專利名稱：杭白菊多倍體優良品種的培育和一步成苗快繁技術的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種農業生物新技術領域，尤其涉及ー種杭白菊多倍體優良品種的培育和一歩成苗快繁技木。
背景技術：
菊花為菊科植物菊Chrysanthemum morifolium Ramat的干燥頭狀花序。菊花入藥歷史悠久，為常用大宗中藥材品種，同時又是藥食兩用，國內外市場需求量越來越大，目前藥用的四大名菊有杭白菊、貢菊、滁菊和毫菊，分布于大江南北，其中杭白菊的生產量，市場需求量最大。但是目前杭白菊品種退化嚴重，為解決菊花品種退化問題、提高菊花藥材的產量和質量，我們應用組織培養技術首先對杭白菊進行了莖尖培養脫病毒技術的研究，接著在無菌離體條件下，進行了杭白菊多倍體的誘導和選育研究，并對誘導獲得的株系的產量性狀，化學成分含量和若干生理指標進行了測定，前后經過8年的不懈努力，最終選育出了高產優質的杭白菊多倍體優良品種，同時為了加快優良品種的生產應用推廣工作，研究成功了誘導杭白菊產生大量叢生芽的培養基，研究成功了試管苗一歩法培育技術，為杭白菊優良品種的大面積推廣應用，降低生產成本，提高經濟效益提供了技術的可行性。
發明內容
本專利包括以下4個方面的技術創新1.杭白菊改良熱處理脫病毒技術杭白菊是藥食兩用經濟作物，各地發展很快，但是杭白菊很容易感染多種病毒病， 感染了病毒病的杭白菊品種退化，葉子皺縮，生長緩慢，花一年比一年小、畸形，品質差，一般減產30-80%。并逐年加重。杭白菊的經濟效益大幅度下降，嚴重地阻礙了杭白菊生產的發展。目前對病毒病還沒用有效的農藥進行防治，即使有一些農藥可用，但是病毒病防治效果很差，還往往引起農藥殘留超標，病毒病已經成為杭白菊生產的“癌癥”。對于杭白菊病毒病，我們研究成功了本專利的第一項技術一杭白菊改良熱處理脫病毒技術；應用本專利技術脫病毒效果可以達到90%以上，培育出來的脫毒杭白菊在各地生產試驗中均表現出明顯的增產效果，增產效果達到30-50%左右，一般杭白菊感病毒愈嚴重，應用脫病毒苗后的增產效果愈明顯。2.杭白菊多倍體的誘導和選育技術在杭白菊脫病毒技術成功的基礎上，為了進一步提高杭白菊的產量和質量，進行了培育杭白菊優良品種的研究，我們進行了無菌條件下的杭白菊多倍體的誘導和選育，形成了本專利技術的第2項技術一杭白菊多倍體的誘導和選育技木，研究結果表明菊花從生芽經0. 2%秋水仙堿溶液處理3 后接入培養基中誘導多倍體的效率最高，達到13. 3%0 通過根尖染色體顯微鑒定；通過3年的田間試驗選育工作，成功地選育出了高產，優質的杭白菊多倍體優良品種，產量可以比二倍體脫病毒苗進ー步提高30-50%。可以提供生產上示范推廣應用。
3.誘導杭白菊產生大量從生芽的培養基配方杭白菊脫病毒，多倍體優良品種培育成功后，為了在生產上盡快推廣應用，需要解決優良品種種苗的快速繁殖的技術問題，才能夠在短時間內繁殖才大量優質種苗提供生產上推廣應用，為此經過大量的培養基篩選試驗，得到了杭白菊試管苗大量叢生芽誘導培養基，得到了最佳杭白菊繁殖培養基配方，(MS+BA0. 2-1. 0mg/L+IAA0. 05-0. 5mg/L)；應用該培養基配方，毎月杭白菊的繁殖速度可以達到20-30倍，為杭白菊優良品種大面積生產奠定
/ ^fl LD O4.試管苗一歩法培育技術在以上研究工作的基礎上，杭白菊優良品種試管苗可以在實驗室達到エ廠化生產水平，但是每一株試管苗還是需要經過2-3次培養，經過2-3個月的培養才能夠生產出來， 為了進一歩降低成本，提高生產應用的可行性，提高杭白菊優良品種推廣應用的經濟效益， 我們進ー步進行了培養基的簡化試驗，探討能否進行一歩法(一次接種培養技木)快速繁殖出大量的杭白菊優良品種試管苗，經過大量試驗，最后建立了一歩法培養技術，試管苗僅僅通過一次接種在ー步法培養基上(MS+IAA0. 2-1. 0mg/L+PP333 0. 1-1. Omg/L)，就能夠在30天內先后完成繁殖和生根兩個培養過程。應用一歩法培養技木，可以降低生產成本 50%，同時在時間上進一歩加快了繁殖速度，在生產中具有很好的應用前景，必將進ー步提高了杭白菊優良品種推廣應用的經濟效益。本發明的有益效果對于杭白菊病毒病，我們研究成功了本專利的第一項技木---杭白菊改良熱處理脫病毒技術；應用本專利技術脫病毒效果可以達到90%以上，培育出來的脫毒杭白菊在各地生產試驗中均表現出明顯的增產效果，增產效果達到30-50% 左右，一般杭白菊感病毒愈嚴重，應用脫病毒苗后的增產效果愈明顯。本專利技術的第2項技木--杭白菊多倍體的誘導和選育技木，誘導多倍體的效率最高達到13. 3%。并得到了最佳杭白菊繁殖培養基配方，應用該培養基配方，毎月杭白菊的繁殖速度可以達到20-30倍， 同時應用一歩法培養技術，可以降低生產成本50 %。
