一種防治花生根結線蟲的生物制劑及其制備方法與應用的制作方法

專利名稱：一種防治花生根結線蟲的生物制劑及其制備方法與應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于屬生物農藥技術領域，特別涉及一種防治花生根結線蟲的生物制劑及
其制備方法與應用。
背景技術：
植物根結線蟲可以危害多種作物，造成危害十分嚴重。目前，其防治方法主要是化 學防治為主，但是由于化學方法常常使用高毒、高殘留化學農藥，對人畜危害巨大，有的殺 線劑已被禁用。因此，開發生物殺線蟲劑具有十分重要的意義。 在線蟲的微生物天敵中，有真菌和細菌等。其中真菌殺蟲劑已有相關專利(發 明名稱為一種生物殺線蟲劑的生產方法，專利號為ZL03117930. 4)和2個商品化生產的 產品(法國生產的用于防治蘑燕線蟲病的Roya1300以及用于防治番茄根結線蟲病的 Royal350)。關于細菌制劑防治線蟲病也有相關的專利，例如發明名稱為"一種地衣芽孢桿 菌菌株(B-0A12)及其制劑"、專利號為ZL200310115535. 5的國家發明專利，其中主要報道 了用于防治大豆胞囊線蟲病和鐮刀菌引起的根腐病的細菌液體菌劑的生產方法，沒有關于 在殺根結線蟲方面的技術以及固體粉劑的工藝技術的報道。

發明內容
本發明的首要目的在于提供一種防治花生根結線蟲的生物制劑的制備方法。通過 該制備方法得到的生物制劑能有效防治花生根結線蟲。 本發明的另一目的在于提供通過所述制備方法得到的防治花生根結線蟲的生物 制劑。 本發明的再一目的在于提供所述防治花生根結線蟲的生物制劑的應用。 本發明的目的通過下述技術方案實現一種防治花生根結線蟲的生物制劑的
制備方法，包括以下步驟將鏈霉菌Str印tomyces sp. GDPPRA NH8(保存號CCTCC NO:
M206087)(已在發明名稱為海洋微生物來源的殺蟲化合物及其制備方法和應用、專利號為
ZL. 200610122276. 2的國家發明專利公開)菌體與固體粉劑混和得到。
所述防治花生根結線蟲的生物制劑的制備方法，更優選包括以下步驟 (1)菌種活化在滅菌的高氏一號培養基中接入鏈霉菌菌種Str印tomyces sp.于
28 3(TC搖床培養，轉速為170 200轉/min、培養時間為8 16小時，得到活化的菌種； (2)菌體的大量繁殖發酵培養，培養基為高氏一號培養基，裝液量為發酵罐體積
的70%，培養基滅菌后接種步驟(1)得到的活化的菌種，接種量為發酵培養基體積的5
10% ，泡敵量為0. 05 0. 1 % ，初始pH為7 7. 2，發酵溫度28 30°C 、發酵培養12 36
小時，期間分別取樣鏡檢菌體數，菌體老化前停止發酵； (3)菌劑加工將發酵液進行離心，獲得的菌體與粒徑小于1毫米的固體粉劑進行 混和，然后干燥至水分相對濕度小于質量百分比10%、粉碎，得到防治花生根結線蟲的生物 制劑。
步驟(1)中所述的菌種活化更優選為通過以下步驟進行將高氏一號培養基配制 后，每500ml三角瓶中裝液體100ml，滅菌后，接入菌種Str印tomyces sp. GDPPRA NH8，放入 搖床內發酵培養，溫度為28 3(TC，轉速為170 200轉/min、培養時間為8 16小時， 得到活化的菌種； 步驟(2)中所述的發酵培養優選為應用1000L生物發酵罐發酵進行發酵，裝液量 為700L ; 步驟(3)中所述離心的條件優選為5000 6000rpm，溫度為25 30°C ;
所述的干燥是流化床干燥； 所述的固體粉劑優選滑石、高嶺土、膨潤土、硅藻土、陶土或麩皮中的至少一種； —種防治花生根結線蟲的生物制劑，通過上述制備方法制備得到； 所述防治花生根結線蟲的生物制劑的使用方法可以是拌種，拌土穴施、溝施，也可
以是噴霧； 所述防治花生根結線蟲的生物制劑的使用時期可以是花生種子期，苗期和成株 期。 本發明相對于現有技術具有如下的優點及效果 本發明通過對鏈霉菌Str印tomyces sp. GDPPRA NH8進行深層液體發酵，獲得大量 的菌體；收集菌體與相應的填充劑制備成粉劑。本發明的制備方法有效地促進了鏈霉菌的 增殖。本發明具有原料成本低，生產工藝先進等特點，所制成的防治花生根結線蟲的生物制 劑對花生寄生根結線蟲防治效果達到80 85%。
