一種索拉非尼及其有關物質的檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于藥物分析技術領域，具體涉及一種索拉非尼或其鹽有關物質的測定方 法。 【背景技術】
[0002] W02000/42012A公開了一類ω -羧基芳基取代的二苯脲化合物4-{4-[ ({[4-氯-3-(三氟甲基）苯基]氨基}羰基)氨基]苯氧基}-Ν_甲基吡啶-2-甲酰胺，其結構式如式（I)所 示：
[0003
[0004] W02000/42012A還公開了該化合物及其鹽，例如對甲苯磺酸鹽如結構式（II)，其可 用于抑制Raf激酶所介導癌細胞生長。
[0005]
[0006] W02003/068228A尤其涉及式（II)化合物在治療VEGF信號轉導通路介導的疾病（例 如腫瘤）的應用，可用于異常血管生成或高滲透性病癥。W02003/0475979A公開了式（II)化 合物與細胞毒或細胞抑制化合物聯合用于治療Raf激酶介導的疾病，例如癌癥，如肺癌、胰 腺癌、甲狀腺癌、腎癌、腸癌或癌細胞生長。W02006/034796A公開了一種索拉非尼對甲苯磺 酸鹽的制備方法，其反應路線如下：
[0007]
[0008] 在藥物的制備和貯存過程中，對合成方法可能產生的雜質(包括中間體、副產物等 有機雜質)進行監測，對于原料藥及其制劑的質量控制非常重要。W02006/034796A制備的對 甲苯磺酸索拉非尼的有關物質，包括起始原料(RC1、RC2、RC4、RC9)，中間體(RC3)，乙醇解產 物(RC5)，降解產物(RC110，副產物(RC6、RC7)，水解產物(RC8)，N氧化物副產物(RC10)，索拉 非尼(RC12)。索拉非尼進口藥品注冊標準(標準號:JX20070240)公開了一種對甲磺酸索拉 非尼的含量測定方法，是用十八烷基鍵合硅膠為填充劑(Waters Symmetry C18，3.5μηι，4.6 X 50mm);以ρΗ2.4磷酸鹽緩沖液(取1.0g二水合磷酸二氫鉀，加水使溶解并稀釋至1000ml， 以磷酸調節pH值至2.4)為流動相A，乙腈-乙醇(60:40)為流動相B，檢測波長為235nm;色譜 柱溫為40°C，進行梯度洗脫程序操作。該方法所用儀器設備昂貴且不具有普遍適應性，并且 對所用試劑、色譜柱要求苛刻，實用性和適用性差。
[0009] 0附047614924(公開日2015.07.08)公開了一種索拉非尼的測定方法，是以11^111〇 八(^11(3〇代乂1^(：18(150\4.6臟，4以〇為色譜柱 ；以?!12.4磷酸鹽緩沖液(取1.(^二水合磷酸 二氫鉀，加水使溶解并稀釋至l〇〇〇mL，以磷酸調節pH=2.4)為流動相A;以乙腈-乙醇（60: 40)為流動相B;檢測波長為235nm，進行梯度洗脫程序操作。該方法無法實現對索拉非尼及 其雜質的檢測，且靈敏度低，不能良好地反應系統的檢測能力。因此，需要開發更高靈敏度 的索拉非尼或其對甲苯磺酸鹽及它們有關物質HPLC測定方法。
【發明內容】
[0010] 本發明的目的是提供一種索拉非尼及其有關物質的檢測方法，其可用于索拉非尼 或其鹽的合成過程和終產品及制劑的質量控制。
[0011] 本發明的索拉非尼及其有關物質的檢測方法，是采用高效液相色譜法實現，選用 十八烷基鍵合硅膠色譜柱；以PH2.0~3.0的緩沖液為流動相A，乙腈和乙醇混合物為流動相 B;檢測波長為230nm~240nm，按照下述梯度洗脫程序操作，
[0012]
[0013] 在本發明的一些實施方案中，所述流動相A為pH2.4磷酸鹽緩沖液，所述流動相B為 體積比為60:40的乙腈:乙醇混合溶液。
[0014] 在本發明的一些實施方案中，所述檢測波長為235nm。
[0015] 在本發明的一些實施方案中，所述檢測方法的流速為0.9~1. lmL/min，優選 1·0mL/min〇
[0016] 在本發明的一些實施方案中，所述十八烷基鍵合硅膠色譜柱填料粒徑為3_5μπι，優 選4·6μηι〇
[0017] 在本發明的一些實施方案中，所述柱溫為30°C~45°C，優選30°C。
[0018] 在本發明中，所"pH" ±0.1、"流速" ±0. lmL/min、柱溫±5°C、"流動相比例" ±2%、 "檢測波長" ±2nm對本發明的實施無影響，且均落入本發明的保護范圍內。
