專利名稱：一種高灌藍莓工廠化組培快繁的工藝的制作方法
技術領域：
本發明屬于生物工程技術領域，涉及植物組織培養技術，具體涉及一種高灌藍莓 工廠化組培快繁的工藝流程。
背景技術：
高灌藍莓(Blueberry)，學名越橘，系多年生灌木，原產北美。一般無法形成種子， 大多采用扦插、壓條等繁殖方法，但高灌藍莓對溫度、土壤、氣候等要求比較嚴格，多數品種 不易繁殖，扦插養護更不容易，而且高灌藍莓種質資源退化較為嚴重，扦插繁殖的質量很不 理想。組織培養繁殖植物的技術是一種特殊的營養繁殖方式，現在一般稱為快速繁殖技術 或微繁殖技術。它是在無菌條件下，利用植物體的一部分，包括細菌、組織和器官，在人工控 制的營養和環境條件下繁殖植物的方法。該技術比較成熟，設備比較簡單，技術要求不十分 高，而經濟效益可觀，越來越受到人們的重視。因此，采用工廠化生產方式繁育高灌藍莓品 種既能防止品種退化，保證種苗質量，又能提供大量優質廉價的種苗。現有技術一般不針對 藍莓的品種統一用單一培養基，導致出苗誘導率不高；而且誘導時間較長，生根難度大，成 活率低，不能適應更加快速的市場需求。
發明內容
本發明的目的是提供一種能降低污染率，提高生根成活率且誘導率更高的高灌藍 莓組織培養快速繁殖方法。為解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案。高灌藍莓組織培養快速繁殖方法，包括如下步驟(1)、外植體材料處理即選用外植體材料進行處理，在殺死率和污染率最低的平 衡點制備出符合要求的外植體；(2)、誘導即將步驟Sl中所述的外植體接種到培養基上，在誘導條件下誘導出 芽；所述培養基為瓊脂綜合培養基的改良；(3)繼代培養即將步驟S2中所得叢生芽新梢在繼代培養基中增殖培養；進一步的，步驟Sl采用當年生剪去葉片的嫩莖，自來水沖洗干凈，放入加入活性 炭的0. 氯化汞消毒液中8-30分鐘，在無菌工作臺上用無菌水沖洗3-5遍，切下解刨芽接 種。優選的技術方案中，所述步驟Sl外植體材料處理包括清洗、消毒、和裁剪；所述清 洗將用于制作外植體的外植體材料洗凈；所述消毒對洗凈的外植體材料作消毒處理；所述 剪裁將消毒后的外植體材料裁成合適大小的外植體。步驟(2)中所述培養基的配方為瓊脂綜合培養基+玉米素0. 8--1. 3mg/L+萘乙酸 0. 2—1. 6mg/L,將外植體接種在誘導培養基上，1周后開始萌發，40-52天后芽長成4 5cm 左右的新梢，側芽同時也萌發出5 10個叢生芽。步驟(3)中所述培養基配方為瓊脂綜合培養基+玉米素1.0mg/L+吲哚丁酸0. 2-0. 6mg/L將叢生芽切割2cm左右莖段新梢，轉入繼代培養基上增值培養，后可分化出 30 50個叢生芽，一般54-62天繼代培養一次，增值率在30 50倍。所述外植體材料為高灌藍莓當年生去葉嫩莖。所述清洗包括無菌水清洗和含洗潔精的水浸洗。所述消毒包括酒精消毒和加入活性炭的氯化汞消毒液消毒。采用本發明技術方案的高灌藍莓組織培養快速繁殖方法，與現有技術對比的有益 效果在于使用的消毒液對越桔莖段滅菌時，以25min為宜，污染率與殺死率降到最低，成活 率最高可達75%。初代培養50d左右，部分莖段可直接誘導產生萌生芽，在附加玉米素1. Omg/L 和萘乙酸1.0mg/L的改良瓊脂綜合培養基中，誘導時間更短，不定芽的萌芽率最高，達到 86. 67% ；越桔在改良生根培養基中，生根率達80 %以上，其成活率可達95 %由于外植體材料處理包括清洗、消毒和裁剪，能夠獲得更加優質的外植體，為組織 培養快速繁殖方法鑒定良好的基礎。由于優選藍莓去葉嫩莖作為外植體材料，為組織培養快速繁殖提供良好的的材料 保證。由于清洗包括自來水沖洗和含洗潔精的水浸洗，可以使得清洗更加徹底。由于消毒包括酒精消毒和加入活性炭的消毒液消毒，消毒更加徹底。由于將外植體材料去掉葉之后切成0. 5 lcmXO. 85 1cm大小的嫩莖作為外植 體，誘導培養更加方便，且效果更好。
