專利名稱：一種優質抗螨蜜蜂蜂種的選育方法
技術領域：
本發明屬于蜜蜂育種領域，涉及一種優質抗螨蜜蜂蜂種的選育方法。
背景技術：
蜂螨是蜜蜂最主要的寄生病蟲害之一，它靠吸吮蜜蜂幼蟲、蜜蜂蛹以及成年蜂的體液為食。受蜂螨危害的蜂群，蜂群群勢迅速削弱，幼蟲早期死亡，出房的蜜蜂無翅或翅不全，使蜂群中蜜蜂數量下降，采集蜂也逐漸減少，從而導致蜂群生產力、生命力同時下降。又由于蜂螨的繁殖率極高，在普遍的蜂群中形成了惡性的生物斷鏈循環，可以導致蜂群的最后滅亡。全球中90%以上意蜂均有不同程度的蜂螨病。為了及時控制和治療蜂螨，幾十年來，養蜂從業人員大都采用藥物防治，但藥物防治有如下危害(1)蜂螨對治螨藥物易產生抗性，降低了蜜蜂群體質量，同時導致其他蜂病如爬蜂病等相繼出現；(2)藥物治螨只能把蜂螨控制在低水平，養蜂者必須每年用藥物治螨2-3 次，不僅需要資金，還浪費勞動力和時間；(3)藥物治螨容易對蜂產品的造成污染，特別引起國際市場對我國蜂產品藥物殘留的過度關注，導致增加了貿易壁壘和技術壁壘。中華蜜蜂是蜂螨的原始寄主，對蜂螨有較強的抗性。利用營養雜交技術結合常規的育種方法來選育優質抗螨蜂種是從根本上解決蜂螨危害的有效途徑。
發明內容
本發明主要解決的技術問題是針對上述藥物不能從根本上解決蜂螨問題，提供一種利用營養雜交、配子選育、人工受精、自然交尾配套育種技術來選育優質高產抗螨蜂種方法。本發明的技術方案是通過配子選育技術與人工受精技術定向選育高產蜂王漿的意大利蜜蜂和抗螨性強的中華蜜蜂。利用中蜂與意蜂營養雜交技術和自然交尾方法培育意蜂蜂王。雜交數代后， 培育出優質抗螨意蜂蜂種。再通過蜜蜂育種常規指標檢測技術、現代分子生物學技術和生化檢測技術等來選育一個抗螨的意蜂新品種。具體步驟是a)育種素材的選定根據蜜蜂生物學與遺傳育種特性的要求，按照抗螨性(工蜂自然蜂螨寄居率< 10% )、生產力(蜂王漿年產量> 8. 10kg、蜂蜜年產量> 96. 15kg、商品蜂花粉年> 4. 56kg)、生命力(蜜蜂抗氧化能力SOD活性> 35. 76U/ml)等系列指標，我們篩選出蜂王漿產量較高的“江山2號”意蜂和產蜜性能優越(年產蜜量> IlOkg)的法國純種意蜂以及抗螨性能優越的健康(無各類蜜蜂疾病，并且蜜蜂抗氧化能力SOD活性> 37. 30U/ ml)本地中華蜜蜂蜂種為引種對象。b)抗螨蜂種的選育先利用配子選育原理(即通過雄蜂的精子活力與畸形率檢測，選出最優雄蜂)從江山2號中選育出種用雄蜂，然后遵照蜜蜂生物學與遺傳育種特性 (檢測對蜂王的初生重、卵巢管數、體長與體寬指標進行對比，選出最優處女王。)的要求選育出江山2號處女蜂王，與選育出的種用雄蜂進行人工受精雜交，形成生產性能、抗病性能較強的江山2號蜂種作為父本。以從法國引進的產蜜性能優越的純種意蜂為母本。選擇抗螨性(工蜂自然蜂螨寄居率< )能較強的健康中蜂，采集其新鮮蜂王漿，-20°C保存c)從春繁開始，每隔7天檢查割除法國意蜂雄蜂蛹，直至育種結束。