一種心理性格檢測試劑盒和方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及基因檢測，具體涉及人體性格必理傾向的基因檢測試劑盒。
【背景技術】
[0002] 長期W來，人們一直認為人的性格是由自身經歷和周圍環境決定的，俗語"近朱 者赤、近墨者黑"指的就是送個道理。生活中總有一些人"膽大包天"，敢于冒險，也有一 些人謹慎膽小，行為保守。最新的科學證據表明，人的性格確實和遺傳基因有關。 隨著分子生物學的發展，人們最終將能精密地繪出像身高、體重、情感、性格等人體特 征的遺傳基因圖，并能運用生物和醫學的手段來控制人的感情，重塑人的性格，改變人的行 為。正如紐約大學的尼爾坎教授所說："新發現的基因，促使一種全新遺傳學的誕生，即遺 傳學不僅能夠控制疾病，而且可W在特定的范圍內解釋人的性格和行為，它有著如此巨大 的感染力，可讓你對人們身上發生的每一件事從單一的生物學的角度來找出原因。" 性格必理的成因在不同的學科，如生物學、必理學、社會學等，都有不同的解釋。目前在 生物學領域已經有焦點放在神經傳導物質多己胺、正腎上腺素和血清素等等上。越來越多 的研究表明，對于送些神經傳導相關聯的基因的SNPs (單核巧酸多態性）位點的分析，將會 非常有助于我們對送些基因與性格必理的關聯性的理解。
[0003] SNPs (單核巧酸多態性）指的是由單個核巧酸一A，T，C或G的改變而引起的DNA 序列的改變，造成包括人類在內的物種之間染色體基因組的多樣性。人類遺傳基因的各種 差異，90%可歸因于SNP引起的基因變異。在人類基因組中，每隔100至300個堿基就會存 在一處SNP位點。基于SNPs的關聯研究現在已經成為一種復雜疾病研究的常用方法，尤 其是候選基因關聯研究，它既有助于增加復雜疾病關聯研究的統計能力，又有助于加強 對可能和復雜疾病有關的一系列表型、基因和蛋白的生物學理解。
【發明內容】
[0004] 有鑒于此，本發明提供了一種性格必理傾向基因檢測試劑盒，該試劑盒對受測者 的相關基因進行檢測，分析得到其潛在的必理性格，主要集中在行為的謹慎程度方面，通過 該分析為受測者提供行為必理的科學基礎，評估相應嚴重必理疾病的風險。且PCR擴增反 應在同一臺PCR儀上同步進行并具備檢測的高效性、特異性。
[0005] -種性格必理傾向基因檢測試劑盒，包括盒體及盒體內單獨存放的試劑，存放的 試劑包括： (1)針對4個基因 SNP多態位點的PCR反應引物組（W下引物序列方向均為5'端至3' 玉山\ 乂而）： 針對SNP RS4680的引物組： 1 CCAACCCTGCACAGGCAAGAT 2 CAAGGGTGACCTGGAACAGCG 3 CGGATGGTGGATTTCGCTGACG
(2) PCR擴增試劑； (3) 瓊脂糖凝膠電泳分析試劑。
[0006] 本發明提供的性格必理傾向基因檢測試劑盒的有益效果是；通過PCR引物的設計 使多個PCR擴增反應在同一臺PCR儀上同步進行，對受測者的相關基因進行檢測，并實現檢 測的高效性、特異性，分析得到其潛在的必理性格，主要集中在行為的謹慎程度方面，通過 該分析為受測者提供行為必理的科學基礎，評估相應嚴重必理疾病的風險。【附圖說明】 圖1是反應產物瓊脂糖凝膠電泳圖。
【具體實施方式】
[0007] 性格必理傾向基因檢測試劑盒，包括盒體及盒體內單獨存放的試劑，存放的試劑 包括： (1)針對4個基因 SNP多態位點的PCR反應引物組（W下引物序列方向均為5'端至3' 玉山\ 乂而）：
[0008] 下面將結合實施例對本發明提供的方法予W進一步的說明。
[0009] 本實施例對測試者采用性格必理傾向基因檢測試劑盒同時檢測10個基因的SNP 多態位點，并根據基因分型結果，分析得到其潛在的必理性格，主要集中在行為的謹慎程度 方面，通過該分析為受測者提供行為必理的科學基礎，評估相應嚴重必理疾病的風險。
[0010] 使用到的性格必理傾向基因檢測試劑盒內試劑由W下組成： (1)針對4個基因 SNP多態位點的PCR反應引物組（W下引物序列方向均為5'端至3' 端）；
