一種流通池的制作方法

本實用新型涉及技術檢測領域，更具體地涉及一種可用于光檢測的流通池。
背景技術：
：在檢測領域中，常需要對各類物質進行光檢測。以“雙抗夾心法”為基礎衍生出了多種免疫反應分析方法：放射免疫法、酶聯免疫法、化學發光法、時間分辨熒光法和熒光免疫法等，可用于確定病原微生物，對人體的特異性蛋白定量檢測從而對疾病進行輔助診斷或監測等等，用途非常廣泛。這類免疫反應分析方法的通常作法是：將捕獲抗體固定于固相載體，然后與抗原(目標蛋白)反應，洗滌后再與標記抗體反應，洗滌，加入底物檢測吸光度或直接檢測光信號，整個檢測過程約需2小時或更長，不能滿足臨床急診的需要。綜上所述，本領域仍迫切需要研發出工作效率高且能快速改善檢測數據質量的檢測方法。技術實現要素：本實用新型的目的是提供一種能大幅提高檢測速度且有助于改善快速檢測數據質量的流通池。本實用新型第一方面，提供一種用于檢測的流通池，包括毛細管本體、位于毛細管一端的加樣口、位于毛細管另一端的流出口、以及位于毛細管內部的濾柱和捕獲柱。在另一優選例中，所述毛細管內部的濾柱和捕獲柱以濾柱-用于捕獲檢測物的捕獲柱的順序間隔排列。在另一優選例中，所述毛細管的流出口端還設有夾持、支撐并固定裝置。在另一優選例中，所述捕獲柱數目為n，所述濾柱數目為n+1，其中，n為大于等于1的正整數。在另一優選例中，所述毛細管管身長L1為50-200mm，并且內徑d1為0.5-2mm。在另一優選例中，所述濾柱長L3為3-5mm。在另一優選例中，所述濾柱的孔徑d3為5-20μm。在另一優選例中，所述捕獲柱長L4為1-3mm。應理解，在本實用新型范圍內中，上述各技術特征和在下文(如實施例)中具體描述的各技術特征之間都可以互相組合，從而構成新的或優選的技術方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附圖說明圖1顯示了本實用新型流通池的結構。圖2顯示了cTnI標準曲線。圖3顯示了CA199標準曲線。圖4顯示了CA125標準曲線。圖5顯示了SCCA標準曲線。圖6顯示了AFP標準曲線。圖7顯示了CEA標準曲線。具體實施方式本發明人通過廣泛而深入的研究，首次意外地發現一種能大幅提高檢測速度且有助于改善快速檢測數據質量的流通池。在此基礎上完成了本實用新型。術語說明除非另外定義，否則本文中所用的全部技術與科學術語均具有如所屬領域的普通技術人員通常理解的相同含義。下面結合具體實施例，進一步闡述本實用新型。應理解，這些實施例僅用于說明本實用新型而不用于限制本實用新型的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數是重量百分比和重量份數。以下實施例中所用的實驗材料和試劑如無特別說明均可從市售渠道獲得。流通池本實用新型的流通池包括以下結構：空氣壓力泵、毛細管、濾柱、捕獲柱等。①毛細管的管身長50-200mm，內徑0.5-2mm；②空氣壓力泵對接口長5-20mm，內徑5-10mm；③濾柱長3-5mm；④捕獲柱長1-3mm；⑤毛細管的材質為透光材料，如：聚苯乙烯、玻璃等；⑥濾柱的材質為柱狀玻璃纖維，孔徑5-20μm，起到過濾液體樣本的作用；⑦捕獲柱為聚合物聚集體，如：聚苯乙烯微球聚集體、多空微球和瓊脂糖凝膠等，表面固定有針對目標物的捕獲劑，如針對目標抗原的抗體或針對目標核酸的寡核苷酸片段等；⑧濾柱和捕獲柱緊密填充在毛細管內；⑨圖1a中的捕獲柱僅針對一種目標物，用于檢測單一目標物，圖1b的捕獲柱針對多種目標物，用于同時檢測多種目標物。流通池的制作選擇內徑為2mm的毛細管，玻璃或聚苯乙烯材質均可；選擇與毛細管內徑大小適配的第一濾柱，自上而下緊密填充至毛細管的中央位置；適量地固定了捕獲劑的聚合物自上而下加入毛細管，被第一濾柱阻攔；第二濾柱，自上而下緊密填充至毛細管，與第一濾柱共同擠壓聚合物，形成捕獲柱。試劑和設備：心肌鈣蛋白I(cTnI)及其1對單克隆抗體(Ab1和Ab2)，市售品；甲胎蛋白(AFP)及其1對單克隆抗體(Ab1和Ab2)，市售品；癌胚抗原(CEA)及其1對單克隆抗體(Ab1和Ab2)，市售品；糖類抗原125(CA125)及其1對單克隆抗體(Ab1和Ab2)，市售品；糖類抗原199(CA199)及其1對單克隆抗體(Ab1和Ab2)，市售品；鱗狀細胞癌抗原(SCCA)及其1對單克隆抗體(Ab1和Ab2)，市售品；鏈霉親和素-藻紅蛋白復合物(SA-PE)，市售品；小牛血清白蛋白(BSA)，市售品；生物素Biotin，市售品；表面經羧基修飾的粒徑為20μm的聚苯乙烯微球，市售品；常用試劑、緩沖液為自配；檢測器：USB4000-FL(美國海洋光學公司)；光源：532nm激光光源。