專利名稱：花葉蒲葦的組織培養方法
技術領域：
本發明涉及一種植物的組織培養方法，尤其是涉及花葉蒲葦的組織培養方法。
背景技術：
花葉蒲葦為禾本科蒲葦屬植物，分布廣泛，是常綠多年生草本植物，株高 80-100cm，葉有白色條紋，花序圓錐形羽毛狀，呈銀白色，是國外著名的觀賞草，多用于園林 綠化或岸邊。花葉蒲葦的葉、花穗美麗，庭院栽培壯觀而雅致，植于岸邊，入秋可賞其銀白色 羽狀穗的圓錐花序，也可用作干花或花境觀賞草專類園內使用，具有優良的生態適應性和 觀賞價值。但是作為國外引進的新品種，花葉蒲葦引種數量較少，種苗供應受到一定的限 制。
發明內容
本發明的目的就是為了克服上述現有技術存在的缺陷而提供一種可提高繁殖速 度和苗的整齊度，并提高性狀穩定性的花葉蒲葦的組織培養方法。本發明的目的可以通過以下技術方案來實現
花葉蒲葦的組織培養方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得春季取萌發的幼嫩的芽，去除外面包裹的葉片后，用自來水沖洗l_3h后于超凈工 作臺上，依次利用質量濃度為70-75%的乙醇浸泡10-50s，體積濃度為0. 5_2%。的汞浸泡 10-30min，再用無菌水沖洗4_6次，利用無菌濾紙吸干表面的水分后，再切成0. 5-2cm長的 帶腋芽的節段，節段接種于腋芽誘導培養基上；(2)芽的分化和增殖節段接種于腋芽誘導培養基上1-3周后，腋芽部位開始膨大，出現綠色突起，3-5 周后可見芽分生組織，再培養1-2個月，小的不定芽可以長到3-4cm，將不定芽切下轉入不 定芽增殖培養基中進行增殖培養，不定芽基部的愈傷組織較多，但不影響增殖，不定芽生長 迅速且無玻璃化等不良現象，在培養基中生長發育良好；(3)不定芽壯苗培養在不定芽增殖培養基上，誘導出的叢生芽中每叢有2-3株能夠伸長，其余的處于 矮化狀態，將叢生芽分成小叢后，轉至壯苗培養基上生長，不定芽迅速伸長，15-30天后可以 長到3-4cm ；(4)生根培養取3_4cm的不定芽小植株，轉接入生根培養基中誘導生根，5-15天后幼苗基部分 化出白色的根原基，25-40天后可以長至4-6cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為90-100% ；(5)煉苗與移栽生根培養15-30天，根系長至0. 5-lcm時，選擇根系發達、生長健壯的無菌苗，于室 內開瓶煉苗2-4天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室內的苗床中馴化20-40天，即可移栽室外，給予肥水管理，最終的移栽成活率為90-100%。所述的腋芽誘導培養基包括MS+6-BA1. 0-5. 0mg/L+NAA0. 1-0. 5mg/L。所述的腋芽誘導培養基優選MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。所述的不定芽增殖培養基包括MS+6-BA0. 5-4. 0mg/L+NAA0. 1-0. 2mg/L。所述的不定芽增殖培養基優選MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。所述的壯苗培養基包括MS+6-BA0. 2-1. 0mg/L+NAA0. 1-0. 2mg/L。
所述的壯苗培養基優選 MS+6-BA0. 2mg/L+NAA0. lmg/L。所述的生根培養基包括MS+NAA0. 05-0. 2mg/L。所述的生根培養基優選MS+NAA0. lmg/L。所述的培養基還包括蔗糖20_40g/L、瓊脂粉4_8g/L，培養基pH5. 5-6. 0，培養溫度 24-26°C，光照 1500-25001x。與現有技術相比，本發明通過組培技術，極大提高了花葉蒲葦的繁殖速度和苗的 整齊度，并提高了其性狀的穩定性，可實現育苗的工廠化大批量生產。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發明進行詳細說明。實施例1(1)無菌材料的獲得春季取萌發的幼嫩的芽，去除外面包裹的葉片后，用自來水沖洗Ih后于超凈工作 臺上，依次利用質量濃度為70%的乙醇浸泡10s，體積濃度為0. 5%。的汞浸泡lOmin，再用無 菌水沖洗4次，利用無菌濾紙吸干表面的水分后，再切成0. 5cm長的帶腋芽的節段，節段接 種于包括MS+6-BA1. Omg/L+NAAO. lmg/L的腋芽誘導培養基上；(2)芽的分化和增殖節段接種于腋芽誘導培養基上1周后，腋芽部位開始膨大，出現綠色突起，3周 后可見芽分生組織，再培養1個月，小的不定芽可以長到3cm，將不定芽切下轉入包括 MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L的不定芽增殖培養基中進行增殖培養，不定芽基部的愈傷組 織較多，但不影響增殖，不定芽生長迅速且無玻璃化等不良現象，在培養基中生長發育良 好；(3)不定芽壯苗培養在不定芽增殖培養基上，誘導出的叢生芽中每叢有2株能夠伸長，其余的處于矮 化狀態，將叢生芽分成小叢后，轉至包括MS+6-BA0. 