專利名稱：：一種利用茶枯溶液進行蚯蚓采集的方法
技術領域：
：本發明涉及一種蚯蚓釆集的方法，具體來說涉及一種利用茶枯溶液進行野外蚯蚓采集的方法。技術背景-蚯蟲引是陸地生態系統中最為重要的大型土壤動物，對土壤有機質的轉化和土壤結構的建立有著十分積極的影響。同時，蚯蚓對土壤環境的反應極為敏感，其群落分布、種類組成及密度多寡可作為一個地區土壤條件狀況的重要指示。因此蚯蚓的群落調查在土壤生態系統效應評估中得到了廣泛應用。然而，蚯蚓的野外采樣方法尚并沒有建立起統一、完善的標準，而各種采樣方法也都存在著一定的缺點。目前，蚯蚓采樣所釆用的方法有物理方法如手挖法(hand—sorting)、電擊法、化學驅趕方法如福爾馬林(formaldehyde)法、芥末(mustardpowder)法、異硫氰酸丙烯酯(allylisothiocyanate)法及各種家用清潔劑驅趕法等。手挖法是對內棲類(endogeic)蚯蚓有效的采樣方法，但手挖法耗時、勞動強度大，在有著巖石、多根等地難以操作；對土壤造成嚴重破壞，在土壤可持續利用地區不能廣泛應用；手挖法對容易逃到土壤深層的大型深棲類(anecic)蚯蚓也難以采樣。電擊法可以減少對土壤的破壞，但操作費時，采樣效率容易受到土壤類型、含水量等外界因素制約。化學驅趕是目前應用最為廣泛蚯蚓采樣方法。將化學溶液潑灑土樣，使蚯蚓逃逸出地表進行收集。此法對洞穴為垂直方向的深棲類蚯蚓采樣效率高，但對洞穴為水平方向的內棲類蚯蚓采樣效率不是很理想。福爾馬林是蚯蚓采樣最常用的化學劑，采樣效率高且方法容易標準化，但近年來的研究表明福爾馬林對土壤生物、地表植有著持久的毒害，因此不應該在生態農場、保護區、或有可能滲入到地下水的土壤區使用。對利用芥末進行蚯蚓采樣的研究應用也很多，曾有著替代福爾馬林法的建議，但芥末法采樣效率不夠穩定，且商業上的芥末組分和配比并不清楚，因此也難以標準化。近年來，利用異硫氰酸丙烯酯(AITC)進行蚯蚓采樣有一些報道，異硫氰酸丙烯酯是很多十字花科植物中可提取的芥子油苷，有刺激的芥子氣味，微溶于水，見光易分解，在土壤中半衰期為80—120h，其采樣效率和福爾馬林法采樣效率相近，但異硫氰酸丙烯酯即使保存在避光的丙酮(acetone)溶液中,也會快速從溶液界面蒸發，其準確劑量難以確定。
發明內容本發明的目的是提供了一種無殘留污染、對環境友好、采樣效果好、采樣效率穩定的蚯3蚓采集方法，即利用茶枯溶液進行蚯蚓采集的方法。茶枯是將油茶(Ca附e〃/"o/e^ra)油茶籽榨油后剩余的茶枯粉(或茶籽餅)。茶枯粉中含有茶皂素(TeaSaponin)、粗纖維、茶多酚、氨基酸、蛋白質、礦物質等，其中茶皂素是一種五環三萜皂苷類化合物，具有一定的抗病菌、殺蟲作用。本發明人根據茶枯粉具有一定的抗菌、殺蟲作用，通過實驗對茶枯溶液濃度進行選擇，選取到了一定濃度的茶枯溶液，發現該濃度的茶枯溶液能刺激驅趕土壤中的蚯蚓爬出地面，從而實現了本發明。本發明通過以下技術方案予以實現的本發明所述的利用茶枯溶液進行蚯蚓采集的方法，包括以下步驟.-(a):茶枯溶液的制備將茶枯粉按照質量比l:3加入到水中，加熱回流0.5-2h，然后過濾，得到茶枯過濾液，將此茶枯過濾液按照質量比1:5-9加入到水中，配制成茶枯溶液；(b):將茶枯溶液噴灑于土壤樣方上，每0.25平方米均勻噴灑5-9升茶枯溶液，收集爬出的蚯頓；本發明優選將茶枯粉按質量比1:3加入到水中，加熱回流lh，然后過濾，得到茶枯過濾液，將此茶枯過濾液按照質量比l:8加入到水中，配制成茶枯溶液，將茶枯溶液均勻噴灑于土壤樣方上，每0.25平方米噴灑5升茶枯溶液。本發明中將茶枯溶液噴灑于樣方上，以不溢出樣方為準，具體是指等噴灑的茶枯溶液滲進土里后繼續噴灑，使樣方中的茶枯溶液不要溢出樣方外，邊噴灑茶枯溶液邊收集爬出的蚯頓，一般等待蚯蚓爬出并同時進行采集的時間為1個小時左右，時間從開始噴灑茶枯溶液的時候開始計算。