專利名稱：鄧恩桉組培快繁的生根方法
技術領域：
本發明涉及一種鄧恩桉生根的方法，尤其涉及一種利用組織培養對鄧恩桉進行快速 繁殖的生根方法，屬于植物組織培養技術領域。
背景技術：
鄧恩桉(Eucalyptus dunnii Maiden)為桃金娘科桉樹屬、雙蒴蓋亞屬(subgenus symphyomyrtus)、藍桉組(section Maidenaria)多枝桉系(series Viminales)， 原產于澳大禾(J 亞，生長快，樹干通直，木質粗細均勻，紋理直，耐干旱，抗病性，耐寒性極強等特性， 可作刨花板材、紙漿材、木片材等多種用途，為推廣擴大桉樹人工林種植范圍的優良種 源。但從目前市場形勢看，國內大面積種植鄧恩桉還有很多問題尚待解決。由于鄧恩桉 在澳大利亞分布有限，產種量少，而國內鄧恩桉難于開花結實，不能生產種子，種子價 格非常昂貴，每公斤價格高達3萬多元，且還存在貨源不穩和質量等問題，遠遠滿足不 了市場的需求。因此進行鄧恩桉快速繁殖對開發和利用寶貴的桉樹資源具有重要的意 義。
關于鄧恩桉的組織培養，自1989年ME.Cortezzi Graca等首先用莖段誘導獲得再生植 株以來，國內外在這方面進行了一些研究，ReginaR. Termignoni等(1996)以3日生種 苗為材料誘導了體細胞胚胎的發生，歐陽磊(2003年)、陳研華(2004年)、易敏(2005)、 馬英(2006年)、易靄琴 (2007年)、王以紅(2005、 2006、 2008年)等主要采用下 胚軸、萌芽條的莖段、半木質化的帶芽莖段、種子實生苗的帶芽莖段等材料為外植體， 通過不同基本培養基、不同的激素組合、谷氨酸、抗氧化劑以及不同的光源和光照強度 對鄧恩桉組培試管苗不定芽的分化和增殖進行了研究，芽的增殖系數較低為3 5。歐陽 磊(2006)和林彥(2007)等研究了生長素(ABT、 IBA、 NAA)、活性炭、大量元素、 微量元素、有機物、蔗糖、溫度及光照等對組培苗生根的影響，結果表明不同無性系之 間的生根率差別非常大，大部分株系生根率很低約為20%。 2002年彭信海等發明了關于 "鄧恩桉組培育苗方法"的專利(專利號02114142)，試管苗的繁殖系數僅為3，生根 率未見報道。雖然近幾年關于鄧恩桉已做了不少的研究，但增殖系數較低，遠遠滿足不 了大規模工廠化育苗和市場的大量需求，生根未解決，在生產上根本無法應用。因此， 建立高效穩定的鄧恩桉組培快繁體系，尤其是鄧恩桉生根極為困難，用常規的組織培養 生根方法和培養基達不到效果，已成為目前國內外組培中的難點。
從上述有關鄧恩桉組織培養的研究結果看，國內外尚未見到有關鄧恩桉繼代增殖培 養中采用不同激素種類的培養基交替使用，通過極低激素濃度或無激素培養基的壯苗培 養后，再以較低pH值及生長素和細胞分裂素的組合誘導生根獲得完整植株的研究報道。
發明內容
針對現有技術的不足，本發明的目的是提供一種鄧恩桉快速繁殖的生根方法，以解決鄧恩桉組培苗生根難的問題。本發明所述鄧恩桉組培快繁的生根方法，步驟包括(1)無菌苗培育，(2)芽的繼 代增殖，(3)試管苗復壯，(4)誘導生根，(5)試管苗移栽；其中步驟(1)所述無菌苗培育的具體方法是挑選飽滿無病蟲害的種子，消毒后接種到萌發培養基中，進行晝夜光照周期培養，光照強度為38 42pmoL m'、"，光照時間 13 15h'd—1，晝溫度25士rC，夜溫度18士rC， 5 8d后種子萌發，獲得無菌苗；步驟(2)所述芽的繼代增殖培養的具體方法是將步驟(1)培育的無菌苗從子葉 