[0019] 本發明中，術語"索拉非尼"在沒有明確區分的情況下，可以是索拉非尼的純品、原 料藥、合成品、索拉非尼的鹽(如對甲苯磺酸索拉非尼)等以索拉非尼作為主成分的產品。本 發明的測定方法均適用于上述產品的質量控制，并且這些產品的有關物質的測定方法也保 護在本發明的保護范圍內。
[0020] 本發明中，術語"有關物質"是指在藥物制備和貯存過程中，對合成方法可能產生 的雜質（包括中間體、副產物等有機雜質）。
[0021] 本發明的方法具有空白基線平穩、專屬性強、分離度好、靈敏度高（L0D數量級為 0.01ng、L0Q數量級為O.lng)、準確度高（回收率在96%~100%)、精密度良好、線性范圍寬 (0.3~3000μg/ml)等特點，其適用于索拉非尼或其鹽及其中間體雜質的檢測，亦可用于索 拉非尼及其中間體的定性和定量分析，或進一步用于監測索拉非尼合成反應工藝、終產品 或原料藥及制劑的質量。
【附圖說明】
[0022] 圖1為實施例1的空白溶液的色譜圖。
[0023] 圖2為實施例1的甲苯磺酸索拉非尼混合對照品的色譜圖。
[0024] 圖3為實施例1的甲苯磺酸索拉非尼樣品的色譜圖。
[0025] 圖4為實施例2的甲苯磺酸索拉非尼樣品的色譜圖。
[0026] 圖5為實施例3的甲苯磺酸索拉非尼樣品的色譜圖。
[0027] 圖6為對比例1的甲苯磺酸索拉非尼樣品的色譜圖。
[0028] 圖7為對比例2的空白溶液的色譜圖。
[0029] 圖8為對比例2的甲苯磺酸索拉非尼混合對照品的色譜圖。 具體實施方案
[0030] 下面用具體實施例來進一步解釋和說明本發明，但并不以任何方式限制本發明的 范圍。
[0031] 本發明所使用的試劑均可以從市場上購得。
[0032] 實施例1
[0033] (1)檢測條件
[0034] 儀器:Thermo U3000高效液相色譜儀，檢測器:紫外檢測器，檢測波長:235nm;
[0035] 色譜柱：Waters Xbridge C18(250X4.6mm，5ym);
[0036] 流動相:pH 2.4磷酸鹽緩沖液（取l.Og二水合磷酸二氫鉀，加水使溶解并稀釋至 1000ml，以磷酸調節pH=2.4)為流動相A，以乙腈-乙醇(60:40)為流動相B;
[0037] 柱溫：30 Γ;
[0038] 流速：lmL/min;
[0039] 進樣量：5yL。
[0040] 按表3的條件進行線性梯度洗脫程序。
[0041] 表 3
[0042]
[0043] (2)檢測方法
[0044] 定性對照溶液的配制:精密稱取RC1、RC2、RC3、RC4、RC9、RC12各5mg，置于1 OmL量瓶 中，用甲醇溶解并稀釋至刻度;精密稱取此5、此6、此7、此8、1^10、此11各11^，置于1〇1^量瓶 中，用甲醇溶解并稀釋至刻度;再精密稱取索拉非尼30mg，置于20mL量瓶中，用甲醇溶解并 稀釋至刻度，即得各定性對照溶液。
[0045] 混合對照品溶液的配制:精密稱取甲苯磺酸索拉非尼樣品30mg，置于20mL量瓶中， 先加入5mL的甲醇溶解再分別加入上述定性對照溶液各lmL，用甲醇定容至刻度，搖勻，作為 供試品溶液。
[0046]供試品溶液的配制:精密稱取甲苯磺酸索拉非尼樣品30mg，置于20mL量瓶中，用甲 醇定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
[0047] 空白溶液:稀釋劑。
[0048] 分別取空白溶液、混合對照品溶液和供試品溶液，按照上述條件進行HPLC分析并 記錄色譜圖，見圖1、圖2和圖3。結果表明，該方法可實現索拉非尼及其雜質的完全分離，且 空白基線平穩，靈敏度高。
[0049] 實施例2
[0050] 按照實施例1類似的檢測方法，其中，波長替換為230nm。其甲苯磺酸索拉非尼樣品 的色譜圖見圖4。
[0051] 結果表明，該方法可實現索拉非尼及其雜質的完全分離，且空白基線平穩，靈敏度 尚。
[0052] 實施例3
[0053]按照實施例1類似的檢測方法，其中，波長替換為240nm。其甲苯磺酸索拉非尼樣品 的色譜圖見圖5。
