專利名稱：低聚體改進劑量和工序的制作方法
低聚體改進劑量和工序
本申請要求于2006年3月31日提交的第60/787,846號專利申請獲 得優先權，在此作為參考文獻整體引述。
發明范圍 本發明涉及一種治療人類增生性疾病的方法，例如由一種 目標基因(包括但不限于致癌基因，包括癌癥促發基因或抗藥基因)過 度表達造成的癌癥，或自體免疫疾病，或導致疾病更難治愈，該方法是， 在給予病患有效量的核苷基合成物抑制基因的表達之前，給予病患有效 量的預治療。該預治療是放射線療法中的一種或多種，例如，X射線、 質子束、電子束；升溫治療、超聲波治療、化學療法和生物療法。該發 明也涉及 一 種需要采用核苷基基因表達抑制劑以治療 一 種人類疾病的 改進劑量和工序。 背景以前治療增生性疾病，包括由于缺乏特異性導致癌癥的方 法。多數已經開發出來的藥物都是天然藥物或衍生物，阻斷代謝途徑 (Araujo,爭乂，2W6, Cwm 4癥秀參《標.6,' 77-S7)或與DNA隨意 發生作用。而且，大多數癌癥的治療措施都伴隨由于較低的治療指數 導致的嚴重的劑量限制性毒性。例如，大多數給予病患的抗癌藥不僅會 殺死癌細胞，也會殺死非癌癥細胞。由于有這些毒害作用，需要采用能 更準確地影響癌癥細胞的治療方法。由于對腫瘤發展中的分子機制理解上的進步，確定了許多 潛在的基因目標,包括致癌基因、抗藥基因，以及涉及細胞變形和癌癥狀 態維護的生長和細胞周期調節基因。很明顯，干擾基因轉錄或抑制其蛋 白物的作用可產生良好的治療效果。在Bish叩于1987年，在《科學>> 雜志235: 305-311,所發表的文章"細胞致癌基因和逆轉錄酶病毒"一 文中，對許多人類癌癥病原中的致癌基因的作用進行了評估。例如，在 許多人類癌癥中， 一種被稱為Bcl-2 (B細胞淋巴瘤/白血病-2)的基因 就為過度表達基因，而且,該過度表達可能與致腫瘤性相關(Tsujimoto等 人，1985年在《科學》雜志228:1440-1443中，所發表的文章，，人類濾
泡性淋巴瘤中Bcl-2基因的參與")。Bcl-2基因被認為主要通過延長 細胞生存率，而非通過加快細l包分裂，從而有助于癌癥的發病，并乂于治 療起抵制作用。
人類的Bcl-2基因被認為與某種白血病、淋巴瘤、成神經細 胞瘤，以及鼻咽癌、前列腺癌、乳&,癌和結腸癌的病因有關聯。(Croce 等人，于1987年在《病毒腫瘤學進展》7: 35-51中所發表的文章"人 類B和T細胞瘤形成的分子基礎，，，G.Klem (編輯))，紐約Raven press 出版社；Reed等人,于1991年在《癌癥研究〉〉51:6529-38中所發表的文 章"Bcl-2原癌基因在成神經細胞瘤和其他人類神經起端腫瘤細胞系中 的差異表達，，；Yums等人,于1989年在《新格蘭醫學期刊〉〉320:1047-54 中所發表的文章"大細胞淋巴瘤預后中Bcl-2和其他染色體畸變"； Campos等人，于1993年在《血液》81: 3091-6中所發表的文章"Bcl-2 蛋白在急性髓系白血病中的高表達與對化學療法的不良反應相關"； McDonnell等人，于1992年在《癌癥研究》52: 6940-4中所發表的文章 "原癌基因Bcl-2的表達和其與雄性荷爾蒙-非依賴性前列腺癌發生的關 系，，；Lu等人，于1993年在《國際癌癥雜志》53: 29-35中所發表的文 章"Bcl-2原癌基因在EB( Epstem Barr )病毒相關鼻咽癌的表達"；Bonner 等人，于1993年在《實驗室研究》68: 43A中所發表的文章"與推薦 形態和分子順序有關的Bcl-2原癌基因和腸道黏膜腫瘤進展模式")。已 經發現Bcl-2在多種腫瘤中有過度表達，包括非霍奇金淋巴瘤、肺癌、 乳腺癌、結腸癌、前列腺癌、腎癌和急'隄性白血病(Reed,于1995年 在胂瘤時論(Curr. Opm.Oncol) 7:541-6中所發表的文章，，Bcl隱2族蛋白 的凋亡調節和其在癌癥和化學抗性中的作用")。 反義低(聚)核苷酸技術對致癌基因和其他目標基因功能的 破壞提供了潛在的治療手段。這些低聚物對目標基因的DNA或 pre-mRNA或mRNA區具有序列補償或部分補償作用，并形成氫鍵基對 復式結構。該混合物可以干擾目標mRNA和其編碼的蛋白的表達，從而 可以妨礙下游的相互作用和信號傳專lr。由于一個mRNA分子可引起多蛋 白復制，所以對pre-mRNA或mRNA的抑制可以更加有效，并且比在蛋 白質級進行干擾，例如，抑制酶的活性部位或其他基于蛋白結構的功能 更力口有效。
已經采用c-myc致癌基因mRNA的低(聚)核苷酸補償以
專門抑制c-myc蛋白的復制，從而阻止體外人類白血病細胞的生長(Holt 等人，于1988年在《分子和細胞生物學》8: 963-73中所發表的文章； Wickstrom等人，于1988年在《美國國家科學院院刊》85: 1028-32中
所發表的文章)。在逆轉錄酶病毒抑制劑中也采用了低(聚)核普酸，包 括人類免疫缺乏病毒(Zamecnik和Stephenson于1978年在《美國國家 科學院院刊》75: 280-4中所發表的文章；Zamecnik等人于1986年在《美 國國家科學院院刊》83: 4143-6中所發表的文章)。 使用具有標靶和抑制單個癌癥相關基因的反義低(聚)核苷 酸，在潛伏期癌癥模型和臨床試驗中已經展現出良好的前景。疏代磷酸 酯反義低(聚)核苷酸已經表現出抑制Bcl-2體外表達的活性，并可根除淋 巴瘤異種移植的老鼠模型內的腫瘤。已認為某些癌癥的抗化學治療性與 Bcl-2致癌基因的表達相關(Grover等人，于1996年在《歐洲肺瘤外禾+》 22 ( 4) : 347-9中所發表的文章"Bcl-2在惡性黑[色]素瘤中的表達和其 預后顯性")。Bcl-2標革巴低(聚)核苷酸給藥可以選擇性降低實驗鼠體內 腫瘤異種移植物內的Bcl-2蛋白水平(Jansen等人，于1998年在《自然 醫學》4 (2) : 232-4中所發表的文章"Bcl-2反義治療SCID老鼠體內 化學感應人類(惡性)黑素瘤")。另外，Bcl-2反義低(聚)核苷酸給藥 能使實驗鼠體內的胂瘤異種移植物更易受到化學療法藥的影響Jansen 等人，于1998年在《自然醫學》4 (2) : 232-4中所發表的文章"Bcl-2 反義治療SCID老鼠體內化學感應人類(惡性)黑素瘤，，)。采用Bcl-2 反義低(聚)核苷酸進行系統治療減少了老鼠體內的Bcl-2蛋白并促進了 細胞凋亡。單獨采用Bcl-2反義低(聚)核苷酸治療具有適度的抗癌性，并 且在配合其他傳統療法，例如化學療法藥物時能增強抗癌性。在對多種 腫瘤的臨床試驗中，已經證實了 Bcl-2反義低(聚)核苷酸的活性。但是， 通常由于對這些治療形態的抵制作用，使這些反應引起克隆存活和疾病 發展。因此，急切需要將這些抗癌治療予以擴大，以抵抗人類癌癥。 盡管生物療法,藥物療法和聯合治療日益有效，但是許多癌 癥患者仍然表現出預后不良。例如，盡管氮烯唑胺(DTIC)普遍用于治 療轉移性黑色素瘤，卻無任何患者的病情能夠得到長期的改善。事實上， 在第三期臨床試驗中，當采用DTIC配合其他化學療法藥劑，例如，順 氯氨鉑、卡氯芥和他莫西芬時，存活率并無任何改善(Chapman等人， 于1999年在《臨床胂瘤雜志》中所發表的文章"Dartmouth regimen和
氮烯唑胺在轉移性黑色素瘤患者的三期多中心隨;k試l全中的比4支"， 17(9):2745-51 )。另外，盡管許多采用Bcl-2反義低(聚)核苷酸，隨帶傳 統療法的臨床研究一直鼓勵采用化學療法藥物，仍然需要進一步調查。 但是，有個長期未解決的問題是，如何以醫學上可行的、便利和經濟的 方式將足夠劑量的低(聚)核苷酸送至靶細胞。
本發明概述 —方面,本發明提供了一種治療增生性疾病患者的方法，該 方法包括，在每一治療周期，給予病患有效量的預治療；隨后，給予病 患有效量的低聚物。另一方面，增生性疾病是一種胂瘤性疾病或一種自 體免疫疾病。肺瘤性疾病可以是一種癌癥， 一種實體瘤或一種惡性血'液 病。預治療在低聚物給藥前進行，在優選實施例中包括一種或多種放射 療法、抗腫瘤療法，包括化學療法、聲學療法和熱療法。在一實施例中， 低聚物或反義低(聚)核苷酸從一種或多種反義低(聚)核苷酸、siRNA、 microRNA、核酸適體、嗎啉代、誘導分子和核糖核酸酶中選擇。低聚 物可以定向抑制在 一 個細胞，例如腫瘤細胞內過度表達的基因的表達， 從而導致或促發增生性疾病。該基因包括但不限于，致癌基因、抗凋亡
