一種提取銀杏葉黃酮的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種提取銀杏葉黃酮的新工藝方法，利用新型綠色環保的離子液體以及雙水相技術。
【背景技術】
[0002]銀杏為現存古代孑遺植物之一，被稱為“活化石”，是我國的特產植物，占世界的70%以上，它的葉和果都具有較高的藥用價值，因而受到國內外的重視。銀杏葉為銀杏科銀杏屬植物銀杏的葉子，在植物學和化學上占有重要地位。銀杏葉中的化學成分種類繁多，非常復雜，許多成分具有生物活性，其中人們比較關注的有很多種，含量較高的黃酮類化合物是不容忽視的一種。
[0003]目前提取銀杏葉黃酮的方法主要有以下幾種:①有機溶劑提取法:這是國內外使用最廣泛的方法。常用的有機溶劑主要有乙醇、甲醇、乙酸乙酯、乙醚、丙酮、石油醚等。張永紅利用70%乙醇對銀杏葉黃酮類物質進行提取(張永紅，李艷.銀杏葉黃酮類化合物提取方法探討[J].實用中醫藥雜志，2007，23 ￠):396-397)。但是此方法溶劑使用量大，成本較高，雜志含量也較高，并且提取過程中氣味大，有毒溶劑殘留。②酶提取法??張小清等將酶法與溶劑提取相結合提取銀杏葉黃酮類化合物(張小清，程寧，秦蓓等.酶解-溶劑提取銀杏葉活性成分工藝條件[J].應用化學，2005，34(10):635-637)。雖然比單純的溶劑提取方法在一定程度上提高了萃取率，但是萃取過程中仍要用到一些有毒副作用的有機溶劑，并且酶的加入主要是為了通過破壞植物細胞壁來提高效率，并沒有起到選擇性提取的作用，雜質含量也較高。③超聲波提取法:劉晶芝等研究了銀杏葉黃酮類化合物的超聲波法提取工藝，Riee Evans C對超聲波在其中作用做了研究(Riee Evans C，Miller N J.The relative anth1xidant activeties of plant derived ployphenloicflavonoids[J], Free radical Res.1995，22:375-383)。但是超聲波萃取多數還是作為一種輔助提取的手段。④微波提取法:劉峙嶸等提出在利用微波提取黃酮類化合物時要盡量采用鮮原料(劉峙嶸，俞自由，方裕勛等.微波萃取銀杏葉黃酮類化合物[J].東華理工學院學報，2005，28 (2):151-154)。但是微波萃取在理論和實踐方面還存在一些問題，如有機溶劑的殘留以及微波穿透物質內部時的衰減問題等，其研究還處于初期階段。⑤超臨界流體萃取法:是最近幾十年來才發展起來的一種新型技術，它利用超臨界流體作為萃取劑從液體和固體中提取某種高沸點的成分，以達到分離或提純的目的(Jianchun Xie, LiliZhu, Hongpeng Lu0.Direct extract1n of specific pharmacophoric flavonoids fromgingko leaves using a molecularly imprinted polymer for quercetin[J].Journal ofChromatography A, 2001,934:1-11)。但是超臨界流體需要在較高的壓力下進行操作，因此設備費用比較昂貴，而且需高壓技術，在設備和過程設計上還缺乏基礎數據和系統的方法，在我國的應用還未普及。
【發明內容】
[0004]本發明的目的在于提供一種新的提取銀杏葉黃酮的工藝方法，這種工藝方法通過利用離子液體雙水相對銀杏葉中總黃酮進行選擇性的提取，并通過適合的大孔樹脂進一步提取并將其分開，而又不吸附離子液體，這樣就可以將離子液體與黃酮分開，這樣，對銀杏黃酮既進行了 2次提純，又可將離子液體循環使用，離子液體中前次未被提取的黃酮可繼續循環到下一次的提取中，大孔樹脂也是可以多次利用的，這樣整個流程既沒有太多的有害溶劑滲入，也大大減少了銀杏黃酮的損失，節約了溶劑使用的成本，并且綠色環保。
