標志物及其應用、試劑盒、該標志物的檢測方法與流程

本發明涉及生物
技術領域：
，特別涉及標志物及其應用、試劑盒、該標志物的檢測方法。
背景技術：
：類風濕關節炎(RheumatoidArthritis，RA)是一種主要以關節滑膜炎癥反應為病理改變的慢性自身免疫性疾病。RA的病變過程與患者體內產生多種自身抗體并與相應抗原形成抗原抗體免疫復合物(ICs)密切相關，部分循環中的ICs可反復沉積于關節滑膜組織，通過激活補體系統級聯反應引起滑膜炎癥，造成關節損傷。RA患者關節液和血清中的ICs可促進軟骨細胞的生長、NO的生成和細胞凋亡，提示ICs在RA發病中扮演著重要的作用。ICs在RA檢測中具有較高的敏感性，ICs持續增高常提示RA患者預后較差。只有含有IgG和IgM類抗體的復合物才能活化補體的經典途徑而引起炎癥。這兩類抗體在血清中含量較大，是構成免疫復合物的主要抗體；可溶性抗原與相應抗體形成的較大免疫復合物活化補體的能力較強。IgG抗體為雙價，可與相應的多價抗原交互結合形成較大的免疫復合物；IgM分子可形成更大的免疫復合物。抗原－抗體親和力高時易形成大而穩定的免疫復合物。RA患者關節液和血清中存在較高水平的瓜氨酸肽與ACPA形成的免疫復合物，正常情況下，抗原抗體復合物在機體中被吞噬清除，然而在病例狀態下，ICs可誘發炎癥反應。RA發病過程中伴隨多種免疫活性細胞如T細胞、B細胞、巨噬細胞、滑膜成纖維細胞(Fibroblast-likesynovicyte,FLS)和中性粒細胞等的活化及細胞因子(IL6、TNF-α)、趨化因子和炎性介質的釋放。RAFLS增殖與局部關節炎癥和血管翳形成、骨破壞密切相關，FLS增殖和細胞因子分泌異常在RA發病過程中發揮關鍵作用。RA血清中存在含有瓜氨酸化蛋白與ACPA的ICs具有促FLS增殖能力，并可刺激FLS分泌更多細胞因子，參與RA發病機制。自身免疫性是類風濕關節炎的主要特征,最佳例證是血漿中可檢測出高滴度的自身抗體,其中研究最為透徹的是類風濕因子(rheumatoidfactors，RF)，但RF不只在RA中出現,也可見于正常人,并在其他一些疾病中升高。近年來，抗瓜氨酸化蛋白抗體(anti-citrullinatedproteinantibodies，ACPA)雖然在RA常規診斷中尚未完全取代RF的地位，但其已成為診斷RA的首選指標。總體而言，ACPA與RF敏感性相近，但特異性更高。這些抗體識別轉錄后被瓜氨酸化的多種蛋白，包括聚絲蛋白(filaggrin)、波形蛋白(vimentin)、α和β纖維蛋白(α-andβ-fibrin)、α-烯醇化酶(α-enolase)及I型和Ⅱ型膠原多肽(TypeIandtypeⅡcollagen)。ACPA的檢測是通過ELISA法檢測血清對環瓜氨酸多肽(CCP)的反應。最初的臨床檢驗以檢測抗瓜氨酸化聚絲蛋白的環狀多肽的反應為基礎，因為環瓜氨酸多肽與天然構象表位更為接近，從而提高的實驗結果的準確性。目前這一實驗已被結果更準確的第二代試驗——抗CCP2Elisa——所取代，它使用從瓜氨酸化多肽庫中篩選的瓜氨酸化多肽，這些瓜氨酸化的多肽均為人工合成。近期研究顯示瓜氨酸化殘基可在肺和滑膜表達，ACPA的產生可能為肽基精氨酸脫亞胺酶(Peptidylargininedeiminase，PAD)介導的蛋白在肺及滑膜脫亞氨基作用而致。這些蛋白可被特異性抗原遞呈細胞或通過B細胞形成的免疫復合物所攝取，并遞呈給T細胞，促進激活ACPA反應性B細胞。目前關于RF的檢測特異性較低；采用人工合成瓜氨酸化多肽用于ACPA的檢測，僅可以反映自生抗體的水平，且ACPA水平未必與疾病狀態相關聯。