基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器的制備及應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器的制備及應用，具體涉及一種硼摻雜金剛石電極制備，乙酰膽堿酯酶的固定及在有機磷農藥殘留檢測中的應用。要解決的技術問題是硼摻雜金剛石薄膜電極電催化活性低、表面再造困難、選擇性及靈敏性較差。本發明包括以下步驟：①在硼摻雜金剛石電極上制備三維納米多孔金并修飾硼摻雜金剛石電極；②將步驟①經過修飾的三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極固定乙酰膽堿酯酶構建成電化學生物傳感器。采用這樣的技術方案后的本發明用于固定乙酰膽堿酯酶，并用于有機磷農藥殘留的電化學檢測，可增加比表面積，促進電子轉移，提高電催化活性，提高檢測的靈敏度。
【專利說明】基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器的制備及應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種電化學生物傳感器，具體涉及一種基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極制備，乙酰膽堿酯酶的固定及在有機磷農藥殘留檢測中的應用。
【背景技術】
[0002]由于有機磷農藥的廣泛使用，對環境造成了嚴重污染，危害人類健康。傳統檢測方法如色譜法等雖然有既定性又定量、準確、靈敏度高等優點，但需要專業的操作人員，儀器很昂貴，而且需要復雜的樣品預處理過程等，因此不能實現快速檢測。電化學檢測方法由于具有響應速度快、操作簡單、靈敏度高、可以實現現場檢測等優點，已作為一種快速檢測手段在有機磷農藥檢測領域得到廣泛的研究。
[0003]作為新型電極材料，硼摻雜金剛石薄膜(BDD)電極具有許多常規電極所不可比擬的優異性，如寬電化學勢窗、低背景電流、極好的電化學穩定性及表面不易被污染等，在電化學領域發展迅速。但同時也存在著缺點，表現為電催化活性低、表面再造困難、選擇性及靈敏性較差。
【發明內容】
[0004]本發明要解決的技術問題是新型電極材料，硼摻雜金剛石薄膜電極電催化活性低、表面再造困難、選擇性及靈敏性較差，提供一種提高電極的電催化活性和靈敏度，有助于乙酰膽堿酯酶的固定的基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器的制備及應用。
[0005]為實現上述目的，本發明采用下述技術方案:一種基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器的制備，它包括以下步驟:①利用模板法和化學生長法在硼摻雜金剛石電極上制備三維納米多孔金并修飾硼摻雜金剛石電極，得到三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極；②將步驟①經過修飾的三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極固定乙酰膽堿酯酶構建成基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器。
[0006]所述的模板法和化學生長法制備三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極包括以下步驟:a、制備單分散性好的粒徑為250-800nm的聚苯乙烯球作為模板山、在硼摻雜金剛石電極(BDD)上預沉積一厚度為4-6nm的薄層的金(Au)納米點作為化學生長法生長金的種子；c、以步驟b中沉積有金納米點的硼摻雜金剛石電極為基片，垂直浸入含有聚苯乙烯球(PS)的懸濁液中，利用垂直提拉儀提拉法，將基片緩慢從懸濁液中提拉就可以得到膜厚均一的聚苯乙烯球模板；d、70-100°C燒結l_5h固定步驟c制得的聚苯乙烯球模板；e、利用化學生長法，將步驟d中得到的組裝有聚苯乙烯球模板的硼摻雜金剛石電極浸入含氯金酸和鹽酸羥胺的水溶液中，振蕩反應5-60分鐘生長金；f、然后將步驟e里振蕩反應后的硼摻雜金剛石電極浸入甲苯中除去PS模板，即可得到基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極。所述的氯金酸和鹽酸羥胺的水溶液為有0.1-1mL濃度為lwt%，氯金酸和0.5-5mL濃度為0.04mol/L的鹽酸羥胺加水配置的15-25mL的水溶液。
[0007]經過修飾的三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極固定乙酰膽堿酯酶采用戊二醛-殼聚糖交聯法。所述的采用戊二醛-殼聚糖交聯法固定乙酰膽堿酯酶包括以下步驟:①用0.05mol/L乙酸緩沖溶液配制質量濃度1%_5%殼聚糖溶液；②取5_10 μ L步驟①配置好的殼聚糖溶液與5-10 μ L的200U/mL乙酰膽堿酯酶溶液混合，再加入5_10 μ L的質量濃度0.5%戊二醛溶液迅速混合；③取步驟②迅速混合的溶液5-10 μ L滴加到三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極表面進行修飾將步驟③修飾好的的三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極在4°C進行干燥0.5-4h，即制得基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器。