基因、轉錄激活因子、蛋白激酶，涉及信號轉導通路的基因、代謝途徑 和調節細月包生長和死亡的基因。另一方面，本發明提供了一種治療細胞,抑制致癌基因表達 的方法，例如一種抗凋亡基因。在一優選實施例中，該基因為Bcl-2基 因、c-Myb基因或c-Myc基因。在另一實施例中，反義低(聚)核苷酸為 奧利默森(oblimersen)。在另一實施例中，反義低(聚)核香酸為G4460 或INX-3001, —種反義低(聚)核苷酸，使c-Myb mRNA雜交(Genta， 新澤西Berkeley Heights 7>司)。另一方面，本發明提供了一種治療增生性疾病患者的方法， 該方法包括給予病患有效量的低聚物，該低聚物間斷給藥。在一優選實 施例中，兩次低聚物給藥之間間隔至少一天。在另一實施例中，兩次低 聚物給藥至少間隔一天，如果間隔至少3天則更好，如果間隔至少5天 則最好。在另一實施例中，上述低聚物每周給藥，每兩周或每3-4周給 藥。另一方面，本發明是一種治療人類癌癥患者的方法，包括
一種或多種治療周期，在治療中，首先給予患者一有效量的預治療，之后，給予患者有效量的低聚物。在一優選實施例中，預治療為放射治療，
低聚物為奧利默森(oblimersen)。在另一實施例中，低聚物給藥頻率 不超過隔天一次，更適宜的是，不超過每三天一次。在本發明的一方面， 低聚物給藥為每周、每兩周或每三周。在本發明的另一方面，在一周期 首次預治療給藥后，低聚物給藥至少一天一次，較適宜的是至少兩天一 次，更適宜的是至少三天一次。在本發明的另一方面，腫瘤性疾病為肺 癌、乳腺癌、前列腺癌、(惡性)黑素瘤、慢性髓系白血病或淋巴瘤。 本發明的另一方面提供了一種治療人類癌癥患者的方法， 包括一個或多個治療周期，在周期內，給予患者1至50mg/kg、較適宜 的是5至30mg/kg、更適宜的是7至25mg/kg和最適宜的是10至30mg/kg 劑量的低聚物，且該低聚物的給藥頻率不超過隔天一次，更適宜的是隔 三天一次。在另一實施例中，上述低聚物為奧利默森(oblimersen)。 在另一實施例中，上述低聚物的給藥量為，平均最高血藥濃度為至少6 jug/mL, 4支適宜的是至少8jLig/mL,更適宜的是至少10 ju g/mL。在另一 實施例中，平均最高血藥濃度為至少為10jug/mL,更適宜的是至少15 lug/mL,最適宜的是至少20jug/mL。在另一實施例中，低聚物為奧利 默森(oblimersen ),且給藥量為，平均最高血藥濃度至少為6 |u g/mL, 4交適宜的是至少8iug/mL,更適宜的是至少10iug/mL。在另一實施例中， 平均最高血藥濃度為至少10pg/mL,更適宜的是至少15yg/mL,最適 宜的是至少20yg/mL。 本發明的另一方面，使用低聚物生產藥物，與預治療聯合 使用，治療增生性疾病。在一優選實施例中，增生性疾病為腫瘤性疾病。 本發明的另一方面是，使用低聚物生產藥物，與預治療聯合使用，治療 增生性疾病，其中，上述低聚物為間斷給藥。在一優選實施例中，預治 療從放射治療、化學治療、聲學治療、生物治療、熱治療或以上Jf關合治 療中選捧。 本發明的另一方面是，使用低聚物生產藥物，與預治療聯 合使用，治療增生性疾病，其中，該低聚物為間斷給藥。本發明的另一 方面是，使用一種抗Bcl-2的反義低(聚)核苷酸，以制造一種藥物，與一 種放射療法的預治療l關合，以治療增生性疾病，其中，所述的抗Bcl-2 反義低(聚)核苷酸為間斷給藥。在一優選實施例中，Bcl-2低(聚)核苷酸
為奧利默森(oblimersen)。 本發明的另一方面是，使用奧利默森(oblimersen),以制 造一種藥物，與一種放射療法的預治療聯合，以治療一種腫瘤性疾病， 其中，奧利默森(oblimersen)為間斷給藥，以取得平均最高血藥濃度 為至少6 in g/mL。在一優選實施例中，奧利默森(oblimersen)為間斷給 藥，以取得平均最高血藥濃度為至少8jug/mL,較適宜的是至少10jug/mL, 更適宜的是至少15iug/mL。在本發明的另一實施例是，使用奧利默森 (oblimersen),以制造一種藥物，與 一種》文射療法的預治療聯合，以 治療一種腫瘤性疾病，其中，奧利默森(oblimersen)為間斷給藥，以 取得平均最高血藥濃度為至少20jug/mL。 本發明另一方面是，使用抗Bcl-2的反義低(聚)核苷酸，該 反義低(聚)核普酸為奧利默森(oblimersen),用于生產一種藥物，其中 所述抗Bcl-2的反義低(聚)核普酸為間斷給藥，每劑量從5mg/kg至 50mg/kg。本發明的一優選實施例是，使用一種抗Bcl-2反義低(聚)核苷 酸，該反義低(聚)核苷酸為奧利默森(oblimersen),用于生產一種藥物， 其中所述奧利默森(oblimersen)為間斷給藥，每劑量乂人10mg/kg至 50mg/kg。本發明的另一優選實施例是，使用抗Bcl-2反義低(聚)核苷酸， 該反義低(聚)核苦酸為奧利默森(oblimersen),用于生產一種藥物，其 中所述奧利默森(oblimersen)為間斷給藥，每劑量,人15mg/kg至 50mg/kg。 本發明的另一方面是一種每日或隔日治療疾病的方法，該 方法在預治療后通過皮下或靜脈給藥奧利默森(oblimersen)實施，該 藥劑量為少于3mg/kg,或少于2mg/kg，或少于lmg/kg,另外每日實施 伴隨療法，最多一周實施5天。
圖示簡介
圖1A顯示對攜帶異種移植肺瘤的老鼠給藥的熒光標記 G3139的給藥劑量和時間線。
圖1B顯示接受腹腔灌注IP治療的老鼠的異種移植肺瘤吸 收熒光標記的G3139低(聚)核苷酸、FAM-G3139、 Bcl-2反義低(聚) 核苷酸的情況，腹腔灌注(IP)給藥量為每日給藥5mg FAM-G3139/kg (OBL5,小劑量)7天(左面板)，和15mg FAM-G3139/kg (OBL15,大
劑量)隔兩天間斷給藥(1、 4、 7)。在腫瘤組織吸收FAM-G3139給藥 后第8天(中間面板)和第12天(右面板)，對腫瘤組織進行檢查。圖2A顯示對攜帶異種移植肺瘤的老鼠給藥5mg/kg熒光標 記的G3139低(聚)核苷酸、FAM-G3139 ( OBL5 )和X射線的劑量和 時間線，其中X射線(XPT)在治療的首天于G3149給藥前實施，或在 治療最后一天于G3139最終給藥前實施。圖2B顯示老鼠異種移植肺瘤內熒光標記G3139低(聚) 核苷酸、FAM-G3139的吸收情況，該老鼠接受7天靜脈治療，每日5mg FAM-G3139/kg,在治療的第一天(左面板)和(B)最后一天(右面板) 實施X射線照射。第11天對胂瘤組織吸收情況進行檢查。圖3 (A)顯示對攜帶異種移植肺瘤的老鼠，給藥15mg/kg 熒光標記的G3139低(聚)核普酸、FAM-G3139 (OBL15)和X射線 的劑量和時間線。其中，X射線(XRT)在第一天于G3139給藥前實施， 或在最后一天于G3139給藥后實施。圖3 ( B )顯示老鼠異種移植胂瘤內熒光標記G3139低(聚) 核苷酸、FAM-G3139的吸收情況，該老鼠間隔2天(1、 4、 7)間斷接 受15mgFAM-G3139/kg (OBL15)靜脈治療，其中X射線于第一天實施 (左面板)和(B)最后一天(右面板)實施。第11天對腫瘤組織吸收 情況進行檢查。圖4顯示，老鼠的異種移植腫瘤組織吸收低(聚)核苷酸 后，熒光標記G3139^氐(聚)核苷酸、FAM-G3139的長期療效。在該 老鼠攜帶腫瘤的右腰上實施首次X射線預治療，隨后5日每日靜脈給藥 6mg/kg FAM-G3139 (左上面板)；每隔一天靜脈給藥10 mg/kg FAM-G3139 (既，在第1、 3、 5日給藥)，給藥三次(中上面板)；在 X射線預治療當日給藥30mg/kgFAM-G3139,給藥一次(右上面^反)。 所有老鼠在第8天解剖，評估腫瘤對FAM-G3139的吸收情況。將 FAM-G3139的吸收情況與各只老鼠未接受照射治療和FAM-G3139治療 的左腰上控制肺瘤對比[底部面板]。
圖5顯示圖4中老鼠肺瘤的FAM-3139定量。
圖6顯示對A549 NSCLC異種移植老鼠給藥G3139的試驗 時間表和劑量。給藥時間為每日或隔日，或隔兩日或隔三日給藥，給藥 量為2.5、 5、 7.5、 10、 20、 30和40mg/kg。圖7顯示按圖8所示給藥時間和給藥量的腫瘤的生長曲線。