基部剪斷，帶子葉轉接于增殖培養基I或II中，以步驟(1)所述條件進行晝夜光照周 期培養，7 10d后誘導形成叢生芽，形成的叢生芽再分割成帶2~3個芽的芽叢接種于增 殖培養基I或II中進行繼代增殖，繼代周期15~20d,在繼代增殖培養中所述2種增殖培 養基I或II交替使用；步驟(3)所述試管苗復壯培養的具體方法是將步驟(2)苗高1~2厘米、帶1~2 個芽的小苗接種到壯苗培養基中，以步驟(1)所述條件進行晝夜光照周期培養12~15d 后進行誘導生根；步驟(4)所述誘導生根培養的具體方法是待步驟(3)培養復壯的試管苗長到 3~4cm,將其切成單株，接種到第一生根培養基中培養6~9d，再轉接到第二生根培養基 中培養8 12d獲得生根植株,培養條件為步驟(1)所述晝夜光照周期培養；步驟(5)所述試管苗移栽的具體方法是把生根的瓶苗移到遮光度80%~90%遮蔭 網塑料大棚溫室條件下適應ld后，逐漸打開瓶苗封口膜降低濕度，2 3d后，用鑷子將 苗夾出，用清水洗去基部殘留的培養基，移栽到裝有混合基質育苗盤中，利用間歇噴霧 裝置或人工噴水保持相對濕度在80%以上，經馴化煉苗5 6d后，栽入盆栽基質中繼續 培養3~4d后，然后轉移到遮光度約50%~60%遮蔭網通風棚內培養8~12d定植于大田；其中所述的混合基質育苗盤的成分以體積比計為細沙土育苗基質=4: 1: 1， 混合基質育苗盤上面再放置細沙l~2cm;盆栽基質的成分以體積比計為沙壤土爐灰 育苗基質=5: 1: 1;所述育苗基質購于壽光市恒先育苗基質加工廠。上述方法各步中采用的培養基及其配方是萌發培養基是指MS+0 0.5mg/L 6-BA(6-芐基氨基嘌呤)+25~35g/L蔗糖+4 6g/L瓊 脂，pH值5.7 5.9;MS培養基組分為KN03 1900 mg L"， NH4N03 1650 mg L"， MgS04.7 H20 370mg-L", KHzPC^nOmg'L-1, CaCl2.2H20 440 mg I/1 ， MnS04'4H20 22.3 mg . L"， ZnS047H20 8.6 mg L曙1， H3B03 6.2 mg L-1， KI 0.83 mg L1， NaMo04-2H20 0.25 mg L-1, CuS04'5H20 0.025 mg L-1 ， CoCl26H20 0.025 mg L-1, Na2-EDTA 37.3 mg . L-1 ， FeSO4'7H20 27.8 mg L—1，鹽酸硫胺素O.lmg L—1，鹽酸比哆醇0.5 mg . L—1，煙酸0.5 mg'L"，肌醇lOOmg. 1/1,甘氨酸2.011^'1/1。增殖培養基I是指MS+0.4 0.6mg/L6-BA+0.4 0.6mg/LKT(激動素)+0.2 0.4mg/LIBA (吲哚丁酸)+25~35§^蔗糖+4~68/^瓊脂，pH值5.7 5.9;增殖培養基II是指MS+0.4~0.6mg/L ZT (玉米素)+ 0.2-0.4mg/L IAA (吲哚乙酸) +25~358^蔗糖+4~6§/!^瓊脂，pH值5.7 5.9;壯苗培養基是指MS+0~0.1 mg/LKT+0~0.05mg/LNAA (萘乙酸)+25~35g/L蔗糖 十4 6g/L瓊脂，pH值5.7 5.9;第一生根培養基是指l/2MS+2.0~4.0 mg/L IBA+0.005~0.02 mg/L NAA+0.05~0.2 mg/L KT+15~25g/L庶糖+6~8 g/L瓊脂，pH值5.2~5.5;第二生根培養基是指1/2MS+15 25g/L蔗糖+6 8g/L瓊脂，pH值5.2 