專利名稱：試管藕誘導技術的制作方法
技術領域：
本發明涉及屬于農業生物技術領域，具體地說是一種試管藕誘導技術。
背景技術：
我國是蓮藕的起源中心之一。蓮藕在我國分布及栽培極為廣泛，是我國栽培面積 最大的水生蔬菜，黃河流域及其以南地區種植十分普遍。隨著農村產業結構的調整，藕種需 求量急劇增加，但由于蓮藕是以無性繁殖為主的作物，繁殖系數較低(1 10)，優新藕種繁 殖速度遠遠不能滿足市場需求，而且常規藕種存在用種量大、運輸費用高、損耗較大、易帶 病等問題，使得蓮藕產業發展受到一定的限制。因此，進行試管藕的生產是解決上述問題的 有效途徑之一。現階段蓮藕的組織培養研究工作主要由國內研究人員進行，而國外對其研 究較少。從20世紀80年代起，我國中科院武漢植物所、江蘇農學院、廣西大學等科研單位 和高等院校先后開展了一些研究工作，但只得到蓮藕試管苗，移栽成活率低，栽培技術要求 高，不能直接應用于實際生產。試管藕誘導新技術的發明及其應用，解決了常規藕種和蓮藕 試管苗存在的種種問題，具有顯著的優勢和社會經濟效益，表現在第一，試管藕通過蓮藕 莖尖組培快繁而來，繁殖速度快，可工廠化生產，解決了常規種藕繁殖系數低的問題，可以 大大加快優新品種的繁殖和推廣；第二，試管藕藕體積小，解決了常規藕種用種量大、運輸 費用高的問題；第三，試管藕不帶病，解決了常規藕種易帶病的問題；第四，與蓮藕試管苗 相比，試管藕移栽成活率高，為蓮藕的組培技術應用于生產實際提供了更為有效的方法；第 五，通過試管藕可以直接誘導微型藕，易于栽培種植等。
發明內容
本發明克服了蓮藕常規生產上藕種繁殖困難的技術難題，在深入研究蓮藕的莖尖 培養和脫毒快繁的基礎上，提供了一種試管藕誘導技術，該方法為蓮藕的組織培養技術應 用于生產實際提供了更為有效的方法。本發明包括如下步驟1.莖尖啟動選取無病蓮藕的頂芽或側芽為外植體，外植體經清洗消毒后，用解 剖刀剝去外層葉鞘，切取莖尖接種于蓮藕莖尖啟動培養基上進行培養，培養溫度為M ^°C，光照強度為2000 25001x，每天光照10h，直至生長成單芽或叢芽。其中莖尖啟動培 養基為 1/2MS+6-BA0. 5 4. 0mg/L+NAA0. 1 0. 5mg/L+3. 0%蔗糖 + 瓊脂 0. 5 0. 6%。2.繼代增殖將單芽或叢芽轉接到繼代培養基上進行繼代增殖培養，溫度為 M ^°C，光照強度2000 25001X，每天光照IOh至產生新的叢芽。其中繼代培養基為 1/2MS+6-BA0. 5 2. 0mg/L+NAA0. 1 1. Omg/L+3. 0%蔗糖 + 瓊脂 0. 5 0. 6%。3.生根將叢芽分割成單芽，轉接到生根培養基進行誘導生根，培養溫度為M ^TC,光照強度為2000 25001x，每天光照10h，至生根形成試管苗。其中生根培養基是 1/2MS+6-BA0. 5 1. 0mg/L+IBA0. 1 1. 5mg/L+AC0. 5 1. Og/L+5. 0% 蔗糖 + 瓊脂 0. 5 0. 6%。
4.誘導試管藕采用固液混合培養基培養誘導試管藕。生根培養30d后，將液體 培養基1/2MS+6-BA0. 1 1. 0mg/L+NAA0. 1 0. 5mg/L+3. 0 12. 0%蔗糖倒入培養容器中， 在溫度為M 26°C、光照強度2000 25001x下培養，每天光照10h，誘導形成試管藕。本發明培養基全稱是MS :Murashige&Skoog(1962)培養基；6-BA :6-節氨基嘌呤；NAA 萘乙酸；IBA 吲哚丁酸；AC 活性炭。本發明通過組織培養進行試管藕的生產，它具有以下優點1.試管藕生長快，周期短，繁殖系數高。