實施例1：人血清中cTnI的檢測1.準備1.1Ab1預先去除含氨基小分子和雜蛋白(透析或過層析柱),測量其濃度。1.2在1.5ml聚丙烯離心管中，精確稱取5mg左右N-hydroxysulfosuccini-mide(NHSS)，備用(防潮)。1.3在1.5ml聚丙烯離心管中，精確稱取5mg左右N-ethyl-N’(3-dimethylainopropyl)-carbodiimide(EDC)，備用(防潮)。2.聚苯乙烯微球(Beads)活化2.1微球原液旋渦混旋儀混懸20秒，移取200μL微球(相當于2.5×106微球)于1.5ml聚丙烯離心管中。2.215000rpm離心2分鐘(設置3分鐘)，移去上清液。2.3加入100μL蒸餾水，旋渦混旋儀混懸20秒，15000rpm離心2分鐘，移去上清液。2.4重復2.3。2.5加入80μL0.1mol/L磷酸緩沖液(PBS)，pH6.2，旋渦混旋儀混懸20秒。2.6用蒸餾水將(NHSS)稀釋至50mg/ml。(現配現用)2.7取10μL50mg/ml(NHSS)加到Beads溶液中，旋渦混旋儀混懸20秒。2.8用蒸餾水將EDC稀釋至50mg/ml。(現配現用)2.9取10μL50mg/mlEDC加到Beads溶液中，旋渦混旋儀混懸20秒。2.10避光、37℃孵育20分鐘。2.1115000rpm離心2分鐘，移去上清液。2.12加入250μL50mmol/L2-(N-morpholino)ethanesulfonicacid(MES)(MES)pH5.0。2.1315000rpm離心2分鐘，移去上清液。2.14重復2.12，2.13，馬上進行下步實驗。3.交聯、封閉和儲存3.1加20μg已處理的Ab1到已活化的Beads中，旋渦混旋儀混懸20秒。3.2避光、37℃反應2小時,每十五分鐘混勻一次。3.3加入1mlPBS-TBN，旋渦混旋儀混懸20秒，10000rpm離心2分鐘。移去上清液(PBS-TBN的組成為10mmol/LpH7.4的磷酸鹽緩沖液、0.02％吐溫20、1mg/ml的小牛血清白蛋白和0.05％疊氮鈉)。3.4加入500μLPBS-TBN，旋渦混旋儀混懸20秒，10000rpm離心2分鐘。移去上清液。3.5加入500μLPBS-TBN，旋渦混旋儀混懸20秒。3.62-8℃避光保存，得到Ab1-Beads。4.本實用新型的制作Ab1-Beads在旋渦混旋儀混懸20秒，取50μl，按“本實用新型的制作”所述制作本實用新型，重復該過程可制作多個圖1中的a。圖1說明：①毛細管的管身長50～200mm，內徑0.5～2mm；②空氣壓力泵對接口長5～20mm，內徑5～10mm；③濾柱長3～5mm；④捕獲柱長1～3mm；⑤毛細管的材質為透光材料，如：聚苯乙烯、玻璃等；⑥濾柱的材質為柱狀玻璃纖維，孔徑5～20μm，起到過濾液體樣本的作用；⑦捕獲柱為聚合物聚集體，如：聚苯乙烯微球聚集體、多空微球和瓊脂糖凝膠等，表面固定有針對目標物的捕獲劑，如針對目標抗原的抗體或針對目標核酸的寡核苷酸片段等；⑧濾柱和捕獲柱緊密填充在毛細管內；⑨圖1的a僅有針對一種目標物的捕獲柱，用于檢測單一目標物，圖1的b含有針對多種目標物的捕獲柱，用于同時檢測多種目標物。5.Ab2標記Biotin5.1Ab2預處理5.2Biotin標記反應取上述預處理的Ab110μL，加入25μL的1mg/mlNHSS-BiotinDMSO溶液，混勻，4℃冰箱避光反應2小時。6.Ab2標記PE取標記好Biotin-Ab2，加入pH7.4磷酸鹽緩沖液中，Ab2終濃度為5μg/ml，同時加入SA-PE，PE總濃度為60μg/ml，得到Ab2-PE，總體積為5ml，4℃避光保存備用。7.cTnI抗原標準品的配制用PBS-TBN配制cTnI標準品及質控品溶液，見表1。