專利名稱：：社會地位誘發的抑郁癥動物模型建立方法
技術領域：
：本發明屬生命科學
技術領域：
，具體涉及一種抑郁癥動物模型建立的方法。
背景技術：
：抑郁癥是常見病，被比喻為"精神感冒"。人的一生很可能會患上好幾次這樣的"精神感冒"。抑郁癥能讓人的免疫力降低，生理機能下降，并可能會誘發心絞痛、哮喘、胃潰瘍、癌癥等器質性病變。更嚴重的是抑郁癥患者中的1015%有不同程度的自殺傾向，給社會和其家庭帶來沉重負擔。為了更詳盡地了解抑郁癥，一個合適有效的動物模型顯得至關重要，它可以幫助我們(l)隨病程的發展過程進行跟蹤觀察，在發病后的不同時間、地點進行研究；(2)直接從腦室或腦組織中采集標本，直接檢測抑郁癥發病過程中某些生化物質的動態改變及神經生理學上的異常變化；(3)研究抑郁癥的癥狀學與某些生化物質異常改變的相關性；(4)在動物模型上檢驗抗抑郁藥物的效果，以及進行探索新藥物的應用研究。非人靈長類動物由于在遺傳學、解剖結構和生理功能上與人類的相似性而成為許多精神疾病的理想模型，并且已有很多學者嘗試在非人靈長類動物身上模擬人類抑郁癥的發生、發展及治療過程。瑞士的Pryce實驗室通過每天母嬰分離(maternald印rivation)的方法建立了絨猴的(marmoset)抑郁模型，它們同時具有心理快感缺乏和習得性絕望這兩種重要的人類抑郁標志性癥狀(Pryceetal.，2004)。然而，這種母嬰分離在人類中很少發現，故用來支持人類抑郁性障礙的病因理論尚值得懷疑，而且母嬰分離還會誘發其它的一系列精神疾病，如精神分裂癥。但有一點肯定的是，個體早期的生長環境的確會對其神經行為和腦功能的發展產生一種長期的影響。有研究證實，個體早期生長環境中的不利因素可以使其成為某些精神疾病，如抑郁癥的易感者。因此，為了更深入確切地探討人類抑郁性障礙，大多學者已開始轉向通過慢性應激的方法來建立抑郁模型。美國的Shively實驗室通過調整群體的社會等級次序，利用社會地位的變更作為一種慢性應激，使得那些經歷了劇烈社會地位變更的雌性食蟹猴(cynomolgusmonkey)產生挫敗感，而其中的一些個體繼而抑郁，表現出與人類抑郁癥患者相似的病理癥狀，包括體重減輕、活動量降低、心率升高、HPA軸(hypothalamic-pituitary-adrenal，下丘腦_垂體_腎上腺軸)功能紊亂、死亡率升高等(Shivelyetal.，2005)。與母嬰分離相比，慢性應激方法無疑會成為未來抑郁癥建模方法中的首選，通過這種方法建立的抑郁模型不僅具備與人類抑郁癥患者相似的病因學基礎，可以模擬出人類抑郁癥患者的大多數癥狀，而且還能有助于對抑郁癥的發展過程進行實時追蹤觀察。但Shively的慢性應激方法卻存在一個缺陷即摻雜了人為因素(人為調整群體的社會等級次序)的干擾，相對地縮短了抑郁癥的發病進程，不能充分模擬人類抑郁癥的發展過程，并沒有成功地達到自然建模的目的。
發明內容本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種社會地位誘發的抑郁癥動物模然狀態下建立動物模型、從而能充分模擬人類抑郁癥的發展過程。本發明方法按如下步驟1.在非人靈長類動物的天然群體中，于214周內，采用間隔或連續的方式，觀察記錄并獲得其中各個體蜷縮行為、自主活動行為和對外界剌激反應行為這三個行為各自的總時間，并且保證對各個體進行觀察記錄的總時間相等，為14小時100小時。2.將所有個體蜷縮行為的總時間按由高至低的順序劃分為四等份，其中處于最短蜷縮時間范圍內的個體定義為正常個體，處于其他范圍內的個體定義為抑郁個體；全部正常個體構成正常組，全部抑郁個體構成抑郁組。