專利名稱：以幼花瓣為外植體的君子蘭離體快速繁殖方法
技術領域：
本發明屬于花卉繁殖方法，具體涉及花卉的無性快速繁殖方法。
背景技術：
植物組織培養即植物無菌培養技術，是根據植物細胞的全能性，利用植物體離體的器官(如根、莖、葉、莖尖、花、果實等)、組織(如形成層、表皮、皮層、胚乳等)或細胞(如大孢子、小孢子、體細胞等)以及原生質體，在無菌和適宜的人工培養基及光照、溫度等人工條件下，能誘導出愈傷組織、不定芽、不定根，形成完整的植株或產生具有經濟價值的其它產品的技術。由植物組織培養所產生的再生植株除了極低的變異外基本都能保持親本(外植體來源植株)的優良性狀。植物組織培養技術發明以來已經取得了很大的進展，自上世紀60年代以來植物組織培養已經從實驗室研究階段成為一種大規模成批量的工廠化生產方法。君子蘭，是石蒜科君子蘭屬的多年生草本觀賞植株。原產南非高山，性喜溫涼，于本世紀初經由德國和日本引入我國，并安家落戶。是我國名貴花卉，經濟價值較高。它株型端莊、葉、花、果并美，深受國內外花卉愛好者的青睞。目前，君子蘭的繁殖方式
主要為種子繁殖與分株繁殖，而這兩種方式的繁殖速度都很慢君子蘭一年只開一次花，且種子需要9個月才能成熟；分株繁殖一年最多分出1-3株。由于君子蘭高度雜合，種子
繁殖得到珍品君子蘭的得率很低，即便以珍品君子蘭做父母本得到珍品的幾率仍很低，珍品君子蘭在國內國際市場一直供不應求。利用植物組織培養技術離體快速繁殖君子蘭可以大規模產生株型統一的君子蘭，快速繁殖君子蘭優良稀缺品種，進一步滿足國內國際市場的需求。前人所做的君子蘭組織培養實驗雖然己經初步獲得成功，但分化最好的品種平均
每塊外植體上只能分化出少于2.5株苗，繁殖系數極低。這就限制了君子蘭組織培養技術
在實際生產中的應用。而本發明可使君子蘭在一年以內實現快速繁殖。 一塊外植體可再生
出700株再生植株，非常適合工廠化生產。
發明內容
本發明的目的是為克服君子蘭傳統繁殖方法產生君子蘭個體株型千差萬別、繁殖速度
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慢的缺點；克服前人君子蘭組織培養實驗中再生系數小的缺點。提供一種君子蘭無性快速繁殖方法，使君子蘭在相對短的時間內大量產生基因背景完全相同、株型統一的再生植株。
本發明所采用的技術方案-
1. 外植體接種及愈傷組織誘導將幼花序花苞從子房下端剪開取下，將完整或上端剪
開的花苞放入無菌超凈臺中，用75% (體積/體積)酒精浸泡30-60秒，用0. 1-0. 2% (質量/體積)的升汞溶液浸泡3-10分鐘，無菌水沖洗3-5遍。將花苞從子房最上部切開，然后將花苞上部大部分切掉，剩余中部縱切兩刀，接種在含6-BAO. 2 mg/L 、 2， 4-DO. 1-0. 5mg/L、蔗糖3. 0-3. 5%(質量/體積)的MS培養基上，20°C-30°C每天40W日光燈照射2-4小時。30-50天繼代一次，待長出黃綠色愈傷時便可誘導分化。
2. 不定芽的誘導將黃綠色的愈傷轉接到誘導分化培養基MS+6-BA(0. 5-1.0 mg/L) +2，4-D(0. l-0.2mg/U+3-3. 5%蔗糖，30-50天繼代一次，20°C-30。C每天光照8-10小時。該愈傷分化能力可持續一年以上，從一塊愈傷經反復繼代可分化出700多株再生苗。