2mg/L+NAA0. lmg/L的壯苗培養基上生 長，不定芽迅速伸長，15天后可以長到3cm ；(4)生根培養取3cm的不定芽小植株，轉接入包括MS+NAAO. 05mg/L的生根培養基中誘導生根， 5天后幼苗基部分化出白色的根原基，25天后可以長至4cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為 90% ；(5)煉苗與移栽生根培養15天，根系長至0. 5cm時，選擇根系發達、生長健壯的無菌苗，于室內開 瓶煉苗2天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室內的苗床中馴化20天，即可移栽室
5外，給予肥水管理，最終的移栽成活率為90%。上述各種情況的培養基還包括蔗糖20g/L、瓊脂粉4g/L，pH= 5. 5，培養溫度24°C， 光照 15001x。實施例2(1)無菌材料的獲得春季取萌發的幼嫩的芽，去除外面包裹的葉片后，用自來水沖洗2h后于超凈工作 臺上，依次利用質量濃度為75%的乙醇浸泡30s，體積濃度為1%。的汞浸泡15min，再用無菌 水沖洗5次，利用無菌濾紙吸干表面的水分后，再切成Icm長的帶腋芽的節段，節段接種于 包括MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的腋芽誘導培養基上；(2)芽的分化和增殖節段接種于腋芽誘導培養基上2周后，腋芽部位開始膨大，出現綠色突起，4周 后可見芽分生組織，再培養1個月，小的不定芽可以長到4cm，將不定芽切下轉入包括 MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的不定芽增殖培養基中進行增殖培養，不定芽基部的愈傷組 織較多，但不影響增殖，不定芽生長迅速且無玻璃化等不良現象，在培養基中生長發育良 好；(3)不定芽壯苗培養在不定芽增殖培養基上，誘導出的叢生芽中每叢有3株能夠伸長，其余的處于矮 化狀態，將叢生芽分成小叢后，轉至包括MS+6-BA0. 2mg/L+NAA0. lmg/L的壯苗培養基上生 長，不定芽迅速伸長，20天后可以長到4cm ；(4)生根培養取4cm的不定芽小植株，轉接入包括MS+NAAO. lmg/L的生根培養基中誘導生根，10 天后幼苗基部分化出白色的根原基，30天后可以長至6cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為 100% ；(5)煉苗與移栽生根培養20天，根系長至Icm時，選擇根系發達、生長健壯的無菌苗，于室內開瓶 煉苗3天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室內的苗床中馴化30天，即可移栽室外， 給予肥水管理，最終的移栽成活率為100%。上述各種情況的培養基還包括蔗糖30g/L、瓊脂粉6g/L，pH = 5. 8，培養溫度25°C， 光照 20001x。實施例3(1)無菌材料的獲得春季取萌發的幼嫩的芽，去除外面包裹的葉片后，用自來水沖洗3h后于超凈工作 臺上，依次利用質量濃度為75%的乙醇浸泡50s，體積濃度為2%。的汞浸泡30min，再用無菌 水沖洗6次，利用無菌濾紙吸干表面的水分后，再切成2cm長的帶腋芽的節段，節段接種于 包括MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L的腋芽誘導培養基上；(2)芽的分化和增殖節段接種于腋芽誘導培養基上3周后，腋芽部位開始膨大，出現綠色突起，5周 后可見芽分生組織，再培養2個月，小的不定芽可以長到4cm，將不定芽切下轉入包括 MS+6-BA4. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的不定芽增殖培養基中進行增殖培養，不定芽基部的愈傷組織較多，但不影響增殖，不定芽生長迅速且無玻璃化等不良現象，在培養基中生長發育良 好；(3)不定芽壯苗培養在不定芽增殖培養基上，誘導出的叢生芽中每叢有3株能夠伸長，其余的處于矮 化狀態，將叢生芽分成小叢后，轉至包括MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的壯苗培養基上生 長，不定芽迅速伸長，30天后可以長到3. 5cm ；(4)生根培養取3. 5cm的不定芽小植株，轉接入包括MS+NAAO. 2mg/L 的生根培養基中誘導生根， 15天后幼苗基部分化出白色的根原基，40天后可以長至5cm，根系粗壯，須根眾多，生根率 為 92% ；(5)煉苗與移栽生根培養30天，根系長至0. 8cm時，選擇根系發達、生長健壯的無菌苗，于室內開 瓶煉苗4天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室內的苗床中馴化40天，即可移栽室 夕卜，給予肥水管理，最終的移栽成活率為96%。上述各種情況的培養基還包括蔗糖40g/L、瓊脂粉8g/L，pH = 6. 0，培養溫度26°C， 光照 25001x。
