專利名稱：果實角質層的分離方法
技術領域：
本發明屬于食品加工技術領域，具體涉及果實角質層的分離方法。
背景技術：
陸生高等植物器官的表面通常覆蓋著一層脂肪性的、非細胞結構的薄膜，這層薄膜即角質層。角質層作為植物與外界環境之間的一道屏障，在植物生長發育和適應外界環境方面起重要作用。這層角質層不僅可以抵御細菌、病毒等微生物的侵襲以及其它的外界產生的不良影響，同時也對植物體本身的各種生理活動起調節作用。果實表皮外層也有角質層，它可以防止果實內水分喪失、營養滲漏、機械損傷，還可避免病原菌侵染、病蟲害侵入以及外界環境因素如風力、干旱、紫外輻射等的脅迫。對于采摘后的果實而言，在光合作用和外界物質供給停止的前提下，果皮角質層對氣體和水分的透性直接關系著果實采摘后各種生理生化變化和質量品質。此外，大量研究結果表明果實角質層生物學特性與果實的裂果關系密切，最初的角質層龜裂導致了最終的裂果。同時， 研究者還認為果皮角質層在果實抵抗環境逆境方面可能起著重要作用。鑒于上述原因，深入系統地研究果實角質層的結構、化學組成、生物合成、生理特性對提高果實采前的抵抗能力以及采后的貯藏保鮮具有重要意義，其研究成果有望直接引向對果實角質層抵抗環境逆境功能的遺傳改良。而開展這些研究工作的前提需要有形態結構完整并且組成成分和理化特性不受分離方法影響的離體角質層。然而，過去對于角質層的研究大多集中在植物葉片上，專門針對果實角質層的分離技術鮮有報道。由于葉片與果實表皮在結構、化學組成上存在很大差異，對葉片的分離技術并不適合于果實角質層的分離。如通常的植物葉片角質層的分離方法直接用來分離蘋果角質層，會發現在光學顯微鏡下觀察有明顯的表皮細胞粘附，致使角質層的形態結構不清晰。因此需要針對果實研究一種新的分離角質層的方法，使其能快速且完整的分離出角質層，使分離出的角質層形態結構清晰，減少表皮細胞的粘附。
發明內容
為了解決上述的技術問題，本發明提供了一種果實的角質層分離方法，該方法不僅能快速的將果實的角質層分離出來，而且還能很大限度的保留角質層的完整結構。本發明的一種果實的角質層分離方法，包括取果皮、酶解分離角質層、清洗角質層、保存角質層，以上所說的酶解分離角質層為雙步酶解法酶解，然后再加入酸性試劑處理；
其中所述的雙步酶解方法中，酶解液中含質量分數為1 H的果膠酶、1 H的纖維素酶，余量為PH為3. 8 4. 2、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含 ImM 的 NaN3 ；
第一步酶解條件是將果皮置于盛有酶解液的燒杯中于35 40°C下酶解，酶解時間為12 72h，酶解時，將盛有果皮和酶解液的燒杯置于振蕩器中振蕩，振蕩的轉速為80 120rmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗角質層；
第二步酶解條件是將經過第一步酶解并沖洗后得到的角質層置于盛有酶解液的燒杯中，于35 40°C下酶解，酶解時間為12 Mh ；酶解時，將盛有角質層和酶解液的燒杯置于振蕩器中振蕩，振蕩的轉速為80 120rmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗角質層；
采用酸性試劑處理的具體步驟為將經過第二步酶解并沖洗的角質層取出，加入酸性試劑；以上所述的酸性試劑為草酸與草酸銨的混合溶液或者是飽和氯酸鉀的硝酸溶液，所述的草酸濃度為4g/l，其質量分數為0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質量分數為1. 6% ；所述的飽和氯酸鉀的硝酸溶液，是將濃硝酸稀釋ι倍后，加入固體καο3溶解至飽和。優選的，一種果實的角質層分離方法，包括下述的步驟
a.準備原材料取果實的果皮，將果皮切削成直徑為1.5 2. 5cm的圓形；
b.酶解分離角質層配制酶解液，酶解液中含質量分數為1 21的果膠酶、1 21的纖維素酶，余量為pH為3. 8 4. 2、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含ImM的NaK3 ；
第一步酶解取步驟a中的圓形果皮置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 25 ml于燒杯中，在35 40°C下酶解12 72h，酶解時，啟動振蕩器并調節其轉速為80 120rmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗；