技術實現要素：有鑒于此，本發明提供標志物及其應用、試劑盒、該標志物的檢測方法。本發明的目的是利用內源瓜氨酸化抗原與ACPA可以形成抗原抗體免疫復合物的原理，尋找和摸索一種瓜氨酸化抗原抗體免疫復合物的檢測方法及相關ELISA試劑盒，不僅可以反映ACPA的水平，還可以反映瓜氨酸化抗原抗體免疫復合物的水平，并且瓜氨酸化抗原抗體免疫復合物與疾病狀態相關聯，其量的變化可以直接反映病情的進展情況和治療的效果評價，以實現快速、準確、方便診斷和評價RA的目的。為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：本發明提供了一種標志物(ECP)，其為內源瓜氨酸化抗原與抗瓜氨酸化抗體的免疫復合物。利用內源RA特異性瓜氨酸化蛋白抗原檢測ACPA，其結果不僅可以反映患者血清中ACPA的水平，還可以進一步反映患者內源瓜氨酸化抗原與ACPA抗原抗體復合物的水平或免疫復合物反應的能力，循環中的ECP可反復沉積于關節滑膜組織引起滑膜炎癥，造成關節損傷。因此，ECP不僅可作為RA診斷和判斷預后的生物學標志，并且可在疾病進展中發揮作用，對于目前的理論研究和臨床實踐將具有重要的意義。RA患者血清中具有天然構象表位的瓜氨酸化蛋白更易于與ACPA形成抗原抗體免疫復合物，目前尚未有關利用內源瓜氨酸化蛋白抗原檢測ACPA的方法。本發明利用內源瓜氨酸化抗原與ACPA可以形成抗原抗體免疫復合物的原理，尋找和摸索一種瓜氨酸化抗原抗體免疫復合物的檢測方法及相關ELISA試劑盒，不僅可以反映ACPA的水平，還可以反映瓜氨酸化抗原抗體免疫復合物的水平，并且瓜氨酸化抗原抗體免疫復合物與疾病狀態相關聯，其量的變化可以直接反映病情的進展情況和治療的效果評價，以實現快速、準確、方便診斷和評價RA的目的。在本發明的一些具體實施方案中，所述標志物中所述內源瓜氨酸化抗原為一類內源瓜氨酸化蛋白質。在本發明的一些具體實施方案中，所述標志物中所述抗瓜氨酸化抗體為IgG和/或IgM類抗體。本發明還提供了所述標志物相應的所述抗瓜氨酸化抗體在制備類風濕關節炎的診斷試劑或診斷工具中的應用。在本發明的一些具體實施方案中，本發明提供的所述應用中所述診斷工具為診斷試劑盒。本發明還提供了一種試劑盒，包括抗瓜氨酸化抗體和檢測中可接受的試劑；所述抗瓜氨酸化抗體與待測樣品中內源瓜氨酸化抗原形成所述標志物。在本發明的一些具體實施方案中，本發明提供的所述試劑盒中所述試劑還包括載體、封閉液、洗滌液、樣品稀釋液、標記抗體、底物、顯色液、終止液中的一種或兩者以上的混合物。本發明涉及的瓜氨酸化抗原抗體免疫復合物的檢測方法及相關ELISA試劑盒，包括抗瓜氨酸化抗體預包被的載體、標記好的抗人IgG/IgM抗體以及相關的樣品稀釋液、洗滌液、顯色液、終止液。在本發明的一些具體實施方案中，上述抗瓜氨酸化抗體是指采用PAD催化牛血清白蛋白(BSA)形成的具有多種瓜氨酸化位點的BSA(cit-BSA)作為抗原免疫動物產生的抗瓜氨酸化抗體。具體位點為BSA蛋白的所有可以被瓜氨酸化的精氨酸位點；所述抗體可由市場購買得到。在本發明的一些具體實施方案中，上述cit-BSA可以用其它蛋白，尤其是人關節滑膜特有蛋白經PAD等酶催化形成瓜氨酸化蛋白抗原免疫動物獲得抗人瓜氨酸化抗體。具體有PAD4/PAD2兩種酶，可以將蛋白質上的精氨酸位點催化形成瓜氨酸。在本發明的一些具體實施方案中，上述抗瓜氨酸化抗體預包被的載體是指將抗瓜氨酸化抗體以包被緩沖液稀釋至0.5-100ug/ml，常規包被的酶標板。在本發明的一些具體實施方案中，上述標記好的抗人IgG抗體是指以常規方法經酶標記、化學發光物質標記、熒光素標記或金標記的抗人IgG，其種屬來源要求與制備瓜氨酸化抗體的種屬來源一致。