(2)PCR擴增試劑；lOXPCR緩沖液，該PCR緩沖液為lOOmM Tris-肥1 p冊.3,500mM KCl，15mM MgC12 ;dNTPs混合物，該dNTPs混合物為Η磯酸鳥嘿嶺脫氧核巧酸dGTP，Η磯 酸腺嘿嶺脫氧核巧酸dATP，Η磯酸胸腺嚼巧脫氧核巧酸dTTP，Η磯酸胞嚼巧脫氧核巧酸 dCTP四種核巧酸，各組分濃度為2. 5mM ;5υ/μ 1熱啟動Taq酶。
[0011] (3)瓊脂糖凝膠電泳分析試劑諒脂糖、TAE緩沖液、DM分子量標準、Goldview 染色液和DM上樣緩沖液，該緩沖液W漠酪藍為指示劑稀釋至IX后使用。
[0012] 使用上述性格必理傾向基因檢測試劑盒按如下步驟進行檢測： (1)提取樣本基因組DNA。
[0013] 采集該測試者唾液，向l-2ml唾液樣品中加入500ul提取緩沖溶液，該DNA提取 緩沖溶液溶劑為50mM的化is-肥1 pH7. 4、0. 5mM的邸TA和50mM的化C1，反復吹打混勻 后，8000Xg離必5分鐘，棄去上清，此步驟重復一次；得到的沉淀中加入500ul裂解液， 該裂解液溶劑為 50mM Tris-肥 1 pH7. 4,50mM Tris-肥 1 pH7. 4，150mM 化Cl，lmM 邸TA，1% Triton χ-100，1% Sodium deoxycholate, 0.1% SDS,蛋白酶 K20mg/mL,徹底懸浮沉淀并 充分混勻后，室溫放置30分鐘，期間來回顛倒離必管數次；得到的混合液中，加入濃度為 lOmg/mLRNA酶的水溶液10 μ L，37°C下靜置lOmin ;得到的上清液中，加入等體積苯酪-氯 仿混合溶液，苯酪和氯仿體積比為1 : 1，充分混勻，混合液4°C，12000Xg離必5分鐘，上清 液移入干凈離必管內；加入等體積苯氛-氯仿-異戊醇混合溶液，苯酪、氯仿和異戊醇體積 比為25 : 24 : 1，充分混勻后，4°C，12000Xg離必5分鐘，上清液移入干凈離必管內；加 入等體積氯仿-異戊醇混合溶液，充分混勻后，4°C，12000Xg離必5分鐘，上清液移入干 凈離必管內；加入0. 6倍體積的冰浴異丙醇溶液及0. 1倍的3mol/L醋酸鋼溶液，-2(TC靜 置60分鐘后，4°C，12000 X g離必10分鐘，棄上清液；得到的沉淀物中加入0. 5血70 %己醇 清洗沉淀物，4°C，12000 X g離必5分鐘，棄上清液，此步驟重復一次；得到的沉淀物自然風 干，加入20 μ L無菌超純水回溶，電泳檢測，-2(TC保存。
[0014] (2)PCR 擴增 本實施例同時檢測RS4680、RS6314、RS62952和RS3749034。每個SNP的檢測需要一對 上下游引物、兩條多態引物共4條PCR引物，共需要16條引物。每個SNP的檢測需要做兩 管PCR擴增，為防止出現假陽性之類的反應，衡量PCR是否成功，加設一管陰性對照組，共做 9管PCR，所述陰性對照組基因組模板及反應體系是一樣的，但沒有引物存在。
[001引根據不同的檢測位點，用相應的引物按如下比例分別配制PCR反應體系： 2.5μ 110XPCR緩沖液，2μ 1 dNTPs，0.5u 1引物組，熱啟動Taq酶0. 15μ 1，基因組模板 80mg，添加超純水至總體積為25 μ 1。
[0016] 將裝有反應溶液的化pendorf試管放入ΑΒΙ 9700 PCR儀中，設置反應條件如下： 預變性 95°C 3min ;熱循環 94°C 30s，6(TC 30s，72°C 30s，35 個循環；延伸 72°C 3min。反應 結束后，取出試管。
[0017] 由于9管PCR擴增反應是在同一臺PCR儀上同步進行的，為了實現檢測的高 效性、特異性，要求16條PCR引物的Tm值相近，為此需要先進行大量的DNA序列軟件分析 來設計PCR引物，并通過大量的實驗來進行Tm值的優化并確定設計的合理性，本試劑盒各 基因 SNP多態性的檢測是既相對獨立又相互聯系的，不可分割。
