香茶藨子莖尖再生擴繁的方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于植物組織培養領域，具體涉及到對香茶薦子莖尖誘導叢生芽植物組織 培養技術擴繁的研究。
【背景技術】
[0002] 香茶薦子為虎耳草科茶薦子屬植物，又名黃花茶薦子、野芹菜、黃丁香，原產美國， 現東北、華北多有栽培。香茶薦子為直立叢生落葉灌木，高1~2. 5m;小枝圓柱形，淡黃褐 色；葉近圓形，掌狀3裂，葉緣疏生粗鋸齒；花黃色，味芳香，故名香茶薦子，漿果黑色球形； 花期4~5月；果熟期6~7月。茶薦子屬植物果實為多汁漿果，可直接食用或用于食品、 飲料、釀酒及添加調料，對風濕性關節炎、腸胃炎等有一定療效。該屬植物全世界約有160 種，主要分布于北半球溫帶和較寒冷地區，少數延伸到亞熱帶和熱帶山地。中國是世界茶薦 子屬植物的分布中心之一，原產59種、30變種，主要分布在西南、西北至東北。該屬植物在 歐洲作為溫帶觀賞灌木和小果類果樹資源具有很長的栽培歷史，栽培面積和產量均居世界 首位。香茶薦子花色鮮艷，花開時一片金黃，香氣四溢，是良好的園林觀賞品種，宜叢植于草 坪、林緣、坡地、角隅、巖石旁，也可作花蘺栽植。它喜光，也耐蔭，耐寒力強，適于生長在深厚 肥沃的土壤中，有一定耐旱能力。但因其種子繁殖周期較長，不能在短時間內滿足生產需 要，而且目前苗圃商品苗的存量少，遠遠不能滿足市場的需要。植物組織培養是建立高頻率 植株再生實驗體系和工廠化育苗的基礎，也為種質保存、人工種子制作以及抗旱、抗寒和抗 逆性等基因的轉化、樹種改良等方面開拓了新途徑，應用組織培養技術種質保存和繁育優 良、珍稀、瀕危植物品種、工廠化育苗是當今世界林業科技發展的趨勢，研究香茶薦子組織 培養快繁技術具有重要意義。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的在于提供一種香茶薦子莖尖再生擴繁的方法，采用無菌莖尖誘導叢 生芽增殖得到大量的芽叢對香茶薦子進行擴繁。對香茶薦子莖尖進行初代培養出芽叢后， 再次將芽叢切割接種在繼代培養基上培養，為了得到大量的叢生芽對培養基進行篩選；為 了減輕培養過程中褐化現象而加入抗褐化物(如檸檬酸、pvp、維生素c或者活性炭);通過莖 尖誘導叢生芽，再將叢生芽進行擴繁，為香茶薦子組織培養擴繁提供指導，并實現工廠化育 苗。
[0004] 為實現上述目的，本發明采用如下技術方案： 具體包括以下步驟： (1) 取材方法： 選取無病蟲害健壯的香茶薦子植株上切取帶芽莖段，剝取莖尖為外植體材料； (2) 培養基的配制： ①莖尖誘導叢生芽初代培養基：MS+0.5-2.0mg/LKT+0.l-0.9mg/LIBA+20-30g/L蔗 糖+3-68/1瓊脂+500-80011^/1?￥?口11值調至5.8-5.9之間； ②單個叢生芽誘導腋芽增殖培養基：MS+0. 1-0. 9mg/L6-BA+0. 1-0. 9IBA+20-30g/1^蔗糖+3-6 8/1瓊脂+80〇11^/1?￥?口11值調至5.8-5.9之間； _生根培養基：1/4_1/2MS+0.1-1.0mg/LNAA+20-30g/L蔗糖+3-6g/L瓊脂pH值 調至5. 8-5. 9之間； (3)材料處理： ①將香茶薦子帶有側芽或頂芽的莖段放在燒杯里加入幾滴吐溫-20,在自來水下沖洗 30-50min，轉移至超凈工作臺內以質量濃度為70-75%的酒精消毒搖蕩28-32s.后倒出酒 精，用無菌水沖洗2-3次，加入質量分數為0. 1%升汞溶液處理8-12min，將升汞倒出用無菌 水沖洗6~8遍后，用消毒濾紙吸干表面水分；剝取左右的莖尖，接種至初代培養基 中培養。
[0005] ②待莖尖初代培養出來的叢生芽轉移至超凈工作臺上，取出外植體放在無菌濾紙 上，切開叢生芽使其成為單芽，單芽既可以用來繼代增殖培養又可以進行生根培養。
[0006] (4)叢生芽誘導培養： 將剝取的左右的莖尖，接種至初代培養基中培養，培養溫度為25±2°C，光照 時間 10-12h/d，光照強度 2000-30001ux。