本發明還提供了所述試劑盒在檢測類風濕性關節炎中的應用。本發明還提供了所述標志物的檢測方法，包括如下步驟：步驟1：取載體包被所述抗瓜氨酸化抗體，與待測樣品混合，孵育，獲得包含有樣品待測液的載體；步驟2：取載體包被所述抗瓜氨酸化抗體，與陰性參考樣品混合，孵育，獲得包含有陰性參考樣品待測液的載體；步驟3：分別取步驟1制得的包含有樣品待測液的載體與步驟2制得的包含有陰性參考樣品待測液的載體，洗滌后，分別與標記二抗混合，孵育，洗滌，顯色，檢測所述待測樣品的光吸收值和所述陰性參考樣品的光吸收值，獲得所述標志物的濃度。在本發明的一些具體實施方案中，本發明提供的所述檢測方法步驟3中所述獲得所述標志物的濃度＝所述待測樣品的光吸收值/所述陰性參考樣品的光吸收值。本發明還提供了一種類風濕性關節炎的檢測方法，根據所述標志物的濃度獲得檢測結果。在本發明的一些具體實施方案中，本發明提供的所述檢測方法，檢測結果為半定量檢測結果，用S/N值來表示。所述標志物檢測結果S/N大于3.2為陽性；所述標志物檢測結果S/N小于等于3.2為陰性。本發明利用內源瓜氨酸化抗原與ACPA可以形成抗原抗體免疫復合物的原理，尋找和摸索一種瓜氨酸化抗原抗體免疫復合物的檢測方法及相關ELISA試劑盒，不僅可以反映ACPA的水平，還可以反映瓜氨酸化抗原抗體免疫復合物的水平，并且瓜氨酸化抗原抗體免疫復合物與疾病狀態相關聯，其量的變化可以直接反映病情的進展情況和治療的效果評價，以實現快速、準確、方便診斷和評價RA的目的。與現有技術相比，本發明提供一種瓜氨酸化抗原抗體免疫復合物(ECP)檢測方法，其優點可以歸納如下：1.與類風濕因子檢測相比，本發明具有更高的特異性(90％以上)，且具有較高的靈敏度。2.與ACPA檢測相比，本發明的方法不用人工合成的瓜氨酸化多肽，避免了由于人工合成瓜氨酸肽種類的差異造成各ACPA檢測方法之間的差異。3.本發明利用內源瓜氨酸化蛋白與ACPA形成免疫復合物，從而不僅可以檢測到ACPA，而且可以檢測到瓜氨酸化抗原抗體免疫復合物。4.本發明僅用常規ELISA方法即可檢測瓜氨酸化抗原抗體免疫復合物，方法簡單，耗時短。5.循環中的ECP可反復沉積于關節滑膜組織，通過激活補體系統級聯反應引起滑膜炎癥，造成關節損傷。6.RA患者體內瓜氨酸化抗原抗體形成免疫復合物的能力與水平對于RA診斷，病情評估及發病機制研究具有重要的指導作用和意義。附圖說明為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。圖1示本發明檢測原理；其中圖1(A)示內源瓜氨酸化蛋白與ACPA形成瓜氨酸化抗原抗體免疫復合物(ECP)示意圖；圖1(B)示ECPElisa檢測原理示意圖；圖2示不同稀釋倍數下樣品血清ECP檢測水平；圖3示正常人與RA患者ECP水平比較。具體實施方式本發明公開了標志物及其應用、試劑盒、該標志物的檢測方法，本領域技術人員可以借鑒本文內容，適當改進工藝參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明。本發明的方法及應用已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本