本發明所述的利用茶枯溶液進行蚯蚓采集的方法，由于釆用了合適濃度的茶枯溶液噴灑于樣方上，刺激驅趕蚯蟲引爬出地面，只需采集爬出的蚯蚓即可，不但采樣效果好，此方法在廣東省昆蟲研究所所內草叢中，其驅趕采樣效率為90%以上，其在鶴山人工林區的樣地里面，本方法的驅趕采樣效率為79.5%，而0.4%福爾馬林在此林區的驅趕采樣效率為73.9%，而且由于的茶枯溶液容易降解，無殘留污染、對環境友好，對土壤生物、地表植物沒有持久的毒害，因此是一種非常安全、環保的蚯蚓采集方法，本方法克服了現有采樣方法的一些缺點，如福爾馬林采樣法的毒性和長期殘留等問題。因此本發明特別適于生態農場、保護區、或有可能滲入到地下水的土壤區的蚯蚓采集。具體實施例方式下面結合實施例對本發明做進一步的描述實施例1:2007年5月份，在廣東省昆蟲研究所所內草叢內進行選樣，選用茶枯粉按照質量比1:3的比例加入到水中，加熱回流lh，然后過濾，得到茶枯過濾液。按照質量比l:8的比例將茶枯過濾液加入到水中稀釋，配制成茶枯溶液，將此茶枯溶液不斷噴灑于選好的土壤樣方上。共選3個樣地，各有6個小樣方，共有18個1/4nf的樣方，各樣地采集面積1.5nf。每個1/4m'的樣方噴灑茶枯溶液5000ml，噴灑過程中有蚯蚓爬出，收集爬出的蚯蚓，直到沒有蚯蚓爬出，等待蚯蚓爬出時間約1個小時，1小時后，對樣方進行手挖，統計未驅趕出蚯蚓數量，計算茶枯溶液的驅趕、采集效率，其結果如表1所示。表l茶枯溶液對蚯蚓的驅趕、采集效率<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>實施例2:2007年5月份，在廣東省昆蟲研究所所內草叢內進行選樣，選用茶枯粉按照質量比l:3的比例加入到水中，加熱回流0.5h,然后過濾，得到茶枯過濾液。將茶枯過濾液按照質量比1:5的比例加入到水中稀釋，配制成茶枯溶液，將此茶枯溶液不斷噴灑于選好的土壤樣方上。共選3個樣地，各有6個小樣方，有18個1/4nf的樣方，各樣地采集面積1.5m2。每個1/4m2的樣方噴灑稀釋茶枯溶液7000ml，噴灑過程中有蚯蚓爬出，收集爬出的蚯蚓，直到沒有蚯蚓爬出，等待蚯蚓爬出時間約l個小時，l小時后，對樣方進行手挖，統計未驅趕出蚯蚓數量，計算茶枯溶液的驅趕、采集效率，其結果如表2所示。表2茶枯溶液對蚯蚓的驅趕、采集效率<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>實施例3:2007年5月份，在廣東省昆蟲研究所所內草叢內進行選樣，選用茶枯粉按照質量比L-3的比例加入到水中，加熱回流2h，然后過濾，得到茶枯過濾液。將茶枯過濾液按照質量比1:9的比例加入到水中稀釋，配制成茶枯溶液，將茶枯溶液不斷噴灑于選好的土壤樣方上。共選3個樣地，各有6個小樣方，有18個1/41112的樣方，各樣地采集面積1.5m2。每個1/4nf的樣方噴灑稀釋茶枯溶液9000ml，噴灑過程中有蚯蚓爬出，收集爬出的蚯蚓，直到沒有蚯蚓爬出，等待蚯KI爬出時間約I個小時，l小時后，對樣方進行手挖，統計未驅趕出蚯蚓數量，計算茶枯溶液的驅趕、采集效率，其結果如表3所示。表3茶枯溶液對蚯蚓的驅趕、采集效率樣地采集面積(m"采集時間茶枯溶液驅趕、采集的蚯蚓數量(條)茶枯溶液未采集出、手挖數量(條)總數量(條)采集效率(％)樣地l1.52007.5.152091522493.30樣地21.52007.5.162311324494.67樣地31.52007.5.17128713594.81實施例4:2007年5月份，在廣東省昆蟲研究所所內草叢內進行選樣，選用茶枯粉按照質量比l:3的比例加入到水中，加熱回流0.5h，然后過濾，得到茶枯過濾液。將茶枯過濾液按照質量比1:9的比例加入到水中稀釋，配制成茶枯溶液，將茶枯溶液不斷噴灑于選好的土壤樣方上。共選3個樣地，各有6個小樣方，有18個1/4rtf的樣方，各樣地采集面積1.5nf。每個1/4nf的樣方噴灑稀釋茶枯溶液6000ml，噴灑過程中有蚯蚓爬出，收集爬出的蚯蚓，直到沒有蚯蚓爬出，等待蚯蚓爬出時間約l個小時，l小時后，對樣方進行手挖，統計未驅趕出蚯蚓數量，計算茶枯溶液的驅趕、采集效率，其采集效率達到90%以上。