專利名稱：以幼子房為外植體的君子蘭離體快速繁殖方法
技術領域：
本發明屬于植物繁殖方法，具體涉及是花卉的無性快速繁殖方法。
背景技術：
植物組織培養即植物無菌培養技術，是根據植物細胞的全能性，利用植物體離體的器 官(如根、莖、葉、莖尖、花、果實等)、組織(如形成層、表皮、皮層、胚乳等)或細胞 (如大孢子、小孢子、體細胞等)以及原生質體，在無菌和適宜的人工培養基及光照、溫度 等人工條件下，能誘導出愈傷組織、不定芽、不定根，形成完整的植株或產生具有經濟價 值的其它產品的技術。由植物組織培養所產生的再生植株除了極低的變異外基本都能保持 親本(外植體來源植株)的優良性狀。植物組織培養技術發明以來已經取得了很大的進展， 自上世紀60年代以來植物組織培養已經從實驗室研究階段成為一種大規模成批量的工廠 化生產方法。君子蘭，是石蒜科君子蘭屬的多年生草本觀賞植株。原產南非高山，性喜溫 涼，于本世紀初經由德國和日本引入我國，并安家落戶。是我國名貴花卉，經濟價值較高。 它株型端莊、葉、花、果并美，深受國內外花卉愛好者的青睞。目前，君子蘭的繁殖方式
主要為種子繁殖與分株繁殖，而這兩種方式的繁殖速度都很慢君子蘭一年只開一次花， 且種子需要9個月才能成熟；分株繁殖一年最多分出1-3株。由于君子蘭高度雜合，種子 繁殖得到珍品君子蘭的得率很低，即便以珍品君子蘭做父母本得到珍品的幾率仍很低，珍 品君子蘭在國內國際市場一直供不應求。利用植物組織培養技術離體快速繁殖君子蘭可以 大規模產生株型統一的君子蘭，快速繁殖君子蘭優良稀缺品種，進一步滿足國內國際市場 的需求。前人所做的君子蘭組織培養實驗雖然已經初步獲得成功，但分化最好的品種平均
每塊外植體上只能分化出少于2.5株苗，繁殖系數極低。這就限制了君子蘭組織培養技術
在實際生產中的應用。而本發明可使君子蘭在一年以內實現快速繁殖。 一塊外植體可再生
出100多株再生植株，非常適合工廠化生產。 發明內容為克服君子蘭傳統繁殖方法產生君子蘭個體株型千差萬別、繁殖速度慢的缺點；也為
了克服前人君子蘭組織培養實驗中再生系數小的缺點。本發明使君子蘭在相對短的時間內 大量產生基因背景完全相同、株型統一的再生植株。以大花君子蘭幼花序(青苞)的子房
縱切塊為外植體，脫分化率可達80%以上，分化率可達70%。由一塊外植體誘導的愈傷組織 經反復繼代可分化出100多株叢生芽。叢生芽生根率可達100%，在適宜環境下移栽成活率 達100%。
本發明所采用的技術方案是-
1. 外植體接種及愈傷組織誘導取大花君子蘭幼花序，放入無菌超凈臺中，用75%(體 積/體積)酒精浸泡30-60秒，用0. 1-0. 2% (質量/體積)的升汞溶液浸泡3-10分鐘，無 菌水沖洗3-6遍。將幼花序子房切下，從中部縱切兩刀，接種在含6-BA1. 0mg/L、NAA1. 0mg/L、 2， 4-Dl. 0mg/L、蔗糖3. 0-3. 5% (質量/體積)的MS培養基上，置于20°C-28°C散射光下培 養。30-50天繼代一次，待長出黃色較致密愈傷時便可誘導分化。
2. 不定芽的誘導將黃色的愈傷轉接到誘導分化培養基MS+6-BA(0. 5-1.0 mg/L) + NAA(O. 5-4mg/L)+3. 0-3. 5%蔗糖，30-50天繼代一次，20°C-28°C每天40W日光燈光照8-10 小時。該愈傷分化能力可持續一年以上，從一塊愈傷經反復繼代可分化出100多株再生苗。
3. 根的誘導再生植株轉到1/2MS+NAA(0.2-0.5mg/L)+蔗糖2%的生根培養基上， 2(TC-28T全天光照，60天左右繼代一次。
4. 再生植株移栽植株生根后即可移栽。腐殖土 121°C滅菌30-60分鐘。移栽前將植 株上的瓊脂等雜物沖洗干凈。7-15天澆一次透水便可成活。
本發明的有益效果是使君子蘭在相對短的時間內大規模繁殖出遺傳背景相同、外觀 整齊的植株，植株移栽后生長狀態良好，平均單株再生苗的成本低；適合于君子蘭優良稀
缺品種的快速繁殖。
具體實施例方式
下面將結合實際操作對本發明作進一步的說明，但是本發明的內容不僅限于以下3個 實施例。
實施例1:
l.外植體接種及愈傷組織誘導取大花君子蘭幼花序，放入無菌超凈臺中，用75%(體 積/體積)酒精浸泡30秒，用0. 1%(質量/體積)的升汞溶液浸泡3分鐘，無菌水沖洗3遍。 將幼花序子房切下，從中部縱切兩刀，接種在含6-BA1. 0mg/L、 NAA1. 0 mg/L、 2， 4-Dl. 0mg/L、蔗糖3.5y。(質量/體積)的MS培養基上，20°C散射光下培養,30天繼代一次，待長出黃色較 致密愈傷時便可誘導分化。
2. 不定芽的誘導將黃色的愈傷轉接到誘導分化培養基MS+6-BA0.5mg/L+ NMO. 5mg/L+3. 5%蔗糖，30天繼代一次，20°C每天光照8小時。該愈傷分化能力可持續一 年以上，從一塊愈傷經反復繼代可分化出100多株再生苗。
