專利名稱：一種抗腫瘤蠅幼蟲的培養方法
技術領域：
本發明涉及一種蠅幼蟲的培養方法，尤其涉及一種抗腫瘤蠅幼蟲的培養方法。
背景技術：
大頭金蠅(Chrysomyia megacephala)，別名紅頭蒼蠅，是節肢動物門有顎亞門昆蟲綱有翅亞綱雙翅目麗蠅科金蠅亞科昆蟲的一種。它食物轉化率高，生長速度快，繁殖力高，產卵期長，其蟲體的蛋白質含量高，飼養條件和養殖設備相對簡單，有利于大規模生產。大頭金蠅是一種完全變態的昆蟲，生活史包括卵一幼蟲一蛹一成蠅4個階段。大頭金蠅卵為淡黃色，呈香蕉型，長度約一毫米，一克卵大約有7000粒。幼蟲呈錐形，前端尖， 后端鈍圓，有明顯的體節，體長為13 16毫米，一克幼蟲約有15條，在適宜的溫度環境下， 成熟幼蟲1 2天就可以成蛹，蛹經過5天左右，即可羽化出成蟲。成蟲體長8 11毫米， 金屬綠色，身被灰色，復眼紅色。中國專利200510060277. 4公開了一種具有抗腫瘤生物活性蠅蛆的養殖方法。包括1)大頭金蠅飼養采用全透明式蠅房，房內拉設有多根繩子供種蠅歇息，以動物蛋白、 紅糖、水果為食物，以中藥淫羊藿、加賴氨酸、蛋氨酸、維生素作為催卵素，用集卵盤子收集蠅卵；2)蠅蛆飼養采用通風的蠅蛆房，房頂用透明材料，房中裝有換氣扇和風扇，窗戶、 換氣窗與房外相通的地方用紗窗嚴實封好，蠅蛆房內設有育蛆池，育蛆池溫度控制28°C 60°C，在育蛆池內放入蠅蛆餌料，同時放入上述蠅卵。該方法使用的培養基價格昂貴，而且無法規模養殖。
發明內容
本發明提供了一種抗腫瘤蠅幼蟲的培養方法，該方法所用培養基價格低廉，而且可以規模化操作。一種抗腫瘤蠅幼蟲的培養方法，包括將大頭金蠅消毒后馴化兩代以上，制得種蠅，培養基置于培養箱內發酵3 5小時后將種蠅放入培養箱內產卵，控制培養箱內氨氣濃度為50 200ppm，卵孵化后，控制培養箱內溫度為26 35°C，氨氣濃度為500 lOOOppm，繼續培養24 120小時。所述的培養基為蛙、家禽肉、家禽內臟、家畜肉、家畜內臟和淡水魚肉中至少一種， 這些基料易獲得，成本低廉。所述培養基可以選用以下幾種配方(1)10 60%的淡水魚肉、20 70%豬內臟和10 50%的青蛙；(2)30 70%的豬內臟和30 70%的青蛙；(3) 10 50%的豬肉和10 50%淡水魚肉及10 50%雞肉；(4)20 60%的牛肉和30 70%青蛙；(5)30 70%的羊肉、10 50%淡水魚肉及20 60%豬內臟。本發明的關鍵點在于控制容器內的氨氣濃度，而氨氣濃度主要由培養基組分和培養溫度決定，溫度越高，發酵速率越大，氨氣濃度越高，上述培養的氨氣產生量也是不一樣的，因此當溫度較低時，可以選用產氨氣較多的培養基，反之，則選用產氨氣較少的培養基。 本發明所用的容器時相對封閉的，只用一個可調節大小的通氣孔，通過調節通氣孔的大小， 可以調節容器內氣體濃度。
卵孵化前，培養箱內一氧化碳濃度小于30ppm，氧氣濃度20 21ppm，二氧化碳濃度 3000 6000ppm。卵孵化后，培養箱內一氧化碳濃度小于lOppm。主要是讓幼蠅生長的更好。本發明方法通過對幼蟲培養各個階段環境中氨氣濃度和溫度的控制，使得幼蟲在發育階段各個蛋白表達發生變化，這些異常表達的蛋白具有抗腫瘤的活性，而且本發明方法所使用培養基成分簡單，操作方便，容易實現規模化養殖，具有較好的產業化前景。