常規種藕的繁殖系數一般為1 10，一年 繁殖一代；而試管藕的繁殖系數為1 4，一年可繁殖6 8代，極大的提高了蓮藕的繁殖 速度，有利于優新蓮藕品種的推廣應用。2.試管藕體積小，重量輕，便于運輸。傳統生產上每畝需常規藕種200 300kg， 而試管藕每支重1 3g，每畝用種量0. 5 1. ^g，便于藕種的長途運輸，減少了藕種的損 耗率及運輸費用。3.試管藕不帶病，質量高。通過組培快繁得到的微型藕種不帶病，抗病能力強，同 時藕種的遺傳背景一致從而保證了藕種的純度。4.試管藕培養條件可控，可周年工廠化生產。蓮藕傳統繁殖是在自然條件下生長 繁殖，受自然氣候環境影響很大。試管藕是在人為提供的培養基及小氣候環境條件下生長 的，培養基中各種成分、環境條件的溫度、光照等，完全不受季節限制，可全年工廠化連續生 產，及時為生產提供規格整齊一致的優質無病種苗。5.與蓮藕試管苗相比，試管藕的移栽成活率更高，可達90%以上。6.試管藕可直接誘導微型藕。總之，試管藕誘導技術的發明為蓮藕產業的發展提供了一種快速、方便、有效的藕 種繁殖方法，大大滿足了蓮藕的市場需求。
具體實施例方式實施例1本發明以藕蓮品種鄂蓮五號的頂芽為外植體，經過莖尖啟動、繼代增殖、生根、誘 導形成試管藕。包括如下步驟1.莖尖啟動取清洗干凈的無病鄂蓮五號品種的頂芽，經75%酒精浸泡30秒后， 用0. 1 % HgCl2溶液浸泡3 12分鐘，再用無菌水沖洗3次，每次3 5分鐘。完成上述 表面消毒處理程序后，用解剖刀剝去外層葉鞘，切取0. 3 0. 6cm長的莖尖，接種于蓮藕莖 尖分化培養基1/2MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 5mg/L+3. 0%糖上，在溫度為M ，光照強度 2000 25001x下，每天光照10h，30 45d后產生芽或叢生芽。蓮藕莖尖分化培養基的pH 值為5. 8 6.0。2.繼代增殖將芽或叢芽轉接到繼代培養基1/2MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. 5mg/ L+3. 0%糖繼代增殖，在溫度為M ，光照強度2000 25001x下，每天光照10h，30 40d產生新的芽或叢芽。繼代培養基pH值為5. 8 6.0。3.生根將叢芽分割成單芽，轉接到生根培養基1/2MS+6-BA0. 5mg/L+IBAl. Omg/ L+AC0. 5g/L+5. 0%糖誘導生根，在溫度為M ^°C，光照度2000 25001x下，每天光照10h, 25d生根形成試管苗。生根培養基pH值為5. 8 6. 0。4.誘導試管藕生根培養30d后，將液體培養基(l/^MS+6-BAO. 1 1. Omg/ L+NAA0. 1 0. 5mg/L+3. 0 12. 0%蔗糖)倒入培養容器中，在溫度為M ^°C、光照強 度2000 25001x下培養，每天光照10h，誘導形成試管藕。30d以后誘導形成試管藕。誘 導試管藕培養基pH值為5. 8 6. 0。實施例2以子蓮品種太空3號的頂芽為外植體，經過莖尖啟動、繼代增殖、生根、誘導形成 試管藕。包括如下步驟1.莖尖啟動以太空3號為試驗材料，取清洗干凈的無病太空3號頂芽，經75%酒 精浸泡30秒后，用0. 1 % HgCl2溶液浸泡3 12分鐘，再用無菌水沖洗3次，每次3 5分 鐘。完成上述表面消毒處理程序后，用解剖刀剝去外層葉鞘，切取0. 3 0. 6cm長的莖尖， 接種于蓮藕莖尖分化培養基1/2MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 5mg/L+3. 0 %糖上，在溫度為M ^°C，光照強度2000 25001x下，每天光照10h，30 45d后產生芽或叢生芽。