對兩組個體的平均每小時自主活動時間和對外界剌激反應時間分別作獨立樣本t檢驗，考察兩組的差異性，若正常組個體的平均每小時自主活動時間和對外界剌激反應時間均顯著高于抑郁組，即p<0.05，則表明抑郁組中的個體滿足對模型的行為特征要求。3.對兩組個體測定其毛發中的可的松含量和局部腦血流值，然后對這兩個生化指標分別作獨立樣本t檢驗，若正常組個體毛發的平均可的松含量顯著低于抑郁組，即p<0.05，同時正常組個體平均局部腦血流值顯著高于抑郁組，即p<0.05，則表明抑郁組中的個體滿足對模型的生化指標要求。4.同時滿足抑郁模型行為特征要求和生化指標要求的個體就是按照本方法建立成功的抑郁模型。所說非人靈長類動物可以是獼猴，并且以雌性獼猴最好。測定局部腦血流值可以使用單光子發射計算機斷層掃描(簡稱SPECT)。所說觀察記錄最好采用錄像法。蜷縮行為是指像嬰兒一樣把整個身體蜷縮起來，把頭埋入肩膀中或肩膀以下。自主活動行為是指走、跑、跳、爬等。對外界剌激反應行為是指籠外剌激發生后，動物對剌激反應的狀況。SPECT是一種神經影像學技術，用于腦功能成像。可的松是一種應激激素，由下丘腦_垂體_腎上腺皮質軸中的腎上腺皮質部合成和分泌。一般認為毛發中的可的松水平可以反映3個月之內的下丘腦_垂體_腎上腺皮質軸功能狀態。慢性應激(chronicstress)可以誘發抑郁已成為公認事實。研究報道，有抑郁癥史的自殺病人，其行為表現與慢性應激引發的癥狀非常一致。在具有明顯等級地位的社會群體中，等級地位長期地影響生活在其中的社會成員。社會等級可以作為一種慢性應激。有研究發現，在人群中抑郁癥的發病率和社會經濟地位之間存在著一種負向相關性(Murphyetal.，1991)。獼猴營家族式群體生活，每一群體內都有森嚴的社會等級次序，這使得生活在其中的地位較低的個體經歷更多的長期生理與心理應激(stress)，并且缺乏發相應的發泄途徑，變得愈加孤立(isolated)，而孤立(isolation)和應激(stress)正是誘發抑郁的兩大重要因素。因此，獼猴的社會等級地位可以作為一種慢性應激，使其產生抑郁，用于研究人類抑郁性障礙發生的病因，以及跟蹤觀察抑郁癥發病過程中的生理學及腦功能改變。抑郁猴的蜷縮時間顯著長于正常猴，表明它們的情緒低落，模擬了臨床抑郁癥患者的情緒狀態。和正常猴相比，抑郁猴的自主活動時間和對外界剌激反應時間顯著降低，表明它們的活動性和反應性降低，這一表現也同樣類似于抑郁癥患者的臨床癥狀。為了建立起可靠的抑郁癥動物模型，本發明通過將非人靈長類動物本身的社會地位差異作為壓力來源來建立天然的抑郁癥模型。這種建模方法主要由兩個階段構成首先4通過3個行為指標(蜷縮行為、自主活動行為和對外界剌激反應行為)的持續時間，在繁殖群體中找到行為表現抑郁的個體。然后通過2個生化指標(毛發可的松含量和局部腦血流值)，進一步確證模型的可靠性。本方法選擇繁殖群中的非人靈長類動物，在完全自然的狀態下建立動物的抑郁模型，未經過任何人為干預。本方法以臨床抑郁癥狀為指導，以先前研究為參照，制定出3個與抑郁相關的行為指標，通過測定每種行為的持續時間，來判斷獼猴的抑郁狀況。本方法第一次將抑郁行為指標、毛發可的松含量測定和局部腦血流值計算三種手段結合，用于抑郁癥動物模型的建立。本發明的有益效果所建立的模型能充分模擬人類抑郁癥的發展過程。本研究發現抑郁猴毛發可的松含量顯著高于正常猴，說明它們的HPA軸功能確實存在長期亢進，這與臨床抑郁癥患者表現的癥狀是相似的。同時，抑郁猴還存在全腦性的腦血流值下降。與正常猴相比，抑郁猴雙側顳葉、雙側枕葉和雙側小腦的局部腦血流都有顯著性的下降，說明它們全腦性腦功能下降，尤其是與情緒調節相關的腦區，如顳葉和小腦，功能下降更加明顯，這與臨床抑郁癥患者表現的癥狀也是相似的。