[0008]基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器的應用，將固定乙酰膽堿酯酶的基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器應用有機磷農藥的檢測，檢出限為1.0Xl(T12mOl/L。所述的機磷農藥包括甲基對硫磷、對氧磷、毒死蜱、敵敵畏、馬拉硫磷、克百威、久效磷、甲胺磷。
[0009]納米金復合材料導電性好、促進電極表面電子轉移、比表面積大、吸附性強、具有良好生物相容性等優勢，已成功地用于電化學傳感器中，為有機磷農藥殘留的快速檢測提供了一條嶄新的途徑。構建多孔納米結構電極材料，可克服電極本身缺點，提高電極的電催化活性和靈敏度，有助于乙酰膽堿酯酶的固定，其電極在生物傳感器中發揮作用。
[0010]本發明利用模板法和化學生長法制備不同孔徑大小的三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極，利用納米材料的多孔性質固定乙酰膽堿酯酶，用于有機磷農藥殘留的檢測。三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極用于固定乙酰膽堿酯酶，并用于有機磷農藥殘留的電化學檢測，可增加比表面積，促進電子轉移，提高電催化活性，提高檢測的靈敏度。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0011]圖1是硼摻雜金剛石電極結構示意圖。
[0012]圖2是在圖1上沉積金納米點后的硼摻雜金剛石電極的基片的結構示意圖。
[0013]圖3是圖2的基片浸入含有聚苯乙稀球(PS)懸池液的結構不意圖。
[0014]圖4是圖3基片浸入含有聚苯乙烯球(PS)懸濁液后采用提拉法得到的組裝有聚苯乙烯球模板的硼摻雜金剛石電極結構示意圖。
[0015]圖5是圖4采用化學生長法處理后的組裝有聚苯乙烯球模板的硼摻雜金剛石電極。
[0016]圖6是圖5除去聚苯乙烯球模板的硼摻雜金剛石電極結構示意圖。
【具體實施方式】
[0017]如圖1至圖6所示:一種基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器制備方法，它包括以下步驟:①利用模板法和化學生長法在硼摻雜金剛石電極上制備三維納米多孔金并修飾硼摻雜金剛石電極，得到三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極；②將步驟①經過修飾的三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極固定乙酰膽堿酯酶構建成基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器。[0018]所述的模板法和化學生長法制備三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極包括以下步驟:a、制備單分散性好的粒徑為250-800nm的聚苯乙烯球作為模板山、在硼摻雜金剛石電極(BDD)上預沉積一厚度為4-6nm的薄層的金(Au)納米點作為化學生長法生長金的種子；c、以步驟b中沉積有金納米點的硼摻雜金剛石電極為基片，垂直浸入含有聚苯乙烯球(PS)的懸濁液中，利用垂直提拉儀提拉法，將基片緩慢從懸濁液中提拉就可以得到膜厚均一的聚苯乙烯球模板；d、70-100°C燒結l_5h固定步驟c制得的聚苯乙烯球模板；e、利用化學生長法，將步驟d中得到的組裝有聚苯乙烯球模板的硼摻雜金剛石電極浸入含氯金酸和鹽酸羥胺的水溶液中，振蕩反應5-60分鐘生長金；f、然后將步驟e里振蕩反應后的硼摻雜金剛石電極浸入甲苯中除去PS模板，即可得到基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極。所述的氯金酸和鹽酸羥胺的水溶液為有0.1-1mL濃度為lwt%，氯金酸和0.5-5mL濃度為0.04mol/L的鹽酸羥胺加水配置的15-25mL的水溶液。
[0019]經過修飾的三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極固定乙酰膽堿酯酶采用戊二醛-殼聚糖交聯法。所述的采用戊二醛-殼聚糖交聯法固定乙酰膽堿酯酶包括以下步驟:①用0.05mol/L乙酸緩沖溶液配制1%_5%殼聚糖溶液；②取5_10 μ L步驟①配置好的殼聚糖溶液與5-10 μ L的200U/mL乙酰膽堿酯酶溶液混合，再加入5_10 μ L的0.5%戊二醛溶液迅速混合；③取步驟②迅速混合的溶液5-10 μ L滴加到三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極表面進行修飾將步驟③修飾好的的三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極在4°C進行干燥0.5-4h，即制得基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器。
