專利名稱：一種杉木無性系離體生根培養方法
技術領域：
本發明涉及杉木無性繁殖技術，具體涉及一種杉木無性系離體生根培養方法。
背景技術：
杉木(Cunninghamia lanceolata)是裸子植物杉科(Taxodiaceae)的常綠大喬木， 性喜溫暖濕潤氣候，生長迅速，樹干通直，高達30m，胸徑2. 5 3m。杉木材質輕軟、細致、紋理直，易加工；供建筑、橋梁、造船、電焊、坑木、木椿等用，并可作造紙、紡織等原料；樹皮及根、葉入藥，能祛風燥濕、收斂止血；種子含油約20%，供制肥皂。杉木是我國南方主要造林樹種和最重要的商品用材樹種，栽培歷史悠久，其造林面積和林分蓄積均居我國人工林的首位。近年來隨著經營水平的不斷提高，良種壯苗得到高度重視。南方杉木產區選育了大量杉木優良無性系，并利用組織培養快繁技術對這些優良無性系進行了無性育苗造林，取得了顯著的增產效果。但由于不同杉木優良無性系在生根性狀遺傳和生理基礎的差異性，導致不同杉木無性系在同一組培配方條件下成功率和有效率方面存在很大的差異，極大地影響了優良杉木無性系組培苗培育以及推廣應用。
發明內容
發明目的針對現有技術中存在的不足，本發明的目的是提供一種杉木無性系離體生根培養方法，進而解決杉木不同優良無性系在組織培養條件下組培苗的生根困難問題，實現建立杉木穩定高效的組培體系，為加快杉木組培苗產業化發展提供技術支撐。技術方案為了實現上述發明目的，本發明采用的技術方案如下 一種杉木無性系離體生根培養方法，包括以下步驟
(1)選取杉木優良無性系原株的樹干的基部萌條為組織培養材料，接入繼代增殖培養基進行繼代增殖培養，誘導分化出不定芽，然后將不定芽轉入MS培養基上進行伸長培養; 繼代增殖培養基配方為3/4MS + 6BA0. 3mg · L—1 + NAAO. 02mg · L—1 +蔗糖3% ；
(2)步驟(1)的不定芽伸長到2 3cm時，轉入誘導生根培養基培養，得生根試管苗； 誘導生根培養基以1/2MS或1/4MS為基本培養基，在其中添加植物生長調節劑和2%蔗糖；植物生長調節劑為 IBA0. 05 0. 4mg · Γ1、NAAO. 05 0. 4mg · Γ1、ΙΑΑΟ. Γ . Omg · L、或 IBAO. 05 0· 4mg · Γ1 與 NAAO. 05 0· 4mg · Γ1 的混合；
(3)移栽生根試管苗，選用黃土、泥炭土3 1比例混合后用作移栽基質。優選步驟(2)中，誘導生根培養基為1/2MS，植物生長調節劑為 ΙΒΑΟ. Γ0. 4mg · L-1 或 NAAO. Γθ. 2mg · Γ1。優選驟(2)中，誘導生根培養基為1/4MS，植物生長調節劑為ΙΒΑ0. Γθ. 2mg · L—1 或 NAAO. 05 0. 2mg · Γ1。優選步驟(2)中，誘導生根培養基為1/2MS，植物生長調節劑為 ΙΒΑ0. 05 0. 2mg · Γ1 與 NAAO. 05 0. 4mg · Γ1 的混合。優選步驟(2)中，誘導生根培養基為1/4MS，植物生長調節劑為ΙΒΑ0. 05 0. 2mg · Γ1 與 ΝΑΑ0. 05 0. 4mg · Γ1 的混合。優選步驟(3)中，在移栽生根試管苗前一周，將生根試管苗放入自然光照下進行煉苗，逐日松開培養瓶封口膜直至最后撤去。優選步驟(3)中，試管苗的根長度不小于1cm。優選步驟(3)中，試管苗的根長度為1 3cm。在組培過程中，試管苗生根受培養基、激素以及培養條件等多種因素的影響。