專利名稱：一種飼養煙粉虱成蟲進行毒力測定的方法
技術領域：
本發明涉及昆蟲飼養技術領域，尤其涉及一種用于生物測定的煙粉虱成蟲飼養方法。
背景技術：
Bemisia tabaci (Gennadius) M^lMS HomopteraAleyrodidae, 原產于北非和中東地區，是熱帶、亞熱帶保護地及大田作物的主要害蟲之一(Brown等， 1995)。煙粉虱主要通過吸食植物汁液、分泌蜜露招致霉菌污染葉面影響光合作用、傳播植 物病毒和誘導作物產生非正常生理反應等為害植物的正常生長(Davidson等，2000)，其中 其誘發植物病毒病所造成的危害比其它危害要嚴重得多(馮蘭香等，2001)，受其危害所造 成的糧食和經濟作物損失可達30-100% (Brown, 1994)。截至2005年，世界范圍內共描述至少有沈種煙粉虱生物型，而我國至少存在6種 煙粉虱生物型(B、Q、ZHJ-I、ZHJ-2、ZHJ-3和FJ-1) (Wan等，2009)。目前，保守估計浙江省 每年因煙粉虱危害造成的損失達2億元，而且煙粉虱在浙江一帶還有進一步加重為害與擴 散蔓延的趨勢，對蔬菜、花卉和棉花等作物生產構成嚴重威脅(萬方浩等，2009)。化學防治 因具有防治效果顯著、殺蟲范圍廣和便于使用等優點，仍然是目前控制煙粉虱的主要手段。 煙粉虱化學防治技術研究必然離不開要對其進行毒力測定，而瓊脂保濕浸葉法是目前國內 外普遍采用的一種煙粉虱成蟲毒力測定的方法(Nauen等，1996 ；劉燕等，2010 ；文吉輝等， 2008 ；宋曉宇等，2006)。然而，將瓊脂保濕浸葉法應用在花卉、蔬菜和經濟等作物上時，往 往會產生以下問題例如將葉片剪成圓形葉盤并直接貼放在瓊脂面上后，既容易導致瓊脂 的發霉0天)、又容易造成葉面葉肉的損傷及枯萎天)、且煙粉虱成蟲也容易粘著在 瓊脂上導致死亡而影響測定的正確性等。因此，尋找一種能夠較真實模擬葉片生長時的狀 態、既能適應煙粉虱成蟲在自然狀態下的飛行活動習性，又能延長完整葉片的保鮮時間，且 能降低瓊脂污染率及提高試蟲安全性的煙粉虱成蟲的飼養方法，是本技術領域迫切希望解 決的問題。關于其中應用合成培養基和插葉保鮮飼養煙粉虱成蟲的方法尚未見有報道。
發明內容
本發明目的是，針對傳統瓊脂保濕浸葉法所存在的瓊脂容易發霉、葉片剪成圓形 葉盤后容易造成葉肉損傷及枯萎、煙粉虱粘著在瓊脂上的概率較大等缺陷，提供一種較能 真實模擬葉片生長時的狀況、能延長葉片保鮮期、降低瓊脂污染率及提高試蟲安全性的煙 粉虱成蟲的飼養方法，使試蟲能達到標準化，保證實驗結果的可靠性。本發明目的通過以下技術方案得以實現。一種飼養煙粉虱成蟲進行毒力測定的方法，該方法按以下步驟進行(1)合成培養基的配制與滅菌配制濃度為14_16g/L的瓊脂溶液500mL后，再加 入 25-30mL 由 NH4N0320_25mg/L、KN03l_;3mg/L、MgSO4 · 7H20 l-3mg/L, KH2PO4 l_3mg/L、無水 CaCl2l-3mg/L并用水補足至1升的營養液，攪拌均勻即成合成培養基；將該合成培養基高3壓滅菌后，在超凈工作臺上將其分別倒入長度X直徑X厚度為30mmX25mmXl. 5mm的滅 菌平底玻璃試管內，冷卻后將該批玻璃試管放入滅菌、干燥后的廣口玻璃瓶內，廣口瓶用無 菌塑料紙封口后，備用；(2)葉片的藥劑處理、葉柄消毒及插置剪取試材鮮嫩葉片并保留葉柄長 30-40mm;葉片按試驗設計進行藥劑處理后，將葉柄浸泡入50%多菌靈可濕性粉劑 500-1000倍稀釋液中10-20s進行消毒；用鑷子在步驟(1)每一玻璃試管的合成培養基內， 按葉面向上將葉柄斜插入，以保持葉片在植株上的生長狀況；(3)煙粉虱成蟲的吸取及釋放使用由橡膠管、玻璃管和隔蟲紗布組成的簡易吸 蟲器，吸取在人工氣候箱內用相應試材植株飼養的羽化12-24h的煙粉虱成蟲10-15頭后， 將吸蟲器的吸口對準步驟(2)廣口玻璃瓶內的葉面上，一次性吹入后，迅速用滅菌塑料紙 封口、扎緊，并用解剖針扎數孔；(4)飼養及觀察將步驟(3)玻璃瓶放入人工氣候箱內，在光周期14:10，溫度 27°C，濕度70%條件下，分別飼養lh、24h、4 i、7ai后觀察、記載瓶內煙粉虱的存活率，同時 每天觀察葉片保鮮及合成培養基的發霉情況，連續觀察10天。