[0020]基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器的應用，將固定乙酰膽堿酯酶的基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器應用有機磷農藥的檢測，檢出限為1.0Xl(T12mOl/L。所述的機磷農藥包括甲基對硫磷、對氧磷、毒死蜱、敵敵畏、馬拉硫磷、克百威、久效磷、甲胺磷。
[0021]利用模板法和化學生長法制備三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極，然后在該電極上固定乙酰膽堿酯酶，并應用于有機磷農藥殘留的檢測。下面結合具體實施例對本發明進行說明。
[0022]實施例1
首先制備單分散性好的250nm的聚苯乙烯球(PS):將1mL質量濃度為3.87%單體苯乙烯，ImL質量濃度為10.17%的甲基丙烯酸，225mL 二次蒸餾水加入到三口瓶中，通入氮氣來除去其中的氧氣，轉速設定在300rpm左右，并開始加熱；升溫至70°C，待溫度穩定后加入引發劑過硫酸鉀0.3239g ;加入引發劑13小時之后，停止加熱，反應完畢，即得直徑250nm左右的聚苯乙烯球(PS)。
[0023]在硼摻雜金剛石電極上預沉積一厚度為5nm的薄層的金(Au)納米點作為化學生長法生長金的種子。基于單分散性好的納米粒子可以自組裝的特性，以沉積有金納米點的硼摻雜金剛石電極為基片，利用垂直提拉儀提拉法，將基片緩慢從懸濁液中提拉得到膜厚均一的聚苯乙烯球模板；70-10(TC燒結5h固定聚苯乙烯球模板；利用化學生長法將組裝有聚苯乙烯球模板的硼摻雜金剛石電極垂直浸入含氯金酸(lwt%，0.1mL)和鹽酸羥胺(0.04mol/L,0.5mL)的20mL水溶液，振蕩反應5分鐘生長金，洗滌后再浸入甲苯除去PS模板，即可得到三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極。
[0024]用0.05mol/L乙酸緩沖溶液配制1%殼聚糖溶液，取5 μ L該溶液與5 μ L的200U/mL乙酰膽堿酯酶溶液混合，再加入5 μ L的0.5%戊二醛溶液，迅速混合后取5 μ L滴加到三維納米多孔硼摻雜金剛石電極電極表面；將修飾好的的電極在4°C進行干燥2h，即制得基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器。
[0025]選用10_n-10_6mol/L濃度范圍的甲基對硫磷溶液進行定量測定，確定該電化學生物傳感器的檢出限為6.0X 10_12mOl/L。
[0026]實施例2
制備單分散性好的300nm的聚苯乙烯球(PS)，制備步驟如實施案例I類似。
[0027]在硼摻雜金剛石電極上預沉積一厚度為4nm的薄層的金(Au)納米點作為化學生長法生長金的種子。基于單分散性好的納米粒子可以自組裝的特性，以沉積有金納米點的BDD電極為基片，利用垂直提拉儀提拉法，將基片緩慢從懸濁液中提拉得到膜厚均一的聚苯乙烯球模板；70-100°C燒結4h固定聚苯乙烯球模板；利用化學生長法將組裝有聚苯乙烯球模板的硼摻雜金剛石電極垂直浸入含氯金酸(lwt%, 0.3mL)和鹽酸輕胺(0.04mol/L, ImL)的20mL水溶液，振蕩反應10分鐘生長金，洗滌后再浸入甲苯除去PS模板，即可得到三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極。 [0028]用0.05mol/L乙酸緩沖溶液配制2%殼聚糖溶液，取10 μ L該溶液與10 μ L的200U/mL乙酰膽堿酯酶溶液混合，再加入10 μ L的0.5%戊二醛溶液，迅速混合后取5 μ L滴加到三維納米多孔金硼摻雜金剛石電極表面；將修飾好的的電極在4°C進行干燥2h，即制得基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器。
[0029]選用10_n-10_6mol/L濃度范圍的毒死蜱溶液進行定量測定，確定該電化學生物傳感器的檢出限為4.0 X 10_12mol/L。
[0030]實施例3
制備單分散性好的520nm的聚苯乙烯球(PS)。苯乙烯和蒸餾水先加入到圓底三頸燒瓶中，攪拌下通氮氣驅氧15min后，升溫到指定溫度并恒溫20min,加入3.5X10_3mol/L的引發劑過硫酸鉀水溶液開始聚合。聚合反應在氮氣保護下進行，苯乙烯濃度為
0.88mol -L-1,聚合時間為12h。反應結束后，冷卻至室溫，得到的聚合物乳液用300nm微孔濾膜抽濾，反復用雙蒸水洗滌。
[0031]在硼摻雜金剛石電極上預沉積一厚度為6nm的薄層的金(Au)納米點作為化學生長法生長金的種子。基于單分散性好的納米粒子可以自組裝的特性，以沉積有Au納米點的硼摻雜金剛石電極為基片，利用垂直提拉儀提拉法，將基片緩慢從懸濁液中提拉得到膜厚均一的聚苯乙烯球模板；70-10(TC燒結3h固定聚苯乙烯球模板；利用化學生長法將組裝有聚苯乙烯球模板的硼摻雜金剛石電極垂直浸入含氯金酸(lwt%，0.5mL)和鹽酸羥胺(0.04mol/L, 1.5mL)的20mL水溶液，振蕩反應20分鐘生長金，洗滌后再浸入甲苯除去PS模板，即可得到三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極。