圖8顯示攜帶A549 NSCLC異種移植腫瘤老鼠在按圖8所 示各種劑量給藥后的存活率百分比。
本發明詳細i兌明 本發明通過間斷地給藥低聚物伴隨或不伴隨預治療，提供 了治療人類增生疾病的方法和制劑，該疾病包括自免疫性疾病和腫瘤性 疾病，包括癌癥、惡性血液病和實體瘤。該發明為一種4支術，交替用于 涉及實體瘤和惡性血液病的癌癥、腫瘤、腫瘤性疾病或腫瘤。本發明的
另一方面是通過一個或多個治療周期治療增生條件，其中，各周期包括 一預治療，該預治療包括一種或多種ii射治療、化學治療、聲學治療和 生物治療，該預治療在該周期4氐聚物給藥前實施。該預治療包4舌一種治 療，該治療將改善接受預治療的細胞吸收低聚物的吸收情況。 一優選實 施例為一治療，通過一種或多種反義低聚物，包括但不限于Bcl-2反義 低(聚)核苷酸治療致癌基因相關疾病，例如癌癥，低聚物給藥配合一 種預治療實施，例如，it射治療、熱治療或聲學治療，由此，預治療在 反義低聚物給藥前實施，反義低聚物按間斷給藥時間給藥，該給藥時間 改善了藥物至疾病細胞的輸送和治療情況。術語低聚物、核苷低聚物或 反義低聚物，以及反義低(聚)核苷酸應理解為包括反義低(聚)核苦 酸、siRNA、 microRNA、核酸適體、嗎淋、分子資導和衍生物。如本文 所用，術語"衍生物"指可用于制藥的相應于本發明醫藥合成物的天然 或人工同系物、相似物、或碎片。預治療應按有效量實施，即，應足以 改善接受預治療的細胞對低聚物的吸收能力，該治療量應對未給予低聚 物的疾病有治療效果。有效量應理解為，包括在治療增生性條件時，日 常給予的預治療量。同樣地，低聚物的有效量為足以減少相關靶分子數 量的有效量。
相關基因表達的核苷酸低聚物和其他抑制劑"低聚物"為上述通稱，但也指核酸的短小碎片，該碎片 使基因或其mRNA部分雜交從而對基因部分進行補充，該基因在待抑制 疾病細胞內過度表達。疾病細胞包括但不限于瘤細胞或胂瘤細胞和造成 其他增生性疾病的細胞，例如自體免疫疾病。胂瘤細胞內過度表達的基
因包括但不限于，致癌基因、抗凋亡基因、轉錄激活因子、蛋白激酶、 涉及信號轉導通路的基因，以及與細胞生長和死亡相關的基因。致癌基 因表達導致惡性腫瘤發病頻率增加或與之相關。另外，細胞已經發展出 方法，使細胞在接受放射療法或其他抗肺瘤藥劑治療，和特定基因例如 抗細胞凋亡基因的上調治療(該治療可以導致惡意腫瘤或抗治療疾病的 發展)中免于自然死亡或受到損傷。該蛋白通過產生上述基因，約束和
限制調節細胞死亡的蛋白，例如半胱氨酸蛋白酶、p53、 BAD、 BAX和 其他細胞死亡激動劑從而抑制凋敝。因此，本發明中預期的反義低聚物 包括核普酸低聚物，該低聚物與致癌基因、抗凋亡基因和與蛋白激酶族 相關的基因、轉錄激活因子和細胞生長調節因子雜交。在本發明的一個 實施例中，預期的反義低聚物被引導至致癌基因，該致癌基因包括但不 限于，c-Myb、 c-Myc、 ErbB、 Jun、 Src、 TGF-p以及MCC。在另一實 施例中，反義低聚物為抗凋亡基因族的反義低(聚)核苦酸，例如Bcl-XL、 MDM-2、 IAPs (細胞凋亡蛋白抑制劑)，例如cIAPl、 cIAP2和x鏈IAP (XIAP) 、 Survivin、 Bfl-l、 LMP1,包括同族體、相似體和書f生物。在 另一實施例中，反義低聚物被引導至涉及信號轉錄通道的基因，例如 FADD、 TRADD和TRAFF。在一優選實施例中，反義低聚物為Bcl-2反 義低聚物。
小干預RNAs (siRNAs)為短雙螺旋RNAs (dsRNAs),長度 為21個核苷酸，兩端懸掛有2-3個核普酸。因此，分子的各股有一^岸酸 酯基團在5，端，有一羥基團在3，端。和反義RNAs相同，siRNA已 經證明可以在轉錄級干擾基因表達，因此，有利于抑制相關特定基因， 特別是與癌癥相關的基因。盡管siRNA是由于一種酶(Dicer酶)(該 酶可將長的dsRNA或發卡RNAs轉變為siRNAs )的分裂而在細胞內自 然形成，合成siRNAs可以指定攻擊任何相關基因。但是，由于兩端的 懸掛物，當人工將siRNA引入細胞時，siRNA具有極短的壽命。因此， 本發明的另一目標是提供一種方法，有效傳遞和吸收siRNA,并通過使 用siRNA加強人類抗凋亡相關疾病的治療。在另一實施例中，本發明提 供了一種方法，在預治療，包括但不限于治療劑量或小劑量的放射療法 后，改善siRNA的傳遞和吸收。 Micro-RNA或miRNA為單股RNA,長度為20-25個核普， 并一皮認為在轉錄級用于調節其他基因的表達。和siRNA不同，成熟
miRNA為非線性復式結構，該結構突起于從DNA轉錄的一個較長的 miRNA分子。這些RNA分子不被轉錄進蛋白，但于mRNA結合，例如， E2F-1,并且抑制轉錄到基因產物，例如E2F-1蛋白，該蛋白為一種調 節細胞增生的蛋白。在一實施例中，本發明提供了一種方法，該方法改 善了 miRNA的傳遞和吸收，由此，miRNA充分補充了與調節細l包增生 的蛋白，例如E2F-I的pre-mRNA或mRNA。在另 一實施例中，本發明 提供了一種方法，在實施損害細胞或引起炎癥的預治療，例如但不限于 治療劑量或小劑量的力文射療法后，該方法改善miRNA的傳遞和吸收。 核酸適體為結合到其他分子上的小分子。更準確的說法是， 核酸適體可以劃分為DNA或RNA核酸適體。DNA或RNA核酸適體是 選擇性序列，該序列能通過形成結合口袋識別特定的配合基。RNA或 DNA核酸適體可以與核酸、蛋白或小的無才幾化合物結合。核酸基核酸適 體的一個例子是環狀AMP反應元(CRE K秀導核酸適體(新澤西Berkeley Heights, Genta公司)。CRE-誘導核酸適體與蛋白復合體結合，并阻斷 蛋白復合體，該蛋白復合體通常引發受到CRE調節的基因，由此抑制 肺瘤細^^的生長。 在一實施例中，本發明提供了一種方法，該方法改善了核 酸適體的傳遞和吸收，其中，核酸適體被指定在轉錄級或轉譯級專門抑 制基因。在另一實施例中，本發明提供了一種改善核酸適體的傳遞和吸 收的方法，其中，該核酸適體專門與一種調節細胞增生或凋亡的蛋白結 合，該核酸適體在預治療，包括但不限于放射療法后間斷給藥。
預治療
本發明的 一個方面涉及一個或多個治療周期，包括一種低聚物治療 前的預治療。該預治療包括一種或多種傳統治療，詳情如下 放射療法放射療法是治療癌癥，特別是治療乳腺癌、肺 癌和前列腺癌的一種主要治療手段。(有關放射療法的情況，參見De Vita、 Jr等人，在J.B. Lippincott公司(出版商)出版的《胂瘤學原理和 實踐》第三版中的文章"癌癥，，，第15章-"放射療法原理")。在放 射療法中，或放射療法結合有效的傳統化學療法中，病患經常接受大劑 量的輻射。盡管由于采用了復雜的規劃和先進的大劑量放射傳遞方法， 從而提高了治愈率，但是仍然會出現治療失敗的情況。通常，使用放射
療法需要結合其他抗瘤藥物，例如化療藥物、抗生素或激素。在某一癌 癥中，由于致癌基因的過度表現，將對放射療法和抗瘤藥劑產生^t氐抗， 從而導致凋亡通路的抑制，該通路通常在放射療法或其他抗瘤藥劑而使 細胞受損后被激活。例如，Bcl-2的過度表達， 一種凋亡抑制因子在多 種癌癥中起作用，包括(惡性)黑素瘤、慢性髓性白血病和其他癌癥。同
樣，抑制Bcl-2功能可以加強胂瘤細胞對放射的敏感度。 明顯地，所有結合其他抗瘤治療的反義^氐聚物的治療方案 都需要初期給藥反義低聚物，該低聚物被認為是在給予抗瘤治療前，抑 制抗凋亡基因表達所必須的物質。使用反義低(聚)核苷酸，例如Bcl-2 反義低(聚)核苷酸的臨床研究應經實施，由此，低(聚)核苷酸每日 給藥，典型地在傳統治療前，通過10天連續靜脈注射或通過14天連續 皮下注射給藥。(參見，G.Marcucci等人(2003 )《血液》101: 425-432; 和J.S.Waters等人(2000)《臨床腫瘤》18: 1812-1823 )。該戰略的基 本原理是，在給予更傳統的治療前，必須確保細胞內低(聚)核苷酸的 局部水平足夠高，以便能立即抑制Bcl-2基因的表達，從而防止細胞免 于受到例如，放射療法或抗瘤藥劑治療的傷害。這些研究的結果令人鼓 舞，但仍不是最理想的。 在<<良好生產規范>>(GMP)要求下，臨床級低(聚)核普 酸的合成通常成本較高，因此，大劑量的低(聚)核苷酸給藥，特別是 按曰給藥/連續給藥安排對于許多患者和/或健康保險過于昂貴。在一實 施例中，本發明提供了更經濟的治療方法。 進入細胞質是一個關鍵問題，因為低(聚)核苷酸必須能 夠再分配進入細胞，在細胞內，低(聚)核苷酸能夠與mRNA雜交，以 抑制具有抗凋亡基因產物的表達。盡管，目前對于低(聚)核苷酸的天 然吸收機制還不了解，但是認為低(聚)核苷酸可以通過被動擴散或內 體泄漏進入細胞質。但是，通過被動擴散，特別是帶點低(聚)核苷酸 的吸收效果微弱，而且健康細胞通常不會發生泄漏。另外，I期臨床試 驗中的藥物(代謝)動力研究表明，根據給藥的劑量和模式，消除低(聚) 核苷酸的血漿平均半衰期為30分鐘至8小時。目前為止，傳遞低聚物 至肺瘤細胞的能力被認為是暴露在循環低聚物下的腫瘤細胞的持續時 間的函數，治療戰略要求給予足夠長的暴露時間，強化持續時間和每曰 給藥安排。 一個關鍵問題是，如何優化腫瘤細胞對低(聚)核苷酸的吸