第二步酶解將經過第一步酶解并沖洗后的角質層取出置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 25 ml于燒杯中，35 40°C下酶解，酶解時間為12 Mh ；酶解時，啟動振蕩器并調節其轉速為80 120rmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗；
酸性試劑處理取經過第二步酶解并沖洗后的角質層于50ml的燒杯中，加入20 50ml酸性試劑；以上所述的酸性試劑為草酸與草酸銨混合溶液或者是飽和氯酸鉀的硝酸溶液，所述的草酸濃度為4g/l，其質量分數為0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質量分數為 1.6%;所述的飽和氯酸鉀的硝酸溶液，是將濃硝酸稀釋ι倍后，加入固體καο3溶解至飽和；
c.清洗取步驟b中酶解后的角質層用水沖洗，加入pH9.0的硼酸-硼酸鈉緩沖液清洗，直至緩沖液澄清為止；
d.保存將分離的角質層用水沖洗并晾干至其水份含量為5%以下，貯存于1 4°C的冰箱中備用。以上所述的果皮為圓形，取圓形的果皮有利于分離出平整無卷曲的角質層。酶解過程中最常見的問題之一是出現角質層卷曲或破裂現象，其原因是角質層受到外界逆向的或者劇烈的攪拌，采用IOOrmp的溫和轉速不僅能避免這個問題，還能加快酶解過程，優選的，振蕩器的轉速為lOOrmp。優選的，酸性試劑為草酸與草酸銨混合溶液，其中，草酸濃度為4g/l，其質量分數為0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質量分數為1. 6%。更優選的，一種果實的角質層分離方法，包括下述的步驟
a.準備原材料取果實的果皮，將果皮切削成直徑為2.5cm的圓形；
b.酶解分離角質層配制酶解液，酶解液為含質量分數為1.5%的果膠酶、1. 5%的纖維素酶，余量為PH為4. 0、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含ImM 的腳3 ；
第一步酶解將步驟a中的圓形果皮置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液15 ml 于燒杯中，在40°C下酶解12h，啟動振蕩器并調節其轉速為IOOrmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗；
第二步酶解將經過第一步酶解并沖洗后的角質層取出置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml于燒杯中，40°C下酶解，酶解時間為12h ；啟動振蕩器并調節其轉速為 IOOrmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗；
酸性試劑處理取經過第二步酶解并沖洗后的角質層于50ml的燒杯中，加入20ml酸性試劑；以上所述的酸性試劑為為草酸與草酸銨混合溶液或者是硝酸與飽和的氯酸鉀溶液， 所述的草酸濃度為4g/l，其質量分數為0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質量分數為1. 6% ；
c.清洗取步驟b中酶解后的角質層用水沖洗，加入pH9.0的硼酸-硼酸鈉緩沖液在超聲波下清洗，清洗的功率為100W，清洗直至緩沖液澄清為止；
d.保存將分離的角質層用水沖洗并晾干至其水份含量為5%以下，貯存于2°C的冰箱中備用。以上所述的果實為番茄、蘋果、梨、葡萄、李子、芒果中的任一種。本發明采用酶解法分離果實角質層依據是果實角質層外面是一層蠟質，里側通過果膠層同表皮細胞壁分開，而細胞壁主要由果膠、纖維素、半纖維素組成，三者分別占細胞壁多糖類的35%、20 30%和25%。采用纖維素酶和果膠酶的混合酶液對果皮進行兩次酶解來分離角質層，其作用條件溫和，分離效率高，分離的角質層清晰完全，少有表皮細胞的粘附，能夠滿足科學研究試驗對離體角質層的需求。本發明的有益效果是
(1)采用酶對果實角質層分離，其作用條件溫和，不會對角質層產生損傷；
(2)采用本發明的兩步酶解法和酸性試劑結合的方法，其分離效率高，分離的角質層清晰完全，鮮有表皮細胞的粘附，能夠滿足科學研究試驗對離體角質層的需求；
(3)酶解以后再采用酸性試劑對角質層進行處理，更進一步的使角質層上粘附的表皮細胞脫落下來，從而使角質層分離得更徹底更完全；
(4)采用本發明的方法分離出來的角質層外觀平整的、形態結構完整，從而為進一步開展果實角質層的科學研究提供可靠的材料來源。
圖1為實施例1番茄離體角質層在顯微鏡下觀察的圖片； 圖2為對照例1番茄離體角質層在顯微鏡下觀察的圖片；