8.cTnI標準曲線的制備取5μl的Ab2-PE與50μl的STD0混合，將圖1中的a與空氣壓力泵緊密對接，保證密封，然后將a的下端插入混合液中，使混合液在毛細管內往復運動3次(1次往復約40秒)，每次都通過捕獲柱，最后將混合液打出毛細管，再用PBS洗滌捕獲柱，檢測捕獲柱的熒光強度。同樣操作得到STD1～STD4的熒光強度，填入表1相應位置，并以LgC為橫坐標、LgF為縱坐標制作曲線圖，如圖2所示。表1：cTnI標準品與熒光強度對照表cTnISTD0STD1STD2STD3STD4C(ng/ml)00.52510熒光強度F33.7702.61480.62910.75646.69.質控品檢測用PBS-TBN配制2個cTnI質控品溶液，濃度分別為1ng/ml和8ng/ml，用本實用新型檢測，熒光信號帶入標準曲線，得測定濃度分別為0.91ng/ml和8.23ng/ml，與理論值符合良好。實施例2：5種腫瘤標志物的快速檢測1、重復實施例1的“1～6”的所有步驟，分別得到AFP的Ab1-Beads和Ab2-PE、CEA的Ab1-Beads和Ab2-PE、CA125的Ab1-Beads和Ab2-PE、CA199的Ab1-Beads和Ab2-PE、SCCA的Ab1-Beads和Ab2-PE，并制備多個如圖1b所示的用于同時檢測5種腫瘤標志物的本實用新型。2、5種腫瘤標志物混合抗原標準品及質控品的配制用PBS-TBN配制如表2所示的5種腫瘤標志物的標準品和質控品，即：STD1中不含任何腫瘤標志物，STD2中同時含有5種腫瘤標志物，其他依次類推。3.標準曲線的制備各取3μl的5種Ab2-PE加入50μl的STD0中混合均勻，將圖1中的b與空氣壓力泵緊密對接，保證密封，然后將b的下端插入混合液中，使混合液在毛細管內往復運動3次(1次往復約40秒)，每次都通過所有捕獲柱，最后將混合液打出毛細管，再用PBS洗滌所有捕獲柱，分別檢測所有捕獲柱的熒光強度。同樣操作得到STD1、STD2、STD3、STD4標準溶液中5種抗原的對應的熒光強度，見表3～7，并以LgC為橫坐標、LgF為縱坐標制作曲線圖，相應的標準曲線見圖3-圖7。表2：5種腫瘤標志物混合抗原標準品及質控品的濃度腫瘤標志物STD0STD1STD2STD3STD4質控1質控2CA1990U/ml5U/ml20U/ml100U/ml300U/ml40U/ml200U/mlCA1250U/ml10U/ml30U/ml100U/ml300U/ml30U/ml200U/mlSCCA0U/ml1U/ml5U/ml30U/ml150U/ml5U/ml100U/mlAFP0ng/ml5ng/ml20ng/ml100ng/ml300ng/ml20ng/ml200ng/mlCEA0ng/ml2ng/ml10ng/ml50ng/ml200ng/ml5ng/ml150ng/ml表3：CA199標準品與熒光強度對照表CA199STD0STD1STD2STD3STD4C(U/ml)0520100300熒光強度F13.7713.71470.92839.2.75728.7表4：CA125標準品與熒光強度對照表CA125STD0STD1STD2STD3STD4C(U/ml)01030100300熒光強度F61.8750.2149326505127.2表5：SCCA標準品與熒光強度對照表SCCASTD0STD1STD2STD3STD4C(U/ml)01530150熒光強度F10.7740.2142125505227.2表6：AFP標準品與熒光強度對照表AFPSTD0STD1STD2STD3STD4C(U/ml)0520100300熒光強度F3.7666.513872768.55213.7表7：CEA標準品與熒光強度對照表AFPSTD0STD1STD2STD3STD4C(U/ml)021050200熒光強度F3.7666.513872768.55213.74.質控品的測定用PBS-TBN配制各個腫瘤標志物的質控品，然后用本實用新型檢測，結果見表8，實測值與理論值符合性良好。表8：腫瘤標志物質控品的測定結果在本申請提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應理解，在閱讀了本實用新型的上述講授內容之后，本領域技術人員可以對本實用新型作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。當前第1頁1 2 3