具體實施例方式實施例1馴化野生大頭金蠅取自然界的大頭金蠅，為避免野生種類的帶菌傳病之嫌，經過高猛酸鉀消毒處理后，進行2 3代隔離飼養，然后在接近自然的養蠅房內養殖馴化，經過四代后，種蠅馴化完成，得到種蠅。如來年不再馴化種蠅，就需要保存種蠅。保種的方法為在9 10月份秋末時，把蠅蛹放入密封容器內，置于溫度為5 10°C的冷藏室內，在該溫度下蛹不會死亡也不會孵化，來年室外溫度上升到22°C以上時，取出放進蠅房即可孵化。培養幼蟲將20千克培養基(60%的淡水魚肉、30%豬內臟和10%的青蛙)置于培養箱內。 培養箱體積0. 14立方米，制作材料可使用金屬、塑料、木材、水泥、復合材料等，形狀為長方體或正方體，頂面設有一個可調節大小的通氣孔。當培養基開始發酵后，將種蠅放入培養箱內產卵，并控制培養箱內氨氣濃度在50 200ppm，一氧化碳濃度小于30ppm，氧氣濃度 20 21ppm，二氧化碳濃度3000 6000ppm，培養6個小時左右，卵開始孵化。接著把通氣孔孔徑減小，增加氨氣濃度至500 lOOOppm，一氧化碳濃度降低小于 lOppm，控制培養溫度為30°C，繼續培養100小時，得到幼蟲。整個過程中，不再加入新鮮的培養基，當氣體濃度超出上述范圍，則將通氣孔增大，調整到上述范圍內。后處理首先把收集的蠅幼蟲活體放置在60目尼龍篩網制成的無蓋網箱內，用清水沖洗。 30分鐘沖洗一次，連續沖洗四次以上，此方法能將幼蟲體內的污物徹底清洗干凈，真空冷凍干燥干燥至含水量10%以下，粉碎。對腫瘤細胞抑制活性所有樣品對腫瘤細胞的抑制活性均委托中科院上海藥物研究所，檢測方法采用磺酰羅丹明Bkulfordamine B. SCR)蛋白染色法，具體檢測結果如下
權利要求
1.一種抗腫瘤蠅幼蟲的培養方法，包括將大頭金蠅消毒后馴化兩代以上，制得種蠅，培養基置于培養箱內發酵3 5小時后將種蠅放入培養箱內產卵，控制培養箱內氨氣濃度為50 200ppm，卵孵化后，控制培養箱內溫度為26 35°C，氨氣濃度為500 lOOOppm，繼續培養M 120小時。
2.根據權利要求1所述的培養方法，其特征在于所述的培養基為蛙、家禽肉、家禽內臟、家畜肉、家畜內臟和淡水魚肉中至少一種。
3.根據權利要求2所述的培養方法，其特征在于所述培養基重量百分比組成為 10 60%的淡水魚肉、20 70%豬內臟和10 50%的青蛙；
4.根據權利要求2所述的培養方法，其特征在于所述培養基重量百分比組成為 30 70%的豬內臟和30 70%的青蛙。
5.根據權利要求2所述的培養方法，其特征在于所述培養基重量百分比組成為 30 70%的羊肉、10 50%淡水魚肉及20 60%豬內臟。
6.根據權利要求1所述的培養方法，其特征在于卵孵化前，培養箱內一氧化碳濃度低于30ppm，氧氣濃度20 21ppm，二氧化碳濃度3000 6000ppm。
7.根據權利要求1所述的培養方法，其特征在于卵孵化后，培養箱內一氧化碳濃度小于 IOppm0
全文摘要
本發明公開了一種抗腫瘤蠅幼蟲的培養方法，包括將大頭金蠅消毒后馴化兩代以上，制得種蠅，培養基置于培養箱內發酵3～5小時后將種蠅放入培養箱內產卵，控制培養箱內氨氣濃度為50～200ppm，卵孵化后，控制培養箱內溫度為26～35℃，氨氣濃度為500～1000ppm，繼續培養24～120小時。本發明方法通過對幼蟲培養各個階段環境中氨氣濃度和溫度的控制，使得幼蟲在發育階段各個蛋白表達發生變化，這些異常表達的蛋白具有抗腫瘤的活性，而且本發明方法所使用培養基成分簡單，操作方便，容易實現規模化養殖，具有較好的產業化前景。
文檔編號A23K1/18GK102150644SQ201010603260
公開日2011年8月17日 申請日期2010年12月23日 優先權日2010年12月23日
發明者王正華 申請人:浙江千年春生物技術有限公司