圖3為對照例2番茄離體角質層在顯微鏡下觀察的圖片； 圖4為實施例1番茄離體角質層表面立體結構圖； 圖5為對照例1番茄離體角質層表面立體結構圖； 圖6為對照例2番茄離體角質層表面立體結構圖； 圖7為實施例2蘋果離體角質層在顯微鏡下觀察的圖片； 圖8為實施例3梨離體角質層在顯微鏡下觀察的圖片；圖9為實施例4葡萄離體角質層在顯微鏡下觀察的圖片； 圖10為實施例5李子離體角質層在顯微鏡下觀察的圖片； 圖11為實施例6芒果離體角質層在顯微鏡下觀察的圖片； 圖12為實施例7芒果離體角質層在顯微鏡下觀察的圖片。
具體實施例方式下面結合附圖和具體實施例來對本發明作更進一步的說明，以便本領域的技術人員更了解本發明，但并不以此限制本發明。本發明中，對分離后的果實角質層的形態結構和超微結構按照下述方法進行測定和iff介。角質層的形態結構采用光學顯微鏡觀察。按常規方法直接將角質層置于載玻片上，用帶有C⑶數碼攝像的光學顯微鏡(BA80 Digital，Motic，China)進行觀察和拍照。顯微鏡采用IOX物鏡進行觀察，分辨率設置為800X600，通過“計算白平衡”和“讀取背景” 功能得到最接近實際角質層圖像的照片。角質層的超微結構采用透射電子顯微鏡觀察。樣品先后經磷酸緩沖液配制的戊二醛固定液及鋨酸(四氧化鋨)作前、后固定，乙醇梯度脫水，Epon 812包埋，超薄切片機切片， 在經醋酸雙氧鉬及檸檬酸鉛染色，透射電鏡觀察拍片。實施例1番茄角質層的分離
a.準備原材料將原料番茄用清水沖洗干凈后，在果實果頰處取直徑為2.5cm左右的圓形果皮，將果皮上的果肉刮掉，再用蒸餾水沖洗果皮；
b.酶解分離角質層配制酶解液，酶解液為含質量分數為1.5%的果膠酶、1. 5%的纖維素酶，余量為PH為4. 0、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含ImM的NaN3 ；
第一步酶解取步驟a中的蕃茄果皮置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液15 ml 于燒杯中，在40°C下酶解12h，啟動振蕩器并調節其轉速為IOOrmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗；
第二步酶解將經過第一步酶解并沖洗后的角質層取出置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml于燒杯中，35°C下酶解，酶解時間為12h ；啟動振蕩器并調節其轉速為 IOOrmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗；
酸性試劑處理取經過第二步酶解并沖洗后的角質層于50ml的燒杯中，加入20ml酸性試劑；以上所述的酸性試劑為為草酸與草酸銨混合溶液，所述的草酸濃度為4g/l，其質量分數為0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質量分數為1. 6% ；
c.清洗取步驟b中酶解后的角質層先用水沖洗，再加入pH9.0的硼酸-硼酸鈉緩沖液在超聲波下清洗，清洗的功率為100W，清洗直至緩沖液澄清為止，以去除粘附在角質層中的酸性物質如酚類、脂肪酸等；
d.保存將分離的角質層用水沖洗并晾干至其水■量為5%以下，C存于21的々搏苜中備用。對照例1
對照例1的acd步驟同實施例1，不同之處在于，步驟b為
b.酶解分離角質層配制酶解液，酶解液為含質量分數為1. 5%的果膠酶、1. 5%的纖維素酶，余量為PH為4. 0、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含ImM 的·3 ；酶解取步驟a中的蕃茄果皮置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml于燒杯中，在35°C下酶解36h，啟動振蕩器并調節其轉速為lOOrmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗；
酸性試劑處理取經過酶解并沖洗后的角質層于50ml的燒杯中，加入20ml酸性試劑； 以上所述的酸性試劑為為草酸與草酸銨混合溶液，所述的草酸濃度為4g/l，其質量分數為 0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質量分數為1. 6% ； 對照例2
對照例2的acd步驟同實施例1，不同之處在于，步驟b為