一般而言，試管苗生根均需要在低鹽培養基中進行。這是由于鹽濃度變化導致培養基滲透壓變化，從而影響試管苗對營養吸收和向培養基中釋放物質。而且鹽濃度的變化也使植株體內氮濃度下降到一個適合生根的有利水平。本申請中，洋062、洋061、洋021、洋023的試管苗在1/4MS的培養基上生根效果較好，其生根率最高可分別達到93. 3%,56. 7%,70%,90%, 但洋020的試管苗在1/2MS的基本培養基上生根較好，最高生根率為100%。試管苗移栽成活率高低是鑒定發根質量和發根技術最有效的依據，本申請杉木試管苗的移栽成活率達70%以上，可說明杉木無性系離體生根培養方法所培養的杉木試管苗不定根為高質根。有益效果與現有技術中的杉木組培方法相比，本發明的杉木無性系離體生根培養方法優勢在于有效解決了杉木不同優良無性系在組織培養條件下組培苗的生根困難問題，實現建立杉木穩定高效的組培體系，生根率最高可達到100% (洋020)，為加快杉木組培苗產業化發展提供技術支撐，能夠產生很好的社會效益，具有很好的經濟前景。
圖1是洋062的生根圖； 圖2是洋020的生根圖3是洋061的生根圖； 圖4是洋021的生根圖； 圖5是洋023的生根圖； 圖6是試管苗移栽成活圖。
具體實施例方式下面結合附圖和實施例對本發明做進一步的說明。以下實施例采用南京林業大學和福建合作選育的福建洋口林場杉木優良無性系無菌苗，本申請將各樣品分別簡稱為洋062、洋020、洋061、洋023和洋021。這些材料起源于南林一福建合作開展的第二代遺傳改良計劃中選擇的優良家系中的優良個體，繁殖成無性系后進行了 10多年的無性系測定，再選擇后作為優良無性系加速繁殖。所有組織培養材料均起源于無性系原株的樹干的基部萌條。以下各實施例使用的培養條件(除特殊指明)為培養基中均附加瓊脂0.6%， pH5. 8，光照(20001x) 14h/d，培養溫度 25°C左右。實施例1芽的分化和伸長
將各組織培養材料(洋062、洋020、洋061、洋023和洋021)分別放入繼代增殖培養基中培養，誘導分化出不定芽，繼代增殖培養基配方采用3/4MS + 6BA0. 3 mg · L—1 +
4NAAO. 02mg · Γ1 +蔗糖3%。將經誘導分化的不定芽轉入無任何生長調節劑的MS培養基上進行伸長培養。實施例2誘導生根
當實施例1的各不定芽長到2 3cm時，將其轉入生根培養基培養其生根。在生根培養基中添加植物生長調節劑和蔗糖2%，觀察統計數據。數據統計指標包括不定根的誘導頻率(％)=長出不定根的不定芽數/接種不定芽數X 100% ；平均不定根數=不定根的總數 /誘導出不定根的不定芽數；不定根的形成能力(RFC) =平均不定根數X不定根的誘導頻率。在洋062培養中，生根培養基及植物生長調節劑的選取情況及其對應的實驗結果如表1所示，從表中可見，以附加NAA的培養基生根最好，當NAA濃度<0. 2mg -L"1時，生根率與NAA濃度成正相關；當NAA濃度>0. 2mg-r1時，為負相關；而當NAA濃度等于0. 2mg-r1 時，生根率最高為46.7%。附加IAA的培養基效果最差。在相同濃度的NAA水平下，1/4MS 培養基中生根率明顯高于1/2MS培養基；在相同濃度的IBA水平下，1/4MS培養基中生根率也明顯高于1/2MS培養基。其中以1/4MS附加NAAO. 2mg · Γ1培養基效果最好，生根率為 56. 7%，外植體長勢良好。 表1洋062生根培養基及植物生長調節劑的選取情況及其對應的實驗結果表
