小活絡丸中非法添加化學成分的快速篩查方法
【專利摘要】本發明涉及一種小活絡丸中非法添加化學成分的快速篩查方法。首先制備對照品和供試品溶液，然后分別吸取對照品溶液，供試品溶液，點于同一塊硅膠薄層板上，以展開劑上行展開，取出晾干，置紫外光燈下觀察薄層色譜，再噴上硫酸乙醇溶液，并置于烘箱中恒溫加熱至薄層板上的斑點顯色清晰，再置日光下觀察薄層色譜，若與對照品相同比移值處有相同顏色的熒光淬滅斑點或斑點同時出現，則判定樣品結果為陽性。顯然，本發明操作簡便，快速，成本低，既解決了其中的假“陽性”干擾的問題，也避免了傳統采用紅外光譜、HPLC-MS等測定所產生的昂貴費用和大量時間，使有效監控中成藥小活絡丸內是否非法添加化學成分成為可能。
【專利說明】小活絡丸中非法添加化學成分的快速篩查方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及中藥質量檢測領域，具體涉及一種小活絡丸中非法添加化學成分的快速篩查方法。
【背景技術】
[0002]小活絡丸是由膽南星、制川烏、制草烏、地龍、乳香(制)、沒藥(制)共6味中藥飲片組成的中藥制劑。主要功效是祛風散寒，化痰除濕，活血止痛。用于風寒濕邪閉阻、痰瘀阻絡所致的痹病，癥見肢體關節疼痛，或冷痛，或刺痛，或疼痛夜甚、關節屈伸不利、麻木拘攣。其制備方法是將膽南星、制川烏、制草烏、地龍、乳香(制)、沒藥(制)分別粉碎成細粉，過篩，混勻，每IOOg細粉加煉蜜120?130g制成大蜜丸。該中藥制劑成分復雜，臨床用于治療風濕性關節炎、類風濕性關節炎及骨質增生所致的腰痛、腿痛、頸痛、上肢痛等痹證，坐骨神經痛，十二指腸壅積癥等。屬抗風濕類中成藥。為了追求經濟利益，一些不法分子在小活絡丸中非法添加具有解熱、抗炎、止痛作用的廉價化學成分，以達到快速顯效的效果。而患者在不知情的情況下過多攝入這些化學成分后，會對身體造成極大的危害。
[0003]抗風濕類中成藥內非法添加化學成分主要有兩大類:解熱鎮痛類和糖皮質激素類。目前，檢測抗風濕類中成藥內非法添加化學成分的方法均為不限定中成藥具體種類的通用方法。該通用方法涉及所有抗風濕類中成藥，范圍廣，但抗風濕類中成藥種類繁多，而每一種中成藥的組方都各不相同，極易產生假“陽性”干擾，無法明確地判定結果，因此通用方法僅能做到粗篩。而且由于假“陽性”的干擾，所檢測的化學成分僅限于解熱鎮痛類或糖皮質激素類中有限的幾種。如張鶴等“關于抗風濕類中藥制劑中非法添加化學藥品的檢測方法研究”(亞太傳統醫藥.2010.6 (6):31-32)先采用薄層色譜法進行粗篩，而后必須再進一步對其中的陽性樣品采用紅外光譜或高效液相色譜法進行驗證。但由于紅外光譜儀、HPLC-MS、GC-MS儀器昂貴，且必須由專業的技術人員操控，維護費用也極高，無法實現快速篩查達到監控的目的。顯然，完全針對小活絡丸內非法添加多種化學成分構建起能進行快速篩查的方法是非常必要的。因此，為了使在小活絡丸內非法添加化學成分的違法行為得到有效扼制，保障人民群眾用藥安全有效，亟需建立小活絡丸內非法添加化學成分的快速篩查方法。
【發明內容】
[0004]本發明的目的是提供一種小活絡丸中非法添加化學成分的快速篩查方法，以克服現有技術的不足。
[0005]本發明的另一目的是排除小活絡丸和非法添加化學成分的假“陽性”干擾，實現多種非法添加化學成分的快速篩查，達到監控的普及可行。
[0006]小活絡丸是一個中藥制劑，雖然組方藥味不多，但化學成分十分復雜，加之非法添加化學成分，測定時極易出現假“陽性”干擾。通常假“陽性”干擾必須采用紅外光譜儀、HPLC-MS, GC-MS進行成分確證。研究發現，由于小活絡丸中所需篩查的5種化學成分均有溶于甲醇的性質，且甲醇對大蜜丸中的煉蜜溶解度低，因此利用該性質，選用甲醇作為提取溶劑。考慮到小活絡丸是大蜜丸，如不進行分散，該提取溶劑無法滲入到樣品中，不能充分提取待測的化學成分。因此取小活絡丸一丸(3g)，剪碎后，加硅藻土研磨，即可將大蜜丸充分分散。再加入甲醇，將樣品全部浸泡，并采用超聲處理，以有效地將這5種成分提取出來。既可避免小活絡丸中煉蜜的溶出，便于點樣，又可大大減少小活絡丸中其他成分對測定的干擾。又因非法添加的化學成分在薄層板上吸附能力上的不同，再以展開劑篩查出中成藥小活絡丸中是否非法添加了 5種化學成分。