酶解分離角質層配制酶解液，酶解液為含質量分數為1. 5%的果膠酶、1. 5%的纖維素酶， 余量為PH為4. O、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含ImM的NaN3 ； 第一步酶解取步驟a中的蕃茄果皮置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml 于燒杯中，在35°C下酶解12h，啟動振蕩器并調節其轉速為IOOrmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗；
第二步酶解將經過第一步酶解并沖洗后的角質層取出置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml于燒杯中，35°C下酶解，酶解時間為12h ；啟動振蕩器并調節其轉速為 IOOrmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗； 表1角質層分離效率及效果對照表
實施例1對照例1對照例2酶解時間/h243624光鏡下角質層清晰度形態結構清晰完全形態結構不清晰形態結構不清晰表皮細胞粘附幾乎無約占角質層部面積的80%以上的表皮細胞粘附約占角質層部面積的10%的表皮細胞粘附電鏡下角質層表面三維立體結構結構清晰三維結構不清晰三維結構不清晰
結果分析與實施例1相比，對照例1采用一步酶解與酸性試劑處理結合的方法，其酶解時間為36 h，要長于雙步酶解法；對照例2采用雙步酶解法，不加入酸性試劑，酶解后的角質層在外觀狀態上要次于實施例1。因此，無論是從處理時間上來看，還是從分離后的角質層形態來看，采用雙步酶解法與酸性試劑結合處理果皮分離角質層的方法是最佳的。
實施例2蘋果角質層的分離
a.準備原材料將原料蘋果用清水沖洗干凈后，在果實果頰處取直徑為2cm左右的圓形果皮，將果皮上的果肉刮掉，再用蒸餾水沖洗果皮；
b.酶解分離角質層配制酶解液，酶解液為含質量分數為1.5%的果膠酶、1. 5%的纖維素酶，余量為PH為4. 0、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含ImM 的腳3 ；
第一步酶解取步驟a中的蘋果果皮置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml 于燒杯中，在35°C下酶解48h，啟動振蕩器并調節其轉速為IOOrmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗；
第二步酶解將經過第一步酶解并沖洗后的角質層取出置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml于燒杯中，35°C下酶解，酶解時間為Mh ；啟動振蕩器并調節其轉速為 IOOrmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗；
酸性試劑處理取經過第二步酶解并沖洗后的角質層于50ml的燒杯中，加入20ml酸性試劑；以上所述的酸性試劑為為草酸與草酸銨混合溶液，所述的草酸濃度為4g/l，其質量分數為0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質量分數為1. 6% ；
c.清洗取步驟b中酶解后的角質層先用水沖洗，再加入pH9.0的硼酸-硼酸鈉緩沖液在超聲波下清洗，清洗的功率為80W，清洗直至緩沖液澄清為止，以去除粘附在角質層中的酸性物質如酚類、脂肪酸等；
d.保存將分離的角質層用水沖洗并晾干至其水份含量為5%以下，貯存于2°C的冰箱中備用。實施例3白梨角質層的分離
a.準備原材料將白梨用清水沖洗干凈后，在果實果頰處取直徑為2.5cm左右的圓形果皮，將果皮上的果肉刮掉，再用蒸餾水沖洗果皮；
b.酶解分離角質層配制酶解液，酶解液為含質量分數為1.5%的果膠酶、1. 5%的纖維素酶，余量為PH為4. 0、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含ImM 的腳3 ；
第一步酶解取步驟a中的白梨果皮置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml 于燒杯中，在35°C下酶解48h，啟動振蕩器并調節其轉速為IOOrmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗；