[0032]用0.05mol/L乙酸緩沖溶液配制2%殼聚糖溶液，取10 μ L該溶液與10 μ L的200U/mL乙酰膽堿酯酶溶液混合，再加入10 μ L的0.5%戊二醛溶液，迅速混合后取5 μ L滴加到三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極表面；將修飾好的的電極在4°C進行干燥2h，即制得基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器。
[0033]選用10_n-10_6mol/L濃度范圍的馬拉硫磷溶液進行定量測定，確定該電化學生物傳感器的檢出限為1.0X10_12mol/L。[0034]實施例4
制備單分散性好的600nm的聚苯乙烯球(PS),引發劑過硫酸鉀濃度為6.6 X 1(T3 mol/L，制備步驟如實施案例3類似。
[0035]在硼摻雜金剛石電極上預沉積一厚度為5nm的薄層的金(Au)納米點作為化學生長法生長金的種子。基于單分散性好的納米粒子可以自組裝的特性，利用垂直提拉儀提拉法，將基片緩慢從懸濁液中提拉得到膜厚均一的聚苯乙烯球模板；70-100°C燒結2h固定聚苯乙烯球模板；利用化學生長法將組裝有聚苯乙烯球模板的硼摻雜金剛石電極垂直浸入含氯金酸(lwt%, 0.6mL)和鹽酸羥胺(0.04mol/L, 2.5mL)的20mL水溶液，振蕩反應30分鐘生長金，洗滌后再浸入甲苯除去PS模板，即可得到三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極。
[0036]用0.05mol/L乙酸緩沖溶液配制2%殼聚糖溶液，取8 μ L該溶液與8 μ L的200U/mL乙酰膽堿酯酶溶液混合,再加入8 μ L的0.5%戍二醒溶液,迅速混合后取5 μ L滴加到三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極表面；將修飾好的的電極在4°C進行干燥2h，即制得基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器。
[0037]選用10_n-10_6mol/L濃度范圍的甲胺磷溶液進行定量測定，確定該電化學生物傳感器的檢出限為2.0 X 10_12mol/L。
[0038]實施例5
制備單分散性好的700nm的聚苯乙烯球(PS),引發劑過硫酸鉀濃度為8.3 X 1(T3 mol/L，制備步驟如實施案例3類似。
[0039]在硼摻雜金剛石電極上預沉積一厚度為6nm的薄層的金(Au)納米點作為化學生長法生長金的種子。基于單分散性好的納米粒子可以自組裝的特性，以沉積有Au納米點的BDD電極為基片，利用垂直提拉儀提拉法，將基片緩慢從懸濁液中提拉得到膜厚均一的聚苯乙烯球模板；70-10(TC燒結2h固定聚苯乙烯球模板；利用化學生長法將組裝有聚苯乙烯球模板的硼摻雜金剛石電極浸入含氯金酸(lwt%, 0.8mL)和鹽酸輕胺(0.04mol/L, 4mL)的20mL水溶液，振蕩反應40分鐘生長金，洗滌后再浸入甲苯除去PS模板，即可得到三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極。
[0040]用0.05mol/L乙酸緩沖溶液配制5%殼聚糖溶液，取7 μ L該溶液與7 μ L的200U/mL乙酰膽堿酯酶溶液混合，再加入7 μ L的0.5%戊二醛溶液，迅速混合后取5 μ L滴加到三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極表面；將修飾好的的電極在4°C進行干燥2h，即制得基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器。
[0041]選用10_n-10_6mol/L濃度范圍的克百威溶液進行定量測定，確定該電化學生物傳感器的檢出限為3.0 X 10_12mol/L。
[0042]實施例6
制備單分散性好的800nm的聚苯乙烯球(PS),引發劑過硫酸鉀濃度為9.9 X 1(T3 mol/L，制備步驟如實施案例3類似。
[0043]在硼摻雜金剛石電極上預沉積一厚度為5nm的薄層的金(Au)納米點作為化學生長法生長金的種子。基于單分散性好的納米粒子可以自組裝的特性，以沉積有Au納米點的BDD電極為基片，利用垂直提拉儀提拉法，將基片緩慢從懸濁液中提拉得到膜厚均一的聚苯乙烯球模板；70-100°C燒結Ih固定聚苯乙烯球模板；利用化學生長法將組裝有聚苯乙烯球模板的硼摻雜金剛石電極垂直浸入含氯金酸(lwt%，ImL)和鹽酸羥胺(0.04mol/L, 5mL)的20mL水溶液，振蕩反應60分鐘生長金，洗滌后再浸入甲苯除去PS模板，即可得到三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極。