[0007] (5)增殖培養： 將待莖尖初代培養出來的叢生芽切開使其成為單芽，單芽接種在增殖培養基中。培養 溫度為25±2°C，光照時間10_12h/d，光照強度2000-30001ux。
[0008] (6)誘導生根： 當叢生芽長至2cm高時，將芽分割成單株，轉移到生根培養基中，培養溫度為25±2°C下暗培養。
[0009] (7)小苗移栽： 當試管苗長至3-4cm高，有3-5條根，3-4片葉片，葉片長度l-2cm時，進行煉苗，將試管 苗放在自然光下煉苗5d，后打開瓶蓋上的封口膜先進行煉苗2d，期間用噴壺噴灑葉片保證 葉片不失水以增強試管苗對室外環境的適應能力；然后從培養瓶中取出小苗，洗凈根部培 養基，然后栽于基質中定植，基質配方為腐殖土 ：珍珠巖：蛭石=3 :1 :1，待40d后達到移栽 苗。保持空氣濕度在80%以上，放置在陰涼通風處，光線由前期弱到強。
[0010] 本發明的有益效果在于：本發明可以使香茶薦子在短時間內建立無菌株系進行 大量產業化生產，并可以周年生產，繁殖速度快，為園林建設提供大量優質苗木；由于本發 明的外植體選取的是莖尖，后代可保持母系穩定的遺傳性狀，為企業提供技術含量高的生 產技術，使其植株大小一致，便于產業化統一管理，為降低企業生產成本和提供產品品質， 并站穩市場提高銷售量而帶來了巨大的經濟效益。
[0011] 實施例1 : 本發明選取香茶薦子健壯母樹，從健壯母株上切取帶芽莖段，剝取莖尖為外植體材料； 莖尖經過一個月初代培養，長出翠綠的叢生芽，切下單個叢生芽后對其進行繼代增殖培養， 2周后叢生芽不斷長出腋芽，待腋芽長至1. 5-3cm時切下，再次將腋芽接種在繼代培養基上 培養，周而復始直到腋芽活性下降為止，這樣培養可以在一個莖尖上獲得大量的叢生芽，得 到的叢生芽可以一部分以芽繁芽的方法繼續繼代培養，一部分可以接種至生根培養基上進 行生根。
[0012] 具體包括以下步驟： (1) 取材方法： 選取從呼和浩特市良種繁育中心引進的無病蟲害的香茶薦子植株，從健壯母株上切取 帶芽莖段，剝取莖尖為外植體材料； (2) 培養基的配制： ① 莖尖初代誘導叢生芽培養基：MS+1.0mg/LKT+0.3mg/LIBA+30g/L蔗糖+6g/L瓊 脂+800mg/LPVPpH值調至5. 8; ② 單個叢生芽誘導腋芽增殖培養基：MS+0. 5mg/L6-BA+0. 3IBA+30g/L蔗糖+6g/ L瓊脂+800mg/LPVPpH值調至5. 8; 爾生根培養基：1/2MS+0.5mg/LNAA+30g/L蔗糖+6g/L瓊脂pH值調至5.8 ; (3) 材料處理： ①、將香茶薦子帶有側芽或頂芽的莖段放在燒杯里加入2滴吐溫-20在自來水下沖洗 半個小時，轉移至超凈工作臺內以質量濃度為75%的酒精消毒搖蕩30s.后倒出酒精，用無 菌水處理3次，加入質量分數為0. 1%升汞溶液處理lOmin，將升汞倒出用無菌水沖洗6遍 后，用消毒濾紙吸干表面水分；剝取2_的莖尖，接種至初代培養基中培養。
[0013] ②、待莖尖初代培養出來的叢生芽轉移至超凈工作臺上，取出外植體放在無菌濾 紙上，切開叢生芽使其成為單芽，單芽既可以用來繼代增殖培養又可以進行生根培養。
[0014] (4)叢生芽誘導培養： 將剝取的2mm的莖尖，接種至初代培養基中培養，培養溫度為25±2°C，光照時間12h/d，光照強度2000~30001ux; (5) 增殖培養： 將待莖尖初代培養出來的叢生芽切開使其成為單芽，單芽接種在繼代增殖培養基中， 培養溫度為25±2°C，光照時間12h/d，光照強度2000~30001UX; (6) 誘導生根： 當叢生芽長至2cm高時，將芽分割成單株，轉移到生根培養基中；培養溫度為25±2°C下暗培養； (7)小苗移栽： 當試管苗長至3~4cm高，有3~5條根，3~4片葉片，葉片長度1~2cm時，就可進行煉苗， 將試管苗放在自然光下煉苗5d，打開瓶蓋上的封口膜先進行煉苗2d，期間用噴壺噴灑葉片 保證葉片不失水以增強試管苗對室外環境的適應能力；然后從培養瓶中取出小苗，洗凈根 部培養基，然后栽于基質中定植：腐殖土：珍珠巖：蛭石=3 :1 :1，待40d后達到移栽苗。保 持空氣濕度在80%以上，放置在陰涼通風處，光線由前期弱到強。成活率可達90%。
