專利名稱：一種抑制鏈孢霉生長的殺菌劑及其制備方法
技術領域：
本發明屬于微生物領域，具體地說涉及是一種抑制鏈孢霉生長的殺菌劑及其制備 方法。
背景技術：
鏈孢霉是一種頑強、速生的氣生霉，主要危害各種食用菌菌種，也發生在栽培過程 中，危害食用菌的菌絲體和子實體，極難防治，目前雖有化學藥劑防治，但效果不佳，且毒性 大，目前尚未發現能有效抑制鏈孢霉生長的微生物或其代謝物。鏈孢霉廣泛分布在自然界的土壤中、禾本科植物以及富含淀粉的食物上，能產生 大量的分生孢子，靠氣流傳播。培養室環境不衛生；菌袋高壓滅菌不徹底；棉塞受潮、過松； 菌袋破漏，均是鏈孢霉侵染的主要途徑。菌袋一旦受侵染后，所產生新的分生孢子，是再侵 染的主要來源。在高溫高濕條件下，能在1-2天內傳遍整個培養室。鏈孢霉是菌種生產期間危害最嚴重的一種病害之一。菌袋一經污染很難徹底清 除，常引起整批菌種或菌袋報廢，經濟上損失很大。目前常用的鏈孢霉殺菌劑為百菌清和多菌靈，但這兩種殺菌劑存在如下缺陷毒 性強，對生產種危害大，污染環境，對鏈孢霉殺菌作用不強。
發明內容
本發明的目的首先在于提供一種鏈孢霉殺菌劑。本發明所提供的一種鏈孢霉殺菌劑，是通過將惡臭假單胞菌種進行液體培養，所 得到的上清液。所述的鏈孢霉殺菌劑，是通過如下方法制備得到的 液體培養惡臭假單胞菌種；
菌液離心取上清液，即為殺菌劑。優選的方式為菌液離心取上清液后，再進行過濾。所述的過濾為用0. 22 μ m微孔濾膜進行過濾。所述的鏈孢霉殺菌劑，其是通過如下方法制備得到的
制備液體培養基牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，NaC 15 g，瓊脂20 g，水1000 mL, pH
7. 0-7. 2 ；
按照5%的接種量將惡臭假單胞菌種接入液體培養基，放入37°C恒溫搖床培養，轉 速120 rmp/min，振蕩培養4天；
將振蕩培養后的菌液4000 rmp/min離心15分鐘，取上清液，重復3次后，取上清 液真空過濾；
將獲得的上清液，用0.22 ym微孔濾膜過濾。優選的鏈孢霉殺菌劑是通過如下制備方法得到的
制備液體培養基牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，NaC 15 g，瓊脂20 g，水1000 mL, pH7. 0-7. 2 ；
按照5%的接種量將惡臭假單胞菌種接入液體培養基，放入37°C恒溫搖床培養，轉速 120 rmp/min，振蕩培養4天；
將振蕩培養后的菌液4000 rmp/min離心15分鐘，取上清液，重復3次后，取上清液真 空過濾；
將獲得的上清液，用10 μ m微孔濾膜過濾，45°C旋轉蒸發儀濃縮至菌液OD值為0. 1， 再用0. 22 μ m微孔濾膜過濾，4°C密封保存。本發明還提供了制備上述鏈孢霉殺菌劑的方法，該方法為 液體培養惡臭假單胞菌種；
菌液離心取上清液，即得殺菌劑。本發明所用的惡臭假單胞菌種O^e^/oMwas /^iiiZa SK_10)其來源為上海 農科院保藏菌種，編號SK-10。本發明所提供的鏈孢霉殺菌劑具有具有殺菌效果好、安全等特點。既能有效防治 鏈孢霉污染，又對環境無污染，同時制備簡單、使用方便，可以達到生物防治鏈孢霉的目的。
具體實施例方式實施例1制備鏈孢霉殺菌劑1并檢測殺菌活性