具體實施例方式
下面結合實施例對本發明作進一步詳細的描述，但本發明的實施方式不限于此。
實施例1 (1)菌種培養將高氏一號培養基配制后，每500ml三角瓶中裝液體100ml，滅菌
后，接入菌種Str印tomyces sp. GDPPRA NH8(保存號CCTCC NO :M206087)，放入搖床內發酵
培養，溫度28t:，轉速為200轉/min、培養時間為16小時，得到活化的菌種； (2)菌體的大量繁殖應用IOOOL生物發酵罐發酵進行發酵，發酵液為高氏一號
培養基，裝液量為700L，接種步驟(1)得到的活化的菌種70L，泡敵量為0. 05X，初始pH為
7. 2，發酵溫度3(TC、發酵培養36小時，期間分別取樣鏡檢菌體數，菌體尚未老化； (3)菌劑加工將發酵液于室溫、6000rpm進行離心，獲得的菌體與粒徑小于1毫米
的固體粉劑(由滑石、高嶺土和膨潤土按質量比i : i : i混合而得)進行混和，菌體含量
占質量百分比1%，然后流化床干燥，流化床干燥的條件是溫度不高于8(TC，干燥至水分相 對濕度小于質量百分比10%、粉碎，得到防治花生根結線蟲的生物制劑。
實施例2 (1)菌種培養將高氏一號培養基配制后，每500ml三角瓶中裝液體100ml，滅菌 后，接入菌種Str印tomyces sp. GDPPRA NH8，放入搖床內發酵培養，溫度30°C ，轉速為190 轉/min、培養時間為18小時； (2)菌體的大量繁殖應用IOOOL生物發酵罐發酵進行發酵，發酵液為高氏一號培 養基，裝液量為700L，接種步驟(1)得到的活化的菌種63L，泡敵量為0. 05X，初始pH為7，發酵溫度2『C、發酵培養30小時，期間分別取樣鏡檢菌體數，菌體尚未老化； (3)菌劑加工將發酵液于室溫、6000rpm進行離心，獲得的菌體與粒徑小于1毫米
的固體粉劑(由硅藻土、陶土和麩皮按質量比i : i : i混合而得)進行混和，菌體含量占
質量百分比1%，然后流化床干燥，流化床干燥的條件是溫度不高于8(TC，至水分相對濕度 小于質量百分比9%、粉碎，得到防治花生根結線蟲的生物制劑。
實施例3 實施例2獲得的菌體防治花生根結線蟲的生物制劑的效果實驗測定
(1)試驗菌劑實施例2獲得的菌體，菌體含量為3X108CFU/克。
(2)試驗方法 ①室內實驗將防治花生根結線蟲的生物制劑與沙土 (50%細沙，10%煤渣和 40%的泥土)按質量比例混合，設置的比例為A組1 : IOO;B組I : 50;C組1 : 125; D組將生物制劑于8(TC滅菌3小時，再與沙土按質量比1 : 100混合；E組不加生物制劑
的沙土。取100ml的每種土樣放到500ml有螺旋蓋的的容器內，輕輕壓實，接種花生根結線 蟲的卵約20000粒，將濕度調到8%，蓋上蓋子后將整個容器置于一密閉的大容器內，大容 器內的溫度為25t:，濕度為100%，放置4周后，用漏斗分離法分離、記數土壤中的線蟲。
②溫室實驗將防治花生根結線蟲的生物制劑與沙土 (50%細沙，10%煤渣和 40%的泥土 )按質量比1 : 100混合；接著在直徑為30cm的塑料缽中填加2000ml前述混 合物，設5個重復，接種花生根結線蟲的卵約20000粒/缽，4周后記數根系上的瘤結數。
3.結果 ①室內試驗結果顯示(表1)，在1 : 25處理中，菌劑對花生根結線蟲卵的致死率 高達92%。 表1 :菌劑對花生根結線蟲卵的致死率
處理幼蟲數量死亡率(％)
A16092
B19890
C62069
D18845.8
E2000— ②溫室試驗的結果為對照的瘤結數為400個/株，菌劑處理的瘤結數為58個/株， 瘤結減少率為85.5%。 此實驗結果說明本發明制備的防治花生根結線蟲的生物制劑能有效抑制花生根 結線蟲的生長。另外，本發明制備的生物制劑還能促進花生的生長，提高產量和品質。