權利要求
1.一種杉木無性系離體生根培養方法，其特征在于，包括以下步驟(1)選取杉木優良無性系原株的樹干的基部萌條為組織培養材料，接入繼代增殖培養基進行繼代增殖培養，誘導分化出不定芽，然后將不定芽轉入MS培養基上進行伸長培養; 其中，繼代增殖培養基配方為3/4MS + 6BA0. 3mg · L-1 + NAAO. 02mg · L-1 +蔗糖3% ；(2)步驟(1)的不定芽伸長到2 3cm時，轉入誘導生根培養基培養，得生根試管苗； 誘導生根培養基以1/2MS或1/4MS為基本培養基，在其中添加植物生長調節劑和2%蔗糖；植物生長調節劑為 ΙΒΑ0. 05 0. 4mg · Γ1、NAAO. 05 0. 4mg · Γ1、ΙΑΑΟ. Γ . Omg · L、或 IBAO. 05 0· 4mg · Γ1 與 NAAO. 05 0· 4mg · Γ1 的混合；(3)移栽生根試管苗，選用黃土、泥炭土3 1比例混合后用作移栽基質。
2.根據權利要求1所述的杉木無性系離體生根培養方法，其特征在于步驟(2)中，誘導生根培養基為1/2MS，植物生長調節劑為ΙΒΑΟ. Γ0. 4mg · L-1或NAAO. Γθ. 2mg · L-1。
3.根據權利要求1所述的杉木無性系離體生根培養方法，其特征在于步驟(2)中，誘導生根培養基為1/4MS，植物生長調節劑為ΙΒΑ0. Γ0. 2mg · L—1或NAAO. 05 0. 2mg · L—1。
4.根據權利要求1所述的杉木無性系離體生根培養方法，其特征在于步驟(2)中，誘導生根培養基為1/2MS，植物生長調節劑為ΙΒΑ0. 05 0. 2mg · L-1與ΝΑΑ0. 05 0. 4mg · L-1的混合ο
5.根據權利要求1所述的杉木無性系離體生根培養方法，其特征在于步驟(2)中，誘導生根培養基為1/4MS，植物生長調節劑為ΙΒΑ0. 05 0. 2mg · L-1與ΝΑΑ0. 05 0. 4mg · L-1的混合ο
6.根據權利要求1所述的杉木無性系離體生根培養方法，其特征在于步驟(3)中，在移栽生根試管苗前一周，將生根試管苗放入自然光照下進行煉苗，逐日松開培養瓶封口膜直至最后撤去。
7.根據權利要求1所述的杉木無性系離體生根培養方法，其特征在于步驟(3)中，試管苗的根長度不小于1cm。
8.根據權利要求1或7所述的杉木無性系離體生根培養方法，其特征在于步驟(3) 中，試管苗的根長度為1 3cm。
全文摘要
本發明公開了一種杉木無性系離體生根培養方法，該方法包括以下步驟選取杉木優良無性系原株的樹干的基部萌條為組織培養材料，接入繼代增殖培養基進行繼代增殖培養，誘導分化出不定芽，然后將不定芽轉入MS培養基上進行伸長培養；不定芽長到2～3cm時，轉入誘導生根培養基培養，得生根試管苗；移栽生根試管苗，選用黃土、泥炭土31比例混合后用作移栽基質。與現有技術中的杉木組培方法相比，本發明的杉木無性系離體生根培養方法優勢在于有效解決了杉木不同優良無性系在組織培養條件下組培苗的生根困難問題，實現建立杉木穩定高效的組培體系，生根率最高可達到100％(洋020)，為加快杉木組培苗產業化發展提供技術支撐。
文檔編號A01H4/00GK102217539SQ201110129388
公開日2011年10月19日 申請日期2011年5月19日 優先權日2011年5月19日
發明者施季森, 程強, 鄭仁華, 陳金慧 申請人:南京林業大學