收能力，以提供最大有效且經濟的治療值。 本發明部分上基于一意外發現，即，間斷地向異種移植老 鼠給予一種大劑量的抗Bcl-2抗凋亡低(聚)核苷酸，比按傳統治療方 式，每日向該動物給藥核苷酸的方式，更能提高老鼠體內腫瘤細胞對低 (聚)核苦酸的吸收率。對異種移植腫瘤的老鼠，在第1、 4和7天(3 日間隔間斷給藥安排)按15mg/kg劑量，給予熒光標記Bcl-2反義低(聚) 核苷酸，與每日給藥相比，甚至在5天后治療之后，仍明顯改善了標記 低(聚)核苷酸的吸收率和保持性。(參見
圖1B)。在給予Bcl-2反義 低(聚)核苷酸之前，通過對胂瘤肺塊的預治療，例如放射療法，可進 一步提高吸收率。已經顯示，首先對動物給予預治療，然后間斷給予低 聚物而非傳統的連續/每日給藥，能取得最佳療效。與當前實踐相反， 一個非同尋常的發現是，與IO天每曰給 予5mg/kg的低(聚)核苷酸后(參見圖2B,左面板)，于第10天給予 相同劑量的放射治療，或不實施放射療法(參見圖2B,右面板)的方 案相比，在10天每日5mg/kg的低(聚)核苷酸的Bcl-2反義治療之前， 在第l天實施放射治療(X射線5Gy)的方案，更能極大地提高熒光標 簽Bcl-2反義低(聚)核普酸的吸收率。另外，在給予放射預治療后， 在第1、 4、 7和10天(隔三天間斷給藥安排，總劑量為4次給藥，每 次15mg/kg)間斷給予相同總劑量的Bcl-2反義低(聚)核苷酸，也會 明顯改善吸收率(參見圖3B)。與第10天給予Bcl-2反義低(聚)核 苷酸治療之后對胂瘤進行照射治療的方案相比，低聚物間斷治療方案， 盡管也能提高吸收率，但是，在首日低聚物給藥前，對腫瘤實施照射治 療，可以達到最大吸收率。 —個非同尋常的發現是，和間斷給予低聚物治療一樣，放 射預治療可以提高低聚物的吸收率，而放射預治療后給予間斷低聚物治 療，可以取得最高吸收率，另一非同尋常的發現是，在給予低聚物治療 前給予放射預治療，也可以改善/延長低聚物在預先接受放射治療的細胞 內的保持率。在至少5天至7天后治療的細胞內，存留有大量的低聚物。 另外，對于接受放射治療后接受一次性大劑量低聚物給藥的動物，比接 受間接給藥的動物，具有更高藥物保持率，而接受間接給藥的動物比每 曰給藥的動物具有更高的藥物保持率。在所有病例中，已經接受預治療 的動物體內具有較大的藥物保持率。特別是，與實施放射預治療，隨后
隔日(第1、 3和5天)給予10mg/kg的低(聚)核苷酸，或5天每日 給予6mg/kg的低聚物的方案相比，在首日實施放射療法，之后于當曰 給予單次30mg/kg低(聚)核苷酸的方案，其低(聚)核苷酸的保持率 可以達到至少5至7天。(參見圖4和圖5)。
這些研究的結果表明，使用預治療，例如放射療法，不僅 可以提高低(聚)核苷酸的吸收率和保持率，還提供了一種治療方法， 該方法以更便利的方式，更少的低(聚)核苷酸給藥量，改善了治療的 效力。通過改善反義低(聚)核苷酸的吸收率和延長保持率，本治療方 法提供了一種改進的方法，該方法抑制抗凋亡基因的表達，從而改進了 該條件的治療。(參見圖7和圖8)。這些研究提供了一種方法，在癌 癥治療中，改進反義核苷酸治療的臨床應用。另夕卜，無論是否降低低(聚) 核苷酸的給藥量，較低頻率的給藥，減少了患者至治療中心的看病頻率， 節約了看病時間和費用。基于上述結果，本發明設想了一種治療方案，該方案包括 一種或多種治療周期，包括在每一周期內，實施一次或多次預治療，在 預治療后，更適宜地以間隔方式，給予大劑量或小劑量低聚物，例如但 不限于Bcl-2反義低(聚)核苷酸。該治療方案將隨意按周期給藥，直 到取得最佳結果，達到預設的周期數量或治療藥師確定在治療中已經發 生了適當的變化。本發明也設想了一種方法，該方法通過在間斷給予大 劑量合成制劑前，實施一種或多種預治療，從而改進/增強了抑制抗凋亡 基因表達制劑的傳遞。該預治療涉及一種能夠破壞細胞膜和/或引起一種 發炎反應的治療方法。在本發明的一個實施例中，預治療的選擇基于對 細胞的傷害和/或發炎反應的控制能力。上述預治療可以是物理治療、生 物治療或藥物治療。物理預治療的一個例子是電》茲輻射，例如^f旦不限于 X射線、伽馬射線、貝塔粒子、紫外線、紅外線、無線電波和微波。無 線電波的另 一 實施例是質子束或電子脈沖。 X射線或伽馬射線為最普遍的用于治療癌癥的放射療法， 并且是最主要的治療惡性腫瘤的有效治療手段。但是，臨床醫師從未將 該射線治療作為一種增強低聚物吸收率的方法。使用X射線或伽馬射線 的一個優勢是，能夠通過輻射深透體腔，從而導入指定區域，而不會被 身體吸收。本發明也設想采用該療法進行全身輻照(TBI)、皮膚輻照 以治療皮月夫'淋巴瘤，并在適當環境下進行近距》文射療法。 在本發明的一個實施例中，電磁輻射為貝塔粒子。在本發 明的另一實施例中，電磁輻射為一種無線電波或一種微波。在本發明的 一優選實施例中，電磁輻射為伽馬射線，而在本發明的一更優選的實施 例中，電；茲輻射為X射線。
電磁輻射可以通過傳統方式，定向方式或全身輻照方式對 病患實施。定向輻照是一種較精確的方法，可以將射線輸送到腫瘤上， 而不會損傷周圍的正常組織。輻射可以為單次傳統分割輻射或輔助野超 分割輻射。 在本發明的一個實施例中，在進行低聚物治療前，以定向 方式或傳統方式對病患實施放射治療。在本發明的另一實施例中，以定 向方式實施方欠射治療，隨后在預治療后的1至24小時或以上時間內》會 予低聚物治療。該預治療的時間可達數天或數周，期間，給予低聚物治 療，前提條件是，預治療必須于低聚物治療前實施。 在本發明的一個更優選實施例中，以定向方式實施》文射治 療，隨后在預治療后的1至IO天內間斷給予低聚物治療.例如,在本發明 的一個實施例中，低聚物的給藥頻率不超過隔天一次。在另一實施例中， 低聚物為每兩天、三天或四天給藥一次。在一優選實施例中，低聚物每 五天給予一次。在本發明的一更優選實施例中，低聚物為每周、每兩周、 每月或每兩月給予一次。在另一優選實施例中，低聚物在預治療后當天 給予一次，或在與治療后的1至7天內給予。 在本發明的另一實施例中，在低聚物治療前，以定向方式對 病患實施》文射療法。在本發明的另一實施例中，在以定向方式對病患實 施放射療法后，在3至24小時內間斷地給藥低聚物或抑制劑。在本發 明的一更優選的實施例中，以分割方式實施放射療法，隨后在預治療后 的2至10天內，間斷給藥低聚物。 在另一優選實施例中，在以定向方式實施》文射療法后，3妄 2至IO天間隔期，間斷給藥低聚物治療。例如，在本發明的一實施例中， 低聚物給藥頻率不超過隔天一次。在另一實施例中，低聚物給藥頻率為 每兩天、每三天或每四天一次。在一優選實施例中，低聚物給藥頻率為 每五天或每六天一次。在本發明的一更優選實施例中，低聚物給藥頻率 為每周、每兩周、每月或每兩月一次。
放射療法在預治療中的實施劑量為所屬領域的技術人員顯
而易見的劑量。劑量根據胂瘤的種類、形狀和大小而定。除此以外，也 應該考慮到正常器官結構或組織的接近度。在一實施例中，放射療法的 預治療劑量為傳統非治療性劑量。該劑量也是所屬領域的技術人員顯而 易見的劑量，并且可以用于前期已經治療過的區域，或不能適應更高的 傳統治療性放射量的區域。在另一實施例中，預治療的實施劑量和方式 為單獨治療時的治療性劑量，或與化學療法或其他通用抗瘤制劑聯合治 療時的治療性劑量。 在另 一 實施例中，本發明設想了 一種減少在 一 治療周期內 低聚物的給藥量的方法，該方法首先實施預治療，隨后按一次劑量或多 次劑量給藥低聚物，該低聚物的給藥頻率為隔天一次或每七天一次。聲學治療本發明也設想了，在低聚物給藥前，利用低或 高強度聚焦超聲對癌癥患者進行非侵入式預治療。與放射療法相同，聲 學療法也提供了 一種非侵入式的方法，該方法可使聲波深透體腔到達指 定區域，減少了對正常組織的傷害。