[0007]本發明的快速篩查方法如下
[0008](I)對照品溶液的制備:分別取潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德和醋酸氫化可的松對照品各10mg，用甲醇IOml溶解，制成對照品溶液。
[0009](2)供試品溶液的制備:取小活絡丸3g，剪碎，加硅藻土 2g，研勻，加甲醇，超聲處理，濾過，取濾液作為供試品溶液。
[0010](3)進行篩查測定:分別吸取對照品溶液1μ 1，供試品溶液5μ 1，點于同一塊硅膠GF254薄層板上，以展開劑上行展開，取出，晾干，置紫外光燈(波長254nm)下觀察薄層色譜，然后再噴上10%硫酸乙醇溶液，并置于105°C烘箱中恒溫加熱至薄層板上的斑點顯色清晰，再置日光下觀察薄層色譜。上述二種觀察方式的色譜中，與對照品相同比移值處如有相同顏色的熒光淬滅斑點或斑點同時出現，則可判定樣品結果為陽性。
[0011]上述的展開劑為三氯甲烷-丙酮-甲醇-濃氨試液=18: 6: 2: 0.1(體積比)。
[0012]上述超聲處理的條件為30分鐘，功率250W，頻率50kHz。
[0013]該方法從對照品溶液的制備到對樣品結果進行判定，全過程僅需I小時，而且能在同一塊硅膠GF254薄層板上篩查多個廠家的產品。顯然，本發明方法操作簡便，快速，成本低，既解決了小活絡丸成藥因成分復雜所導致的假“陽性”干擾的問題，也避免了采用紅外光譜、HPLC-MS、GC-MS測定所產生的昂貴費用和大量時間，因此是有效監控中成藥小活絡丸內是否非法添加化學成分成為可能。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0014]圖1:本發明的小活絡丸和潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德、醋酸氫化可的松在紫外光燈(波長254nm)條件下的TLC色譜圖；其中的，1:小活絡丸陰性樣品的供試品溶液；2:小活絡丸陽性樣品的供試品溶液；3:對照品溶液(斑點a:潑尼松龍；斑點b:氫化可的松；斑點c:潑尼松；斑點d:曲安奈德；斑點e:醋酸氫化可的松)。
[0015]圖2:本發明的小活絡丸和潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德、醋酸氫化可的松在日光條件下的TLC色譜圖；其中的，1:小活絡丸陰性樣品的供試品溶液；2:小活絡丸陽性樣品的供試品溶液；3:對照品溶液(斑點a:潑尼松龍；斑點b:氫化可的松；斑點c:潑尼松；斑點d:曲安奈德；斑點e:醋酸氫化可的松)。
[0016]上述的圖1、圖2中的小活絡丸陰性樣品的供試品溶液為不含潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德、醋酸氫化可的松的小活絡丸樣品按照供試品溶液的制備方法制備的供試品溶液。小活絡丸陽性樣品的供試品溶液為含有潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德、醋酸氫化可的松的小活絡丸樣品按照供試品溶液的制備方法制備的供試品溶液。【具體實施方式】
[0017]下面給出詳細的實施例。
[0018]本發明采用:儀器與試藥:SartorisBP211D 電子天平；AUT0 SCIENCE AS10200BT型超聲波清洗器；P/G2007型恒溫烘箱；薄層板:硅膠GF254薄層板(德國MERCK批號:HX929689規格:20X20cm);試劑均為分析純；潑尼松龍對照品(批號:100153-201004)、氫化可的松對照品(批號:100152-200206)、潑尼松對照品(批號:100199-201002)、曲安奈德對照品(批號=100055-201103)、醋酸氫化可的松對照品(批號:100013-200607)，以上對照品均由中國食品藥品檢定研究院提供；小活絡丸(標示批號:130110、20130715、130401、120801、20121201、120012、2111105)。
