專利名稱：：取代苯基呋喃甲醛縮氨基硫脲類化合物作為昆蟲酪氨酸酶抑制劑的用途的制作方法
技術領域：
：本發明涉及取代苯基呋喃甲醛縮氨基硫脲類化合物的新用途，尤其是涉及該類化合物作為昆蟲酪氨酸酶抑制劑的應用。
背景技術：
：酪氨酸酶(tyrosinase)又口L]多酚氧化酶(polyphenoloxidase,PP0或phenoloxidase，P0)，廣泛存在于動物、植物及微生物中。酪氨酸酶是二價銅離子(Cu2+)與酶蛋白相結合的一種金屬酶，兼有加氧酶和氧化酶的雙重功能，能將單酚加氧成二酚，又可以將二酚等多元酚氧化成醌，進而生成黑色素(J.Agric.FoodChem.，1996,44(3):631-653)酪氨酸酶作為生物體內黑色素合成的關鍵酶，與昆蟲傷口的愈合、免疫、新表皮的形成等生理過程密切相關；同時與人各種色素皮膚病、黑色素腫瘤以及果樹的褐變、營養缺失等也有密切關系。目前對酪氨酸酶抑制劑的研究是一個熱點問題。酪氨酸酶抑制劑通過抑制酪氨酸酶的活性從而抑制黑色素的形成，影響昆蟲的正常生理活動和發育；在預防和治療色素沉積及黑色素瘤等疾病、生產美白祛斑化妝品以及果蔬保鮮等方面也有廣泛的市場。目前已知的酪氨酸酶抑制劑主要有熊果苷、曲酸、L-抗壞血酸、氫醌、托酚酮等(廈門大學學報，2007，46(2):274-281)，但是這些抑制劑存在著各種不足氫醌雖然有較高的抑制活性，但是對皮膚剌激較大，目前在很多國家和地區被禁止使用；托酚酮抑制活性高，但是由于副作用明顯而限制了其在藥學領域的應用(Bioorganic&MedicinalChemistry,16(2008)1096-1102);曲酸、熊果苷抑制效果差，L-抗壞血酸存在化學性質不穩定等缺點；另外，在醫藥行業里有很多植物提取物作為酪氨酸酶抑制劑的報道，多數為中藥材植物的提取物，如白蒺藜提取物的抑制率為43.8%(華西藥學雜志，2006，21(1):050-052)。但植物提取物受產地、提取條件等影響，活性差距很大，且提取物通常情況下受本身色澤等性質的影響，在實際應用上受到很大限制。昆蟲的一生需要多次脫去舊表皮、形成新表皮才能完成整個生活史。而酪氨酸酶是昆蟲新表皮形成所不可缺少的關鍵酶。另外，酪氨酸酶還是昆蟲免疫系統的重要組成部分，在抵御侵入昆蟲體內的病原菌、有毒化合物及促進傷口愈合等過程中起著重要作用。因此，如果該酶活性被抑制，將不可避免地導致昆蟲的生長發育受阻，最終導致其死亡。如果與昆蟲病毒、細菌類生物農藥聯合使用，理論上也可以顯著增強其殺蟲效果。但目前以昆蟲酪氨酸酶為主要靶標的殺蟲藥劑市場上尚未見到，也未見相關文獻報道。因此，研究開發對昆蟲酪氨酸酶具有較強抑制活性的化合物，將為新型殺蟲劑的創制提供新途徑，具有非常廣闊的應用前景。取代苯基呋喃甲醛縮氨基硫脲類化合物，由于含有硫脲類結構，是很好的銅離子螯合劑，目前對于該類化合物的研究比較少，主要集中在合成研究及其作為中間體的應用上(EuropeanJournalofMedicinalChemistry,2003，3，313-318;)。另夕卜，Barsanti，Paul等人報道了取代基為4-0CH3、4-F、4-Cl、3-Cl等的該類化合物的抗病毒和免疫增強功能(W02004060308)，XiaohuiDu等報道了取代基為4_C1、4-Br、3-Cl、2-0CH3的該類化合物的錐蟲半胱氨酸蛋白酶抑制活性(J.Med.Chem.2002，45，26952707)，關于該類化合物作為昆蟲酪氨酸酶抑制劑的用途還未見報道。