上述實施例為本發明較佳的實施方式，但本發明的實施方式并不受上述實施例的 限制，其他的任何未背離本發明的精神實質與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化， 均應為等效的置換方式，都包含在本發明的保護范圍之內。
權利要求
一種防治花生根結線蟲的生物制劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟將鏈霉菌(Streptomyces sp.)GDPPRA NH8菌體與固體粉劑混和，干燥至水分相對濕度小于質量百分比10％，粉碎，得到防治花生根結線蟲的生物制劑。
2. 根據權利要求1所述防治花生根結線蟲的生物制劑的制備方法，其特征在于所述 鏈霉菌(Str印tomyces sp. )GDPPRA NH8菌體通過如下步驟獲得(1) 菌種活化在滅菌的高氏一號培養基中接入鏈霉菌(Str印tomyces sp.) GDPPRANH8，于28 30。C搖床培養，轉速為170 200轉/min、培養時間為8 16小時，得 到活化的菌種；(2) 菌體的大量繁殖發酵培養，培養基為高氏一號培養基，裝液量為發酵罐體積的 70%，培養基滅菌后接種步驟(1)得到的活化的菌種，接種量為發酵培養基體積的5 10%，泡敵量為0. 05 0. 1 %，初始pH為7 7. 2，發酵溫度28 3(TC、發酵培養12 36小時，期間分別取樣鏡檢菌體數，菌體老化前停止發酵；將發酵液進行離心，得到鏈霉菌 (Str印tomyces sp. )GDPPRA NH8 ;所述固體粉劑的粒徑小于1毫米。
3. 根據權利要求2所述防治花生根結線蟲的生物制劑的制備方法，其特征在于步驟(1) 中所述的菌種活化通過以下步驟進行將高氏一號培養基配制后，每500ml三角瓶中裝 液體100ml，滅菌后，接入鏈霉菌(Str印tomyces sp. )GDPPRA NH8，放入搖床內發酵培養，溫 度為28 3(TC，轉速為170 200轉/min、培養時間為8 16小時，得到活化的菌種。
4. 根據權利要求2所述防治花生根結線蟲的生物制劑的制備方法，其特征在于步驟(2) 中所述的發酵培養為應用IOOOL生物發酵罐發酵進行發酵，裝液量為700L。
5. 根據權利要求2所述防治花生根結線蟲的生物制劑的制備方法，其特征在于步驟 (2)中所述離心的條件為5000 6000rpm，溫度為25 30°C 。
6. 根據權利要求1所述防治花生根結線蟲的生物制劑的制備方法，其特征在于所述 的固體粉劑為滑石、高嶺土、膨潤土、硅藻土、陶土或麩皮中的至少一種。
7. 根據權利要求1所述防治花生根結線蟲的生物制劑的制備方法，其特征在于所述 的干燥是流化床干燥。
8. —種防治花生根結線蟲的生物制劑，通過權利要求1 7任一項所述的制備方法制 備得到。
9. 權利要求8所述防治花生根結線蟲的生物制劑的應用，其特征在于所述防治花生 根結線蟲的生物制劑的使用方式包括拌種，拌土穴施、溝施，以及噴霧。
10. 權利要求9所述防治花生根結線蟲的生物制劑的應用，其特征在于所述防治花生根結線蟲的生物制劑的使用時期包括花生的種子期、苗期和成株期。
全文摘要
本發明公開了一種防治花生根結線蟲的生物制劑及其制備方法與應用。本發明通過在高氏一號培養基中接種鏈霉菌GDPPRA NH8，搖床培養，得到活化的菌種；接著于高氏一號培養基中發酵培養，裝液量為發酵罐體積的70％，接種量為發酵培養基體積的5～10％，泡敵量為0.05～0.1％，初始pH為7～7.2，發酵溫度28～30℃、發酵時間12～36小時；然后將發酵液進行離心，得到的菌體與粒徑小于1毫米的固體粉劑進行混和，干燥至水分相對濕度小于10％、粉碎，得到防治花生根結線蟲的生物制劑。該制備方法有效地促進了鏈霉菌的增殖，所制成的防治花生根結線蟲的生物制劑對花生寄生根結線蟲防治效果達到85％，且成本低。
文檔編號A01N63/00GK101790995SQ201010111159
公開日2010年8月4日 申請日期2010年2月8日 優先權日2010年2月8日
發明者林壁潤, 沈會芳, 潘群英, 蒲小明 申請人:廣東省農業科學院植物保護研究所