在本發明的 一 實施例中，高低強度的超聲預治療在低聚物 治療前實施。在本發明的另一實施例中，在實施了高低強度超聲波后， 于1至24小時內，間斷給藥低聚物。在本發明的一更優選實施例中， 對人來癌癥患者實施高^氐強度的超聲治療，隨后在2至10天內，間斷 給藥低聚物。例如，在本發明一實施例中，低聚物的給藥頻率不超過隔 天一次。在另一實施例中，低聚物的給藥頻率為每兩天、三天或四天一 次。在一優選實施例中，低聚物的給藥頻率為每五天一次。在本發明的 一更優選實施例中，低聚物的給藥頻率為每周、每兩周、每月或每兩月 實施一次。 超聲治療的劑量為所屬領域的技術人員顯而易見的劑量。 超聲治療強度根據腫瘤的種類、大小形狀而定。另外，必須考慮與腫瘤 區相關的正常結構或組織的鄰近區域，即，無論該腫瘤位于體腔深凹處， 或皮膚表面。本發明的一實施例中，采用0.1至3W/cr^的能量。在本 發明的另一個實施例中，能量強度為3至10W/cm2 。在本發明的另一實 施例中，能量強度為100至1000W/cm2。 熱療 一種熱療的形式是高溫療法，該方法是對體組織實 施45 。C的高溫治療，該治療通常對正常組織的傷害極小。
設想在一實施例中，通過各種技術將局部高溫施加到肺瘤
塊內一個小區域內從而加熱肺瘤。這些技術包括但不限于微波、射頻和 超聲。局部高熱療法也包括針對皮膚內或皮膚下腫瘤的外部方法，或4f 對體腔內或靠近體腔的肺瘤的腔內方法，針對體內較深區域肺瘤的間隙 方法，以及隔離灌注法，例如隔離月支體灌注。 在另一實施例中，局部高溫療法可以用于加熱大面積腫瘤 組織。在本發明的另一實施例中，全身高溫療法可以用于治療擴散至全 身的轉移癌。在本實施例中體溫可以升至4rC至42°C 。
在另 一 實施例中,預治療包括局部或全身交替高溫療法。 在本發明的 一優選實施例中，高溫預治療在^氐聚物給藥前 實施,隨后實施2天或10天間隔間斷給藥低聚物或不給藥。例如，在本 發明的一實施例中，低聚物的給藥頻率不超過隔天一次。在另一實施例 中，低聚物的給藥頻率為每兩天、三天或四天一次。在一優選實施例中， 低聚物的給藥頻率為每五天一次。在本發明的一更優選實施例中，低聚 物每周、每兩周、每月或每兩月給藥一次。 在本發明的 一 更優選實施例中，高溫預治療在低聚物給藥 前1至24小時內實施,隨后按2至10天間隔間斷給藥低聚物。在本發明 的一實施例中，低聚物的給藥頻率不超過隔天一次。在另一實施例中， 低聚物的給藥頻率為每兩天、三天或四天一次。在一優選實施例中，4氐 聚物的給藥頻率為每五天一次。在本發明的一更優選實施例中，低聚物 每周、每兩周、每月或每兩月給藥一次。藥學療法另外，本發明也設想了使用化學療法作為人類 增生性疾病包括但不限于癌癥的預治療。這些藥劑于低聚物給藥前給 藥，給藥量為腫瘤預治療有效量。有效量為技術人員認為顯而易見的劑 量，包括但不限于傳統的藥劑治療性劑量或亞治療劑量。藥劑包括但不 限于屬于抗瘤藥劑、抗生素、脂肪酶、洗滌劑、小分子、激酶激動劑或 對抗劑，或其衍生物以及相似體一類的化學藥劑。抗瘤藥劑類包括^旦不 限于烷[烴]化劑、拓樸異構酶抑制劑、植物堿和萜類、核苷酸/核苷酸相 似體，以及抗代謝劑。預期的抗瘤藥劑包括^旦不限于硼替佐米 (bortezomib ), 吉西4也;賓(gemcitabine ) , j尹馬替尼(Imatinib), 氟4立 達濱(fludarabine),奧沙利鉑(Oxaliplatin ),多烯紫衫醇(Docetaxel), 紫衫醇(palcitaxel ),沙立度胺(thalidomide) , 5-FU ，多柔比星 (Doxorubicin)，阿糖胞苦(arabinoside-C)，卡柏(Carboplatin),柔
紅霉素(daunomycin), 地塞米松(Dexamethasone ) 和依托泊戒 (etoposide )。 在本發明的一實施例中，在低聚物給藥前，對人類癌癥患 者，實施一個或多個周期的預治療，隨后實施2天或10天間隔間斷》會藥 低聚物或不給藥。例如，在本發明的一實施例中，低聚物的給藥頻率不 超過隔天一次。在另一實施例中，低聚物的給藥頻率為每兩天、三天或 四天給藥一次。在一優選實施例中，低聚物的給藥頻率為每5天或10 天給藥一次。在本發明一更優選實施例中，基因表達低聚物的給藥頻率 為每周、每兩周、每月或每兩月給藥一次。 在本發明的另一實施例中，藥物療法預治療在低聚物癥會藥 前的1至24小時內實施，隨后按2天至10天間隔間斷給藥低聚物。在 本發明的一實施例中，低聚物的給藥頻率不超過隔天一次。在另一實施 例中，低聚物的給藥頻率為每兩天、三天或四天給藥一次。在一優選實 施例中，低聚物的給藥時間為每五天給藥一次。在本發明一更優選的實 施例中，低聚物的給藥頻率為每周、每兩周、每月或每兩月給藥一次。生物療法本發明另外提供了一種包括一種或多種生物預 治療的藥物合成法。生物預治療包括但不限于抗生素、蛋白，例如穿孔 蛋白、蛋白酶、荷爾蒙、細胞活素類、生長因子和前列腺素。 在本發明的一實施例中，人類癌癥患者接受預治療配合纟會 藥一種或多種生物合成物。生物預治療合成物劑量為亞治療劑量，并且 可以在給藥后，立即給藥預治療抑制劑，隨后間隔2至10天間斷給藥 低聚物或不給藥。 在本發明的另一優選實施例中，在低聚物給藥前的1至24 小時內給藥生物預治療合成物，隨后間隔2至10天間斷給藥低聚物。 例如，在本發明的一實施例中，低聚物的給藥頻率不超過隔天一次。在 另一實施例中，低聚物的給藥頻率為每兩天、三天或四天給藥一次。在 一優選實施例中，低聚物的給藥時間為每五至10天給藥一次。在本發 明一更優選的實施例中，低聚物的給藥頻率為每周、每兩周、每月或每 兩月給藥一次。
抗凋亡基因表達抑制劑 本發明設想使用 一種或多種抗凋亡基因抑制劑，包括但不
限于Bcl-2反義低(聚)核苷酸，例如奧利默森(oblimersen) ( Genasense ; G3139),或其衍生物、相似體、片段、混合物、擬態和致癌基因。 本文所用，術語"衍生物"指相對于本發明藥物合成物的任何可制藥的 天然或合成同系物、相似體或片段。適于本發明所用的反義低(聚)才亥 苷酸包括核苷酸低聚物，長度從5至10基、10至20基、20至50基、 50至75基、75至100基；較優選的長度是10至40基；更優選的長度 是15至25基；最優選的長度是18基。反義核苷酸結合的靶序列可以 為使患病或癌癥細胞內蛋白高表達的RNA或DNA。靶序列可以為單月更 或雙股。粑分子包括但不限于pre-mRNA、 mRNA、 DNA和蛋白質。在 一實施例中，輩巴分子為mRNA。在一優選實施例中，粑分子為Bcl-2 pre-mRNA或Bcl-2 mRNA。在一特定實施例中，反義低(聚)核苷酸與 Bcl-2 pre-mRNA或mRNA上的任意一處的蛋白雜交。該反義低(聚) 核苷酸最好從與Bd-2 pre-mRNA或mRNA的轉導起始點、供體剪接點、 受體剪接點、輸送點或降解點雜交的低(聚)核苷酸中選擇。 前期已經對幾種Bcl-2反義低(聚)核苷酸進行了評估，取得 了各種結果(參見，SEQ.ID.NOS:美國專利號5, 831， 066)。美國 專利申請號08/217,082 (現為美國專利號5,734,033 ),美國專利號 08/465，485 (現為美國專利號5,831,066 );和美國專利號09/080,285 (現 為美國專利號6,040,181 )對可用于本發明的Bcl-2反義低(聚)核苷酸 進行了詳細說明，以上各文件在此作為參考文獻整體引述。 在一實施例中,Bcl-2反義低(聚)核苷酸對Bcl-2pre-mRNA或 mRNA的部分，或與Bcl-2有關的pre-mRNA或mRNA的部分給予了充 分補充。在一優選實施例中，Bcl-2反義低(聚)核苷酸與pre-mRNA編碼 鏈的轉導起始點雜交。在另一更優選實施例中，Bcl-2反義低(聚)核苷酸 與包括人類Bcl-2基因轉譯起始點的pre-mRNA編碼鏈的 一個部分雜交。 更優選的實施例中，Bcl-2反義低(聚)核苷酸包括一個TAC序列，該序 列對Bcl-2 pre-mRNA或RNA的AUG起始序列互補。 在另 一實施例中，Bcl-2反義低(聚)核普酸與人類Bcl-2基因 的pre-mRNA編碼鏈的剪接供體點的一部分雜交。較優選的是，該核香 酸包括一個CA序列，與Bcl-2基因的GT剪接供體序列互補，更優選的 是，包括5至50基的側翼部分，更優選的是，包括10至20基，與Bcl-2 基因編碼鏈側面剪接供體點部分雜交。 在另一實施例中，Bcl-2反義低(聚)核苷酸與人類Bcl-2基 因的pre-mRNA編碼鏈的剪接供體點的一部分雜交。4交優選的是，該核 苷酸包括一個TC序列，與Bcl-2基因的AG剪接供體序列互補，更優選 的是，包括5至50基的側翼部分，更優選的是，包括10至20基，與 Bcl-2基因編碼鏈側面剪接供體點部分雜交。在另一實施例中，Bcl-2反 義低(聚)核苷酸與涉及剪接、傳導或降解的pre-mRNA或mRNA的部分 雜交。