具體實施例方式下面結合具體實例對本發明的實施做進一步的說明實施例1 1、外植體材料處理包括對外植體材料進行清洗、消毒和裁剪等處理，以制備出合 乎要求的外植體。具體為采用當年生剪去葉片的嫩莖，自來水沖洗干凈，在無菌工作臺上用無菌水 沖洗3-5遍，用自來水中沖洗20 30min，再用加洗潔精的水浸洗20 30min。清洗干凈 之后在超凈工作臺上進行消毒處理，放入加入活性炭的0. 氯化汞消毒液中10分鐘，消 毒完成之后放入無菌瓶中備用。2、誘導出芽將外植體接種在配方為瓊脂綜合培養基+玉米素0. 8mg/L+萘乙酸 0. 2mg/L的培養基中，將外植體接種在誘導培養基上，1周后開始萌發，40天后芽長成4 5cm左右的新梢，側芽同時也萌發出5 10個叢生芽3、生根培養將叢生芽切割2cm左右莖段新梢，轉入繼代培養基上增值培養，所述 培養基配方為瓊脂綜合培養基+玉米素1. Omg/L+吲哚丁酸0. 2mg/L后可分化出30 50 個叢生芽，54天左右繼代培養一次，增值率在30 50倍。實施例2:1、外植體材料處理包括對外植體材料進行清洗、消毒和裁剪等處理，以制備出合乎要求的外植體。
具體為采用當年生剪去葉片的嫩莖，自來水沖洗干凈，在無菌工作臺上用無菌水 沖洗3-5遍，用自來水中沖洗20 30min，再用加洗潔精的水浸洗20 30min。清洗干凈 之后在超凈工作臺上進行消毒處理，放入加入活性炭的0. 氯化汞消毒液中20分鐘，消 毒完成之后放入無菌瓶中備用。2、誘導出芽將外植體接種在配方為瓊脂綜合培養基+玉米素1.0mg/L+萘乙酸 1. Omg/L的培養基中，將外植體接種在誘導培養基上，1周后開始萌發，45天后芽長成4 5cm左右的新梢，側芽同時也萌發出5 10個叢生芽3、生根培養將叢生芽切割2cm左右莖段新梢，轉入繼代培養基上增值培養，所述 培養基配方為瓊脂綜合培養基+玉米素1. Omg/L+吲哚丁酸0. 4mg/L后可分化出30 50 個叢生芽，58天繼代培養一次，增值率在30 50倍。實施例3 1、外植體材料處理包括對外植體材料進行清洗、消毒和裁剪等處理，以制備出合 乎要求的外植體。具體為采用當年生剪去葉片的嫩莖，自來水沖洗干凈，在無菌工作臺上用無菌水 沖洗3-5遍，用自來水中沖洗20 30min，再用加洗潔精的水浸洗20 30min。清洗干凈 之后在超凈工作臺上進行消毒處理，放入加入活性炭的0. 氯化汞消毒液中30分鐘，消 毒完成之后放入無菌瓶中備用。2、誘導出芽將外植體接種在配方為瓊脂綜合培養基+玉米素1. 3mg/L+萘乙酸 1. 6mg/L的培養基中，將外植體接種在誘導培養基上，1周后開始萌發，52天后芽長成4 5cm左右的新梢，側芽同時也萌發出5 10個叢生芽3、生根培養將叢生芽切割2cm左右莖段新梢，轉入繼代培養基上增值培養，所述 培養基配方為瓊脂綜合培養基+玉米素1. Omg/L+吲哚丁酸0. 6mg/L后可分化出30 50 個叢生芽，62天繼代培養一次，增值率在30 50倍。
權利要求
一種高灌藍莓工廠化組培快繁的工藝，包括如下步驟(1)、外植體材料處理即選用外植體材料進行處理，在殺死率和污染率最低的平衡點制備出符合要求的外植體；(2)、誘導即將步驟S1中所述的外植體接種到培養基上，在誘導條件下誘導出芽；所述培養基為瓊脂綜合培養基的改良；(3)繼代培養即將步驟S2中所得叢生芽新梢在繼代培養基中增殖培養。
2.如權利要求1所述的一種高灌藍莓工廠化組培快繁的工藝，其特征在于步驟(1)所 述材料用0. 氯化汞和含活性炭消毒液處理。
3.如權利要求1所述的一種高灌藍莓工廠化組培快繁的工藝，其特征在于步驟(1)所 述材料處理時間為8-—30分鐘。
4.如權利要求1所述的一種高灌藍莓工廠化組培快繁的工藝，其特征在于步驟(2)所 用培養基為瓊脂綜合培養基+玉米素0. 8-1. 3mg/L+萘乙酸0. 2-1. 6mg/L。
5.如權利要求1所述的一種高灌藍莓工廠化組培快繁的工藝，其特征在于步驟(2)培 養40-52天再切割新梢。
6.如權利要求1所述的一種高灌藍莓工廠化組培快繁的工藝，其特征在于步驟(3)所 用培養基為瓊脂綜合培養基+玉米素1. 0mg/L+吲哚丁酸0. 2-0. 6mg/L。
7.如權利要求1所述的一種高灌藍莓工廠化組培快繁的工藝，其特征在于步驟(3)培 養54—62天后生根培養。
全文摘要
本發明提供一種高灌藍莓工廠化組培快繁的工藝，包括如下步驟(1)外植體材料處理即選用外植體材料進行處理，在殺死率和污染率最低的平衡點制備出符合要求的外植體；(2)誘導即將步驟S1中所述的外植體接種到培養基上，在誘導條件下誘導出芽；所述培養基為瓊脂綜合培養基的改良；(3)繼代培養即將步驟S2中所得叢生芽新梢在繼代培養基中增殖培養。
文檔編號A01H4/00GK101836584SQ20091002073
公開日2010年9月22日 申請日期2009年4月21日 優先權日2009年4月21日
發明者不公告發明人 申請人:山東高端藍莓生物技術股份有限公司