[0044]用0.05mol/L乙酸緩沖溶液配制3%殼聚糖溶液，取5 μ L該溶液與5 μ L的200U/mL乙酰膽堿酯酶溶液混合，再加入5 μ L的0.5%戊二醛溶液，迅速混合后取5 μ L滴加到三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極表面；將修飾好的的電極在4°C進行干燥2h，即制得基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器。
[0045]選用10_n-10_6mol/L濃度范圍的久效磷溶液進行定量測定，確定該電化學生物傳感器的檢出限為2.0 X 10_12mol/L。
【權利要求】
1.一種基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器的制備，其特征在于:它包括以下步驟:①利用模板法和化學生長法在硼摻雜金剛石電極上制備三維納米多孔金并修飾硼摻雜金剛石電極，得到三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極；②將步驟①經過修飾的三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極固定乙酰膽堿酯酶構建成基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器。
2.根據權利要求1所述的基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器的制備，其特征在于:所述的模板法和化學生長法制備三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極包括以下步驟:a、制備單分散性好的粒徑為250-800nm的聚苯乙烯球作為模板；b、在硼摻雜金剛石電極(BDD)上預沉積一厚度為4-6nm的薄層的金(Au)納米點作為化學生長法生長金的種子；c、以步驟b中沉積有金納米點的硼摻雜金剛石電極為基片，垂直浸入含有聚苯乙烯球(PS)的懸濁液中，利用垂直提拉儀提拉法，將基片緩慢從懸濁液中提拉就可以得到膜厚均一的聚苯乙烯球模板；d、70-100°C燒結l_5h固定步驟c制得的聚苯乙烯球模板；e、利用化學生長法，將步驟d中得到的組裝有聚苯乙烯球模板的硼摻雜金剛石電極浸入含氯金酸和鹽酸羥胺的水溶液中，振蕩反應5-60分鐘生長金；f、然后將步驟e里振蕩反應后的硼摻雜金剛石電極浸入甲苯中除去PS模板，即可得到基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極。
3.根據權利要求2所述的基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器的制備，其特征在于:所述的氯金酸和鹽酸羥胺的水溶液為有0.1-1mL濃度為lwt%，氯金酸和0.5-5mL濃度為0.04mol/L的鹽酸羥胺加水配置的15_25mL的水溶液。
4.根據權利要求1所述的基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器的制備，其特征在于:經過修飾的三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極固定乙酰膽堿酯酶采用戊二醛-殼聚糖交聯法。
5.根據權利要求4所述的基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器的制備，其特征在于:所述的采用戊二醛-殼聚糖交聯法固定乙酰膽堿酯酶包括以下步驟:①用0.05mol/L乙酸緩沖溶液配制質量濃度1%_5%殼聚糖溶液；②取5_10 μ L步驟①配置好的殼聚糖溶液與5-10 μ L的200U/mL乙酰膽堿酯酶溶液混合，再加入5_10 μ L的質量濃度0.5%戊二醛溶液迅速混合；③取步驟②迅速混合的溶液5-10 μ L滴加到三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極表面進行修飾將步驟③修飾好的的三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極在4°C進行干燥0.5-4h，即制得基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器。
6.根據權利要求書1-5所述的基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器的應用，其特征在于:將固定乙酰膽堿酯酶的基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器應用有機磷農藥的檢測，檢出限為1.0X10_12mol/L。
7.根據權利要求6所述的基于三維納米多孔金修飾硼摻雜金剛石電極的電化學生物傳感器的應用，其特征在于:所述的機磷農藥包括甲基對硫磷、對氧磷、毒死蜱、敵敵畏、馬拉硫磷、克百威、久效磷、甲胺磷。
【文檔編號】G01N27/26GK104034777SQ201410231351
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2014年5月29日 優先權日:2014年5月29日
【發明者】衛敏, 謝巖黎, 金華麗 申請人:河南工業大學