5.5;其中1/2 MS是指培養基的組分中MS大量元素減半及其余為MS全量元素，其具 體組分為KNO3 950mg.L"， NH4N03 825 mg L", MgS04'7 H20 185mg . I/1 ， KH2P04 85 mg L-1 ， CaCl2.2H20 220 mg I/1 ， MnS04-4H20 22.3 mg L-1 ， ZnS04.7H20 8.6 mg I/1 ， H3B036.2 mg L-1, KI 0.83 mg L"， NaMo042H20 0.25 mg . L", CuS045H20 0.025 mg I/1 ， CoCl26H20 0.025 mg U1 ， Na2-EDTA 37.3 mg I/1 ， FeSO4.7H20 27.8 mg L'1 ， 鹽酸硫胺素0.1mg-L-'，鹽酸比哆醇0.5mg丄—1,煙酸0.5 11^丄-|，肌醇100mg'L",甘 氨酸2.0mg'L-'。上述鄧恩桉組培快繁的生根方法中，所述無菌苗培育、芽的繼代增殖、試管苗復壯、 誘導生根各階段晝夜光照周期培養條件優選為光照強度40pmoL m^s"，光照時間 14h'd'1，晝溫度25'C，夜溫度18'C。上述鄧恩桉組培快繁的生根方法中，所述無菌苗的獲得、芽的繼代增殖、試管苗復 壯各階段培養基中，瓊脂優選5g/L,蔗糖優選30g/L， pH值優選5.8。上述鄧恩桉組培快繁的生根方法中，步驟(4)中所述的第一生根培養基組成優選 為1/2MS+3.0 mg/L IBA+0.01 mg/L NAA+0.1 mg/L KT+20g/L蔗糖+7 g/L瓊脂，pH值 5.4。上述鄧恩桉組培快繁的生根方法中，步驟(4)中所述的單株接種到第一生根培養 基中優選培養7d，再轉接到第二生根培養基中培養。本發明的技術方案是在繼代增殖培養過程中，采用不同激素種類的培養基交替使 用，大幅度提高了試管苗的增殖系數，通過極低激素濃度或無激素培養基的壯苗培養后， 以較低pH值及生長素和細胞分裂素的組合誘導生根獲得完整植株。本發明所提供的鄧恩桉組培快繁的生根方法解決了鄧恩桉組培苗生根難的問題，經 實驗統計生根率可達86%以上，試管苗的增殖系數由原來的3提高到10以上，增殖系 數提高3倍以上，實現了鄧恩桉快繁生根的目的。應用本發明方法短時間內能提供大量 的種苗，以代替進口種子，完全能夠滿足大規模生產的需要。
圖1增殖培養 圖2壯苗培養 圖3生根培養圖4移栽煉苗具體實施方式
下面結合實施案例對本發明作進一步說明 實施例1挑選飽滿無病蟲害的鄧恩桉種子，放于1.5ml離心管中，自來水沖洗干凈后浸泡 10min，用70%乙醇滅菌30秒，再用0.1%氯化汞滅菌2分鐘，然后用無菌水洗滌5次， 在無菌條件下接種到MS+0.5mg/L 6-BA+5g/L瓊脂+30 g/L蔗糖萌發培養基中(pH值 5.8),培養條件為晝溫度25T:，夜溫度18'C，光照強度4(^mol'nT、",光照時間14h-d—1 (培養條件下同)，8d后種子萌發，獲得無菌苗。將無菌苗從子葉基部剪斷，帶子葉轉接于MS+0.5mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.25mg/L IBA +5g/L瓊脂+30g/L蔗糖(pH值5.8)或MS+0.5 mg/L ZT+0.25 mg/L IAA+5g/L瓊脂 +30§^蔗糖(pH值5.8)增殖培養基中，以上述條件進行晝夜光照周期培養，9d后誘 導形成叢生芽，獲得的芽叢可不斷切割繁殖，繼代周期20d，在繼代增殖培養中所述2 種增殖培養基I或II交替使用。