3. 根的誘導再生植株轉到1/2MS+NAA(0-2mg/L)+蔗糖2。/。的生根培養基上，20°C-30°C每天光照10-12小時。
4. 再生植株移栽植株生根后即可移栽。腐殖土 滅菌15-60分鐘。移栽前將植株上的瓊脂等雜物沖洗干凈。3-15天澆一次透水便可成活。
本發明的有益效果是以大花君子蘭幼花序(青苞)的花瓣基部為外植體，脫分化率及分化率均可達80%以上。由一塊外植體誘導的愈傷組織經反復繼代可分化出700株叢生芽，叢生芽表型統一。叢生芽生根率可達100%，在適宜環境下移栽成活率達100%。使君子蘭在相對短的時間內大規模繁殖出遺傳背景相同、外觀整齊的植株；所用激素濃度低，再生植株變異低；再生體系非常高效；平均單株再生苗的成本極低，適合優良品種君子蘭的高效快速繁殖，可應用于工廠化生產。
具體實施例方式
下面將結合實施例對本發明作進一步的說明，但是本發明的內容不僅限于以下3個實施例
實施例一
l.外植體接種及愈傷組織誘導所取材幼花序的發育程度為花苞大小已經或接近發育完全但仍為綠色，該發育程度的花苞從子房下端剪開取下，將完整花苞放入無菌超凈臺中，用75% (體積/體積)酒精浸泡30秒，用O. 1% (質量/體積)的升汞溶液浸泡10分鐘， 無菌水沖洗3遍。將花苞從子房最上部切開，然后將花苞上部大部分切掉，剩余中部縱切 兩刀，接種在含6-BA0. 2 mg/L 、 2, 4-DO. lmg/L、蔗糖3%的MS培養基上，20°C每天40W日 光燈照射2小時。30天繼代一次，待長出黃綠色愈傷時便可誘導分化。
2. 不定芽的誘導將黃綠色的愈傷轉接到誘導分化培養基MS+6-BAO. 5mg/L+ 2， 4-D0. 1+3%蔗糖，30天繼代一次，20。C每天光照8小時。該愈傷分化能力可持續一年以 上，從一塊愈傷經反復繼代可分化出700多株再生苗。
3. 根的誘導再生植株轉到1/2MS+蔗糖2。/。的生根培養基上，2(TC每天光照10小時。
4. 再生植株移栽植株生根后即可移栽。腐殖土高壓12rC滅菌15分鐘。移栽前將植 株上的瓊脂等雜物沖洗干凈。3天澆一次透水便可成活。
實施例二
1. 外植體接種及愈傷組織誘導所取材幼花序的發育程度為花苞大小己經或接近發 育完全但仍為綠色，該發育程度的花苞從子房下端剪開取下，將花苞上端剪開，放入無菌
超凈臺中，用75% (體積/體積)酒精浸泡60秒，用0.2% (質量/體積)的升汞溶液浸泡3 分鐘，無菌水沖洗5遍。將花苞從子房最上部切開，然后將花苞上部大部分切掉，剩余中 部縱切兩刀，接種在含6-BAO. 2 mg/L 、 2， 4-DO. 5mg/L、蔗糖3. 5%的MS培養基上，28°C每 天40W日光燈照射4小時。50天繼代一次，待長出黃綠色愈傷時便可誘導分化。
2. 不定芽的誘導將黃綠色的愈傷轉接到誘導分化培養基MS+6-BA1.0 mg/L+ 2， 4-DO. 2mg/L+3. 5%蔗糖，50天繼代一次，28°C每天光照10小時。該愈傷分化能力可持續 一年以上，從一塊愈傷經反復繼代可分化出700多株再生苗。
3. 根的誘導再生植株轉到l/2MS+NAA2mg/L+蔗糖2呢的生根培養基上，28°C每天光照 12小時。
4. 再生植株移栽植株生根后即可移栽。腐殖土12rC滅菌30分鐘。移栽前將植株上 的瓊脂等雜物沖洗干凈。7天澆一次透水便可成活。