第二步酶解將經過第一步酶解并沖洗后的角質層取出置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml于燒杯中，35°C下酶解，酶解時間為Mh ；啟動振蕩器并調節其轉速為 IOOrmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗；
酸性試劑處理取經過第二步酶解并沖洗后的角質層于50ml的燒杯中，加入20ml酸性試劑；以上所述的酸性試劑為為草酸與草酸銨混合溶液，所述的草酸濃度為4g/l，其質量分數為0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質量分數為1. 6% ；
c.清洗取步驟b中酶解后的角質層先用水沖洗，再加入pH9.0的硼酸-硼酸鈉緩沖液在超聲波下清洗，清洗的功率為80W，清洗直至緩沖液澄清為止，以去除粘附在角質層中的酸性物質如酚類、脂肪酸等；
d.保存將分離的角質層用水沖洗并晾干至其水份含量為5%以下，貯存于2°C的冰箱中備用。實施例4葡萄角質層的分離
a.準備原材料將原料葡萄用清水沖洗干凈后，在果實果頰處取直徑為2.5cm左右的圓形果皮，將果皮上的果肉刮掉，再用蒸餾水沖洗果皮；
b.酶解分離角質層配制酶解液，酶解液為含質量分數為1.5%的果膠酶、1. 5%的纖維素酶，余量為PH為4. 0、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含ImM 的腳3 ；
第一步酶解取步驟a中的葡萄果皮置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml 于燒杯中，在35°C下酶解60h，啟動振蕩器并調節其轉速為IOOrmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗；
第二步酶解將經過第一步酶解并沖洗后的角質層取出置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml于燒杯中，35°C下酶解，酶解時間為Mh ；啟動振蕩器并調節其轉速為 lOOrmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗；酸性試劑處理取經過第二步酶解并沖洗后的角質層于50ml的燒杯中，加入20ml酸性試劑；以上所述的酸性試劑為為草酸與草酸銨混合溶液，所述的草酸濃度為4g/l，其質量分數為0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質量分數為1. 6% ；
c.清洗取步驟b中酶解后的角質層先用水沖洗，再加入pH9.0的硼酸-硼酸鈉緩沖液在超聲波下清洗，清洗的功率為80W，清洗直至緩沖液澄清為止，以去除粘附在角質層中的酸性物質如酚類、脂肪酸等；
d.保存將分離的角質層用水沖洗并晾干至其水份含量為5%以下，貯存于2°C的冰箱中備用。實施例5李子角質層的分離
a.準備原材料將原料李子用清水沖洗干凈后，在果實果頰處取直徑為2.5cm左右的圓形果皮，將果皮上的果肉刮掉，再用蒸餾水沖洗果皮；
b.酶解分離角質層配制酶解液，酶解液為含質量分數為1.5%的果膠酶、1. 5%的纖維素酶，余量為PH為4. 0、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含ImM 的腳3 ；
第一步酶解取步驟a中的李子果皮置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml 于燒杯中，在40°C下酶解Mh，啟動振蕩器并調節其轉速為IOOrmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗；
第二步酶解將經過第一步酶解并沖洗后的角質層取出置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml于燒杯中，40°C下酶解，酶解時間為12h ；啟動振蕩器并調節其轉速為 IOOrmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗；
酸性試劑處理取經過第二步酶解并沖洗后的角質層于50ml的燒杯中，加入20ml酸性試劑；以上所述的酸性試劑為為草酸與草酸銨混合溶液，所述的草酸濃度為4g/l，其質量分數為0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質量分數為1. 6% ；
c.清洗取步驟b中酶解后的角質層先用水沖洗，再加入pH9.0的硼酸-硼酸鈉緩沖液在超聲波下清洗，清洗的功率為80W，清洗直至緩沖液澄清為止，以去除粘附在角質層中的酸性物質如酚類、脂肪酸等；