將苗高l~2cm，帶1~2個芽的苗接種到MS+0.1mg/LKT+0.05mg/LNAA+5g/L瓊脂 +30§^蔗糖(pH值5.8)壯苗培養基中，以上述條件進行晝夜光照周期培養，培養15d 后剪取高3厘米以上的健壯苗接種到1/2MS+3.0 mg/L IBA+0.01 mg/L NAA+0.1 mg/L KT+7g/L瓊脂+20g/L蔗糖(pH值5.4)第一生根培養基中晝夜光照周期培養7d，再轉 接到1/2MS+7g/L瓊脂+20 g/L蔗糖(pH值5.4)第二生根培養基中晝夜光照周期培養 9d獲得生根植株，生根率達92%以上。把生根植株的瓶苗移到遮光度約80%~90%遮蔭網塑料大棚溫室條件下適應ld后， 逐漸打開瓶苗封口膜降低濕度，2d后用鑷子將苗輕輕夾出，用清水洗去基部殘留的培養 基，移栽到裝有混合基質育苗盤中，利用間歇噴霧裝置或人工噴水以保持相對濕度在 80%以上，經馴化煉苗6d后，栽入盆栽基質中繼續培養3d，然后轉移到遮光度約 50%~60%遮蔭網通風棚內培養8d定植于大田，成活率達卯％以上。實施例2挑選飽滿無病蟲害的鄧恩桉種子，放于1.5ml離心管中，自來水沖洗干凈后浸泡 10min，用70%乙醇滅菌20秒，再用0.1%氯化汞滅菌3分鐘，然后用無菌水洗滌6次， 在無菌條件下接種到MS+0.3mg/L 6-BA+5g/L瓊脂+30 g/L蔗糖萌發培養基中(pH值 5.8)，培養條件為晝溫度25'C，夜溫度18。C，光照強度40^imol'mAs"，光照時間14h-d" (培養條件下同)，6d后種子萌發，獲得無菌苗。將無菌苗從子葉基部剪斷，帶子葉轉接于MS+0.45mg/L 6-BA+0.6mg/L KT+0.3mg/L IBA +5g/L瓊脂+30g/L蔗糖(pH值5.8)或MS+0.45 mg/L ZT+0.3 mg/L IAA+5g/L瓊脂 十30g/L蔗糖(pH值5.8)增殖培養基中，以上述條件進行晝夜光照周期培養，lld后誘 導形成叢生芽，獲得的芽叢可不斷切割繁殖，繼代周期18d，在繼代增殖培養中所述2 種增殖培養基I或II交替使用。將苗高2cm，帶1~2個芽的苗接種到MS+0.2mg/L KT+0.01mg/L NAA+5g/L瓊脂 +3(^化蔗糖(pH值5.8)壯苗培養基中，以上述條件進行晝夜光照周期培養，培養15d 后剪取高3厘米以上的健壯苗接種到1/2MS+2.5 mg/L IBA+0.02mg/L NAA+0.15 mg/L KT+7g/L瓊脂+20 g/L蔗糖(pH值5.4)第一生根培養基中晝夜光照周期培養9d,再轉 接到1/2MS+6g/L瓊脂+20 g/L蔗糖(pH值5.5)第二生根培養基中晝夜光照周期培養 9d獲得生根植株，生根率達87%以上。把生根植株的瓶苗移到遮光度約80%~90%遮蔭網塑料大棚溫室條件下適應ld后， 逐漸打開瓶苗封口膜降低濕度，3d后用鑷子將苗輕輕夾出，用清水洗去基部殘留的培養 基，移栽到裝有混合基質育苗盤中，利用間歇噴霧裝置或人工噴水以保持相對濕度在80 %以上，經馴化煉苗5d后，栽入盆栽基質中繼續培養2d，然后轉移到遮光度約50%~60% 遮蔭網通風棚內培養9d定植于大田，成活率達87%以上。實施例3挑選飽滿無病蟲害的鄧恩桉種子，放于1.5ml離心管中，自來水沖洗干凈后浸泡 10min,用70%乙醇滅菌40秒，再用0.1%氯化汞滅菌1分鐘，然后用無菌水洗滌6次， 在無菌條件下接種到MS +5g/L瓊脂+30 g/L蔗糖萌發培養基中(pH值5.8)，培養條件 為晝溫度25°C ，夜溫度18°C ，光照強度40nmol' m《s人光照時間14bd'k培養條件下同)， 7d后種子萌發，獲得無菌苗。