所以，通過將非人靈長類動物本身的社會地位差異作為壓力來源，來建立天然的抑郁癥模型的方法能夠成功模擬臨床抑郁癥狀，可以為人類抑郁癥的治療和研究提供寶貴的平臺。圖1為實施例中的抑郁猴與正常猴的行為數據對比圖。圖2為實施例中的抑郁猴與正常猴毛發可的松含量對比圖。圖3為實施例中的抑郁猴與正常猴局部腦血流值對比圖。具體實施例方式實施例實驗對象為天然繁殖群中聚集的42只雌性獼猴，年齡為6-11歲。在兩周內采用間隔時間的方式，分14次觀察記錄各個體的蜷縮時間、自主活動時間和對外界剌激的反應時間，并且對各個體進行觀察記錄的總時間相等，為14小時。計算出群體各成員的蜷縮總時間、自主活動總時間和對外界剌激反應總時間，并將所有個體的蜷縮總時間按由高至低的順序劃分為四等份，其中處于最少蜷縮總時間范圍內的個體定義為正常個體，共計38只正常猴；處于其他范圍內的個體定義為抑郁個體，共計4只抑郁猴，全部正常猴構成正常組，全部抑郁猴構成抑郁組。對兩組獼猴的平均每小時自主活動時間和對外界剌激反應的時間分別作獨立樣本t檢驗，考察兩組的差異性，若正常組個體平均每小時的自主活動時間和對外界剌激反應行時間均顯著長于抑郁組，即P<0.05，則表明抑郁組中的個體滿足對抑郁模型的行為特征要求。4只抑郁猴每小時蜷縮時間、自主活動時間和對外界剌激反應時間的個體均值分別為626秒、47秒和3秒。見圖1，圖中縱坐標為兩組個體各種行為的個體均值(總秒數)，1為抑郁猴的蜷縮行為，2為抑郁猴的自主活動行為，3為抑郁猴的對蘢外剌激反應行為，4為正常猴的蜷縮行為，5為正常猴的自主活動行為，6為正常猴的對蘢外剌激反應行為。對篩選出的4只抑郁猴，分別測定其毛發中的可的松含量。見圖2，圖中縱坐標為5單位是Pg/dl的毛發可的松含量個體均值，7為抑郁猴，8為正常猴。4只抑郁猴毛發可的松含量個體均值為2.47iig/dl，而正常猴個體均值為1.42iig/dl。利用毛發可的松含量可考察抑郁獼猴下丘腦_垂體_腎上腺皮質軸(簡稱HPA軸)功能的長期變化。還用單光子發射計算機斷層(SPECT)掃描來測定4只抑郁猴的局部腦血流值，考察腦功能的改變。掃描過程是在獼猴深度麻醉的情況下進行的。4只抑郁猴個體均值與正常猴個體均值的比較見圖3。在本實施例中，通過DV聚焦錄像的方法來觀察記錄獼猴的三種行為數據。其中，每只個體的采集時間為2周。具體方法是錄像方式在腳架上固定標清數碼攝像機拍攝。錄像分組6人分3組，2人一組，每組分別跟蹤拍攝某一籠里面的雌性獼猴個體，3組同時進行拍攝。例如，某一籠當中有1只雄猴4只雌猴(錄像之前分別取名為A、B、C和D)，那么就由其中一位實驗者跟蹤A和C個體，同組的另一位實驗者跟蹤拍攝B和D個體。錄像時間分配由于我們所用的DV是磁帶式的，而每盤磁帶只能錄像1小時，所以每位實驗者每天錄像4個小時，拿上面的例子來說，實驗者上午跟蹤A和C個體，下午還是跟蹤A和C個體，只是錄像的順序每天都會有所調整(如下表)。錄像時期每個聚焦的個體都需要拍攝7天，采用隔天拍攝的方式，以保證對此籠子內聚焦個體的錄像時程至少有2周。數據轉換在電腦上利用繪聲繪影軟件把磁帶攜帶的錄像數據轉換成MPEG文件儲存，以便之后分析。組內錄像時間分配(2位實驗者同時對此籠的個體錄像)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注對每個籠子的錄像都至少為兩周。本實施例通過將社會地位的差異作為一種壓力來源，成功建立起自然的雌性獼猴抑郁模型。