所述的葉片按試驗設計進行的藥劑處理，為用10%吡蟲啉可濕性粉劑1000-3000 倍稀釋液進行的處理。本發明的有益效果(1)本發明提出的應用合成培養基插整葉保鮮、飼養煙粉虱成蟲的方法，基本實現 了葉片在植株上生長狀態的模擬，經滅菌的合成培養基輔以消毒后扦插的完整葉片能延長 葉片的新鮮度(第5天開始才有葉片卷曲)，并使培養基不易發霉(第6天開始培養基才有 發霉)，從而能在常規藥劑毒力測定的72小時內保證了對照煙粉虱成蟲的正常存活，達到 了實驗試蟲的標準化要求；(2)本發明通過使用小表面積的平底玻璃試管(長度X直徑X厚度為 30mmX25mmXl. 5mm)作為合成培養基的容器與扦插葉片的支架，能有效避免以往因煙粉虱 粘著在瓊脂上而導致的死亡，并且還能節省瓊脂的用量；(3)本發明在瓊脂中加入了由NH4NO3、KNO3、MgSO4 · 7H20、KH2PO4、無水CaCl2及水組 成的營養液后，既增加了合成培養基的營養成分，有利延長葉片的保鮮期，也提高了培養基 的粘著力，能方便試材葉柄的插入、固定傾斜角度、且不開裂；(4)本方法從第6天開始才有培養基發霉現象、第5天開始才有葉片卷曲(見表 1)，充分保證7 之內對照煙粉虱的正常存活，也顯著避免了煙粉虱成蟲如粘著于培養基 而導致的非毒力死亡(見表幻，使實驗數據更具可靠性；(5)本發明方法能廣泛適用于花卉、蔬菜和經濟作物等有柄植物對煙粉虱成蟲的 生物毒力測定。
具體實施例方式以下通過實施例對本發明方法作進一步的詳細描述，但應該理解本發明并不受這 些內容所限制。實施例1 ( 一品紅飼養煙粉虱成蟲進行毒力測定的方法)(1)合成培養基的配制與滅菌稱量7g瓊脂加熱、攪拌溶解在500mL蒸餾水中，配制成瓊脂溶液；再加入 25HiL 由 NH4NO32Omg/!、KN03;3mg/L、MgSO4.7H2O2Hig/!、KH2P04ang/L、無 水CaCl2lmg/L并用水補足至1升的營養液，攪拌均勻即成合成培養基；將該合成培養基在 121°C，進行15-20分鐘高壓滅菌后，在超凈工作臺上將其分別倒入長度X直徑X厚度為 30mmX25mmXl. 5mm的滅菌平底玻璃試管內，冷卻后將該玻璃試管放入滅菌、干燥后的廣口 玻璃瓶內，并用無菌塑料紙封口后，備用；(2)葉片的藥劑處理、葉柄消毒及插置剪取試材一品紅(Euphorbia pulcherrima)鮮嫩葉片并保留其葉柄長30-40mm ；葉片按試驗設計用10%吡蟲啉可濕性粉 劑1000倍稀釋液進行處理后、陰干，再將該葉柄浸泡入50%多菌靈可濕性粉劑500倍稀釋 液中10-20S進行消毒；用鑷子在步驟(1)每一平底玻璃試管的合成培養基內，按葉面向上 將葉柄斜插入，以保持該葉片在原植株上的生長狀態；(3)煙粉虱成蟲的吸取及釋放將玻璃管的末端罩一層紗布后插入橡膠管的前 端，即組成簡易的吸蟲器；使用時，在人工氣候箱內，將橡膠管的后端含入操作人員的口中， 以吸蟲器的玻璃管前端為吸口，對準飼養在一品紅植株上羽化12-24h的煙粉虱成蟲，吸入 10-15頭后，再將該吸蟲器的吸口移至步驟O)的玻璃瓶內，對準瓶內葉面一次性地將玻璃 管內的成蟲吹入后，迅速用滅菌塑料紙封口、扎緊，并用解剖針扎數孔以保持通氣；(4)飼養及觀察將步驟(3)吹入成蟲后的玻璃瓶放入人工氣候箱內，在光周期 14 10，溫度27 °C，濕度70 %條件下，分別飼養Ih、24h、幼h、7 后觀察、記載、統計瓶內煙粉 虱的存活率，同時每天觀察瓶內一品紅葉片的保鮮及合成培養基的發霉情況，連續觀察10 天(見表1、表2)。實施例2 (茄子飼養煙粉虱成蟲進行毒力測定的方法)本例中，步驟(1)合成培養基的配制為稱量7. 