實施例三
l.外植體接種及愈傷組織誘導所取材幼花序的發育程度為花苞大小已經或接近發 育完全但仍為綠色，該發育程度的花苞從子房下端剪開取下，將花苞上端剪開，放入無菌 超凈臺中，用75% (體積/體積)酒精浸泡45秒，用O. 15% (質量/體積)的升汞溶液浸泡 8分鐘，無菌水沖洗4遍。將花苞從子房最上部切開，然后將花苞上部大部分切掉，剩余 中部縱切兩刀，接種在含6-BAO. 2 mg/L 、 2, 4-DO. 3mg/L、蔗糖3. 2%的MS培養基上，25°C每天40W日光燈照射3小時。45天繼代一次，待長出黃綠色愈傷時便可誘導分化。
2. 不定芽的誘導將黃綠色的愈傷轉接到誘導分化培養基MS+6-BA(0.75mg/L) + 2,4-D(O. 15mg/L)+3.2。/。蔗糖，45天繼代一次，25T每天光照9小時。該愈傷分化能力可持 續一年以上，從一塊愈傷經反復繼代可分化出700多株再生苗。
3. 根的誘導再生植株轉到l/2MS+NAA(lmg/L)+蔗糖2y。的生根培養基上，25°C每天光 照11小時。
4. 再生植株移栽植株生根后即可移栽。腐殖土12rC滅菌60分鐘。移栽前將植株上 的瓊脂等雜物沖洗干凈。15天澆一次透水便可成活。
權利要求
1、以幼花瓣為外植體的君子蘭離體快速繁殖方法，其特征是具體步驟如下1).外植體接種及愈傷組織誘導將幼花序花苞從子房下端剪開取下，將完整或上端剪開的花苞放入無菌超凈臺中，用體積、體積比75％酒精浸泡30-60秒，用質量、體積比0.1-0.2％的升汞溶液浸泡3-10分鐘，無菌水沖洗3-5遍；將花苞從子房最上部切開，然后將花苞上部大部分切掉，剩余中部縱切兩刀，接種在含6-BA0.2mg/L、2，4-D0.1-0.5mg/L、質量、體積比3.0-3.5％蔗糖的MS培養基上，20℃-30℃每天40W日光燈照射2-4小時，30-50天繼代一次，待長出黃綠色愈傷時即誘導分化；2).不定芽的誘導將黃綠色的愈傷轉接到誘導分化培養基MS+6-BA(0.51.0mg/L)+2，4-D(0.1-0.2mg/L)+3-3.5％蔗糖，30-50天繼代一次，20℃-30℃每天光照8-10小時，該愈傷分化能力持續一年以上，從一塊愈傷經反復繼代分化出700多株再生苗；3).根的誘導再生植株轉到1/2MS+NAA(0-2mg/L)+蔗糖2％的生根培養基上，20℃-30℃每天光照10-12小時；4).再生植株移栽植株生根后即移栽，腐殖土121℃滅菌15-60分鐘，移栽前將植株上的瓊脂及雜物沖洗干凈，3-15天澆一次透水即成活。
全文摘要
本發明屬于花卉繁殖方法，具體涉及花卉的無性快速繁殖方法。本發明采用外植體接種及愈傷組織誘導、不定芽的誘導、根的誘導、再生植株移栽等技術，使君子蘭在相對短的時間內大量產生基因背景完全相同、株型統一的再生植株。以大花君子蘭幼花序(青苞)的花瓣基部為外植體，脫分化率及分化率均可達80％以上。由一塊外植體誘導的愈傷組織經反復繼代可分化出700株叢生芽，叢生芽表型統一。叢生芽生根率可達100％，在適宜環境下移栽成活率達100％。
文檔編號A01H4/00GK101637126SQ20091006743
公開日2010年2月3日 申請日期2009年8月21日 優先權日2009年8月21日
發明者麗 王, 王欽美 申請人:東北師范大學