制作蠟質意蜂王臺放入中蜂群清理12h。移中蜂幼蟲，產漿3天后，在不破壞王漿的情況下去除中蜂幼蟲， 移入法國意蜂一日齡幼蟲。放入中蜂群繼續哺育10-12h后移出，放入江山2號強群(蜜蜂數量在4. 5kg以上)，每天用注射器往王臺中人工注射50ul新鮮中蜂蜂王漿，直至封蓋。營養雜交子1代蜂王出房后與江山2號雄蜂自然交尾并產卵，組成新的蜂群，檢測其工蜂自然蜂螨寄居率。當工蜂自然蜂螨寄居率大于5%時，取營養雜交子1代一日齡幼蟲按上述育種方法培育子2代、子3代、子4代營養雜交蜂種。并每隔7天割除子1代、子2代和子3代雄蜂蛹，直至工蜂自然蜂螨寄居率小于5%為止。同理，以江山2號(引自江山健康種蜂場，) 為母本、浙大A系(引自浙江大學動物科學學院)為父本培育出“中意蜂營養雜交意蜂子1 代”，然后用同樣的方法以“營養雜交意蜂子1代”母本、“江山2號”為父本培育出“營養雜交意蜂(Fl，Fi表示第i代，下同)”。當在不用藥物防治情況下，“營養雜交意蜂”蜂群蜂螨感染率下降至5%以下時，再將“營養雜交意蜂”進行姐妹雜交進行基因固定，以此方式，每代進行姐妹雜交固定，經過4代的橫向固定和繼代繁殖，當基因不再發生變化時，即形成一個遺傳穩定的蜜蜂品系——優質抗螨高產蜂種。本發明，可以為蜂農解決蜂螨對蜂群的危害，提高蜂群的繁殖速度和蜂產品的產量禾口質量。
圖1為Nei ‘ s的UPGMA法聚類圖；圖2為育種技術流程圖；圖3為育種技術路線圖。其中A 江山2號，B:法國意蜂，C:中華蜜蜂，D 子1代，E 子4代。
具體實施例方式a)育種素材的選定根據蜜蜂生物學與遺傳育種特性的要求，按照抗螨性(工蜂自然蜂螨寄居率< 10% )、生產力(蜂王漿年產量> 8. 10kg、蜂蜜年產量> 96. 15kg、商品蜂花粉年> 4. 56kg)、生命力(蜜蜂抗氧化能力SOD活性> 35. 76U/ml)等系列指標，我們篩選出蜂王漿產量較高的“江山2號”意蜂和產蜜性能優越(年產蜜量> IlOkg)的法國純種意蜂以及抗螨性能優越的健康(無各類蜜蜂疾病，并且蜜蜂抗氧化能力SOD活性> 37. 30U/ ml)本地中華蜜蜂蜂種為引種對象。b)抗螨蜂種的選育先利用配子選育原理(即通過雄蜂的精子活力與畸形率檢測，選出最優雄蜂)從江山2號中選育出種用雄蜂，然后遵照蜜蜂生物學與遺傳育種特性 (檢測對蜂王的初生重、卵巢管數、體長與體寬指標進行對比，選出最優處女王。)的要求選育出江山2號處女蜂王，與選育出的種用雄蜂進行人工受精雜交，形成生產性能、抗病性能
4較強的江山2號蜂種作為父本。以從法國引進的產蜜性能優越的純種意蜂為母本。選擇抗螨性(工蜂自然蜂螨寄居率< )能較強的健康中蜂，采集其新鮮蜂王漿，_20°C保存備用。c)從春繁開始，每隔7天檢查割除法國意蜂雄蜂蛹，直至育種結束。制作蠟質意蜂王臺放入中蜂群清理12h。移中蜂幼蟲，產漿3天后，在不破壞王漿的情況下去除中蜂幼蟲，移入法國意蜂一日齡幼蟲。放入中蜂群繼續哺育ιο-ia!后移出，放入江山2號強群 (蜜蜂數量在4. 