[0054] 結果表明，該方法可實現索拉非尼及其雜質的完全分離，且空白基線平穩，靈敏度 尚。
[0055] 對比例1
[0056] (1)檢測條件
[0057]儀器:Waters高效液相色譜儀，檢測波長:235nm;
[0058] 色譜柱：Thermo Accucore XL C18(250X4.6mm，4yL);
[0059] 流動相:pH 2.4磷酸鹽緩沖液（取l.Og二水合磷酸二氫鉀，加水使溶解并稀釋至 1 OOOmL，以磷酸調節pH=2.4)為流動相A，以乙腈-乙醇(60:40)為流動相B;
[0060] 柱溫：40 Γ;
[0061] 流速:0.5mL/min;
[0062] 進樣量：10yL。
[0063] 按表2的條件進行線性梯度洗脫程序。
[0064] 表 2
[0065]
[0066] (2)檢測方法
[0067]按照實施例1的檢測方法項下進行操作。其甲苯磺酸索拉非尼樣品的色譜圖見圖 6〇
[0068] 結果表明，索拉非尼中RC2(4.172min)出峰較早，與溶劑峰不能完全分離，無法實 現索拉非尼樣品的檢測。
[0069] 對比例2 [0070] (1)檢測條件
[0071] 儀器:Thermo U3000高效液相色譜儀，檢測波長:235nm;
[0072]色譜柱：Thermo Accucore XL C18(150X4.6mm，4yL);
[0073]流動相:pH 2.4磷酸鹽緩沖液（取l.Og二水合磷酸二氫鉀，加水使溶解并稀釋至 1 OOOmL，以磷酸調節pH=2.4)為流動相A，以乙腈-乙醇(60:40)為流動相B;
[0074]柱溫：3(TC;
[0075] 流速：lmL/min;
[0076] 進樣量：10yL。
[0077] 按表3的條件進行線性梯度洗脫程序。
[0078] 表 3
[0079]
[0080] (2)檢測方法
[0081] 按照實施例1的檢測方法項下進行操作。其空白溶液的色譜圖、甲苯磺酸索拉非尼 混合對照品的色譜圖見圖7和圖8。
[0082] 結果表明，索拉非尼（R12)中RC1與溶劑峰不能完全分離，RC5、RC6重合，不能達到 完全分離，且空白基線不太平穩，噪音較大，靈敏度低。
【主權項】
1. 一種索拉非尼及其有關物質的檢測方法，其特征在于，采用高效液相色譜法實現，選 用十八烷基鍵合硅膠色譜柱；WpH2.0~3.0的緩沖液為流動相A，乙臘和乙醇混合物為流動 相B;檢測波長為230nm~240nm，按照下述梯度洗脫程序操作，2. 根據權利要求1的檢測方法，其特征在于，所述流動相A為pH2.4憐酸鹽緩沖液，所述 流動相B為體積比為60:40的乙臘:乙醇混合溶液。3. 根據權利要求1的檢測方法，其特征在于，所述檢測波長為235nm。4. 根據權利要求1的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法的流速為0.9~1. ImL/min。5. 根據權利要求1的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法的流速為1. OmL/min。6. 根據權利要求1的檢測方法，其特征在于，所述十八烷基鍵合硅膠色譜柱填料粒徑為 3-姐HId7. 根據權利要求1的檢測方法，其特征在于，所述十八烷基鍵合硅膠色譜柱填料粒徑為 4.化m。8. 根據權利要求1的檢測方法，其特征在于，所述柱溫為25°C~35°C。9. 根據權利要求1的檢測方法，其特征在于，所述柱溫為30°C。
【專利摘要】本發明涉及一種索拉非尼及其有關物質的檢測方法，其采用高效液相色譜法梯度洗脫實現，選用十八烷基鍵合硅膠色譜柱；以pH2.0～3.0的緩沖液為流動相A，乙腈和乙醇混合物為流動相B；檢測波長為230nm～240nm。該方法具有空白基線平穩、專屬性強、分離度好、靈敏度高、準確度高、精密度良好、線性范圍寬等特點，其適用于索拉非尼或其鹽及其中間體雜質的檢測。
【IPC分類】G01N30/02, G01N30/34
【公開號】CN105651877
【申請號】
【發明人】楊曉玲, 郝福, 邵玉平
【申請人】神威藥業集團有限公司
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2015年12月30日