一種用作抗肥胖劑的化合物的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及食品化學領域，具體而言，本發明涉及用作抗肥胖的化合物。
【背景技術】
[0002] 肥胖是現代社會中最嚴重的疾病之一，其主要原因是脂肪的過量攝取。此外已知， 脂肪的過量攝取不僅會產生肥胖癥狀，而且還會產生起因于肥胖的糖尿病、高血脂癥、高血 壓、動脈硬化等癥狀。在內臟脂肪型肥胖的基礎上再加上高血糖?高血壓·脂質異常中的 任何2項以上的狀態，被稱為代謝綜合癥（內臟脂肪綜合癥），由于產生心臟病、腦中風癥 狀的危險性很高，所以近年來被視為問題。作為針對肥胖的治療藥，例如羅氏鮮（Xenical) (注冊商標）作為肥胖改善藥在市售，羅氏鮮（Xenical)是利用脂肪酶抑制活性而具有抑制 從腸道吸收脂肪的作用，但報道有脂肪便、排便次數增加、軟便、腹瀉、腹痛等副作用，難于 說一定安全。
[0003] 為了預防肥胖，通過限制飲食來減少攝取熱量雖然是有效的手段，但必須接受嚴 格的營養指導，在日常生活中在很多情況下難于實行。因此認為，安全且健康地抑制來自飲 食的脂肪被體內吸收，從治療肥胖及與此相關的疾病或者從增進健康的目的來看，是實際 有用的策略。
[0004] 在這種背景下，證明安全且對人體有效的特定保健用食品的開發受到關注。到目 前為止，作為抑制餐后血清中性脂肪值升高的食品原料，已將通過胰脂肪酶抑制來抑制脂 肪吸收的球蛋白分解物、與三酰基甘油具有不同的消化吸收特性的二酰基甘油、由魚油精 制而成的二十碳五烯 酸（EPA)、二十二碳六烯酸（DHA)等作為特定保健用食品而銷售。
[0005] 此外，來自植物的脂肪酶抑制活性物質最近也日漸受到關注，特別是關于具有脂 肪酶抑制活性的多酚類，已報道了配合來自植物樹皮的單寧、豆科植物豆茶決明中含有的 單寧類、類黃酮類及其糖苷、綠茶中的主要成分表沒食子兒茶素沒食子酸酯及表兒茶素沒 食子酸酯的脂質吸收抑制食品，由菜椒、叢生口蘑、南瓜、舞茸、羊棲菜、綠茶、烏龍茶等的水 提取物組成的脂肪酶抑制劑，以黃酮及黃酮醇類、羥基苯甲酸類（沒食子酸）、三萜類化合 物及其衍生物、羅望子的原花青素為有效成分的抗肥胖劑等。并且已知葡萄種子提取物的 脂肪酶抑制作用、來自五層龍的多酚的脂肪酶抑制作用和對大鼠的抗肥胖作用、烏龍茶提 取物對小鼠的抗肥胖作用等。此外還有關于茶中含有大量兒茶素類，其成分大多被分離?鑒 定、含有來自茶的成分的脂肪酶抑制劑的報道。其中，已知作為紅茶、烏龍茶的色素而已知 的茶黃素，與其分子內沒食子酸酯基的數量成比例地顯示強的脂肪酶抑制活性。但是，這些 茶黃素類的含量、比率因茶的種類而不同。
[0006] 此外，a-葡萄糖苷酶抑制物質，通過抑制在小腸上皮上存在的a-葡萄糖苷酶， 抑制?延緩糖質的分解?吸收，具有血糖值升高抑制作用。因此，α-葡萄糖苷酶抑制物質 對于由慢性高血糖癥引起的糖尿病、肥胖癥等各種疾病有用。
[0007] 自從1933年在麥芽成分中發現a -葡萄糖苷酶抑制活性以來，發現了大量來自小 麥、豆類等植物的Ct -葡萄糖苷酶抑制物質。1966年從微生物代謝物中分離出了具有Ct -葡 萄糖苷酶抑制活性的野尻霉素，并確定了其結構。已知作為其類似物的1-脫氧野尻霉素從 桑葉的提取物中得到，其具有α -葡萄糖苷酶抑制活性，公開了不使其活性降低的提取方 法。