5kg以上)，每天用注射器往王臺中人工注射50ul新鮮中蜂蜂王漿，直至封蓋。營養雜交子1代蜂王出房后與江山2號雄蜂自然交尾并產卵，組成新的蜂群，檢測其工蜂自然蜂螨寄居率。當工蜂自然蜂螨寄居率大于5%時，取營養雜交子1代一日齡幼蟲按上述育種方法培育子2代、子3代、子4代營養雜交蜂種。并每隔7天割除子1代、子2代和子3代雄蜂蛹，直至工蜂自然蜂螨寄居率小于5%為止。同理，以江山2號(引自江山健康種蜂場，)為母本、浙大A系(引自浙江大學動物科學學院)為父本培育出“中意蜂營養雜交意蜂子1代”，然后用同樣的方法以“營養雜交意蜂子1代”母本、“江山2號”為父本培育出“營養雜交意蜂(Fl，Fi表示第i代，下同)”。當在不用藥物防治情況下，“營養雜交意蜂”蜂群蜂螨感染率下降至以下時，再將“營養雜交意蜂”進行姐妹雜交進行基因固定， 以此方式，每代進行姐妹雜交固定，經過4代的橫向固定和繼代繁殖，當基因不再發生變化時，即形成一個遺傳穩定的蜜蜂品系——優質抗螨高產蜂種。遺傳育種檢測①優質抗螨高產蜂種形態指標及初生重測定本地漿蜂、法國意蜂、本地中華蜜蜂、營養雜交F1、F2、F3和F4代的形態測定工作。通過標準方法測定指標為吻長、右前翅長度、右前翅寬度、第三腹節背板長度、肘脈指數、翅鉤數等六外部形態指標及初生重。②優質抗螨高產蜂種生化特性研究以本地漿蜂、法國意蜂、本地中華蜜蜂和營養雜交Fl、F4代工蜂為材料，應用聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦電泳技術檢測工蜂蘋果酸脫氫酶 II的基因型、基因型頻率、基因頻率、雜合度和純合度。③優質抗螨高產蜂種微衛星DNA遺傳多樣性分析以本地漿蜂、法國意蜂、本地中華蜜蜂和營養雜交Fl、F4代工蜂為實驗材料，運用微衛星DNA遺傳多樣性分析技術檢測以上蜜蜂的DNA多態性。④優質抗螨高產蜂種繁殖率、蜂螨寄生率和衛生行為測定以本地漿蜂、法國意蜂和營養雜交F1、F4代蜂群為材料，檢測各個蜂種的繁殖率，蜂螨寄生率和衛生行為。⑤優質抗螨高產蜂種抗農藥性能測定以本地漿蜂、法國意蜂和營養雜交F4代蜂群為材料，通過農藥攝入法檢測以上蜜蜂的抗農藥特性。⑥實驗蜂群生產力的測定在生產季節，定時定群記錄每組蜂群的蜂蜜及蜂王漿產量。⑦蜂蜜、蜂王漿的質量檢測用抗螨意蜂生產出來的蜂蜜、蜂王漿質量是否符合國家標準，取樣送往農業部蜂產品檢測中心進行水分、蛋白質、蔗糖、癸希酸等指標分析。通過本發明選育的蜂種與親本蜂種對比如下1、營養雜交子4代工蜂和親本蜂種形態指標對比
權利要求