所屬領域一般技術人員可識別，適用于本范明的反義核普 酸也可以對Bcl-2 pre-mRNA或mRNA上的其他點位進行實質性互補， 而形成雜交。技術人員也了解與以下Bcl-2 pre-mRNA或mRNA的部分 雜交的反義核苷酸更優越，能夠保持治療的專一性，該Bcl-2 pre-mRNA 或mRNA的序列在無關基因轉錄中并不常見。 Bcl-2反義低(聚)核苷酸的序列設計可以通過試驗和臨床療 效結果確定，而無論其與Bcl-2基因、Bcl-2 pre-mRNA、 Bcl-2 mRNA或 Bcl-2相關核苷酸序列的同習性程度或雜交程度如何。所屬領域的技術 人員應了解，在臨床治療中也證明了其反應，與優選實施例相比，具有 較少的序列同系性、較多或較少的改性核苷酸、較長或較短的長度的 Bcl-2反義核苷酸也在本發明范圍內。 上訴反義4氏(聚)核苷酸可以是RNA或DNA或其衍生物。 反義低(聚)核苷酸的特定形式可以影響低聚物的藥物代謝參數，例如， 生物利用度、新陳代謝和半衰期等。同樣，本發明設想的反義低(聚)核 苷酸衍生物具有改善細胞吸收率、加強核酸酶抗性、提高與靶序列結合 度或增強靶序列分裂度或降解度的性能。該反義低(聚)核苷酸可以包含 基礎構成物，例如硫代磷酸酯或甲基膦酸脂。該反義低(聚)核苷酸，可 以為混合低聚物，包含磷酸二酯、硫代磷酸酯和/或(尤其是)曱基膦酸 核苷酸。該低聚物也許具有變體，該變體包括但不限于2-0-烴基或2-0-卣代糖變體、骨干變體(例如，曱基膦酸核苷酸、硫代磷酸酯、甲基縮 醛、3-硫甲縮醛、砜、氨基磺酸鹽、硝基氧骨干、嗎啉代衍生物和肽核 酸(PNA)衍生物)，或者基半族已經改質的衍生物(Eghoim等人，于 1992年，所發表的文章"帶有一個非手性肽骨干的肽核酸(PNA)-低(聚) 核苷酸相似體"，Arghya和Norden,于2000年，在《美國實驗生物學 會聯合會》(FASEB) 14: 1041-1060上發表的文章"肽核酸(PNA):
醫療和生物技術應用和前景")。在另一實施例中，反義低(聚)核苷酉交
包括低(聚)核普酸配對和衍生物(Goodchild,于1990年在《生物配只十 化學》1 ( 3 ): 165-87中所發表的文章"低(聚)核苷酸配對和改性低(聚) 核香酸合成和性能回顧")。 在體內治療中，采用Bcl-2反義低(聚)核苷酸的一種硫代石粦 酸酯衍生物可以達到較好效果，部分原因在于，該化學物具有極高的抗^ 降解性。在一實施例中，Bcl-2反義低(聚)核苷酸為包含硫代磷酸酯基的 雜交低聚物。在另一實施例中，Bcl-2反義低(聚)核苷酸包括至少一條石危 代磷酸酯鏈。在另一實施例中，Bcl-2反義低(聚)核苷酸包括至少三條石克 代磷酸酯鏈。在另一實施例中，Bcl-2反義低(聚)核苷酸包括至少三條連 續的硫代磷酸酯鏈。在另一實施例中，Bcl-2反義低(聚)核苷酸包括整個 硫代磷酸酯鏈。對于低(聚)核苷酸衍生物的制備，在所屬領域已知，參 見，Stem等人，于1988年在《核苷酸研究》16: 3209-21 (硫代磷酸酯) 中所發表的文章；Blake等人，于1985年在《生物4t學》24: 6132-38 中所發表的文章(甲基膦酸核苷酸)；Morvan等人，于1986年在《#亥 苷酸研究》14: 5019-32中所發表的文章(oc-脫氧核苷酸)；Monia等 人，于1993年在《生物化學雜志》268: 14514-22中發表的文章"對作 為基因表達反義抑制劑的包含2脫氧裂隙的2-改性低(聚)核苷酸的評 價"(2-0-甲基-核苷)；Asseline等人，于1984年在《美國國家科學院 院刊》81: 3297-3301中所發表的文章(吖啶)；Knorre等人，于1985 年，在《生物化學》67: 783-9中所發表的文章；Vlassov等人，于1986 年在《核苷酸研究》14: 4065-76中所發表的文章(N-2-氯乙胺鹽酸鹽 和吩溱)；Webb等人，于1986年在《核苷酸研究》14: 7661-74 ( 5-曱基-N4-N4-乙醇胞嘧。定)；Boutorm等人，于1984年，在《美國實馬全生 物學會聯合會》172: 43-6中所發表的文章(乙二胺四乙酸(EDTA )和 相似體)；Chi-Hong等人，于1986年在《美國國家科學院院刊》83: 7147-51中發表的文章(5-胺基乙醯根-1, 10-o-鄰二氮雜菲)；和Chu 等人，于1985年在《美國國家科學院院刊》82: 963-7中發表的文章(二 亞乙基三胺五乙酸(DTPA)衍生物)。 Bcl-2反義低(聚)核苷酸的有效劑量為，0.1至50mg/kg/每 劑，較好的劑量為1至50 mg/kg/每劑，更適合的劑量為5至30mg/kg/ 每劑，最適合的劑量為10至30mg/kg/每劑。Bcl-2反義低(聚)核苷酸的
給藥量可以根據給藥方式而定。例如，靜脈給藥Ba-2反義低(聚)核苷酸， 比使用包含了 Bcl-2反義低(聚)核苷酸的藥物合成物的藥物局部灌輸更 能提高全身劑量。在一實施例中，Bcl-2反義低(聚)核苷酸采用皮下給藥， 給藥量為1至50mg/kg/每劑；更適宜的劑量為4至30mg/kg/每劑，最適 宜的劑量為5至15mg/kg/每劑。在另一實施例中，Bcl-2反義低(聚)核苷 酸采用靜脈給藥，給藥量為1至50mg/kg/每劑；更適宜的劑量為4至 30mg/kg/每劑；最適宜的劑量為5至15mg/kg/每劑。在另一實施例中， Bcl-2反義低(聚)核苷酸采取局部給藥，給藥量為1至50mg/kg/每劑；較 適宜的劑量為4至30mg/kg/每劑；更適宜的劑量為5至15mg/kg/每劑。 對于所屬領域技術人員，很明顯，局部給藥導致全身給藥量較低。例如， 局部給藥方式，例如胂瘤內給藥、眼球內注射或灌注會導致局部Bcl-2 反義低(聚)核苷酸的高濃度，但是全身劑量卻相對較低。因此，在該案 例中，設想Bcl-2反義低(聚)核苷酸的局部給藥量，將導致全身劑量達到 0.1至50mg/kg/每劑。 在另一實施例中，Bcl-2反義低(聚)核苷酸的規定大劑量為 10至50 mg/kg/每劑，該劑量在治療周期內給予。另外， 一個特定的Bcl-2反義低(聚)核苷酸的有效劑量也要 根據其他一些因素而定，這些因素包括，癌癥的種類、疾病的狀態或階 段、低(聚)核普酸的毒性、癌癥細胞對低(聚)核苷酸的吸收率，以及接受 反義低(聚)核苷酸給藥的病患的體重、年齡和健康狀況。由于體內有i午 多因素將干擾Bcl-2反義低(聚)核苦酸的作用或生物活性，所屬領域的技 術人員認識到，Bcl-2反義低(聚)核苷酸的有效量將因人而異，并由此認 識到，對特定患者應采用不同的合適劑量。 本發明的另一實施例中，Bcl-2反義低(聚)核苷酸奧利默4兔 (oblimersen )將以至少為6 ju g/ML的平均峰值血藥濃度(Cmax)為一 個劑量，間斷給藥，較適宜的劑量為至少8pg/ML,更適宜的劑量為至 少10jug/ML，而更適宜的劑量為至少15jug/ML,更適宜的劑量為至少 20jug/ML。在另一實施例中，平均峰值血藥濃度為至少40jLig/ML,而 更適宜的劑量為50jug/ML。 一個非同尋常的發現是，當根據本發明間 斷給藥時，可以達到更高的有效峰值血漿水平，而且不會出現明顯的臨 床毒性。平均峰值血藥濃度應根據至少4個病例的血藥濃度而定，并且 應在奧利默森(oblimersen)初次給藥后15分鐘至24小時內，進^f亍測
量， 一邊確定各樣例的峰值血藥濃度。奧利默森(oblimersen)的血藥 濃度可以通過陰離子交換高性能法進行側梁，然后求得峰值血藥濃度平 均值。液相鐠。簡要地說明，在控制血漿中可以產生復制的標準曲線， 奧利默森(oblimersen)的血藥濃度為0.25、 0.5、 1、 2、 5、 10和20mg/mL。 采用苯酚、氯仿和異戊醇提取標準曲線和病例中的血漿。可以V吏用 GenPak-Fax柱管(英國沃特福德waters )進行層離。通過Li(OH) 220mmol /L中的LiCl22mol/L的生物梯度，洗提奧利默森(oblimersen )。通過
