一種茄子花蕾表面消毒技術的制作方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于組織培養領域，涉及茄子花藥培養前對花蕾進行有效消毒，以提高茄子花藥培養成功率的技術，適用于不同品種、不同生長時期以及不同生長條件下采摘的茄子花蕾的消毒處理。
【背景技術】
[0002]前子(Solarium melongena L)，別名前、矮瓜、吊菜子、落蘇，草本或亞灌木狀，果可供蔬食，根、莖、葉、種子皆可入藥。茄子原產亞洲熱帶，我國各省均有栽培。
[0003]近年發展起來的以組織培養和遺傳工程為主導的生物技術，為縮短育種年限和選育優質新品種開辟了一條新途徑，通過花藥和花粉培養可以獲得大量純合的單倍體、雙單倍體植株，用于育種實踐后，可大大縮短育種進程。70年代初，Riana等成功地通過茄子花藥培養經愈傷組織途徑成苗，目前不論是茄子花藥還是花粉(小孢子)培養，都已有許多成功的報道，但國內利用花藥或花粉培養獲得的親本，選育出茄子新品種的報道卻并不多。究其原因，主要是茄子花藥或花粉培養產生再生植株的頻率不高，且再生植株中的單倍體加倍頻率不高。事實上，從茄子無菌、且有活力的花藥中誘導出愈傷組織或胚狀體并不困難，困難在于茄子花藥(花蕾)的表面消毒技術。因此，在升汞等傳統表面消毒劑禁用的情況下，如何利用對環境友好的酒精和次氯酸鈉對茄子花蕾表面進行有效的消毒，是成功進行茄子花藥或花粉培養的關鍵技術。
【發明內容】
[0004]為了更好的解決花藥及花粉培養過程中出現的污染問題，本發明提供了一種高效的前子花蕾表面消毒技術。
[0005]本發明提供的技術方案是:
[0006]—種前子花蕾表面消毒技術，包括的步驟如下:
[0007](I)采集花蕾:選取花粉發育時期為單核后期至雙核早期的茄子花蕾，裝在塑封袋內，將塑封袋放入裝有冰塊的冰盒中及時帶回室內；
[0008](2)花蕾預處理:將花蕾從塑封袋中取出，不經水或其他液體沖洗，直接去除茄子花蕾外包裹的萼裂片；
[0009](3)酒精消毒、次氯酸鈉消毒:將整理過的茄子花蕾裝入無菌瓶內，依次用酒精消毒、次氯酸鈉消毒；
[0010](4)無菌水沖洗、吸干水份備用:用高壓滅菌的吸水紙將茄子花藥表面吸附的水分吸掉。
[0011]其中，用酒精消毒的時間為1-5分鐘，用次氯酸鈉消毒時間為10-20分鐘。
[0012]優選的，夏秋季高溫季節消毒時間為酒精消毒3分鐘，次氯酸鈉12分鐘。
[0013]優選的，冬春溫度較低的季節酒精消毒可延長到5分鐘，次氯酸鈉最長可達20分鐘。
[0014]其中，用無菌水沖洗要快速，沖洗過后要立即將花蕾上殘存的水分吸干凈。
[0015]本發明通過對茄子花蕾的預處理，調節消毒試劑的消毒時間，實現對各種來源茄子花蕾表面的有效消毒。應用本發明，大大降低了茄子花藥初代和繼代培養時的污染率，提高了花藥和花粉培養的效率，培養的花藥能在多種培養基上獲得胚狀體。利用該技術，花藥污染率低于20%，甚至可以達到100%不污染。
【附圖說明】
[0016]圖1:本發明的前子花蕾表面消毒技術的效果圖。
【具體實施方式】
[0017]下面結合具體實施例和附圖對本發明作進一步說明。
[0018]1.采集花蕾:茄子植株可生長在溫室、大棚或露地，采集生長前期、中期和后期植株上的花蕾，選取花粉發育時期為單核后期至雙核早期的茄子花蕾(花瓣距萼裂基部0-2_)，裝在塑封袋內(防失水)，將塑封袋放入裝有冰塊的冰盒中及時帶回室內，放入冰箱內冷藏24_48h或直接進行前處理；
