.多孔分析板，其包括板體，所述板體具有限定于其中的多個孔，其中所述多個孔包括(a)結合表面，其具有固定化于其上的捕獲試劑，和(b)可重建的干燥的試劑，其中所述干燥的試劑(i)是獨立存在的，或()位于與所述結合表面不重疊的所述孔的表面。2.權利要求I的多孔分析板，其中所述可重建的干燥的試劑包括標記檢測試劑。3.權利要求2的多孔分析板，其中所述可重建的干燥的試劑固定地位于與所述結合表面不重疊的孔的表面。4.權利要求3的多孔分析板，其中所述結合表面位于所述孔的底面，而所述可重建的干燥的試劑位于所述孔的孔壁。5.權利要求4的多孔分析板，其中所述孔的所述壁包括試劑存放用架狀物，其中所述可重建的干燥的試劑位于所述試劑存放用架狀物。6.權利要求2到5中任一項的多孔板，其中所述結合表面涂覆有可重建的保護層。7.在權利要求2的多孔分析板中實施分析的方法，所述方法包括(a)向所述多個孔的一個或多個孔內加入樣品；(b)重建所述一個或多個孔內的可重建的干燥物質，形成反應混合物；(C)在促進所述捕獲試劑和檢測試劑與它們相應的結合配偶體結合的條件下溫育所述反應混合物；和(d)測定包括所述固定化的捕獲試劑和所述標記的結合試劑的復合物的形成。8.權利要求7的方法，其中所述檢測是三明治結合分析，且所述捕獲試劑和所述檢測試劑可以同時結合于感興趣的分析物。9.權利要求7的方法，其中所述檢測是競爭性結合分析，且所述捕獲試劑結合感興趣的分析物，而所述檢測試劑與所述分析物競爭性結合所述捕獲試劑；或者，所述檢測試劑結合感興趣的分析物，而所述捕獲試劑與所述分析物競爭性結合所述檢測試劑。10.制備用于檢測的多孔分析板的方法，所述方法包括在所述板的至少兩個孔內實施下面的步驟(a)將捕獲試劑固定化于所述板的孔的表面上，以便形成結合表面；(b)將包括標記檢測試劑的液體試劑分配到所述孔的表面上，所述表面與所述結合表面不重疊；和(C)干燥所述液體試劑，以形成可重建的干燥的檢測試劑。11.權利要求10的方法，其中所述結合表面位于所述孔的底面上。12.權利要求11的方法，其中所述液體試劑被分配到所述孔的壁上并干燥。13.權利要求12的方法，其中所述壁包括液體存放用架狀物，且所述液體試劑(i)被分配到所述架狀物上并干燥；或者()被分配到所述壁的位于所述架狀物上方的位置上，使得所述架狀物能夠收集沿著所述壁流下的液體試劑，隨后所述液體試劑在所述架狀物上被干燥。14.權利要求10的方法，還包括(d)將包括分析對照物的額外的液體試劑分配到所述孔的表面上，所述表面與所述結合表面不重疊，所述分析對照物對所述捕獲試劑和/或所述標記檢測試劑具有結合親和力；以及(e)干燥所述額外的液體試劑，以形成可重建的干燥的分析對照物；其中所述干燥檢測試劑和干燥分析對照物沒有物理的接觸。15.權利要求10到14中任一項的方法，還包括將保護試劑分配到所述結合表面上，并干燥所述保護試劑，以便在所述結合表面上形成可重建的保護層，其中在分配包括第一標記的結合試劑的所述液體試劑之前進行所述保護試劑的所述分配和干燥。16.權利要求15的方法，其中所述液體試劑還包括一種或多種額外的標記檢測試劑，且所述標記檢測試劑和額外的標記檢測試劑對結合配偶體具有不同的特異性或親和力。全文摘要本發明提供分析模塊(如分析板、盒、多孔分析板、反應容器等)、其制備方法和用其實施分析的方法。試劑可以游離形式或受固相包括分析模塊隔室(例如室、槽、流動池、孔等)的表面或膠體、珠或其他微粒支持物的表面支持的形式存在。具體地，干燥的試劑可以摻入到這些分析模塊的隔室內并在用于分析方法之前被重建。可以用干燥劑材料將這些試劑保持并穩定于干燥狀態。文檔編號G01N33/53GK102841195SQ20121010949公開日2012年12月26日申請日期2006年12月21日優先權日2005年12月21日發明者E·N·格萊澤爾,B·杰弗里-科克爾,J·D·迪拜德,S·M·庫馬爾,G·西加爾,G·斯皮萊斯,M·契恩克斯基,M·沃諾克申請人:梅索斯卡萊科技公司