[0019]色譜條件:展開劑:三氯甲烷-丙酮-甲醇-濃氨試液=18: 6: 2: 0.1(體積比);展開條件:溫度:23°C ;相對濕度:59% ;展距:10cm。
[0020]對照品溶液的制備:分別取潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德和醋酸氫化可的松對照品各10mg，用甲醇IOml溶解，制成對照品溶液。
[0021]供試品溶液的制備:取小活絡丸成品3g，剪碎，加硅藻土 2g，研勻，加甲醇10ml，進行超聲處理，濾過，取濾液作為供試品溶液。
[0022]上述的超聲處理條件為30分鐘，功率250W，頻率50kHz。
[0023]進行篩查測定:分別吸取對照品溶液I μ 1，供試品溶液5 μ 1，點于同一塊硅膠GF254薄層板上，以展開劑上行展開，取出，晾干，置紫外光燈(波長254nm)下觀察薄層色譜，然后再噴上10%硫酸乙醇溶液，并置于105°C烘箱中恒溫加熱至薄層板上的斑點顯色清晰，再置日光下觀察薄層色譜。上述二種觀察方式的色譜中，與對照品相同比移值處如有相同顏色的熒光淬滅斑點或斑點同時出現，則可判定樣品結果為陽性。檢出了 5種化學成分是潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德和醋酸氫化可的松。對應的色譜圖如圖1、圖2。
[0024]結果表明，混合對照品分離效果良好，小活絡丸自身的所有成分對測定無干擾，SP供試品在對照品相同比移值處無干擾成分存在。
[0025]綜上，本發明所建立的薄層色譜法可快速檢測中成藥小活絡丸中是否非法添加了潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德和醋酸氫化可的松這5種化學成分，具有操作簡便，快速，低成本的特點，可以作為小活絡丸中成藥質量監控的普及方法。
【權利要求】
1.一種小活絡丸中非法添加化學成分的快速篩查方法，其特征是首先分別制備對照品溶液(I)和供試品溶液(2)，然后進行篩查測定(3): (1)對照品溶液的制備:分別取潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德和醋酸氫化可的松對照品各10mg，用甲醇IOml溶解，制成對照品溶液； (2)供試品溶液的制備:取小活絡丸一丸，剪碎，加硅藻土，研勻，加甲醇，超聲處理，濾過，取濾液作為供試品溶液； (3)進行篩查測定:分別吸取對照品溶液，供試品溶液，點樣于同一塊硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-丙酮-甲醇-濃氨試液作為展開劑上行展開，取出，晾干，置紫外光燈254nm下觀察薄層色譜，再噴以10%硫酸乙醇溶液，并置于105°C烘箱中恒溫加熱至薄層板上的斑點顯色清晰，再置日光下觀察薄層色譜；若上述二種觀察方式的色譜中，與對照品相同比移值處有相同顏色的熒光淬滅斑點或斑點同時出現，則可判定樣品結果為陽性，檢出了 5種化學成分是潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德和醋酸氫化可的松。
2.如權利要求1所述的快速篩查方法，其特征是上述展開劑三氯甲烷-丙酮-甲醇-濃氨試液的體積比為18: 6: 2: 0.1。
3.如權利要求1所述的快速篩查方法，其特征是上述硅藻土重量為2g。
4.如權利要求1所述的快速篩查方法，其特征是上述權利要求1中的(2)的甲醇體積為 IOmlo
5.如權利要求1所述的快速篩查方法，其特征是上述對照品溶液的點樣體積為Iμ I。
6.如權利要求1所述的快速篩查方法，其特征是上述供試品溶液的點樣體積為5μ I。
7.如權利要求1所述的快速篩查方法，其特征是上述超聲處理的條件為30分鐘，功率250W，頻率 50kHz。
【文檔編號】G01N21/31GK103743692SQ201410041883
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2014年1月28日 優先權日:2014年1月28日
【發明者】焦琦, 吳愛英, 張春輝 申請人:焦琦