低葡萄糖苷酶纖維素酶的離心沉渣。
[0035]步驟五、第一次水解處理:將步驟四得到的含有低β-葡萄糖苷酶纖維素酶的離心沉渣投至無菌容器中，在無菌容器中補加無菌水至原反應原液的體積，并調節無菌容器中的反應體系的pH值為4.80，無菌容器的溫度設定為50°C，水解反應一段時間后，采用固液分離方法將液相移除。
[0036]步驟六、第二次水解處理:在經過步驟五第一次水解處理得到的固體渣中補加一定無菌水至原反應原液的體積，調節無菌容器中的反應體系的pH值為4.80，無菌容器的溫度設定為50°C，繼續反應一段時間后，采用固液分離方法將液相移除。
[0037]步驟七、第三次水解處理:在經過步驟六第二次水解處理后得到的固體渣中繼續補加一定無菌水至原反應原液的體積，調節無菌容器中的反應體系的pH值為4.80，無菌容器的溫度設定為50°C，繼續反應一段時間后，采用固液分離方法再次將液相移除。
[0038]其中，步驟五和步驟六中的固液分離方法包括離心法和過濾法。離心法較過濾法的分離速度較快，能節省大量的固液分離時間。在本發明實施例中，固液分離方法采用離心法。
[0039]進一步地，步驟五第一次水解處理、步驟六第二次水解處理和步驟七第三次水解處理的總水解時間為24h。
[0040]實施例一、
[0041]第一次水解處理中的水解時間為6h，第二次水解處理中的水解時間為6h。
[0042]實施例二、
[0043]第一次水解處理中的水解時間為6h，第二次水解處理中的水解時間為8h。
[0044]實施例三、
[0045]第一次水解處理中的水解時間為Sh，第二次水解處理中的水解時間為Sh。
[0046]實施例四、
[0047 ] 第一次水解處理中的水解時間為6h，第二次水解處理中的水解時間為12h。
[0048]實施例五、
[0049 ] 第一次水解處理中的水解時間為24h。
[0050]試驗:
[0051]實施例一至實施例四代表不同分段時間節點的三段水解制備技術，實施例五代表不分段水解制備技術。
[0052]將實施例一至實施例五分別按照本發明提供的一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法制備纖維寡糖，分別測定實施例一至實施例五的纖維寡糖的得率，記錄數據，繪制成柱狀圖如圖1所示。
[0053]參閱圖1，從圖中可發現，實施例一至實施例四的纖維寡糖的得率均明顯高于實施例五的纖維寡糖得率。且在三段水解模式中，實施例一的纖維寡糖的得率最高，為72.27%，較實施例五的纖維寡糖得率高出37.06%，整整翻了一倍，較二段水解模式下的最高得率提升了 15.98%，大大提高了纖維寡糖的生產產量。
[0054]本發明提供的一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法，能夠高效解除水解過程中產物對酶的反饋抑制作用，提高低葡萄糖苷酶纖維素酶定向水解低聚木糖生產廢渣制備纖維寡糖的得率，提升了纖維寡糖的生產產量。
[0055]以上所述僅為本發明的較佳實施例而已，并不用以限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內所作的任何修改、等同替換或改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。
【主權項】
1.一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法，其特征在于:包括如下步驟: 步驟一、制備反應原液:按1:20的比例稱取底物纖維素和無菌水，將底物纖維素和無菌水倒入溫度可設定的無菌容器中，得到底物纖維素濃度為5%的反應原液； 步驟二、設定溫度及PH值:調節無菌容器中的反應原液的pH值為7.0，設定無菌容器的溫度恒為10°C; 步驟三、底物原位吸附:稱取一定量的里氏木霉纖維素酶，投入經步驟二處理后的反應原液中，攪拌均勻后得到吸附體系，吸附時間為30min; 步驟四、固液分離處理:當吸附時間到達30min時，將無菌容器中的吸附體系快速倒入離心機中離心處理，分離除去吸附體系中的液相，得到含有適合于纖維寡糖制備的低β-葡萄糖苷酶纖維素酶的離心沉渣； 步驟五、第一次水解處理:將步驟四得到的含有低β-葡萄糖苷酶纖維素酶的離心沉渣投至無菌容器中，在無菌容器中補加無菌水至原反應原液的體積，并調節無菌容器中的反應體系的PH值為4.80，無菌容器的溫度設定為50°C，水解反應一段時間后，采用固液分離方法將液相移除； 步驟六、第二次水解處理:在經過步驟五第一次水解處理得到的固體渣中補加一定無菌水至原反應原液的體積，調節無菌容器中的反應體系的PH值為4.80，無菌容器的溫度設定為50°C，繼續反應一段時間后，采用固液分離方法將液相移除； 步驟七、第三次水解處理:在經過步驟六第二次水解處理后得到的固體渣中繼續補加一定無菌水至原反應原液的體積，調節無菌容器中的反應體系的pH值為4.80，無菌容器的溫度設定為50°C，繼續反應一段時間后，采用固液分離方法再次將液相移除； 步驟八、提純纖維寡糖:收集經步驟五、步驟六和步驟七固液分離后的液相，并提取液相中的纖維寡糖反應產物，提純得到纖維寡糖，可直接用于飼料添加劑。2.如權利要求1所述的一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法，其特征在于:所述的步驟一中的底物纖維素為低聚木糖生產廢渣。3.如權利要求1所述的一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法，其特征在于:所述的步驟三中里氏木霉纖維素酶的用量為15FPIU/g底物纖維素。4.如權利要求1所述的一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法，其特征在于:所述的步驟五、步驟六和步驟七中的固液分離方法包括離心法和過濾法。5.如權利要求1所述的一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法，其特征在于:所述的步驟五第一次水解處理、步驟六第二次水解處理和步驟七第三次水解處理的總水解時間為24h。6.如權利要求5所述的一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法，其特征在于:所述的步驟五第一次水解處理中的水解時間為6h，步驟六第二次水解處理中的水解時間為6h07.如權利要求5所述的一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法，其特征在于:所述的步驟五第一次水解處理中的水解時間為6h，步驟六第二次水解處理中的水解時間為8h。8.如權利要求5所述的一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法，其特征在于:所述的步驟五第一次水解處理中的水解時間為8h，步驟六第二次水解處理中的水解時間為8h。9.如權利要求5所述的一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法，其特征在于:所述的步驟五第一次水解處理中的水解時間為6h，步驟六第二次水解處理中的水解時間為12h010.如權利要求6所述的一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法，其特征在于:所述的步驟五第一次水解處理中的水解時間為24h。
【專利摘要】本發明適用于纖維寡糖制備的技術領域，公開了一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法，包括如下步驟：制備反應原液、設定溫度及pH值、底物原位吸附、固液分離處理、第一次水解處理、第二次水解處理、第三次水解處理和提純纖維寡糖。本發明一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法，通過低β-葡萄糖苷酶的纖維素酶水解低聚木糖生產廢渣，得到含有纖維寡糖的液相，通過固液分離方法并提純得到纖維寡糖，采用三段水解模式，能高效地解除水解過程中產物對酶的反饋抑制作用，纖維寡糖的得率大大高于不分段水解模式下的纖維寡糖得率，較二段水解模式也明顯提升，提高了纖維寡糖的生產產量，成本較低，資源利用率高，可工業化進行纖維寡糖的生產。
【IPC分類】C12P19/14, C12P19/04
【公開號】CN105524958
【申請號】CN201610057509
【發明人】朱漢靜, 朱漢生, 劉鎦, 陳冬勁
【申請人】江蘇康維生物有限公司
【公開日】2016年4月27日
【申請日】2016年1月27日