實施例5:2007年5月份，在廣東省昆蟲研究所所內草叢內進行選樣，選用茶枯粉按照質量比l-3的比例加入到水中，加熱回流1.5h，然后過濾，得到茶枯過濾液。將茶枯過濾液按照質量比1:5的比例加入到水中稀釋，配制成茶枯溶液，將茶枯溶液不斷噴灑于選好的土壤樣方上。共選3個樣地，各有6個小樣方，有18個1/4m'的樣方，各樣地采集面積1.5m2。每個1/4m2的樣方約需要噴灑稀釋茶枯溶液5500ml，噴灑過程中有蚯蚓爬出，收集爬出的蚯蚓，直到沒有蚯蚓爬出，等待蚯蚓爬出時間約1個小時，1小時后，對樣方進行手挖，統計未驅趕出蚯蚓數量，計算茶枯溶液的驅趕、采集效率，其采集效率達到90%以上。實施例6:2007年5月份，在廣東省昆蟲研究所所內草叢內進行選樣，選用茶枯粉按照質量比l:3的比例加入到水中，加熱回流2h，然后過濾，得到茶枯過濾液。將茶枯過濾液按照質量比l:5的比例加入到水中稀釋，配制成茶枯溶液，將茶枯溶液不斷噴灑于選好的土壤樣方上。共選3個樣地，各有6個小樣方，有18個1/4012的樣方，各樣地采集面積1.5m2。每個1/4nf的樣方約需要噴灑稀釋茶枯溶液9000ml，噴灑過程中有蚯蚓爬出，收集爬出的蚯頓，直到沒有蚯蚓爬出，等待蚯蚓爬出時間約1個小時，1小時后，對樣方進行手挖，統計未驅趕出蚯蟲弓l數量，計算茶枯溶液的驅趕、采集效率，其采集效率達到90%以上。本發明人通過實驗發現，回流時間小于0.5小時或回流后的茶枯過濾液加水稀釋比例大于l:9，將這樣條件下制備的茶枯溶液噴灑于樣方上，其采集效率顯著降低，許多蚯蚓不能被驅趕出地表，而回流時間大于2h，其采集效率并沒有提升，從節約資源和采集效率的角度考慮的話0.5-2h是最佳的，而回流后的茶枯過濾液加水稀釋比例小于1:5的話，茶枯溶液過濃使得采集效率比較低，并且過濃的茶枯溶液噴灑樣方上的話，造成資源的浪費。實施例7:在廣東鶴山丘陵綜合試驗站林區內，本實施例中的茶枯溶液同實施例1的茶枯溶液，將此茶枯溶液不斷噴灑于各林區選好的樣方上。每個樣方為1/4m2，4個樣方為一重復，每林區設置三重復，合計釆集面積3m2,每個1/4r^的樣方噴灑5000ml茶枯溶液，共對鶴山中荷木林、馬占相思林、馬尾松林和桉樹林分別進行了蚯蚓采集試驗。其實驗結果如表4所示。表4茶枯溶液對丘陵山林蚯蚓的采集效率<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>權利要求1.一種利用茶枯溶液進行蚯蚓采集的方法，其特征在于包括以下步驟(a)茶枯溶液的制備將茶枯粉按照質量比1∶3加入到水中，加熱回流0.5-2h，然后過濾，得到茶枯過濾液，將此茶枯過濾液按照質量比1∶5-9加入到水中，配制成茶枯溶液；(b)將茶枯溶液噴灑于土壤樣方上，每0.25平方米均勻噴灑5-9升茶枯溶液，收集爬出的蚯蚓。2.根據權利要求1所述的利用茶枯溶液進行蚯蚓采集的方法，其特征在于在所述的茶枯溶液的制備中，加熱回流時間為lh，將此茶枯過濾液按照質量比l:8加入到水中，配制成茶枯溶液，每0.25平方米均勻噴灑茶枯溶液的量為5升。全文摘要本發明公開了一種利用茶枯溶液進行蚯蚓采集的方法，旨在提供一種無殘留污染、對環境友好、采樣效果好、采樣效率穩定的蚯蚓采集方法。本方法包括以下步驟(a)茶枯溶液的制備將茶枯粉按照質量比1∶3加入到水中，用沸水熬煮0.5-2h，然后過濾，得到茶枯過濾液，將此熬煮好的茶枯過濾液按照質量比1∶5-9加入到水中，配制成茶枯溶液；(b)將茶枯溶液噴灑于土壤樣方上，每0.25平方米均勻噴灑5-9升茶枯溶液，收集爬出的蚯蚓。本發明特別適于生態農場、保護區、或有可能滲入到地下水的土壤區的蚯蚓采集。文檔編號A01M5/00GK101595863SQ20091004074公開日2009年12月9日申請日期2009年7月1日優先權日2009年7月1日發明者廖崇惠,張衛信,李建雄,龔鵬博申請人:廣東省昆蟲研究所