發明內容、精神和范圍內對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本發明技術。本發明技術方法的原理是：以抗人瓜氨酸化抗體作為一抗包被，加樣孵育時樣品中存在的瓜氨酸化蛋白與ACPA形成免疫復合物(ECP)，ECP免疫復合物中的瓜氨酸化蛋白與包被的一抗結合，經洗滌除去未結合蛋白，加入標記抗人IgG/IgM抗體作為二抗，標記二抗與ECP免疫復合物中的ACPA結合，經洗滌除去未結合的標記二抗，加入二抗標記相對應的底物進行反應，使用相關儀器檢測反應結果，結果高低反映了樣品中ECP的含量水平(見圖1)。本發明涉及的瓜氨酸化抗原抗體免疫復合物的檢測方法及相關ELISA試劑盒，包括抗瓜氨酸化抗體預包被的載體、標記好的抗人IgG/IgM抗體以及相關的樣品稀釋液、洗滌液、顯色液、終止液。其中，上述抗瓜氨酸化抗體是指采用PAD催化牛血清白蛋白(BSA)形成的具有多種瓜氨酸化位點的BSA(cit-BSA)作為抗原免疫動物產生的抗瓜氨酸化抗體。具體位點為BSA蛋白的所有可以被瓜氨酸化的精氨酸位點；所述抗體可由市場購買得到。其中，上述cit-BSA可以用其它蛋白，尤其是人關節滑膜特有蛋白經PAD等酶催化形成瓜氨酸化蛋白抗原免疫動物獲得抗人瓜氨酸化抗體。具體有PAD4/PAD2兩種酶，可以將蛋白質上的精氨酸位點催化形成瓜氨酸。其中，上述抗瓜氨酸化抗體預包被的載體是指將抗瓜氨酸化抗體以包被緩沖液稀釋至0.5-100ug/ml，常規包被的酶標板。其中，上述標記好的抗人IgG抗體是指以常規方法經酶標記、化學發光物質標記、熒光素標記或金標記的抗人IgG，其種屬來源要求與制備瓜氨酸化抗體的種屬來源一致。具體技術方案如下：1)抗體制備采用PAD催化牛血清白蛋白(BSA)形成的具有多種瓜氨酸化位點的BSA(cit-BSA)，取健康免疫動物，用cit-BSA作為抗原進行免疫，第一次以抗原加卡介苗和弗氏佐劑研勻，注射動物勁淋巴結或皮下肌肉組織，每二周1次，共免疫4-5次，抗原量根據動物體重增減,免疫最后一次的二周后采血，動物抗血清用飽和硫酸銨二級沉淀后上離子交換層析柱,得到動物抗人瓜氨酸化抗體，測定效價，冷凍備用。所用抗體由市場購買，也可以按照此制備方法制備獲得。2)抗體標記動物抗人IgG/IgM抗體采用常規方法經酶標記、化學發光物質標記或熒光素標記。3)包被抗體聚苯乙烯微孔板制備取抗人瓜氨酸化抗體，用0.01M，pH7.4PBS緩沖液稀釋到0.5-100ug/ml，每孔加量100微升加入到聚苯乙烯微孔板底部，并于2-8℃條件孵育8-48小時；取出用0.01-0.5％TritonX-100洗滌4次，然后加入0.5-5％脫脂奶粉室溫封閉0.5-3小時，倒掉封閉液，37℃烘干0.5-3小時，用鋁箔袋密封包裝。其中，聚苯乙烯微孔板可采用磁珠或其它具有抗體吸附能力的介質代替。4)其他應用試劑：(1)包被緩沖液：PBS緩沖液(0.01M,PH7.4)；(2)封閉液：BSA、脫脂奶粉、酪蛋白(濃度在0.1％到5％范圍)；(3)稀釋液：BSA、脫脂奶粉、酪蛋白(濃度在0.1％到5％范圍)；(4)洗滌液：Tween20、TritonX-100(濃度在0.05％到1％范圍)；(5)顯色液：TMB(6)終止液：硫酸(7)其它：用于酶標記、化學發光物質標記或熒光素標記相對應的底物及相關試劑。5)ECP診斷試劑盒的具體操作方法：A.用0.5-5％脫脂奶粉稀釋樣品血清或血漿5-100倍，滴加100ul的上述樣品于ELISA反應板的樣品孔中；選取其余孔加入陰性參考品和陽性參考品；B.將反應板置于室溫孵育0.5-3小時，使血清或血漿中瓜氨酸化蛋白與反應板板上的抗體交聯，同時存在于血清或血漿中的ACPA與瓜氨酸化蛋白交聯形成抗原抗體免疫復合物；C.用0.01-0.5％TritonX-100洗滌液洗板4次，每次洗板0.5-5min，洗去未交聯蛋白；D.