將無菌苗從子葉基部剪斷，帶子葉轉接于MS+0.4mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.6mg/L IBA +6g/L瓊脂+35g/L蔗糖(pH值5.8)或MS+0.4mg/L ZT+0.2 mg/L IAA+6g/L瓊月旨 +35§^蔗糖(pH值5.8)增殖培養基中，以上述條件進行晝夜光照周期培養，lld后誘 導形成叢生芽，獲得的芽叢可不斷切割繁殖，繼代周期15d，在繼代增殖培養中所述2 種增殖培養基I或II交替使用。將苗高2cm，帶1~2個芽的苗接種到MS +5g/L瓊脂+30g/L蔗糖(pH值5.8)壯苗 培養基中，以上述條件進行晝夜光照周期培養，培養15d后剪取高2厘米以上的健壯苗 接種到1/2MS (MS大量元素減半，其余為MS全量元素)+3.5mg/L IBA+0.025mg/L NAA+0.1 mg/LKT+7g/L瓊脂+20 g/L蔗糖(pH值5.4)第一生根培養基中晝夜光照周期 培養8d，再轉接到1/2MS (MS大量元素減半，其余為MS全量元素)+7g/L瓊脂+20 g/L 蔗糖(pH值5.5)第二生根培養基中晝夜光照周期培養lld獲得生根植株，生根率達89% 以上。把生根植株的瓶苗移到遮光度約80%~90%遮蔭網塑料大棚溫室條件下適應2d后， 逐漸打開瓶苗封口膜降低濕度，2d后用鑷子將苗輕輕夾出，用清水洗去基部殘留的培養 基，移栽到裝有混合基質育苗盤中，利用間歇噴霧裝置或人工噴水以保持相對濕度在80 %以上，經馴化煉苗4d后，栽入盆栽基質中繼續培養3d，然后轉移到遮光度約50°/。~60% 遮蔭網通風棚內培養lld定植于大田，成活率達95%以上。本發明方法實施中采用的培養基及其配方是MS培養基組分為KN03 1900 mg ■ L"， NH4N03 1650 mg L"， MgS04'7 H20 370mg.L—1， KH2PO4170mg-L-1， CaCl2'2H20 440 mg L.1, MnS044H20 22.3 mg ' L', ZnS047H20 8.6 mg L"， H3B03 6.2 mg L"， KI 0.83 mg L-1， NaMo04'2H20 0.25 mg ， CuS04'5H20 0.025 mg l/1 ， CoCl2'6H20 0.025 mg L-1 ， Na2-EDTA 37.3 mg L.1 ， FeSO(7H20 27.8 mg L"，鹽酸硫胺素O.lmg L"，鹽酸比哆醇0.5 mg L"，煙酸0.5 mg L"，肌醇lOOmg. L",甘氨酸2.0 mg L"。1/2 MS培養基的基本組分包括MS大量元素減半及其余為MS全量元素，其組分為 KN03 950 mg I/1 ， NH4N03 825 mg I/1, MgS04-7 H20 185mg L-1 ， KH2P04 85 mg I/1 ， CaCl2'2H20 220 mg L" ， MnS04.4H20 22.3 mg L-1 ， ZnS047H20 8.6 mg L", H3B036.2 mg L"， KI 0.83 mg . !/'， NaMo04-2H20 0.25 mg L"， CuS04-5H20 0.025 mg ■ L"， CoCl2-6H20 0.025 mg-L"， Na2-EDTA 37.3mg.L-1， FeSO4-7H20 27.8 mg L",鹽酸硫 胺素O.lmg'L—1，鹽酸比哆醇0.5mg'L—1，煙酸0.5mg'L—1，肌醇100mg'L",甘氨酸2.0 mg . I/1 。