[0015] 以上所述僅為本發明的較佳實施例，凡依本發明申請專利范圍所做的均等變化與 修飾，皆應屬本發明的涵蓋范圍。
【主權項】
1. 一種香茶薦子莖尖再生擴繁的方法，其特征在于，包括如下步驟： (1) 取材： 選取無病蟲害健壯的香茶薦子植株上切取帶芽莖段，剝取莖尖為外植體材料； (2) 培養基的配制： ① 莖尖誘導叢生芽初代培養基：MS +0.5-2.0mg/L ΚΤ+0. l-0.9mg/LIBA +20-30g/L蔗 糖+3-68/1瓊脂+500-80011^/1?￥??!1值調至5.8-5.9之間 ； ② 單個叢生芽誘導腋芽增殖培養基：MS +0. 1-0. 9mg/L 6-BA +0. 1-0. 9 IBA +20-30g/ 1^蔗糖+3-6 8/1瓊脂+80〇11^/1?￥??!1值調至5.8-5.9之間； ③ 生根培養基：1/4_1/2MS +O.l-l.Omg/LNAA +20-30g/L 蔗糖 +3-6 g/L 瓊脂 pH 值 調至5. 8-5. 9之間； (3) 材料處理： ① 將香茶薦子帶有側芽或頂芽的莖段放在燒杯里加入幾滴吐溫-20,在自來水下沖洗 30-50min，轉移至超凈工作臺內以質量濃度為70-75%的酒精消毒搖蕩28-32s.后倒出酒 精，用無菌水沖洗2-3次，加入質量分數為0. 1%升汞溶液處理8-12min，將升汞倒出用無菌 水沖洗6~8遍后，用消毒濾紙吸干表面水分；剝取左右的莖尖，接種至初代培養基 中培養； ② 待莖尖初代培養出來的叢生芽轉移至超凈工作臺上，取出外植體放在無菌濾紙上， 切開叢生芽使其成為單芽，單芽既可以用來繼代增殖培養又可以進行生根培養； (4) 叢生芽誘導培養： 將剝取的左右的莖尖，接種至初代培養基中培養，培養溫度為25±2°C，光照 時間 10-12h/d，光照強度 2000-30001ux ; (5) 增殖培養： 將待莖尖初代培養出來的叢生芽切開使其成為單芽，單芽接種在增殖培養基中； 培養溫度為25±2°C，光照時間10_12h/d，光照強度2000-30001UX ; (6) 誘導生根： 當叢生芽長至2cm高時，將芽分割成單株，轉移到生根培養基中，培養溫度為25±2°C 下暗培養； (7) 小苗移栽： 當試管苗長至3-4cm高，有3-5條根，3-4片葉片，葉片長度l-2cm時，進行煉苗，將試管 苗放在自然光下煉苗5d，后打開瓶蓋上的封口膜先進行煉苗2d，期間用噴壺噴灑葉片保證 葉片不失水以增強試管苗對室外環境的適應能力，然后從培養瓶中取出小苗，洗凈根部培 養基，然后栽于基質中定植，基質配方為腐殖土 ：珍珠巖：蛭石=3 :1 :1，待40d后達到移栽 苗；保持空氣濕度在80%以上，放置在陰涼通風處，光線由前期弱到強。
【專利摘要】本發明為香茶藨子莖尖再生擴繁的方法，屬于植物組織培養領域，具體涉及到對香茶藨子莖尖誘導叢生芽植物組織培養技術擴繁的研究。本發明包括：（1）取材、（2）培養基的配制、（3）材料處理、（4）叢生芽誘導培養、（5）增殖培養、（6）誘導生根、（7）小苗移栽。本發明的有益效果在于：本發明可以使香茶藨子在短時間內建立無菌株系？進行大量產業化生產，并可以周年生產，繁殖速度快，為園林建設提供大量優質苗木；由于本發明的外植體選取的是莖尖，后代可保持母系穩定的遺傳性狀，為企業提供技術含量高的生產技術，使其植株大小一致，便于產業化統一管理。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105165621
【申請號】
【發明人】何炎紅, 白玉娥, 葉冬梅, 田有亮, 林濤, 鄒微微, 吳高殷, 金牧蘭
【申請人】內蒙古農業大學
【公開日】2015年12月23日
【申請日】2015年10月10日