3. 根的誘導再生植株轉到1/2MS+NAA0. 2mg/L+蔗糖2%的生根培養基上，20°C全天光 照，60天左右繼代一次。
4. 再生植株移栽植株生根后即可移栽。腐殖土12rC滅菌30分鐘。移栽前將植株上 的瓊脂等雜物沖洗干凈。7天澆一次透水便可成活。
實施例2:
1. 外植體接種及愈傷組織誘導取大花君子蘭幼花序，放入無菌超凈臺中，用75%(體 積/體積)酒精浸泡60秒，用0. 2%(質量/體積)的升汞溶液浸泡10分鐘，無菌水沖洗6遍。 將幼花序子房切下，從中部縱切兩刀，接種在含6-BA1. Omg/L、 NAA1. 0 mg/L、 2, 4-D1. Omg/L、 蔗糖3M(質量/體積)的MS培養基上，28°C散射光下培養,50天繼代一次，待長出黃色較致 密愈傷時便可誘導分化。
2. 不定芽的誘導將黃色的愈傷轉接到誘導分化培養基MS+6-BA lmg/L+NAA4mg/L+3% 蔗糖，50天繼代一次，28°C每天光照10小時。該愈傷分化能力可持續一年以上，從一塊 愈傷經反復繼代可分化出100多株再生苗。
3. 根的誘導再生植株轉到l/2MS+NAA0.5mg/L+蔗糖2免的生根培養基上，28°C全天光 照，60天左右繼代一次。
4. 再生植株移栽植株生根后即可移栽。腐殖土12rC滅菌60分鐘。移栽前將植株上 的瓊脂等雜物沖洗干凈。15天澆一次透水便可成活。
實施例3:
1. 外植體接種及愈傷組織誘導取大花君子蘭幼花序，放入無菌超凈臺中，用75%(體 積/體積)酒精浸泡40秒，用0.15%(質量/體積)的升汞溶液浸泡7分鐘，無菌水沖洗4遍。 將幼花序子房切下，從中部縱切兩刀，接種在含6-BA1. 0mg/L、 NAA1. 0 rag/L、 2, 4-Dl. 0mg/L、 蔗糖3.2。/。(質量/體積)的MS培養基上，25°C散射光下培養,40天繼代一次，待長出黃色較 致密愈傷時便可誘導分化。
2. 不定芽的誘導將黃色的愈傷轉接到誘導分化培養基MS+6-BA 0.75mg/L+NM 2mg/L+3.2。/。蔗糖，40天繼代一次，25。C每天光照9小時。該愈傷分化能力可持續一年以上，從一塊愈傷經反復繼代可分化出100多株再生苗。
3. 根的誘導再生植株轉到1/2MS+NM0.3mg/L+蔗糖2y。的生根培養基上，25。C全天光 照，60天左右繼代一次。
4. 再生植株移栽植株生根后即可移栽。腐殖土12rC滅菌40分鐘。移栽前將植株上 的瓊脂等雜物沖洗干凈。IO天澆一次透水便可成活。
權利要求
1、以幼子房為外植體的君子蘭離體快速繁殖方法，其特征是具體步驟如下1).外植體接種及愈傷組織誘導取大花君子蘭幼花序，放入無菌超凈臺中，用體積、體積比75％酒精浸泡30-60秒，用質量、體積比0.1-0.2％的升汞溶液浸泡3-10分鐘，無菌水沖洗3-6遍；將幼花序子房切下，從中部縱切兩刀，接種在含6-BA1.0mg/L、NAA1.0mg/L、2，4-D1.0mg/L、質量、體積比3.0-3.5％蔗糖的MS培養基上，置于20℃-28℃散射光下培養；30-50天繼代一次，待長出黃色較致密愈傷時即誘導分化；2).不定芽的誘導將黃色的愈傷轉接到誘導分化培養基MS+6-BA(0.5-1.0mg/L)+NAA(0.5-4mg/L)+3.0-3.5％蔗糖，30-50天繼代一次，20℃-28℃每天40W日光燈光照8-10小時，該愈傷分化能力持續一年以上，從一塊愈傷經反復繼代分化出100多株再生苗；3).根的誘導再生植株轉到1/2MS+NAA(0.2-0.5mg/L)+蔗糖2％的生根培養基上，20℃-28℃全天光照，60天左右繼代一次；4).再生植株移栽植株生根后即移栽，腐殖土121℃滅菌30-60分鐘，移栽前將植株上的瓊脂及雜物沖洗干凈，7-15天澆一次透水即成活。
全文摘要
本發明屬于植物繁殖方法，具體涉及是花卉的無性快速繁殖方法。本發明所采用外植體接種及愈傷組織誘導、不定芽的誘導、根的誘導、再生植株移栽等技術，以大花君子蘭幼花序(青苞)的子房縱切塊為外植體，使君子蘭在相對短的時間內大量產生基因背景完全相同、株型統一的再生植株。脫分化率可達80％以上，分化率可達70％。由一塊外植體誘導的愈傷組織經反復繼代可分化出100多株叢生芽。叢生芽生根率可達100％，在適宜環境下移栽成活率達100％。植株移栽后生長狀態良好，平均單株再生苗的成本低；適合于君子蘭優良稀缺品種的快速繁殖。
文檔編號A01H4/00GK101637127SQ20091006743
公開日2010年2月3日 申請日期2009年8月21日 優先權日2009年8月21日
發明者麗 王, 王欽美 申請人:東北師范大學