權利要求
花葉蒲葦的組織培養方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得春季取萌發的幼嫩的芽，去除外面包裹的葉片后，用自來水沖洗1-3h后于超凈工作臺上，依次利用質量濃度為70-75％的乙醇浸泡10-50s，體積濃度為0.5-2‰的汞浸泡10-30min，再用無菌水沖洗4-6次，利用無菌濾紙吸干表面的水分后，再切成0.5-2cm長的帶腋芽的節段，節段接種于腋芽誘導培養基上；(2)芽的分化和增殖節段接種于腋芽誘導培養基上1-3周后，腋芽部位開始膨大，出現綠色突起，3-5周后可見芽分生組織，再培養1-2個月，小的不定芽可以長到3-4cm，將不定芽切下轉入不定芽增殖培養基中進行增殖培養，不定芽基部的愈傷組織較多，但不影響增殖，不定芽生長迅速且無玻璃化等不良現象，在培養基中生長發育良好；(3)不定芽壯苗培養在不定芽增殖培養基上，誘導出的叢生芽中每叢有2-3株能夠伸長，其余的處于矮化狀態，將叢生芽分成小叢后，轉至壯苗培養基上生長，不定芽迅速伸長，15-30天后可以長到3-4cm；(4)生根培養取3-4cm的不定芽小植株，轉接入生根培養基中誘導生根，5-15天后幼苗基部分化出白色的根原基，25-40天后可以長至4-6cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為90-100％；(5)煉苗與移栽生根培養15-30天，根系長至0.5-1cm時，選擇根系發達、生長健壯的無菌苗，于室內開瓶煉苗2-4天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室內的苗床中馴化20-40天，即可移栽室外，給予肥水管理，最終的移栽成活率為90-100％。
2.根據權利要求1所述的花葉蒲葦的組織培養方法，其特征在于，所述的腋芽誘導培 養基包括 MS+6-BA1. 0-5. 0mg/L+NAA0. 1-0. 5mg/L。
3.根據權利要求2所述的花葉蒲葦的組織培養方法，其特征在于，所述的腋芽誘導培 養基優選 MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。
4.根據權利要求1所述的花葉蒲葦的組織培養方法，其特征在于，所述的不定芽增殖 培養基包括 MS+6-BA0. 5-4. 0mg/L+NAA0. 1-0. 2mg/L。
5.根據權利要求4所述的花葉蒲葦的組織培養方法，其特征在于，所述的不定芽增殖 培養基優選 MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。
6.根據權利要求1所述的花葉蒲葦的組織培養方法，其特征在于，所述的壯苗培養基 包括 MS+6-BA0. 2-1. 0mg/L+NAA0. 1-0. 2mg/L。
7.根據權利要求6所述的花葉蒲葦的組織培養方法，其特征在于，所述的壯苗培養基 優選 MS+6-BA0. 2mg/L+NAA0. lmg/L。
8.根據權利要求1所述的花葉蒲葦的組織培養方法，其特征在于，所述的生根培養基 包括 MS+NAA0. 05-0. 2mg/L。
9.根據權利要求8所述的花葉蒲葦的組織培養方法，其特征在于，所述的生根培養基 優選 MS+NAA0. lmg/L。
10.根據權利要求2或4或6或8所述的花葉蒲葦的組織培養方法，其特征在于，所述的培養基還 包括蔗糖20-40g/L、瓊脂粉4-8g/L，培養基pH5. 5-6. O,培養溫度24_26°C，光照 1500-25001x。
全文摘要
本發明涉及花葉蒲葦的組織培養方法，包括無菌材料的獲得，芽的分化和增殖，不定芽壯苗培養，生根培養，煉苗與移栽等步驟。與現有技術相比，本發明大大提高了花葉蒲葦的繁殖速度和苗的整齊度，提高了其性狀的穩定性，可實現育苗的工廠化大批量生產。
文檔編號A01H4/00GK101869053SQ20091004985
公開日2010年10月27日 申請日期2009年4月23日 優先權日2009年4月23日
發明者沈勤, 陳建華, 黃建榮 申請人:上海上房園林植物研究所