萌發培養基是指MS+0~0.5mg/L 6-BA+25~35g/L蔗糖+4 6g/L瓊脂，pH值5.7~5.9;增殖培養基I是指MS+0.4~0.6mg/L 6-BA+0.4~0.6mg/L KT+0.2~0.4mg/L IBA+25~35g/L蔗糖+4~6 g/L瓊脂，pH值5.7~5.9;增殖培養基II是指MS+0.4~0.6mg/L ZT + 0.2~0.4mg/L IAA+25~35g/L庶糖+4 6g/L 瓊脂，pH值5.7 5.9;壯苗培養基是指MS+0~0.1 mg/LKT+0~0.05 mg/LNAA+25~35g/L蔗糖+4~6 g/L瓊 脂，pH值5.7 5.9;第一生根培養基是指l/2MS+2.0~4.0 mg/L IBA+0.005~0.02 mg/L NAA+0.05~0.2 mg/LKT+15~25g/L蔗糖+6~8 g/L瓊脂，pH值5.2~5.5;第二生根培養基是指1/2MS+15 25g/L蔗糖+6 8g/L瓊脂，pH值5.2 5.5。上述的混合基質育苗盤的成分以體積比計為細沙土育苗專用基質=4: 1: 1， 混合基質育苗盤上面再放置細沙l~2cm;盆栽基質的成分以體積比計為沙壤土爐灰: 育苗專用基質=5: 1: 1。
權利要求
1、一種鄧恩桉組培快繁的生根方法，步驟包括(1)無菌苗培育，(2)芽的繼代增殖，(3)試管苗復壯，(4)誘導生根，(5)試管苗移栽；其特征在于步驟(1)所述無菌苗培育的方法是挑選飽滿無病蟲害的種子，消毒后接種到萌發培養基中，進行晝夜光照周期培養，光照強度為38～42μmol·m-2·s-1，光照時間13～15h·d-1，晝溫度25±1℃，夜溫度18±1℃，5～8d后種子萌發，獲得無菌苗；步驟(2)所述芽的繼代增殖培養的方法是將步驟(1)培育的無菌苗從子葉基部剪斷，帶子葉轉接于增殖培養基I或II中，以步驟(1)所述條件進行晝夜光照周期培養，7～10d后誘導形成叢生芽，形成的叢生芽再分割成帶2～3個芽的芽叢接種于增殖培養基I或II中進行繼代增殖，繼代周期15～20d，在繼代增殖培養中所述2種增殖培養基I或II交替使用；步驟(3)所述試管苗復壯培養的方法是將步驟(2)苗高1～2厘米、帶1～2個芽的小苗接種到壯苗培養基中，以步驟(1)所述條件進行晝夜光照周期培養12～15d后進行誘導生根；步驟(4)所述誘導生根培養的方法是待步驟(3)培養復壯的試管苗長到3～4cm，將其切成單株，接種到第一生根培養基中培養6～9d，再轉接到第二生根培養基中培養8～12d獲得生根植株，培養條件為步驟(1)所述晝夜光照周期培養；步驟(5)所述試管苗移栽的方法是把生根的瓶苗移到遮光度80％～90％遮蔭網塑料大棚溫室條件下適應1d后，逐漸打開瓶苗封口膜降低濕度，2～3d后，用鑷子將苗夾出，用清水洗去基部殘留的培養基，移栽到裝有混合基質育苗盤中，利用間歇噴霧裝置或人工噴水保持相對濕度在80％以上，經馴化煉苗5～6d后，栽入盆栽基質中繼續培養3～4d后，然后轉移到遮光度約50％～60％遮蔭網通風棚內培養8～12d定植于大田；其中所述的混合基質育苗盤的成分以體積比計為細沙∶土∶育苗基質＝4∶1∶1，混合基質育苗盤上面再放置細沙1～2cm；盆栽基質的成分以體積比計為沙壤土∶爐灰∶育苗基質＝5∶1∶1；上述方法各步中采用的培養基及其配方是萌發培養基是指MS+0～0.5mg/L 