5g瓊脂溶解在500mL蒸餾水中，配 制成瓊脂溶液；再加入 27· 5mL 由 NH4NO322. 5mg/L,KN032mg/L,MgSO4 ·7Η20 lmg/L、KH2POJmg/ L、無水CaCl22mg/L并用水補足至1升的營養液，攪拌均勻即成合成培養基；步驟(2)葉片 的藥劑處理、葉柄消毒及插置剪取試材茄子葉片用10%吡蟲啉可濕性粉劑2000倍稀釋液 進行處理后、陰干，將該葉柄浸泡入50%多菌靈可濕性粉劑800倍稀釋液中10-20s進行消 毒；其余的步驟、工藝同于實施例1。實施例3 (棉花飼養煙粉虱成蟲進行毒力測定的方法)本例中，步驟(1)合成培養基的配制為稱量8g瓊脂溶解在500mL蒸餾水中，配制 成瓊脂溶液；再加入 30mL 由 NH4N0325mg/L、KN03lmg/L、MgSO4 · 7H203mg/L, KH2P04lmg/L、無 水CaCl23mg/L并用水補足至1升的營養液，攪拌均勻即成合成培養基；步驟O)葉片的藥 劑處理、葉柄消毒及插置剪取試材棉花葉片用10%吡蟲啉可濕性粉劑3000倍稀釋液進行 處理后、陰干，將該葉柄浸泡入50%多菌靈可濕性粉劑1000倍稀釋液中10-20s進行消毒； 其余的步驟、工藝同于實施例1。表1合成培養基發霉及葉片保鮮情況
權利要求
1.一種飼養煙粉虱成蟲進行毒力測定的方法，其特征在于按以下步驟進行(1)合成培養基的配制與滅菌配制濃度為14-16g/L的瓊脂溶液500mL后，再加入 25-30mL 由 NH4N0320_25mg/L、KN03l-3mg/L, MgSO4 · 7H20 l_3mg/L、KH2PO4l-3mg/L,無水 CaCl2l-3mg/L并用水補足至1升的營養液，攪拌均勻即成合成培養基；將該合成培養基高 壓滅菌后，在超凈工作臺上將其分別倒入長度X直徑X厚度為30mmX25mmXl. 5mm的滅 菌平底玻璃試管內，冷卻后將該玻璃試管放入滅菌、干燥后的廣口玻璃瓶內，廣口瓶用無菌 塑料紙封口后，備用；(2)葉片的藥劑處理、葉柄消毒及插置剪取試材鮮嫩葉片并保留葉柄長30-40mm；葉 片按試驗設計進行藥劑處理后，將葉柄浸泡入50%多菌靈可濕性粉劑500-1000倍稀釋液 中10-20S進行消毒；用鑷子在步驟(1)每一玻璃試管的合成培養基內，按葉面向上將葉柄 斜插入，以保持葉片在植株上的生長狀況；(3)煙粉虱成蟲的吸取及釋放使用由橡膠管、玻璃管和隔蟲紗布組成的簡易吸蟲器， 吸取在人工氣候箱內用相應試材植株飼養的羽化12-24h的煙粉虱成蟲10-15頭后，將吸蟲 器的吸口對準步驟( 玻璃瓶內的葉面上，一次性吹入后，迅速用滅菌塑料紙封口、扎緊， 用解剖針扎數孔；(4)飼養及觀察將步驟C3)玻璃瓶放入人工氣候箱內，在光周期14:10，溫度271，濕 度70%條件下，分別飼養lh、24h、4au7a!后觀察、記載瓶內煙粉虱的存活率，同時每天觀 察葉片保鮮及合成培養基的發霉情況，連續觀察10天。
2.按權利要求1所述的方法，其特征在于所述的葉片按試驗設計進行的藥劑處理，為 用10%吡蟲啉可濕性粉劑1000-3000倍稀釋液進行的處理。
全文摘要
本發明公開了一種飼養煙粉虱成蟲進行毒力測定的方法，屬于昆蟲飼養技術領域。方法包括(1)合成培養基的配制與滅菌；(2)葉片的藥劑處理、葉柄消毒及插置；(3)煙粉虱成蟲的吸取及釋放；(4)飼養及觀察等步驟。較能真實地模擬葉片在植株上生長時的狀況，能延長葉片的新鮮度，培養基不易發霉，有效避免煙粉虱試蟲的非毒力死亡，在常規毒力測定的72小時內能保證對照煙粉虱成蟲的正常存活，達到實驗試蟲的標準化。本方法能適用于花卉、蔬菜和經濟作物飼養煙粉虱成蟲進行毒力測定的需求。
文檔編號A01K67/033GK102037933SQ20101051053
公開日2011年5月4日 申請日期2010年10月18日 優先權日2010年10月18日
發明者韋茂兔, 黃 俊 申請人:浙江省蕭山棉麻研究所