[001引（3 )瓊脂糖凝膠電泳檢測 將擴增后的產物進行瓊脂糖電泳檢測，過程如下；3g瓊脂糖，加入lOOmL去離子水，微 波爐加熱Imin，冷卻到6(TC時加入5 μ L Goldview染色液，制成3%的瓊脂糖凝膠。PCR產 物10 μ L與6 X T邸緩沖液0. 8 μ L混合上樣，電壓100V電泳15min。紫外燈下讀取結果并 拍照，所得瓊脂糖電泳檢測圖如圖1所示。
[0019] 檢測得到4個基因分型及分析結果如下：
W上所述僅為本發明的較佳實施例，并不用W限制本發明，凡在本發明的精神和原則 之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。
【主權項】
1. 性格心理傾向基因檢測試劑盒，包括盒體及盒體內單獨存放的試劑，其特征在于： 存放的試劑包括： (1) 針對4個基因 SNP多態位點的PCR反應引物組（以下引物序列方向均為5'端至3' 立而）： 針對SNP RS4680的引物組： 1 CCAACCCTGCACAGGCAAGAT 2 CAAGGGTGACCTGGAACAGCG 3 CGGATGGTGGATTTCGCTGACG 4 TCAGGCATGCACACCTTGTCCTTTAT 針對SNP RS6314的引物組： 1 CTCAATGTGTTTGTTTGGATCG 2 TGGTTCCACTAGACTTGTCTA 3 GTTGCTCTAGGAAAGCAGC 4 CTTTAGAAGCCTCTTCAGAATA 針對SNP RS6295的引物組： 1 GATTCCACCAAGTTTCCCCCAGA 2 CTCTAGCTCAGCGTCTTTGCAT 3 CGGAGGTAGCTTTTTAAAAAC 4 AGCTACCTCCGTTCTCGCGCCC 針對SNP RS3749034的引物組： 1 CAACTAGAGCCTCAGCCTCCGT 2 TTCCTTCCGGGCGCAAAACCGT 3 TCGGCTCGGCCCTGACAGGC 4 AGGTGACGCCGGGCAGATTACA (2) PCR擴增試劑； (3) 瓊脂糖凝膠電泳分析試劑。2. 根據權利要求1所述的性格心理傾向基因檢測試劑盒，其特征在于：所述引物用量 均為 〇. 5-1. Ο μ 1。3. 根據權利要求1所述的性格心理傾向基因檢測試劑盒，其特征在于：所述PCR擴增 試劑包括：l〇XPCR緩沖液，dNTPs，熱啟動Taq酶，基因組模板。4. 根據權利要求3所述的性格心理傾向基因檢測試劑盒，其特征在于：所述PCR緩沖 液包含：100mM Tris-HCl pH8.3,500mM KCl，15mM MgCl2。5. 根據權利要求3所述的性格心理傾向基因檢測試劑盒，其特征在于：所述PCR擴增 試劑用量為：l〇XPCR緩沖液2. 5μ 1，dNTPs2l·! 1，熱啟動Taq酶0. 1-0. 2μ 1，基因組模板 50-100ng〇6. 根據權利要求1所述的性格心理傾向基因檢測試劑盒，其特征在于：所述瓊脂糖凝 膠電泳分析試劑包括：瓊脂糖、TAE緩沖液、DNA分子量標準、DNA無毒染料和DNA上樣緩 沖液。7. 根據權利要求6所述的性格心理傾向基因檢測試劑盒，其特征在于：所述DNA無毒
【專利摘要】本發明提供了人體性格心理傾向的基因檢測試劑盒，該試劑盒包括盒體及盒體內單獨存放的試劑，試劑包括：（1）針對4個基因SNP多態位點的PCR反應引物組（2）PCR擴增試劑（3）瓊脂糖凝膠電泳分析試劑。本發明通過PCR引物的設計使多個PCR擴增反應可在同一臺PCR儀上同步進行，對受測者的相關基因進行檢測，并實現檢測的高效性、特異性，分析得到其潛在的心理性格，主要集中在行為的謹慎程度方面，通過該分析為受測者提供行為心理的科學基礎，評估相應嚴重心理疾病的風險。
【IPC分類】C12Q1/68
【公開號】CN105671130
【申請號】
【發明人】李則軒, 張靜靜, 朱軼凡, 邱嘉銘, 張舒, 別茜
【申請人】武漢白原科技有限公司
【公開日】2016年6月15日
【申請日】2014年11月18日