1. 一種優質抗螨蜜蜂蜂種的選育方法，其特征在于包括以下步驟a)育種素材的選定根據蜜蜂生物學與遺傳育種特性的要求，按照抗螨性工蜂自然蜂螨寄居率< 10%，生產力蜂王漿年產量> 8. 10kg、蜂蜜年產量> 96. Mkg、商品蜂花粉年> 4. 56kg，生命力蜜蜂抗氧化能力SOD活性> 35. 76U/ml這些系列指標，篩選出蜂王漿產量較高的“江山2號”意蜂和年產蜜量> IlOkg的產蜜性能優越的法國純種意蜂以及抗螨性能優越的健康無各類蜜蜂疾病且蜜蜂抗氧化能力SOD活性> 37. 30U/ml的本地中華蜜蜂蜂種為引種對象；b)抗螨蜂種的選育通過雄蜂的精子活力與畸形率檢測，選出最優雄蜂的辦法，從江山2號中選育出種用雄蜂，然后檢測對蜂王的初生重、卵巢管數、體長與體寬指標，進行對比，選出最優的江山2號處女蜂王，與選育出的種用雄蜂進行人工受精雜交，形成生產性能、抗病性能較強的江山2號蜂種作為父本；以從法國引進的產蜜性能優越的純種意蜂為母本；選擇工蜂自然蜂螨寄居率< 的抗螨性能較強的健康中蜂，采集其新鮮蜂王漿，-20°C保存備用；c)從春繁開始，每隔7天檢查割除法國意蜂雄蜂蛹，直至育種結束；制作蠟質意蜂王臺放入中蜂群清理12h;移中蜂幼蟲，產漿3天后，在不破壞王漿的情況下去除中蜂幼蟲，移入法國意蜂一日齡幼蟲；放入中蜂群繼續哺育10-1 后移出，放入蜜蜂數量在4. 5kg以上的江山2號強群，每天用注射器往王臺中人工注射50ul新鮮中蜂蜂王漿，直至封蓋；營養雜交子1代蜂王出房后與江山2號雄蜂自然交尾并產卵，組成新的蜂群，檢測其工蜂自然蜂螨寄居率；當工蜂自然蜂螨寄居率大于5 %時，取營養雜交子1代一日齡幼蟲按上述育種方法培育子2代、子3代、子4代營養雜交蜂種；并每隔7天割除子1代、子2代和子3代雄蜂蛹， 直至工蜂自然蜂螨寄居率小于5%為止；同理，以引自江山健康種蜂場的江山2號為母本、 引自浙江大學動物科學學院的浙大A系為父本培育出“中意蜂營養雜交意蜂子1代”，然后用同樣的方法以“營養雜交意蜂子1代”母本、“江山2號”為父本培育出“營養雜交意蜂Fl ； 當在不用藥物防治情況下，“營養雜交意蜂”蜂群蜂螨感染率下降至5%以下時，再將“營養雜交意蜂”進行姐妹雜交進行基因固定，以此方式，每代進行姐妹雜交固定，經過4代的橫向固定和繼代繁殖，當基因不再發生變化時，即形成一個遺傳穩定的蜜蜂品系——優質抗螨高產蜂種。
全文摘要
一種優質抗螨蜜蜂蜂種的選育方法，其特征在于包括以下步驟1)育種素材的選定按照抗螨性、生產力、生命力等系列指標，篩選出蜂王漿產量較高的“江山2號”意蜂和產蜜性能優越的法國純種意蜂以及抗螨性能優越的健康本地中華蜜蜂蜂種為引種對象；2)抗螨蜂種的選育先從江山2號中選育出種用雄蜂，然后遵照蜜蜂生物學與遺傳育種特性的要求選育出江山2號處女蜂王，與選育出的種用雄蜂進行人工受精雜交，形成生產性能、抗病性能較強的江山2號蜂種作為父本；以從法國引進的產蜜性能優越的純種意蜂為母本；3)從春繁開始，每隔7天檢查割除法國意蜂雄蜂蛹，直至育種結束。本發明可以為蜂農解決蜂螨對蜂群的危害，提高蜂群的繁殖速度和蜂產品的產量和質量。
文檔編號A01K67/033GK102342264SQ20111024700
公開日2012年2月8日 申請日期2011年8月25日 優先權日2011年8月25日
發明者何旭江, 曾志將, 汪志平, 陳利華 申請人:蘭溪市鴻香生物科技有限公司