6-BA+25～35g/L蔗糖+4～6g/L瓊脂，pH值5.7～5.9；增殖培養基I是指MS+0.4～0.6mg/L 6-BA+0.4～0.6mg/L KT+0.2～0.4mg/LIBA+25～35g/L蔗糖+4～6g/L瓊脂，pH值5.7～5.9；增殖培養基II是指MS+0.4～0.6mg/L ZT+0.2～0.4mg/L IAA+25～35g/L蔗糖+4～6g/L瓊脂，pH值5.7～5.9；壯苗培養基是指MS+0～0.1mg/L KT+0～0.05mg/LNAA+25～35g/L蔗糖+4～6g/L瓊脂，pH值5.7～5.9；第一生根培養基是指1/2MS+2.0～4.0mg/L IBA+0.005～0.02mg/L NAA+0.05～0.2mg/L KT+15～25g/L蔗糖+6～8g/L瓊脂，pH值5.2～5.5；第二生根培養基是指1/2MS+15～25g/L蔗糖+6～8g/L瓊脂，pH值5.2～5.5；其中1/2MS是指培養基的組分中MS大量元素減半及其余為MS全量元素，其具體組分為KNO3950mg·L-1，NH4NO3825mg·L-1，MgSO4·7H2O 185mg·L-1，KH2PO485mg·L-1，CaCl2·2H2O 220mg·L-1，MnSO4·4H2O 22.3mg·L-1，ZnSO4·7H2O 8.6mg·L-1，H3BO36.2mg·L-1，KI 0.83mg·L-1，NaMoO4·2H2O 0.25mg·L-1，CuSO4·5H2O 0.025mg·L-1，CoCl2·6H2O 0.025mg·L-1，Na2-EDTA 37.3mg·L-1，FeSO4·7H2O 27.8mg·L-1，鹽酸硫胺素0.1mg·L-1，鹽酸比哆醇0.5mg·L-1，煙酸0.5mg·L-1，肌醇100mg·L-1，甘氨酸2.0mg·L-1。
2、 如權利要求1所述鄧恩桉組培快繁的生根方法，其特征在于，所述無菌苗培育、 芽的繼代增殖、試管苗復壯、誘導生根各階段晝夜光照周期培養條件為光照強度 40,1'm—V1,光照時間14h'd"，晝溫度25。C，夜溫度18°C。
3、 如權利要求1所述鄧恩桉組培快繁的生根方法，其特征在于，所述無菌苗的獲得、 芽的繼代增殖、試管苗復壯各階段培養基中，瓊脂5g/L，蔗糖30g/L, pH值5.8。
4、 如權利要求1所述鄧恩桉組培快繁的生根方法，其特征在于，步驟(4)中所述的 第一生根培養基組成為1/2MS+3.0 mg/L IBA+0.01 mg/L NAA+0.1 mg/L KT+20g/L蔗糖 十7g/L瓊脂，pH值5.4。
5、 如權利要求1所述鄧恩桉組培快繁的生根方法，其特征在于，步驟(4)中所述的 單株接種到第一生根培養基中培養7d，再轉接到第二生根培養基中培養。
全文摘要
本發明公開了一種鄧恩桉組培快繁的生根方法，包括(1)無菌苗培育，(2)芽的繼代增殖，(3)試管苗復壯，(4)誘導生根，(5)試管苗移栽等步驟；本發明通過無菌苗的增殖培養和壯苗培養后接種于第一生根培養基和第二生根培養基誘導出完整的植株，解決了鄧恩桉組培苗繁殖系數低尤其是難于生根的問題；利用本發明的技術方法可在短時間內提供大量種苗，以代替昂貴的進口種子，滿足大規模工廠化育苗和市場的大量需求。
文檔編號A01H4/00GK101331853SQ20081013877
公開日2008年12月31日 申請日期2008年8月5日 優先權日2008年8月5日
發明者劉翠蘭, 陽 夏, 李雙云, 燕麗萍, 王太明 申請人:山東省林業科學研究院