專利名稱：一種新型飼料添加劑糖萜素的提取方法
技術領域：
本發明是關于一種新型飼料添加劑糖萜素的提取方法，屬于飼料添加劑領域。
背景技術：
糖萜素是以山茶科植物中糖類和三萜皂甙類為主體研制成的，山茶科屬種子餅粕 中三萜皂甙是由有機酸-配基-糖體組成的.生物活性物質化學性質穩定，可溶于溫水、二 硫化碳和醋酸乙酯，易溶于含水甲醇、含水乙醇、正丁醇和冰醋酸，但不溶于乙醚、丙酮苯等 溶劑，糖萜素分別與醋酸酐、鉬酸銨、三氯化鐵和香莢蘭素起化學呈色反應。它耐高溫，為棕 黃色、無灰微細狀結晶。糖萜素主要是由糖類(I > 30% )、三萜皂甙(> 30% )、有機酸組 成。糖萜素在飼料中的添加量為0. 2-0. 5mgAg，它可以完全替代抗生素藥物，且無殘留，不污 染環境，它是全國唯一 AA級純天然綠色添加劑。 糖萜素的作用機制明顯有別于抗生素，抗生素通過抑制或殺滅畜禽消化道內有害 微生物的生長繁殖防止疾病，使腸壁變薄，促進營養成分的滲透和吸收，加快蛋白合成，促 進動物生長，其作用發揮短期效應。而糖萜素則是通過提高動物的整體免疫性能和內分泌 系統的功能，提高動物的健康水平，進而改善動物的生產性能。 糖萜素所含的生物活性物質，具有調節網狀內皮系統，增強巨噬細胞、淋巴細胞、 白細胞介素的活性，提高抗體水平，調節cAMP與cGMP含量和補體的生成等作用，明顯增強 機體免疫功能。自由基對生物系統的危害極大。抗氧化劑能夠穩定具有高度活性的自山基， 從而司保持細胞結構和功能的完整性(chew，1995)。糖萜素能與游離基產生作用而阻止自 行氧化的繼續進行。它具有清除超氧自由基、羥自由基和脂自由基的作用。糖萜素還可提 高動物體內小腸內消化酶(蛋白水解酶、脂肪酶、淀粉酶)的活性，改善消化吸收功能，提高 生產性能。 糖萜素作為新一代高效、無殘留和無公害綠色飼料添加劑來代替藥物飼料添加 劑，具有良好的市場前景。
發明內容
本發明的目的之一是提供一種新型飼料添加劑糖萜素有效成分的提取方法及含 量測定方法。 本發明的目的之二是為糖萜素為有效成分的新型飼料的研究開發提供一些有效 的信息。 本發明的技術解決方案如下 稱取山茶科植物的種子，干燥后去皮粉碎，按照比例加入溶劑乙醇，用微波加熱， 提取三次。提取完畢后合并提取液，將其減壓濃縮回收溶劑后加水成懸浮液，懸浮液依次用 石油醚、丙酮萃取，棄去石油醚、丙酮萃取液。余相用正丁醇萃取，該萃取液經減壓濃縮，稱重。 采用分光光度法測定提取物中有效成分三萜皂甙的含量，551nm為測定波長。
標準曲線的制訂精確吸取齊墩果酸標準溶液0、0. 05、0. 10、0. 15、0. 20和0. 25ml 分置于具塞試管中，揮去甲醇，精密加入5 %香草醛-冰醋酸溶液(新鮮配制)0. 2ml ，高氯 酸0. 8ml，搖勻，于6(TC水浴中加熱15min后，置冰浴中冷卻。加冰醋酸5ml，搖勻，立即在 551nm波長下測定吸光度A，同時以試劑空白做參照。以吸光度A為縱坐標，濃度C(mg/ml) 為橫坐標，繪制標準曲線。 樣品液的測定精確吸取0.3ml的供試品溶液，置于具塞試管中，揮去甲醇，照標 準曲線項下的方法操作，平行做5次實驗，測定吸光度A，代入回歸方程，計算總皂苷的含 山茶皂苷主要為五環三萜類，故我們選擇了與山茶皂苷類成分基本母核結構接近 的齊墩果酸為對照品。皂苷的分析測定有多種方法，如沉淀法、溶血指數法、層析法等，沉淀 法測定往往易帶進雜質或導致皂苷變質；層析法一般可以分離出總皂苷，但對總含量測定 不適，誤差大，成本高，采用分光光度計法測定其總皂苷的含量操作簡便、靈敏，屬于經典、 成熟、高效的方法。
權利要求
一種新型飼料添加劑糖萜素的提取方法，其特征在于包括以下步驟稱取山茶科植物的種子，干燥后去皮粉碎，按照比例加入的溶劑乙醇，用微波加熱，提取三次。提取完畢后合并提取液，將其減壓濃縮回收溶劑后加水成懸浮液，懸浮液依次用石油醚、丙酮萃取，棄去石油醚、丙酮萃取液。余相用正丁醇萃取，該萃取液經減壓濃縮，稱重。采用分光光度法測定提取物中有效成分三萜皂甙的含量，551nm為測定波長。先用齊墩果酸標準對照品溶液的梯度溶液測定的吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標繪制成標準曲線，得到回歸方程。供試品溶液取0.3ml，按照標準曲線下的方法操作，平行測定5次，代入回歸方程，即可計算出提取物中三萜皂甙的含量。
2. 根據權利要求1所說的按照比例加入溶劑乙醇，用微波加熱，提取三次，其特征在于乙醇的濃度為95%，原料(m):溶劑(v) = 1 : 8，微波功率為300W，輻射時間20min。
3. 根據權利要求1中所說的齊墩果酸標準對照品溶液和供試品溶液，其特征在于干燥的齊墩果酸對照品，加入甲醇，配制成0. 5mg/ml的對照品溶液；山茶子乙醇提取物的干浸膏，加入甲醇配制成2. 36mg/ml的供試品溶液。
4. 根據權利要求1所說的先用齊墩果酸標準溶液的梯度溶液測定的吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標繪制成標準曲線，得到回歸方程，其特征在于精確吸取齊墩果酸標準溶液[0、0. 05、0. 10、0. 15、0. 20和0. 25ml分置于具塞試管中，揮去甲醇，精密加入5%香草醛-冰醋酸溶液(新鮮配制)0. 2ml，高氯酸0. 8ml，搖勻，于6(TC水浴中加熱15min后，置冰浴中冷卻。加冰醋酸5ml，搖勻，立即在551nm波長下測定吸光度A，同時以試劑空白做參照。以吸光度A為縱坐標，濃度C(mg/ml)為橫坐標，繪制標準曲線。
全文摘要
本發明公開了一種新型飼料添加劑糖萜素的提取方法。稱取山茶科植物的種子，干燥后去皮粉碎，用乙醇為溶劑，微波加熱提取三次。合并提取液，將其減壓濃縮，用正丁醇萃取，萃取液經減壓濃縮干燥，得到提取物粉末。用分光光度計，標準曲線法測定提取物中有效成分三萜皂甙的含量。方法實用、簡單、效果好。
文檔編號A23K1/16GK101756023SQ200810121708
公開日2010年6月30日 申請日期2008年10月23日 優先權日2008年10月23日
發明者吳菁, 陳群 申請人:湖州來色生物基因工程有限公司;吳菁