發明內容本發明的目的是提供一種取代苯基呋喃甲醛縮氨基硫脲類化合物(I)的新用途，即對昆蟲酪氨酸酶具有明顯抑制作用，，可以作為酪氨酸酶抑制劑在害蟲防治中應用，本發明中的昆蟲特指棉鈴蟲。本發明所述的取代苯基呋喃甲醛縮氨基硫脲類化合物是指具有以下通式(I)所示的化合物R為2-Br，4_Br，3_F，4_F，2_C1，3_C1，4_C1，2_N02，3_N02，4_N02，2，5_C12，2，4_F2，2，4，6-Br3，2，4-N02。其中，la:R=2-Br，lb:R=4_Br，Ic:R=3_F，Id:R=4_F，Ie:R=2_C1，If:R=3-Cl，Ig:R=4-Cl，Ih:R=2-N02，Ii:R=3_N02，Ij:R=4_N02，Ik:R=2，5_C12，II:R=2，4-F2，Im:R=2，4，6_Br3，In:R=2，4_N02。其中lm(R=2，4，6-Br3)化合物，為本發明首次報道，其余化合物均為已知化合物。本發明提供了通式(I)所示的取代苯基呋喃甲醛縮氨基硫脲類化合物的新用途。本發明通過取代苯基呋喃甲醛縮氨基硫脲類化合物對棉鈴蟲酪氨酸酶抑制活性的研究，證明該類化合物對昆蟲酪氨酸酶具有較好的抑制作用，可作為昆蟲酪氨酸酶抑制劑來防治棉鈴蟲。具體實施例方式本發明可用以下實施例作進一步詳細說明，但本發明并不僅限于這些實施例。實施例1:本發明以新化合物Im為例，說明Im的合成方法Im的制備向500ml四口瓶中加入33g(0.lmol)2，4_，6_三溴苯胺，20ml水，30ml濃鹽酸，攪拌使固體溶解。然后冰浴降溫至零度，緩慢滴加7.Og亞硝酸鈉的20ml水溶液，滴加完畢后，室溫下反應40min。加入50ml水，10g糠醛的30ml丙酮溶液，2.54g氯化銅的8ml水溶液，2025t:反應，滴加飽和醋酸鈉溶液至pH至4左右，停止攪拌，抽濾得黃褐色固體，所得固體依次經石油醚、乙醇重結晶，得黃色固體9.6g，產率23.5%。向50ml三口瓶中加入lga(2.45mmol)所得固體，O.42g(2.04mmol)氨基硫脲，30ml無水乙醇，攪拌回流反應，TLC監測至反應結束。抽濾，得黃色固體，經柱層析純化(石油醚乙酸乙酯l:9)，得淺黃色固體Ia0.53g，m.p.222-224"，產率54.1%。Im:HNMR(DMS0-d6):6.77(d，J=3.51Hz，lH，FuH)，7.12(d，J=3.51Hz，lH，FuH)，7.67(s，1H，NH2)，7.99-8.02(m，1H，ArH)，8.05-8.12(m，2H，ArH+CH=N)，8.23(s，1H，NH2)，11.49(s，1H，NH)，MS:M+1:482.89實施例2本發明所述的通式(I)化合物，除Im以外，其余的化合物均為已知化合物，可以按文獻(CollectionCzechoslovChemCo匪n，1974，39:767771，J.Med.Chem.2002，45，2695-2707)所述的方法制備。