[0019]2.花蕾前處理:將花蕾從塑封袋中取出，不經水或其他液體沖洗，直接去除茄子花蕾外包裹的萼裂片，具體操作為沿著萼片裂開的紋路將萼裂片剝去，但不能將萼筒剝除；
[0020]3.花蕾消毒:將整理過的茄子花蕾裝入無菌瓶內，在超凈工作臺或生物安全柜中，用75%的無水乙醇處理l_5min，倒出無水乙醇后加入一滴吐溫-80，然后用6.5%的次氯酸鈉處理10-20min，期間不停搖晃，最后用無菌水沖洗4_5次；
[0021]4、吸干花蕾表面殘留的水分備用:無菌水沖洗結束后，立即用高壓滅菌的吸水紙將茄子花藥表面吸附的水分吸掉，然后直接從花蕾中剝取花藥接種，來不及接種的花藥可放在冰箱中冷藏l-2d。
[0022]5.花蕾表面消毒的效果:應用本發明，即使在夏季，從處于生長末期、白粉虱高發的植株上采摘的茄子花蕾，其花藥的污染率也不超過20%，比常規方法的對照大大降低了污染率，提高了茄子花藥培養的成功率，培養的花藥能在多種培養基上獲得胚狀體，最終獲得完整再生植株。
[0023]以上所述，僅是本發明的較佳實施例，并非對本發明作任何形式上的限制，任何熟悉本專業的技術人員，在不脫離本發明技術方案范圍內，依據本發明的技術實質，對以上實施例所作的任何簡單的修改、等同替換與改進等，均仍屬于本發明技術方案的保護范圍之內。
【主權項】
1.一種茄子花蕾表面消毒技術，其特征在于:包括的步驟如下: (1)采集花蕾:選取花粉發育時期為單核后期至雙核早期的茄子花蕾，裝在塑封袋內，將塑封袋放入裝有冰塊的冰盒中及時帶回室內； (2)花蕾預處理:將花蕾從塑封袋中取出，不經水或其他液體沖洗，直接去除茄子花蕾外包裹的萼裂片； (3)酒精消毒、次氯酸鈉消毒:將整理過的茄子花蕾裝入無菌瓶內，依次用酒精消毒、次氯酸鈉消毒； (4)無菌水沖洗、吸干水份備用:用高壓滅菌的吸水紙將茄子花藥表面吸附的水分吸掉。2.如權利要求1所述的茄子花蕾表面消毒技術，其特征在于:用酒精消毒的時間為1-5分鐘，用次氯酸鈉消毒時間為10-20分鐘。3.如權利要求1所述的茄子花蕾表面消毒技術，其特征在于:夏秋季高溫季節消毒時間為酒精消毒3分鐘，次氯酸鈉12分鐘。4.如權利要求1所述的茄子花蕾表面消毒技術，其特征在于:冬春溫度較低的季節酒精消毒可延長到5分鐘，次氯酸鈉最長可達20分鐘。5.如權利要求1所述的茄子花蕾表面消毒技術，其特征在于:用無菌水沖洗要快速，沖洗過后要立即將花蕾上殘存的水分吸干凈。
【專利摘要】本發明公開了一種茄子花蕾表面消毒技術，包括的步驟如下：花蕾采集、花蕾預處理、花蕾表面消毒、吸干花蕾表面殘留的水分。采摘不同立地和不同季節生長的植株的花蕾，防失水和低溫條件下帶回室內,去除花萼裂片后，先用75％酒精消毒1-5min，再用6.5％的次氯酸鈉消毒10-20min，無菌水沖洗4-5次，吸干水后剝取花藥進行后續試驗。本發明通過對茄子花蕾的預處理，調節消毒試劑的消毒時間，實現對各種來源茄子花蕾表面的有效消毒，大大降低了茄子花藥初代和繼代培養時的污染率，提高了花藥和花粉培養的效率，培養的花藥能在多種培養基上獲得胚狀體，利用該技術，花藥污染率低于20％，甚至可以達到100％不污染。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105165620
【申請號】
【發明人】崔群香, 杜碧云, 周顯忠, 張天雨, 何成榮, 吳飛澤
【申請人】金陵科技學院
【公開日】2015年12月23日
【申請日】2015年10月9日