蓮藕莖尖 分化培養基的pH值為5. 8 6. 0。2.繼代增殖將芽或叢芽轉接到繼代培養基1/2MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. 5mg/ L+3. 0%糖繼代增殖，在溫度為M ，光照強度2000 25001x下，每天光照10h，30 40d產生新的芽或叢芽。繼代培養基pH值為5. 8 6.0。3.生根將叢芽分割成單芽，轉接到生根培養基1/2MS+6-BA0. 5mg/L+IBAl. Omg/ L+AC0. 5g/L+5. 0%糖誘導生根，在溫度為M ^°C，光照度2000 25001x下，每天光照 10h，25d生根形成試管苗。生根培養基pH值為5. 8 6.0，4.誘導試管藕生根培養30d 后，將液體培養基(1/2MS+6-BA0. 1 1. 0mg/L+NAA0. 1 0. 5mg/L+3. 0 12. 0%蔗糖)倒 入培養容器中，在溫度為24 ^°C、光照強度2000 25001x下培養，每天光照10h，誘導 形成試管藕。30d以后誘導形成試管藕。誘導試管藕培養基pH值為5. 8 6.0。
權利要求
1.一種試管藕誘導技術，它包括如下步驟(1)、莖尖啟動選取無病蓮藕的頂芽或側芽為外植體，剝去外層葉鞘，切取莖尖接 種于蓮藕莖尖啟動培養基上進行培養，直至生長成單芽或叢芽，其中莖尖啟動培養基為 1/2MS+6-BA0. 5 4. 0mg/L+NAA0. 1 0. 5mg/L+3. 0% 蔗糖 + 瓊脂 0. 5 0. 6% ；(2)、繼代增殖將單芽或叢芽轉接到繼代培養基上進行繼代增殖培養，直至產生新的 叢芽，其中繼代培養基為1/2MS+6-BA0. 5 2. 0mg/L+NAA0. 1 1. Omg/L+3. 0%蔗糖+瓊脂 0. 5 0. 6% ；(3)、生根將叢芽分割成單芽，轉接到生根培養基上誘導生根，直至生根形成試管苗， 其中生根培養基為 1/2MS+6-BA0. 5 1. 0mg/L+IBA0. 1 1. 5mg/L+AC0. 5 1. Og/L+5. 0% 蔗糖+瓊脂0.5 0.6% ；、誘導試管藕生根培養30d后，將液體培養基1/2MS+6-BA0. 1 1. Omg/ L+NAA0. 1 0. 5mg/L+3. 0 12. 0%蔗糖倒入培養容器中，誘導形成試管藕。
2.根據權利要求1所述的試管藕誘導技術，其特征在于各階段培養基的PH值為 5. 8 6. 0，培養溫度為M ^°C，光照強度為2000 25001x，每天光照時間為10h。
3.根據權利要求1所述的試管藕誘導技術，其特征在于采用固液混合培養基培養誘 導試管藕。
全文摘要
本發明涉及一種蓮試管藕誘導技術，包括以蓮藕的頂芽或側芽為外植體，經過莖尖啟動、繼代增殖、生根、最后采用固-液培養基培養誘導形成試管藕。所述的誘導試管藕步驟為切取蓮藕莖尖接種于莖尖啟動培養基上培養，使其生長成芽或叢芽。將芽或叢芽轉接到繼代培養基上進行繼代增殖，并將叢芽分割成單芽，轉接到生根培養基上誘導生根，形成試管苗。生根培養30d后，將液體培養基倒入培養容器中，誘導形成試管藕。以上過程培養溫度為24～26℃、光照強度為2000～2500lx，每天光照10h。通過蓮藕的莖尖培養和快速繁殖，誘導形成試管藕，加快了蓮藕的繁殖速度，提高了移栽成活率，可工廠化生產。
文檔編號A01H4/00GK102067818SQ20101055297
公開日2011年5月25日 申請日期2010年11月19日 優先權日2010年11月19日
發明者劉義滿, 劉玉平, 葉元英, 彭靜, 朱紅蓮, 李雙梅, 李峰, 李明華, 柯衛東, 趙春, 黃新芳, 黃來春 申請人:武漢市蔬菜科學研究所