在聚集的42只雌性獼猴當中發現4只抑郁猴，抑郁猴的蜷縮時間顯著長于正常猴，表明它們的情緒低落，模擬了臨床抑郁患者的情緒狀態；和正常猴相比，抑郁猴的自主活動時間和對外界剌激反應時間顯著降低，表明它們的活動性和反應性降低，這一表現也同樣類似于抑郁癥患者的臨床癥狀。雖然本實施例中選擇的非人靈長類動物群體為雌性獼猴繁殖群體，但本專業人員知道對其它非人靈長類動物群體同樣可以實施，因為同雌性獼猴繁殖群體一樣，其它的非人靈長類動物群體同樣具有明顯的社會等級次序。雖然本實施例中的觀察記錄期為2周，但本專業人員知道觀察記錄期為214周都可以實施，因為隨著觀察期的延長，這種行為表現抑郁的個體更容易找到。雖然本實施例中對每個個體進行觀察記錄的總時間為14小時，但本專業人員知道對每個個體觀察記錄的總時間為14100小時都可以實施，因為對每個個體觀察記錄的總時間越長，這種抑郁行為的表現越穩定。雖然本實施例中測定局部腦血流值所應用的方法為單光子發射計算機斷層掃描，但本專業人員知道應用其它的方法如正電子發射計算機斷層掃描同樣可以測定局部腦血流值。權利要求社會地位誘發的抑郁癥動物模型建立方法，其特征在于按如下步驟(1).在非人靈長類動物的天然群體中，于2～14周內，采用間隔或連續的方式，觀察記錄并獲得其中各個體蜷縮行為、自主活動行為和對外界刺激反應行為這三個行為各自的總時間，并且保證對各個體進行觀察記錄的總時間相等，為14小時～100小時；(2).將所有個體蜷縮行為的總時間按由高至低的順序劃分為四等份，其中處于最短蜷縮時間范圍內的個體定義為正常個體，處于其他范圍內的個體定義為抑郁個體，全部正常個體構成正常組，全部抑郁個體構成抑郁組，對兩組個體的平均每小時自主活動時間和對外界刺激反應時間分別作獨立樣本t檢驗，考察兩組的差異性，若正常組個體的平均每小時自主活動時間和對外界刺激反應時間均顯著高于抑郁組，即p＜0.05，則表明抑郁組中的個體滿足對模型的行為特征要求；(3).對兩組個體測定其毛發中的可的松含量和局部腦血流值，然后對這兩個生化指標分別作獨立樣本t檢驗，若正常組個體毛發的平均可的松含量顯著低于抑郁組，即p＜0.05，同時正常組個體平均局部腦血流值顯著高于抑郁組，即p＜0.05，則表明抑郁組中的個體滿足對模型的生化指標要求；(4).同時滿足對模型的行為特征要求和生化指標要求的個體就是按照本方法建立成功的抑郁模型。2.如權利要求1所說的方法，其特征在于所說的非人靈長類動物為獼猴。3.如權利要求1所說的方法，其特征在于所說的獼猴為雌性獼猴。4.如權利要求1所說的方法，其特征在于測定局部腦血流值所采用的方法為單光子發射計算機斷層掃描。5.如權利要求1所說的方法，其特征在于觀察記錄所采用的方法為錄像法。全文摘要社會地位誘發的抑郁癥動物模型建立方法屬生命科學
技術領域：
。在非人靈長類動物的天然群體中，記錄各個體蜷縮、自主活動和對外界刺激反應的總時間。將個體蜷縮總時間由高至低劃分為四等份，最短時間范圍內的為正常個體，其他為抑郁個體。對兩組個體的平均每小時自主活動時間和對外界刺激反應時間作獨立樣本t檢驗，若正常組的均顯著高于抑郁組，表明抑郁組個體滿足行為特征要求。測定兩組個體毛發可的松含量和局部腦血流值，作獨立樣本t檢驗，若正常組個體的平均可的松含量顯著低于、且平均局部腦血流值顯著高于抑郁組的，表明抑郁組個體滿足生化指標要求。同時滿足兩項要求的個體就是建立成的自然抑郁模型，能充分模擬人類抑郁癥的發展過程。文檔編號A01K67/02GK101773096SQ20101003918公開日2010年7月14日申請日期2010年1月20日優先權日2010年1月20日發明者馮曉麗,李燕皎,秦冬冬,胡新天,馬原野申請人:中國科學院昆明動物研究所;昆明亞靈生物科技有限公司