用5％脫脂奶粉稀釋辣根過氧化物酶(HRP)標記的抗人IgG抗體1:500-1:20000倍，滴加100ul抗體于反應板樣品孔中，將平板置于室溫孵育0.5-3h，使抗人IgG抗體與反應板上已吸附的ACPA結合；E.用0.01-0.5％TritonX-100洗滌液洗板4次，每次洗板0.5-5min，洗去未交聯抗人IgG抗體；F.滴加100ul含顯色劑TMB的顯色液，室溫下顯色反應30min；G.滴加100ul1M硫酸的終止液終止反應；H.用酶標儀或分光光度計在400-500nm波長范圍內選取最適吸光度下檢測光吸收值，同時以600-650nm任取一波長同時測定作為背景參考，以待測樣品吸光度與陰性參考品吸光度的比值代表樣品中ECP的濃度水平。其中，上述抗人IgG/IgM抗體可以為酶標記、化學發光物質標記或熒光素標記；其中，上述所用底物對應于各自相對應的酶標記、化學發光物質標記或熒光素標記。(1)瓜氨酸化抗原抗體免疫復合物(ECP)可以作為類風濕關節炎(RA)體外診斷的一種生物標志物。(2)針對(1)中的生物標志物——ECP，發明了一種檢測此生物標志物的Elisa方法。該方法可同時檢測含IgG和IgM類抗體的瓜氨酸化抗原抗體免疫復合物，也可以分別檢測含IgG類抗體的ECP和含IgM類抗體的ECP。(3)用于檢測ECP的Elisa試劑盒包括了包被酶標板、封閉液、洗滌液、樣品稀釋液，酶標抗體、底物、終止液。(4)(3)中所述包被酶標板是指用抗瓜氨酸化抗體包被，經洗滌，封閉，干燥，封裝而制成的酶標板。(5)(4)中所述的瓜氨酸化抗體是指用體外催化形成的瓜氨酸化蛋白作為抗原免疫動物產生的抗瓜氨酸化抗體。(6)(4)中所述抗瓜氨酸化抗體包被濃度為0.5-100ug/ml；包被體積為50-200ul，所用包被緩沖液為常規PBS或碳酸鹽緩沖液；包被條件為2-8℃下包被8-48小時或37℃條件下包被1-8小時；(7)(4)中所述洗滌液為0.01-0.5％TritonX-100或0.01-0.5％Tween20，采用常規PBS緩沖液配制，采用手工或機器洗板。(8)(4)中所述樣品稀釋液為0.1％-5％BSA、脫脂奶粉或酪蛋白，采用常規PBS緩沖液配制。(9)(4)中所述酶標板為聚苯乙烯材質，聚氯乙烯材質，或可用磁珠或其它可與抗體穩定結合的材質制成。(10)(3)中所述封閉液為0.1％-5％BSA、脫脂奶粉或酪蛋白，采用常規PBS緩沖液配制。(11)(3)中所述酶標抗體為抗人IgG/IgM抗體，采用酶標記、化學發光物質標記或熒光素標記。(12)(3)中所述底物與酶標抗體所采用的標記相對應使用。(13)ECP檢測特異性高，在90％以上,且具有較高的靈敏度；(14)ECP檢測即可以反映ACPA的水平，又可以反映抗原抗體形成復合物的能力和水平。(15)循環中的ECP可反復沉積于關節滑膜組織，通過激活補體系統級聯反應引起滑膜炎癥，造成關節損傷。ECP與疾病狀態相關聯，其量的變化可以直接反映病情的進展情況和治療的效果評價。本發明提供的標志物及其應用、試劑盒、該標志物的檢測方法中所用原料及試劑均可由市場購得。下面結合實施例，進一步闡述本發明：實施例1測定一例RA病人血清不同稀釋度下的瓜氨酸化抗原抗體免疫復合物(ECP)水平1)血清制備采用不添加任何抗凝劑的采血管收集RA患者的新鮮血液，用離心機在3000轉離心10min，收集上清液即為血清，置于-20℃～-80℃保存備用。2)ECPElisa檢測試劑盒準備包被酶標板；樣品稀釋液(5％脫脂奶粉)；洗滌液(0.5％TritonX-100)；酶標抗體；顯色液(TMB)；終止液(1M硫酸)。3)實驗操作步驟A.將血清樣品用樣品稀釋液稀釋10倍、20倍、50倍、100倍；分別加入反應板的樣品孔中，每孔加入體積為100ul；B.