2 5 4 n m光"i普完成才全測。將0 . 5 m L的血漿加入到2.45ml, 0.4% 濃度的十二烷基石危酸鈉，5 OmM氯4b鈉，1 OmM乙二胺四乙酉臾， p H值為7 . 4的1 0 mM平衡酚中，然后攪拌兩分鐘，便可以提取低(聚) 核苷酸。高性能液體色譜(H P L C )的情況高性能液體色譜(H P L C ) 系統包4舌兩個K o n t r o n泵， 一個4 6 O梯度-儀和一個K o n t r o n 自動取樣器。紫外線檢查采用一個Un i c am二極管陣列檢測器，檢 測波長為2 5 4 n m。高性能液體色譜(H P L C )柱管為W a t e r s GenPak-Fax柱管(4.63 100mm),緩沖液A為20%的乙腈/10mM LiOH)2, 緩沖液B為200/c)的乙腈/10mM LiOH)2/2M LiCl2。線性梯度為，以 0.5ml/mm的流速，用30分鐘，將緩沖液B從10%加至100%。 80微升 的樣品注入自動取樣器。采用Packard1122餾分收集器采集分鎦出的化 學成分(0.5ml),然后將5ml的Hiomc Fluor閃爍液加入樣品，計凄丈5 分鐘。參見《臨床腫瘤》第18巻，9 (五月)2000: ppl812-1823以及
《藥理學期刊》和《試驗療法》第281巻，l號，420-427, 1997，以上 各文件在此作為參考文獻。 Marcucci等人，已經證明在對兩個同齡組的病人，分別按 4mg/kg/每劑和7mg/kg/每劑的劑量，以靜脈注射的方式，連續10天注射 Bcl-2反義4氐(聚)核苷酸(Genasense眠G3139)后，24小時內可以達到血 藥穩態濃度(Css),但是血藥濃度卻呈單指數衰減，并且在4小時內 變得不可檢測。血漿的半衰期為60分鐘。(G. Marcucci等人，于2003 年在《血液》101: 425-432中所著文章)。當采用連續14天皮下注射 G3139時，在輸液開始后48小時內，可達到血藥穩態濃度。消除濃度 的平均血液半衰期為7.46小時(參見Waters等人(2000)在《臨床腫 瘤期刊》18: 1812-1823中所發表的文章)。另一方面，Yuen等人，曾 報道過在連續靜脈注射低(聚)核苷酸開始后24小時的PKC- a的20-長度
硫代磷酸酯低(聚)核苷酸的血藥濃度，與笫21天所測得的血藥濃度相
同，既，血藥穩態濃度Css在第24小時即'刻達到(參見A.R.Yuen等人， 于1999年在《臨床癌癥研究》5: 3357-3363中所發表的文章)。當劑 量為l.Omg/kg/每劑量時，血藥半衰期為40分鐘，當劑量為3.0mg/kg/ 每劑量時，血藥半衰期為60分鐘。這些觀測數據表明，給藥方式對于 取得足夠血藥濃度以將低(聚)核苷酸輸入細胞，從而有效抑制Bcl-2抗凋 亡作用非常重要。 可以在一個治療天內，通過連續輸液(分鐘或小時，最好 為小時)或可采用推注輸液，進行大劑量給藥。單次大劑量給藥可能導 致Bcl-2反義低(聚)核普酸的循環血藥濃度在瞬間超過30 ju g/mL。另夕卜， 單次大劑量給藥Bcl-2反義低(聚)核苷酸可能導致在不到12小時時間
內，Bd-2反義低(聚)核苷酸達到平均峰值血藥濃度Cmax。本發明的一實
施例-沒想，大劑量給藥可以間隔2至10天，間斷給藥，4支適宜的皇會藥 頻率為每隔3至9天給藥，更適宜的給藥頻率是每隔5至7天給藥一次。 在一優選實施例中，在一個治療周期內，可采用單次高濃度給藥以達到 平均峰值血藥濃度Cmax，從而可以降低治療腫瘤所需要的低(聚)核苷酸 的給藥量。在另一實施例中，可以通過隔天給藥的方式，長時間小劑量 給藥，以實現低(聚)核香酸的大劑量給藥。另外，Bcl-2反義低(聚)核苷酸的劑量會根據所使用的特定 Bcl-2反義低(聚)核香酸的類型不同而有所改變。 在確定Bcl-2反義低(聚)核苷酸的有效劑量時,應考慮的其 他因素包括在低(聚)核苷酸給藥時,是否需要配合其他治療。在此情況 下，大劑量的Bcl-2反義核苷酸的治療，允許采用聯合治療，其中，可 以減少其他治療的劑量，從而減小毒性。例如，對一個病患，按10至 50mg/kg/每劑量，。間斷給藥Bcl-2反義低(聚)核苷酸，可以增加受治療 者對癌癥療法的敏感度。在此情況下，根據本發明給藥的大劑量Bcl-2 反義低(聚)核苷酸治療，與其他治療手段相結合，例如，小劑量的癌癥 治療藥劑，可以提高患者的治療效果。 在一實施例中j妄2至10天間隔，間斷給藥18基硫代石庳酸 酯Bcl-2反義低(聚)核苷酸指定G3139(奧利默森(oblimersen); R丄Klasa 等人(2002)在《反義和核酸藥物發展>>12:193-213中所發表的文章)， 該化學物對Bcl-2mRNA的首6個密碼子互補,并與各自的RNA靶基雜
交。 在另 一 實施例中，奧利默森(oblimersen)按0.1至10 mg/kg/ 每次給藥。在一具體實施例中，奧利默森(oblimersen)按1至50 mg/kg/ 每次給藥，間隔2至10天，間斷給藥；更適宜的給藥量為4至30mg/kg/ 每次給藥；最適宜的給藥量為5至15 mg/kg/每次給藥。在另一實施例中， 奧利默森(oblimersen)按上述劑量，間隔3至9天間斷給藥。在另 一實 施例中，奧利默森(oblimersen)按上述劑量，間隔4至7天間斷給藥。 在一優選實施例中，奧利默森(oblimersen)按上述劑量，間隔3至5 天間斷給藥。在一最優選的實施例中，奧利默森(oblimersen)按5至 30 mg/kg/每劑量，間隔3至14天間斷給藥。本發明根據所使用的特定 Bcl-2反義低(聚)核苷酸，或特定的給藥方式，或Bcl-2反義低(聚)核苷 酸給藥同時配合其他治療，例如癌癥治療藥劑，設想了其他的優選治療 方案。可以在一次或多次治療期間完成間斷給藥。
給藥和時間周期 本發明提供了低聚物給藥和給藥周期的方法和組合物，該 低聚物在上述預治療實施后給藥。迄今，研究中已經采用低聚物包括治 療癌癥的Bcl-2反義低(聚)核苷酸的，按日劑量給藥對患者進行治療，例 如，以14或21天為周期給予Bcl-2反義低(聚)核苷酸治療，隨后從第 14天至21天，在剩余7天內實施傳統療法，例如方文射治療或化學治療。 盡管這些研究結果令人鼓舞，但是，根據本發明的方法治療攜帶異種移 植肺瘤的老鼠時，即，在間斷大劑量給予Bcl-2反義低(聚)核苷酸前實施 X射線預治療，已經觀察到Bcl-2反義低(聚)核苷酸的吸收率得到進一步 提高。因此,在本發明的一實施例中設想， 一個治療周期包括在預 治療實施后，按大劑量給予患者一種或多種低聚物，其中，低聚物間隔 2至10天間隔給藥。剩余的一至四個星期內，可以進行第二個治療周期。 可以對患者實施 一 至六個周期或以上的治療。應理解,本文中公開的本發明原理的變化可以由所屬領i或 的技術人員實施,并且,該變更應包括在本發明范圍內。以上各文件在此作為參考文獻整體引述。
實施例 下文實驗中使用的低(聚)核普酸全部為靶向bcl-2的硫代石粦 酸酯低(聚)核苷酸.所使用的低(聚)核苷酸為高性能液體色語(HPLC),于 使用前在消毒鹽水中清洗和溶解。
G3139' 5-TCTCCCAGCGTGCGCCAT-3，抗bcl-2(基+l至于+18)。 FAM-G3139F-TCTCCCAGCGTGCGCCAT-3，焚光標記G3139 G3622， 5-TACCGCGTGCGACCCTCT-3，反才及控制
實施例1:熒光標記低(聚)核苷酸的高吸收率，大劑量低(聚)核苷酸間斷 治療攜帶異種移植腫瘤的老鼠體內的G3139。
體內腫瘤^t型在雄性無胸腺棵鼠腰部注入lx106個細i包 的lmg/mL的Matrigel,以培養PC-3-Bcl-2異種移植胂瘤。當肺瘤平均 尺寸達到65mm3時，隨機選擇實驗鼠，并在7天內按5mg/kg的日劑量 (小劑量)，通過腹腔灌注(IP)對老鼠給藥熒光Bcl-2反義低(聚)核苷酸 (FAM-G3139),或分別在第1、 4和7天，以15mg/kg的劑量(大劑 量)間斷給藥，即，兩次給藥間隔三天(