實施例3取代苯基呋喃甲醛縮氨基硫脲類化合物對棉鈴蟲酪氨酸酶抑制率的測定a、酶液制備于冰水混合物中預冷的玻璃勻漿器中加入1頭5齡棉鈴蟲幼蟲，lml0.lmol/L、pH=6.5的磷酸鹽緩沖液，充分勻漿，在離心機中以10000Xg的速度離心15min，抽濾后，取上清液冰浴備用。b、測試樣品的配制用匿S01ml溶解，將上述化合物配制成4mg/ml的溶液(母液)，根據不同樣品的抑制情況，稀釋不同的倍數。以曲酸和托酚酮為對照藥劑。c、化合物對棉鈴蟲酪氨酸酶活性抑制能力測定反應體系為lmL。加0.lmol/L、pH=6.5的磷酸緩沖液0.790mL，酶液0.05mL，樣品溶液10iiL，0.lmol/L鄰苯二酚0.lmL，于比色皿中，在420nm下用時間驅動程序測其在2min內的0D(光密度)值變化。重復2次，計算抑制率。以加入10i!L有機溶劑的磷酸緩沖液為空白對照。抑制率用以下公式計算抑制率％=(A0Dn-A0D》/A0DnX100A0Dn:空白對照光密度值變化值A:抑制劑處理后光密度值變化值d、抑制中濃度的測定分別測定不同濃度抑制劑對棉鈴蟲酪氨酸酶的抑制率，以濃度對數對抑制率做回歸曲線，計算ICs。值，結果見表1。表1、式I化合物對棉鈴蟲酪氨酸酶活性的抑制活性(IC5。)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>從表1可以看出，本發明的化合物對棉鈴蟲酪氨酸酶具有明顯的抑制效果，其抑制中濃度(IC5。)均低于對照藥劑曲酸，大部分藥劑抑制中濃度(IC5。)低于對照藥劑托酚酮，說明式I化合物對棉鈴蟲酪氨酸酶的抑制活性均優于對照藥劑曲酸，大多化合物如Ia-Ii，II的活性優于對照藥劑托酚酮。尤其是化合物Ii的活性最為突出，其IC5。比曲酸的ICs。提高了1957倍，比托酚酮的IC5。提高了58倍。表1實驗數據表明，式I所示的化合物可作為昆蟲酪氨酸酶抑制劑應用于棉鈴蟲的防治。權利要求取代苯基呋喃甲醛縮氨基硫脲類化合物作為酪氨酸酶抑制劑在害蟲防治中的新用途。2.根據權利要求1所述新用途，是指對昆蟲酪氨酸酶具有明顯抑制作用。3.根據權利要求2所述新用途，昆蟲特指棉鈴蟲。4.根據權利要求1所述，其特征在于所述取代苯基呋喃甲醛縮氨基硫脲類化合物是指具有以下通式(I)所示的化合物其中R為2-Br，4-Br，3-F，4-F，2-Cl，3-Cl，4-Cl，2-N02，3-N02，4-N02，2，5-Cl2，2，4-F:2，4，6-Br3，2，4-N02。5.根據權利要求4所述化合物，其中R為2，4，6-Br3的化合物，為本發明首次報道。全文摘要本發明提供了一種取代苯基呋喃甲醛縮氨基硫脲類化合物(I)的新用途，即作為昆蟲酪氨酸酶抑制劑，防治棉鈴蟲。本發明通過取代苯基呋喃甲醛縮氨基硫脲類化合物對棉鈴蟲酪氨酸酶抑制活性的研究，證明該類化合物對昆蟲酪氨酸酶具有較好的抑制作用，可以作為昆蟲酪氨酸酶抑制劑用于害蟲防治。其中R為2-Br，4-Br，3-F，4-F，2-Cl，3-Cl，4-Cl，2-NO2，3-NO2，4-NO2，2，5-Cl2，2，4-F2，2，4，6-Br3，2，4-NO2。文檔編號A01N47/34GK101755801SQ201010100979公開日2010年6月30日申請日期2010年1月25日優先權日2010年1月25日發明者凌云,徐焱,楊新玲,梁沛,王振,董瑋申請人:中國農業大學