室溫(25℃)孵育1小時；C.每孔加入洗滌液200ul，洗板4次，每次洗板2min；D.將酶標抗體用樣品稀釋液按1:10000稀釋，每孔加入稀釋酶標抗體100ul；E.室溫(25℃)孵育1小時；F.每孔加入洗滌液200ul，洗板4次，每次洗板2min；G.每孔加入顯色液100ul；室溫(25℃)顯色反應30min；H.每孔加入終止液100ul；I.用酶標儀450nm下檢測各孔的光吸收值(結果見圖2及表1)。表1血清不同稀釋度下的瓜氨酸化抗原抗體免疫復合物(ECP)水平稀釋倍數OD10倍1.07820倍0.61950倍0.490100倍0.300結果表明樣品稀釋倍數對檢測結果的影響，稀釋倍數與OD值呈線性關系。本發明可同時檢測含IgG和IgM類抗體的瓜氨酸化抗原抗體免疫復合物，也可以分別檢測含IgG類抗體的ECP和含IgM類抗體的ECP，按照上述檢測方法，檢測不同的抗體的ECP，結果見表2。表2采用不同三抗用于檢測含不同抗體的ECP采用的三抗檢測含不同抗體的ECP檢測結果(S/N)標記的抗人IgG抗體含IgG類抗體的ECP16.89標記的抗人IgM抗體含IgM類抗體的ECP14.84標記的抗人IgG和IgM抗體含IgG和IgM類抗體的ECP24.77結果表明分別加標記的抗人IgG抗體或標記的抗人IgM抗體，或同時加標記的抗人IgG和IgM抗體都可以檢測出陽性結果(S/N>3.2為陽性)，因此本發明可同時檢測含IgG和IgM類抗體的瓜氨酸化抗原抗體免疫復合物，也可以分別檢測含IgG類抗體的ECP和含IgM類抗體的ECP。實施例2比較35個正常人和45例RA病人血清中瓜氨酸化抗原抗體免疫復合物(ECP)水平1)血清制備采用不添加任何抗凝劑的采血管收集正常人和RA患者的新鮮血液，用離心機在3000轉離心10min，收集上清液即為血清，置于-20℃～-80℃保存備用。2)ECPElisa檢測試劑盒準備包被酶標板；樣品稀釋液(5％脫脂奶粉)；洗滌液(0.5％TritonX-100)；酶標抗體；顯色液(TMB)；終止液(1M硫酸)。3)實驗操作步驟A.將血清樣品用樣品稀釋液稀釋10倍；分別加入反應板的樣品孔中，每孔加入體積為100ul；選取其余孔加入陰性參考樣品和陽性參考樣品各100ulB.室溫(25℃)孵育1小時；C.每孔加入洗滌液200ul，洗板4次，每次洗板2min；D.將酶標抗體用樣品稀釋液按1:10000稀釋，每孔加入稀釋酶標抗體100ul；E.室溫(25℃)孵育1小時；F.每孔加入洗滌液200ul，洗板4次，每次洗板2min；G.每孔加入顯色液100ul；室溫(25℃)顯色反應30min；H.每孔加入終止液100ul；I.用酶標儀450nm和630nm下檢測各孔的光吸收值，以A450-A630的差值表示樣品的光吸收值；J.結果計算：吸光度比值＝待測樣品孔的光吸收值/陰性參考樣品孔的光吸收值結果見表3、表4及圖3。表3為35例正常樣品檢測吸光度比值；表4為45例RA病人血清檢測吸光度比值表3正常樣品檢測吸光度比值表4RA病人血清檢測吸光度比值由表3、4可知：1、本發明的可行性：正常人血清中ECP水平平均值較低；RA患者血清中ECP水平平均值顯著升高(P＜0.05)，為正常人3倍。2、靈敏度和特異性：特異性為92.5％時，靈敏度為66.7％。以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本
技術領域：
的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護范圍。當前第1頁1 2 3