圖1A)。 熒光標記G3139 4氐(聚)核苷酸的吸收率.在第8和第12天, 解剖小鼠，切除皮下組織和器官。將切除的各組織的一部分(a)進行光 學相干斷層掃描(Miles實驗室)或(b)凍存管中和速凍液(N2液) 中以進行水凍切片(8-10juM厚度)，或者放置到防脫載玻片(Fisher) 上。使用立體顯微鏡(Zeiss, 40)和飛點掃描攝像機(QImaging)對熒 光強度進行記錄。
圖1B中的結果表明，與8天每日以5mg/kg劑量，給予老 鼠低(聚)核苷酸的方案相比，在第1、 4和7天，以15mg/kg的劑量(大 劑量，中間面板)，對老鼠間斷給予低(聚)核苷酸的方案，可以提高老 鼠肺瘤組織對熒光標記G3139的吸收率。而在第12天，采取15mg/kg G3139劑量(右側面板)間斷治療的老鼠，體內的熒光標記G3139的吸 收率更高。
實施例2: X射線預-預治療加強了攜帶異種移植腫瘤老鼠的熒光標簽低 (聚)核普酸G3139的吸收率，該老鼠間斷接受大劑量低(聚)核苷酸治療。
體內肺瘤模型如例l,在雄性無胸腺棵鼠腰部培養
PC-3-Bcl-2異種移植腫瘤。當肺瘤平均尺寸達到65mm3時，隨才幾選擇實 驗鼠，采用5Gy X射線對老鼠進行治療，隨后通過腹腔灌注IP,按每日 5mg/kg(小劑量),連續7天給藥，或按15mg/kg(大劑量)，在第1、 4和7 天間斷給藥FAM-G3139低(聚)核苷酸，或在最后一天，G3139給藥后， 進行X射線治療。(圖2A)。 熒光標記G3139低(聚)核苷酸的吸收率。在第11天，解剖 小鼠,切除皮下組織和器官。將切除的各組織的一部分按上例1進行處 理。4吏用立體顯樣i鏡(Zeiss, 40)和飛點掃描揭/f象才幾(QImaging)對熒 光強度進行記錄。 圖2B顯示在一個治療周期開始時，在5mg/kg G3139給藥 前，實施5Gy的X射線預治療的方案比首先給予5mg/kg G3139,隨后 在治療結束時實施X射線治療的方案，更能提高腫瘤細胞對熒光標記 G3139的吸收率。 圖3顯示，在間斷給予15mg/kgG3139期間，在一個治療周 期開始時，對老鼠實施5GyX射線預治療，可以進一步提高吸收率。
實施例3: X射線預-預治療延長了焚光標記低(聚)核苷酸的保持率； G3139單劑量治療攜帶異種移植腫瘤老鼠，其體內G3139的情況。體內肺瘤才莫型如例l,在雄性無胸A,棵鼠腰部培養 PC-3-Bcl-2異種移植肺瘤。當肺瘤平均尺寸達到65mm4t,隨機選擇實 驗鼠,采用5Gy X射線對右腰攜帶異種移植肺瘤的老鼠進行預治療，隨后 通過靜脈注射,按每日6mg/kg(小劑量)，連續5天給藥(左上面板)，或按 10mg/kg(大劑量),在第1、 3和5天(上中面板)間斷給藥熒光標記G3139 低(聚)核苷酸，或在最后一天，在實施X射線預治療后，單劑量給藥 30mg/kg。(右上面板)；以及未治療的攜帶異種移植胂瘤的左腰(下面板 3).各老鼠接受總劑量為30mg/kg的熒光標記G3139。熒光標記G3139低(聚)核普酸的吸收率。在治療的第8天， 解剖小鼠，切除皮下組織和器官，并采用DAPI對比染色，對核染色進 行內部染色控制。切除的組織如上例l處理，使用立體顯微鏡(Zeiss, 40)和飛點掃描攝像機(QImaging)對熒光強度進行記錄。在各樣本上 的三個區域記錄信號強度，并采用計算機成像分析系統MCID Elite (成 像研究)量化，并求取平均數，以取得報告強度。圖6顯示,在第1天采用X射線進行預治療，隨后給予單劑 量30mg/kgG3139的方案，證明不僅有助于提高低(聚)核苷酸的吸收率， 并且在放射治療和G3139給藥后，能在體內存留7天。采取10mg/kg G3139(上中面板)間斷給藥治療的老鼠，與采取6mg/kgG3139(左上面 板)連續5天給藥治療的老鼠相比，對熒光標記G3139的吸收率更高。 在未實施X射線敏化治療的左腰上的腫瘤細胞并無明顯的染色。圖5顯示三組實-瞼鼠的腫瘤內的FAM-3139的定量。該圖 顯示與接受間斷給藥10mg/kg (隔天給藥，總共三個劑量)治療的老鼠， 以及接受連續5天每日給藥6mg/kg治療的老鼠相比，首先接受X射線 治療，隨后給予單劑量30mg/kg FAM-3139治療的老鼠，其組織對藥物 的吸收率最高。
實施例4:間斷給藥Bcl-2反義低聚物增加了單劑量給藥的抗瘤活性。體內肺瘤才莫型:通過皮下注射5至9xl06 A549腫瘤細月包于雄 性無胸腺棵鼠腰部，而培養NSCLC異種移植腫瘤。當腫瘤平均尺寸達 到65mm3時，隨機選擇小鼠，并在4周內(28天)按每日2.5, 5， 7.5mg/kg 的劑量，4周內(28天)按每日10mg/kg的劑量，4周(總共14天)隔天 給藥，4周(總共10天)隔兩天給藥，以及4周(總共7天)隔三天給 藥，以腹腔灌注(IP)的方式灌注G3139。也可采取4周(總共14天)隔 天注射20mg/kg的治療方式。在30mg/kg和30mg/kg的劑量下，分別隔 兩天或隔三天灌注。(圖6)。置入后15-55天，檢測腫瘤生長情況， 并根據以下公式計算腫瘤體積[(寬度)2 x長度]/2。圖7顯示，隔曰接 受20mg/kg G3139治療的老鼠體內的胂瘤生長速度慢于每日接受 10mg/kg(總共280mg/kg)灌注治療的老鼠體內的腫瘤生長速度。間隔2 至3天，間斷接受大劑量灌注治療的老鼠體內的腫瘤的生長速度慢于每 日接受小劑量治療的老鼠體內的腫瘤生長速度。對攜帶異種移植腫瘤的老鼠的成活率進行75天置入后監 測。圖8顯示，按以上劑量給藥的老鼠的成活率百分比。
權利要求
1. 治療人類腫瘤性疾病或自體免疫疾病的一種方法，包括對病人實施至少一個治療周期的治療，其中，所述治療周期包括i. 一種預治療的一個有效量，其中預治療從一種或多種治療手段中選擇，包括放射療法、聲學療法、熱療和抗腫瘤治療；并且ii. 一種低聚物的一個有效量提供的低聚物平均峰值血藥濃度為6μg/mL至50μg/mL。
2. 權利要求1的方法，其中低聚物從奧利默森(oblimersen)、G4460 和INX-3001中選擇。
3. 權利要求l的方法，其中平均峰值血藥濃度至少為40jug/mL。
4. 權利要求l的方法，其中平均峰值血藥濃度至少為20jug/mL。
5. 權利要求l的方法，其中平均峰值血藥濃度至少為15jug/mL。
6. 權利要求1的方法，其中，抗瘤治療從以下一種或多種治療中 選擇，包括藥物治療和生物治療。
7. 權利要求1的方法，其中低聚物的給藥頻率從隔兩天、隔三天 或隔四天中選捧。
8. 權利要求1的方法，其中在治療周期內，預治療為放射治療， 于單劑量低聚物給藥前一天實施。
9. 權利要求8的方法，其中在治療周期內，預治療包括放射治療， 并在放射治療當天，以30mg/kg的單劑量給藥低聚物。
10. 權利要求1的方法，其中在治療周期內，預治療包括按首次 4mg/kg至30mg/kg的劑量,給藥低聚物，在此前一天實施放射療法預治 療，并至少給予一次隨后給藥，其中，在給予初始給藥一至5天后給予 首次隨后給藥。
11. 權利要求10的方法，其中低聚物的隨后給藥包括每日給藥 6mg/kg至10mg/kg。
12. 權利要求11的方法，其中低聚物的隨后給藥包括5天每日給藥 6mg/kg/每劑量。
13. 權利要求10的方法，其中低聚物的隨后給藥為15mg/kg/每劑量。
14. 權利要求13的方法，其中低聚物的隨后給藥在初始給藥兩天后。
15. 權利要求10的方法,其中低聚物為奧利默森(oblimersen)。
16. —種治療人類肺瘤疾病或自體免疫疾病的合成藥物，上述疾病 在一治療周期內通過》文射療法預治療，所述合成藥物適用于，在每一治療周期內，對患者給予有效量的奧利默森(oblimersen),使低聚物的 平均峰值血藥濃度達到6 ju g/mL至50 iu g/mL。
全文摘要
本發明涉及一種治療人類增生性疾病的方法，例如由一種目標基因(包括但不限于致癌基因，包括癌癥促發基因或抗藥基因)過度表達造成的癌癥，或自體免疫疾病，或導致疾病更難治愈，該方法是，在給予病患有效量的核苷基合成物抑制基因的表達之前，給予病患有效量的預治療。該預治療是放射線療法中的一種或多種，例如，X射線、質子束、電子束；升溫治療、超聲波治療、化學療法和生物療法。該發明也涉及一種需要采用核苷基基因表達抑制劑以治療一種人類疾病的改進劑量和工序。
文檔編號A01N47/00GK101394744SQ200780008029
公開日2009年3月25日 申請日期2007年3月31日 優先權日2006年3月31日
發明者B·D·布朗 申請人:真塔公司