[0005]本發明的技術方案為:
[0006]—種提取銀杏葉黃酮的方法，該方法包括如下步驟:
[0007](I)將銀杏葉在60?80°C烘干至恒重，粉碎過60目篩，并將其裝入索式提取器中進行索式提取，得到銀杏葉粗提物浸膏；
[0008](2)將步驟⑴所得的銀杏葉粗提物浸膏放于離子液體與鹽溶液形成的雙水相溶液A中，其中，雙水相溶液A中離子液體濃度控制在0.25?0.45g.mL \鹽溶液濃度控制在0.06?0.1Og -mL1,粗提物在雙水相溶液A中的濃度為0.3?1.0g.mL \用微波進行輔助處理15?30分鐘，得到吸附完成的雙水相溶液；
[0009](3)取步驟(2)吸附完成的的雙水相溶液中上層清液(即雙水相中上層的離子液體)，通過B-R緩沖液控制在pH = 3-6，用大孔吸附樹脂常溫靜態進行吸附24h，其中，前兩小時每隔15min震搖5分鐘；吸附中的固液體積比為1:5_10 ;
[0010](4)用蒸餾水沖洗大孔樹脂至流出液無色，然后收集沖洗液真空干燥，得到離子液體回收利用；并用乙醇溶液對大孔吸附樹脂進行洗脫，最后得銀杏黃酮產物。
[0011]所述的大孔吸附樹脂具體為D101，D140，HPD100，或LX-38。
[0012]所述的的離子液體為[Bmin]BF4、[BPy]BF4S[C4mim]Cl。
[0013]所述的鹽溶液相為NaH2P04、(NH4) 2S04、K2HPO4.3H20、K2CO3, Na2CO3或 K 3P04。
[0014]所述步驟(I)中索氏提取步驟中，提取劑為70-95%乙醇，提取劑的量為固液質量比1:5?10，提取溫度50-100°C，提取時間為2?4小時，總共提取3_5次，最后并將全部所得提取液混合進行減壓蒸餾。
[0015]所述步驟(4)中大孔樹脂洗脫所用乙醇溶液的體積濃度為70%。
[0016]本發明的有益效果為:
[0017]銀杏黃酮苷極性大，一般可溶于水、醇、丙酮、乙酸乙酯等。而銀杏葉中含有的內酯類化合物易溶于低級醇類，在水中溶解度很低，多糖一般不溶于水。本發明通過先對銀杏葉粉末進行粗提，制成銀杏粗提物，最大限度的將黃酮類物質從銀杏葉粉末中提出，當然銀杏葉粗提物中還含有內酯類等其他化合物，此時引入離子液體與鹽溶液形成的雙水相A，在微波輔助下可有選擇性的對銀杏黃酮類物質進行吸附，一些多糖類等物質就會被篩除。最后通過大孔樹脂可將離子液體與銀杏黃酮類物質分開，離子液體雙水相與大孔樹脂共同聯用，好處是對銀杏黃酮既進行了 2次提純，又可將離子液體加一定量的乙醇減壓蒸餾后回收循環使用(由于鍵能關系醇的加入有助于親水性離子液體中水的蒸離)，離子液體中前次未被提取的黃酮可繼續循環到下一次的提取中，這樣大大減少了銀杏黃酮的損失，也節約了溶劑使用的成本，整個流程中并不使用有毒有害有嚴重氣味的有機溶劑以及其它會造成嚴重污染的原料，綠色環保。經此工序純化后黃酮平均重量含量可達29.2% (大于國家要求標準24% )，平均收率3.51%，查閱相關文獻，并按文獻方法利用大孔樹脂進行提取，本發明比其純度提高約3.5%，收率提高約0.4% (本發明中所用銀杏葉制成的粗提物中含有黃酮類物質約為3.8%)。
【具體實施方式】
[0018]下面通過具體實例對本發明作進一步詳細描述，以助于理解本發明的內容。
[0019]提取工藝如下:
[0020](I)將干燥的銀杏葉粉碎成粗粉過60目篩，用10倍量70?95%乙醇進行索氏提取2?4小時，共提取3-5次，收集所有提取液；
[0021]⑵將提取液在60°C條件下減壓蒸餾60min濃縮制成銀杏粗提物浸膏；
[0022]⑶取粗提物浸膏放于一定濃度配比的離子液體與鹽溶液形成的雙水相溶液A中，其中離子液體濃度控制在0.25?0.45g.mL、鹽溶液濃度控制在0.06?0.1Og.mL、將浸膏攪拌開，用微波輔助處理15?30分鐘；
[0023]⑷取雙水相中上相液體即離子液體相，用大孔吸附樹脂DlOl