制備液體培養基牛肉膏3 g，蛋白胨10 g, NaC15 g，瓊脂20 g，水1000 mL, pH 7. 0-7. 2 ；按照5%的接種量將惡臭假單胞菌種接入液體培養基，放入37°C恒溫搖床培養，轉 速120rmp/min，振蕩培養4天；將振蕩培養后的菌液4000 rmp/min離心15分鐘，取上清液， 重復3次后，取上清液真空過濾，作為殺菌劑1。4°C密封保存。將殺菌劑1劃線于90mm LB平皿離中心2cm的兩側，于中心分別接種白色鏈孢霉 菌盤和紅色鏈孢霉菌盤，于28°C培養3天，觀察鏈孢霉生長情況，并與空白對照比較。實施例2制備鏈孢霉殺菌劑2并檢測其殺菌活性
將實施例1制備的鏈孢霉殺菌劑1用0. 22 μ m微孔濾膜過濾，4°C密封保存，作為殺菌 劑2。IOOml PDA溶解后加Ilml的殺菌劑2( 10%);每IOOmlPDA倒六皿，分別接種紅色鏈 孢霉、白色鏈孢霉、空白對照；無任何處理PDA平皿接種紅色鏈孢霉(R)和白色鏈孢霉(W)。實施例3制備鏈孢霉殺菌劑3并檢測其殺菌活性
將實施例1制備的鏈孢霉殺菌劑1用10 μ m微孔濾膜過濾，45°C旋轉蒸發儀濃縮至菌 液OD值為0. 1，用0. 22 μ m微孔濾膜過濾，4°C密封保存，作為殺菌劑3。80ml PDA溶解后加20ml的殺菌劑3 (20%);每IOOmlPDA倒六皿，分別接種紅色鏈 孢霉、白色鏈孢霉、空白對照；無任何處理PDA平皿接種紅色鏈孢霉(R)和白色鏈孢霉(W)。實施例1、實施例2和實施例3的殺菌劑均可有效的殺滅鏈孢霉，其對紅色鏈孢霉 和白色鏈孢霉的殺菌率如下表所示。
權利要求
一種鏈孢霉殺菌劑，其特征在于其是通過將惡臭假單胞菌種進行液體培養，所得到的上清液。
2.根據權利要求1所述的鏈孢霉殺菌劑，其特征在于是通過如下方法制備得到的液體培養惡臭假單胞菌種；菌液離心取上清液，即為殺菌劑。
3.根據權利要求2所述的鏈孢霉殺菌劑，其特征在于菌液離心取上清液后，進行過濾。
4.根據權利要求3所述的鏈孢霉殺菌劑，其特征在于所述的過濾為用0.22 u m微孔濾 膜進行過濾。
5.根據權利要求1-4任一項所述的鏈孢霉殺菌劑，其特征在于其是通過如下方法制備 得到的制備液體培養基牛肉膏3 g，蛋白胨10 g, NaCl 5 g，瓊脂20 g，水1000 mL, pH 7. 0-7. 2 ；按照5%的接種量將惡臭假單胞菌種接入液體培養基，放入37°C恒溫搖床培養，轉速 120 rmp/min，振蕩培養4天；將振蕩培養后的菌液4000 rmp/min離心15分鐘，取上清液，重復3次后，取上清液真 空過濾；將獲得的上清液，用0.22 ym微孔濾膜過濾。
6.根據權利要求1-4任一項所述的鏈孢霉殺菌劑，其特征在于其是通過如下方法制備 得到的制備液體培養基牛肉膏3 g，蛋白胨10 g, NaCl 5 g，瓊脂20 g，水1000 mL, pH 7. 0-7. 2 ；按照5%的接種量將惡臭假單胞菌種接入液體培養基，放入37°C恒溫搖床培養，轉速 120 rmp/min，振蕩培養4天；將振蕩培養后的菌液4000 rmp/min離心15分鐘，取上清液，重復3次后，取上清液真 空過濾；將獲得的上清液，用m微孔濾膜過濾，45°C旋轉蒸發儀濃縮至菌液0D值為0. 1，再 用0. 22 y m微孔濾膜過濾，4°C密封保存。
7.一種制備權利要求1-6任一項所述鏈孢霉殺菌劑的方法，其特征在于該方法為 液體培養惡臭假單胞菌種；菌液離心取上清液，即得殺菌劑。
全文摘要
本發明公開了一種鏈孢霉殺菌劑，該鏈孢霉殺菌劑是通過液體培養惡臭假單胞菌種，菌液離心取上清液得到。本發明的鏈孢霉殺菌劑具有殺菌效果好、安全等特點。
文檔編號A01N63/02GK101940223SQ201010294919
公開日2011年1月12日 申請日期2010年9月28日 優先權日2010年9月28日
發明者于海龍, 周峰, 李玉, 林娓娓, 王瑞娟, 郭倩 申請人:上海市農業科學院;上海國森生物科技有限公司