d.保存將分離的角質層用水沖洗并晾干至其水份含量為5%以下，貯存于2°C的冰箱中備用。實施例6芒果角質層的分離
a.準備原材料將原料芒果用清水沖洗干凈后，在果實果頰處取直徑為2.5cm左右的圓形果皮，將果皮上的果肉刮掉，再用蒸餾水沖洗果皮；
b.酶解分離角質層配制酶解液，酶解液為含質量分數為1.5%的果膠酶、1. 5%的纖維素酶，余量為PH為4. 0、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含ImM 的腳3 ；
第一步酶解取步驟a中的芒果果皮置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml 于燒杯中，在35°C下酶解50h，啟動振蕩器并調節其轉速為IOOrmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗；
第二步酶解將經過第一步酶解并沖洗后的角質層取出置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml于燒杯中，35°C下酶解，酶解時間為12h ；啟動振蕩器并調節其轉速為IOOrmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗；
酸性試劑處理取經過第二步酶解并沖洗后的角質層于50ml的燒杯中，加入20ml酸性試劑；以上所述的酸性試劑為為草酸與草酸銨混合溶液，所述的草酸濃度為4g/l，其質量分數為0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質量分數為1. 6% ；
c.清洗取步驟b中酶解后的角質層先用水沖洗，再加入pH9.0的硼酸-硼酸鈉緩沖液在超聲波下清洗，清洗的功率為80W，清洗直至緩沖液澄清為止，以去除粘附在角質層中的酸性物質如酚類、脂肪酸等；
d.保存將分離的角質層用水沖洗并晾干至其水份含量為5%以下，貯存于2°C的冰箱中備用。 實施例7芒果角質層的分離
與實施例6的不同之處在于，實施例7中加入酸性試劑處理的步驟為取經過第二步酶解并沖洗后的角質層于50ml的燒杯中，加入20ml酸性試劑；該酸性試劑是硝酸與飽和的氯酸鉀溶液，所述的飽和氯酸鉀的硝酸溶液，是將濃硝酸稀釋ι倍后，加入固體καο3溶解至飽和，飽和氯酸鉀的硝酸溶液，即用即配。
權利要求
1.果實的角質層分離方法，包括取果皮、酶解分離角質層、清洗角質層、保存角質層，其特征在于所述的酶解分離角質層為雙步酶解法酶解，然后再加入酸性試劑處理；其中所述的雙步酶解方法中，酶解液中含質量分數為1 21的果膠酶、1 21的纖維素酶，余量為pH為3. 8 4. 2、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含 ImM 的 NaN3 ；第一步酶解條件是將果皮置于盛有酶解液的燒杯中于35 40°C下酶解，酶解時間為12 72h，酶解時，將盛有果皮和酶解液的燒杯置于振蕩器中振蕩，振蕩的轉速為80 120rmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗角質層；第二步酶解條件是將經過第一步酶解并沖洗后得到的角質層置于盛有酶解液的燒杯中，于35 40°C下酶解，酶解時間為12 Mh ；酶解時，將盛有角質層和酶解液的燒杯置于振蕩器中振蕩，振蕩的轉速為80 120rmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗角質層；采用酸性試劑處理的具體步驟為將經過第二步酶解并沖洗的角質層取出，加入酸性試劑；以上所述的酸性試劑為草酸與草酸銨的混合溶液或者是飽和氯酸鉀的硝酸溶液，所述的草酸濃度為4g/l，其質量分數為0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質量分數為1. 6% ；所述的飽和氯酸鉀的硝酸溶液，是將濃硝酸稀釋1倍后，加入固體KC103溶解至飽和。