[0008] 此外還報道，從網狀五層龍（Kothala Himbutu)的根的提取物中分離的具有亞砜 的帶有13員環環多醇結構的物質，具有麥芽糖酶抑制活性。此外還報道，作為從牽牛花、紫 薯的根中分離出的花色素苷化合物，被二酰化后生成的花葵素、矢車菊素、芍藥素的3-槐 糖苷-5-葡萄糖苷（3-sophoroside-5-glucoside)具有麥芽糖酶抑制活性。此外確認，在茶 葉中含有的茶雙沒食子兒茶素 ACTheasinensin A)、具有沒食子酰基的茶黃素衍生物、含有 表阿夫兒茶精沒食子酸酯作為結構單元的原花色素等具有麥芽糖酶抑制活性。但是，具有 沒食子酰基的茶黃素衍生物雖然具有麥芽糖酶抑制活性，但茶葉中的含量為〇. 1~〇. 2%， 非常少。
[0009] 已報道紅茶的茶黃素及綠茶的兒茶素類具有α -葡萄糖苷酶抑制活性（非專利文 獻8)，并且確認，在兒茶素類中3位上有沒食子酰基的表沒食子兒茶素-3-0-沒食子酸酯 (以下稱為"EGCG"）、表兒茶素-3-0-沒食子酸酯具有活性，在茶黃素類中茶黃素-3-0-沒 食子酸酯、茶黃素-3, 3'-二-0-沒食子酸酯具有活性。關于紅茶的ct-葡萄糖苷酶抑制活 性，對其分離物進行了分析，已知通過發酵而進行聚合的高分子組分也有活性。
[0010] 另一方面，已知在制造紅茶、烏龍茶的發酵過程中，在茶葉的多酚氧化酶等酶的作 用下，兒茶素或沒食子酸等多酚類發生縮合，形成具有苯并環庚三烯酚酮環的化合物。
[0011] 報道茶中除茶黃素之外，還存在大量的含苯并環庚三烯酚酮環化合物。例如報道， 紅掊酚衍生物的細胞凋亡誘導、表茶黃掊靈類用于食品的制造方法、或者作為茶黃素的三 聚體的二苯駢卓酸酮4(11163(1讓6112〇1：1'(^〇1〇116 4)的酶促制備法和在紅茶中的存在等。此 外還知道各種含苯并環庚三烯酚酮環化合物的抗炎癥作用。但是，對于茶黃素類、表茶黃 掊靈類之外的含苯并環庚三烯酚酮環化合物，尚不知道其與脂肪吸收相關的脂肪酶抑制作 用、與血糖值升高抑制作用相關的Cl -葡萄糖苷酶抑制作用。
【發明內容】
[0012] 本發明目的在于提供一種可用于食品中的抑制肥胖的化合物，其以式I結構所 示：
[0013] 作為本發明的抗肥胖劑的抑制劑，通過含有來自茶葉的提取化合物，顯示優異的 脂肪酶抑制活性。本發明的脂肪酶抑制劑可利用于包括不損壞香味、嗜好性高且以降低中 性脂肪、促進健康為目的的飲食品在內的各種用途。為了抑制飲食中的脂肪吸收，最好在 進行用餐時同時攝取，將從茶中得到的有效成分強化后的飲料意義重大。特別是通過強化 這些成分，可提供以抗肥胖作用、促進健康為目的的飲料。
[0014] 作為本發明的抗肥胖劑的抑制劑，與以往已知的來自天然物的α-葡萄糖苷酶相 t匕，使用少量即可抑制來自飲食的淀粉、多糖的糖分的分解，抑制吸收。而且因為任一種化 合物均是茶類中含有的兒茶素、多酚的氧化物，所以香味、安全性優異，可長期攝取。
[0015] 此外，本發明的抗肥胖劑，由于含有作為來自飲食經驗豐富的茶的成分的化合物， 所以可用于安全性高、副作用降低的醫藥組合物。 實施例
[0016] 下面通過實施例對本發明作進一步說明。應該理解的是，本發明實施例所述方 法僅僅是用于說明本發明，而不是對本發明的限制，在本發明的構思前提下對本發明制備 方法的簡單改進都屬于本發明要求保護的范圍。實施例中用到的所有原料和溶劑均購自 Sigma Biochemical and Organic Compounds for Research and Diagnostic Clinical Reagents公司；龍井茶葉為普通商購產品。