圖1為本發明的二倍體杭白菊的染色體2η =れ=40圖2為本發明的四倍體杭白菊的染色體2n = 4x = 80圖3為本發明誘導杭白菊多倍體的秋水仙處理時間和效果試驗數據統計圖
具體實施例方式本專利的技術流程1.采集杭白菊優良品種的感病毒材料(芽)。2.將杭白菊芽洗浄，置于流水沖洗10分鐘。3.小心剝去外部葉片3-5張，取出中心芽。4.對有病毒的杭白菊芽進行40_50°C高溫，5-20分鐘短時預處理。5.對杭白菊芽先后用0. 氯化汞，2%次氯酸鈉消毒10分鐘。6.將無菌狀態的杭白菊芽，置于體視顯微鏡下，進行無菌解剖，取出0. 2-0. 5mm的分生組織作為生長點。
7.在無菌條件下，將生長點置于最優化的細胞啟動培養基上進行培養40天。獲得無病毒愈傷組織。8.在無菌條件下，將無病毒愈傷組織轉移到最佳杭白菊繁殖培養基上，培養30天獲得大量叢生芽。9.在無菌條件下，將獲得大量叢生芽轉移到杭白菊生長培養基上，經過30天的培養，叢生芽生長成為無根試管苗。10.在無菌條件下，將無根試管苗轉移到杭白菊生根培養基上培養20天，生長成為可以移栽的試管苗。11.在無菌條件下，將無病毒愈傷組織轉移到一歩法培養基上，培養30天獲得大量有根的試管苗，提供苗床育苗。12.將杭白菊試管苗移植到育苗苗床，經過1-2月的培育，成為脫毒杭白菊原種小
田ο13.脫毒杭白菊原種小苗移植到苗圃中進行正常氣候條件下的繁殖，當年可以繁殖出50-100倍的脫毒杭白菊原種大苗，提供進行生產示范推廣和繁殖。
權利要求
1.ー種杭白菊多倍體優良品種的培育和一歩成苗快繁技術，運用高溫殺滅杭白菊芽的病毒，再取得分生組織進行培養和移栽，培育出脫病毒的試管苗用于生產，以及誘導多倍體及一歩法培養技木。
2.根據權利要求1所述的ー種杭白菊多倍體優良品種的培育和一歩成苗快繁技木， 其特征在于為了達到徹底的脫病毒效果，首先對有病毒的杭白菊芽需要進行高溫40-50°C， 5-20分鐘短時預處理，由于病毒一般不耐高溫，因此我們采用高溫短時處理，達到部分殺死或者鈍化病毒的效果，同時又不會殺死杭白菊芽，或者減少對芽的傷害。
3.根據權利要求1所述的ー種杭白菊多倍體優良品種的培育和一歩成苗快繁技木，其特征在于菊花叢生芽經0. 2%秋水仙堿溶液處理3 后接入培養基中誘導多倍體的效率最高，達到13.3%，通過根尖染色體顯微鑒定，成功地選育出了高產，優質的杭白菊多倍體優良品種，產量可以比二倍體脫病毒苗進ー步提高30-50 %。
4.根據權利要求1所述的ー種杭白菊多倍體優良品種的培育和一歩成苗快繁技木， 其特征在于杭白菊試管苗大量叢生芽誘導培養基，得到了最佳杭白菊繁殖培養基配方， (MS+BA0. 2-1. 0mg/L+IAA0. 05-0. 5mg/L)；應用該培養基配方，每月杭白菊的繁殖速度可以達到20-30倍。
5.根據權利要求1所述的ー種杭白菊多倍體優良品種的培育和一歩成苗快繁技木，其特征在于建立了一歩法培養技術，試管苗僅僅通過一次接種在一歩法培養基上 (MS+IAA0. 2-1. 0mg/L+PP333 0. 1-1. Omg/L)，就能夠在30天內先后完成繁殖和生根ニ個培養過程。應用一歩法培養技木，可以降低生產成本50%，同時在時間上進一歩加快了繁殖速度，在生產中具有很好的應用前景。
全文摘要
一種杭白菊多倍體優良品種的培育和一步成苗快繁技術，對有病毒的杭白菊芽需要進行脫病毒處理，取出生長點，置于最優化的細胞啟動培養基上進行培養40天，獲得無病毒愈傷組織，經數次移栽，獲得大量叢生芽。杭白菊叢生芽經0.2％秋水仙堿溶液處理36h后接入培養基中誘導多倍體的效率最高，達到13.3％。本發明同時建立了一步法培養技術，試管苗僅僅通過一次接種在一步法培養基上，就能夠在30天內先后完成繁殖和生根二個培養過程。應用一步法培養技術，可以降低生產成本50％，同時在時間上進一步加快了繁殖速度在生產中具有很好的應用前景，必將進一步提高了杭白菊優良品種推廣應用的經濟效益。
文檔編號A01H4/00GK102550417SQ20121000806
公開日2012年7月11日 申請日期2012年1月12日 優先權日2012年1月12日
發明者高山林 申請人:天津中植科生物技術有限公司