2.如權利要求1所述的果實的角質層分離方法，包括下述的步驟a.準備原材料取果實的果皮，將果皮切削成直徑為1.5 2. 5cm的圓形；b.酶解分離角質層配制酶解液，酶解液中含質量分數為1 21的果膠酶、1 21的纖維素酶，余量為pH為3. 8 4. 2、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含ImM的NaR3 ；第一步酶解取步驟a中的圓形果皮置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 25 ml于燒杯中，在35 40°C下酶解12 72h，酶解時，啟動振蕩器并調節其轉速為80 120rmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗；第二步酶解將經過第一步酶解并沖洗后的角質層取出置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 25 ml于燒杯中，35 40°C下酶解，酶解時間為12 Mh ；酶解時，啟動振蕩器并調節其轉速為80 120rmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗；酸性試劑處理取經過第二步酶解并沖洗后的角質層于50ml的燒杯中，加入20 50ml酸性試劑；以上所述的酸性試劑為草酸與草酸銨混合溶液或者是飽和氯酸鉀的硝酸溶液，所述的草酸濃度為4g/l，其質量分數為0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質量分數為 1.6%;所述的飽和氯酸鉀的硝酸溶液，是將濃硝酸稀釋ι倍后，加入固體καο3溶解至飽和；c.清洗取步驟b中酶解后的角質層用水沖洗，加入pH9.0的硼酸-硼酸鈉緩沖液清洗，直至緩沖液澄清為止；d.保存將分離的角質層用水沖洗并晾干至其水份含量為5%以下，貯存于1 4°C的冰箱中備用。
3.根據權利要求1或2所述的果實的角質層分離方法，其特征在于所述的振蕩器的轉速為IOOrmp。
4.根據權利要求1或2所述的果實的角質層分離方法，其特征在于所述的酸性試劑為草酸與草酸銨混合溶液，其中，草酸濃度為4g/l，其質量分數為0. 4%，草酸銨溶液濃度為 16g/l，質量分數為1.6%。
5.如權利要求1所述的果實的角質層分離方法，包括下述的步驟a.準備原材料取果實的果皮，將果皮切削成直徑為2.5cm的圓形；b.酶解分離角質層配制酶解液，酶解液為含質量分數為1.5%的果膠酶、1. 5%的纖維素酶，余量為PH為4. 0、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含ImM 的 NaK3 ；第一步酶解將步驟a中的圓形果皮置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液15 ml 于燒杯中，在40°C下酶解12h，啟動振蕩器并調節其轉速為IOOrmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗；第二步酶解將經過第一步酶解并沖洗后的角質層取出置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml于燒杯中，35°C下酶解，酶解時間為12h ；啟動振蕩器并調節其轉速為 IOOrmp，振蕩直至酶解結束，酶解結束后取出角質層，用蒸餾水沖洗；酸性試劑處理取經過第二步酶解并沖洗后的角質層于50ml的燒杯中，加入20ml酸性試劑；以上所述的酸性試劑為為草酸與草酸銨混合溶液或者是硝酸與飽和的氯酸鉀溶液， 所述的草酸濃度為4g/l，其質量分數為0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質量分數為1. 6% ；c.清洗取步驟b中酶解后的角質層用水沖洗，加入pH9.0的硼酸-硼酸鈉緩沖液在超聲波下清洗，清洗的功率為100W，清洗直至緩沖液澄清為止；d.保存將分離的角質層用水沖洗并晾干至其水份含量為5%以下，貯存于2°C的冰箱中備用。
6.根據權利要求1或2或5中任一項所述的果實的角質層分離方法，其特征在于所述的果實為番茄、蘋果、梨、葡萄、李子、芒果中的任一種。
全文摘要
本發明屬于食品加工技術領域，具體涉及一種果實角質層的分離方法。該方法的特點是采用含有纖維素酶和果膠酶的復合酶解液對果皮進行雙步酶解分離出角質層，然后再加入酸性試劑處理角質層，使角質層表面粘附的表皮細胞脫落下來，從而使角質層分離得更徹底和完全。本發明提供的果實角質層分離方法，作用條件溫和，而且分離效率高，分離出來的角質層清晰完全，鮮有表皮細胞的粘附，角質層平整美觀、形態結構完整，從而為進一步開展果實角質層的科學研究提供可靠的材料來源。
文檔編號A23N7/01GK102342570SQ201110297629
公開日2012年2月8日 申請日期2011年9月29日 優先權日2011年9月29日
發明者侯成杰, 張長峰, 王國利, 魏雪琴 申請人:山東商業職業技術學院