[0017] 實施例1 :式I化合的制備 用90°c熱水提取龍井綠茶茶葉，在冷凍干燥后的產物中加入蒸餾水使其為10mg/ml， 進行加熱溶解。一邊在水浴中加熱至60-70°C，一邊取15ml加載于Sephadex LH-20(GE HEALTHCARE BIO SCIENCES株式會社制）60ml中。用20%丙酮（丙酮：蒸餾水=2 : 8、v/ v)45ml、接著用60ml (1個柱體積）洗滌，然后分別用30%丙酮（丙酮：蒸餾水=3 : 7、v/ v)、50%丙酮（丙酮：蒸餾水=1 : l、v/v)、60%丙酮（丙酮：蒸餾水=6 : 4、v/v)各4 柱體積的溶劑進行洗脫，將每1個柱體積分離。從共計14個餾分的各60ml中抽取2ml，將 通過減壓濃縮處理調制的0.1ml的50%二甲基亞砜水溶液（二甲基亞砜：蒸餾水=1 : 1、 v/V)供給脂肪酶抑制活性測定。此外，將各餾分進行減壓濃縮，乙酸乙酯重結晶得到白色固 體的式I化合物。
[0018] NMR (300MHz, DMS〇-d6) : δ 8. 99 (s, 1H), 7. 59 (s, 1H), 7. 46 (s, 1H), 4. 36 (t, J=6. 0 0Hz, 2H), 4. 02 (s, 3H), 3. 83 (t, J=6. 00Hz, 2H), 2. 28 (m, 2H). 實施例2 :生物活性測試 脂肪酶活性的測定，通過在底物中使用熒光性4-甲基傘形酮的油酸酯（4-MU0;Sigma 公司制），測定通過反應生成的4-甲基傘形酮的熒光來實施。測定時緩沖液使用含有150mM NaCl、L 36mM CaCl2& 13mM Tris-HCl (ρΗ8· 0)。作為底物的 4-MU0,將形成(λ 1M 的 DMS0 溶 液后用上述緩沖液稀釋4000倍后供給酶測定，此外脂肪酶，同樣使用上述緩沖液將豬胰脂 肪酶（Sigma公司制）制成400U/ml溶液后供給酶測定。
[0019] 酶反應是在25°C條件下，在96孔微孔板上添加并混合50 μ 1的4-MU0緩沖液溶 液、25 μ 1蒸饋水（或試樣水溶液）后，通過添加25 μ 1脂肪酶緩沖液溶液而開始。進行30 分鐘反應后，添加100μ 1的0. 1Μ檸檬酸緩沖液（ρΗ4. 2)使反應中止。用熒光微孔板檢測 儀（Labsystem公司制Fluoroskan Asent CF)測定通過反應生成的4-甲基傘形酮的突光 (激發波長355nm、突光波長460nm)。
[0020] 被檢試樣的抑制活性，作為相對于對照（蒸餾水）的活性抑制50%所需的試樣量 IC5。（μ M)而求出。式I化合物的脂肪酶已知活性為0. 413。
【主權項】
1. 一種用作抗肥胖劑的化合物，其特征在于W式I所示：2. -種抗肥胖的組合物，其特征在于含有式I化合物W及食物上可接受的助劑。
【專利摘要】本發明涉及一種用作抗肥胖劑的化合物，其結構如式I所示。I。
【IPC分類】A23F3/18, A61K31/5415, A61P3/04, A23L1/30, C07D491/107
【公開號】CN105646510
【申請號】
【發明人】張華春
【申請人】重慶寧牧生態農業有限公司
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2014年12月2日