專利名稱：一種重組乳桿菌和中草藥合生元、合生元制劑及用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及微生物添加劑技術領域，具體涉及ー種重組乳桿菌和中草藥合生元，同時還涉及由該合生元制成的合生元制劑及其用途。
背景技術：
隨著抗生素、激素等作為飼料添加劑的濫用，其危害性已逐漸被人們認識，因此，禁止以添加劑形式添加這些化學藥物已成為不爭的事實，況且，在發達國家，如美國、歐盟國家及其他ー些國家已經執行。但在我國的飼料行業中還普遍存在這種現象，主要還是因為我國整體的養殖環境較差，動物飼養離開了這些藥物，那么它們的健康和生長都會受到影響。所以要想促進我國動物的健康養殖，改善動物產品的品質，就必須找到ー種可以替代抗生素或激素的產品，這種產品作為飼料添加劑不僅能夠促進動物的生長和健康，更重要的是不能在體內殘留。
發明內容
本發明的目的在于提供一種重組乳桿菌和中草藥合生元。本發明的目的還在于提供一種由重組乳桿菌和中草藥合生元制成的合生元制劑。本發明的目的還在于提供一種重組乳桿菌和中草藥合生元的用途。本發明的目的還在于提供一種由重組乳桿菌和中草藥合生元制成的合生元制劑的用途。為了實現以上目的，本發明所采用的技術方案是一種重組乳桿菌和中草藥合生元，由重組乳桿菌活菌粉和中草藥組成，重組乳桿菌活菌粉和中草藥的重量配比為重組乳桿菌活菌粉中草藥=I : 50 ;重組乳桿菌活菌粉中活菌數為(5 8) X IO11個/克,所述中草藥由以下重量份數的原料藥組成黃芪4份、黨參4份、神曲4份、麥芽4份、茯苓4份、甘草I份。ー種由所述重組乳桿菌和中草藥合生元制成的合生元制劑，由重組乳桿菌和中草藥合生元、CaCO3、粘合剤、助懸劑、崩解劑組成，其中重組乳桿菌和中草藥合生元的重量百分含量為88 92%, CaCO3的重量百分含量為I %，粘合劑的重量百分含量為I 5%,助懸劑的重量百分含量為O. I I崩解劑的重量百分含量為I 5%。所述合生元制劑為粉劑、片劑或液體制劑。所述粘合劑為淀粉，所述助懸劑為海藻酸鈉，所述崩解劑為羧甲基淀粉鈉。一種重組乳桿菌和中草藥合生元作為雞飼料添加劑的應用。重組乳桿菌和中草藥合生元作為雞飼料添加劑應用時，重組乳桿菌和中草藥合生元的添加量為重組乳桿菌和中草藥合生元中的中草藥的重量為雞飼料重量的O. I
0.4%。優選的，重組乳桿菌和中草藥合生元的添加量為重組乳桿菌和中草藥合生元中的中草藥的重量為雞飼料重量的O. 3%。一種由重組乳桿菌和中草藥合生元制成的合生元制劑作為雞飼料添加劑的應用。
合生元制劑作為雞飼料添加劑應用時，合生元制劑的添加量為合生元制劑中的中草藥的重量為雞飼料重量的O. I O. 4%。優選的,合生元制劑的添加量為合生元制劑中的中草藥的重量為雞飼料重量的O. 3%。其中的重組乳桿菌來源于干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)(保藏編號為ATCCNo. 5276，保藏單位美國菌種保藏中心)，通過在干酪乳桿菌基因組中整合了淀粉酶基因，井能高效表達。微生態制劑一般指的都是活的益生菌，這些益生菌在動物的腸道能夠起到調節菌群平衡，抑制有害菌，尤其是ー些功能性益生菌，如分泌各種消化酶、抗菌肽、過氧化氫的益生菌在腸道能夠產生多種效應。目前在動物飼料中廣泛應用的微生物有乳酸桿菌、雙歧桿菌、芽孢桿菌、酵母菌等，實踐證明這些益生菌制劑在促進動物生長、預防或治療腹瀉等方面具有一定的作用。我國中草藥種類繁多，資源十分豐富，目前發現的中草藥已達12000多種。中草藥含有的蛋白質、氨基酸、維生素等多種營養物質，對動物有促生長和抗病的作用。經研究發 現有200多種中草藥含有免疫活性物質，能增強動物體的免疫功能；有400多種中草藥有殺菌、抑菌作用；50多種中草藥對病毒有滅活或抑制作用。尤其是一些扶正固本類中草藥，如黃芪、黨參等，除可增強機體免疫功能外，還可促進益生菌的生長。因中草藥是天然物質，保持了各種成分的自然性和生物活性，易被動物機體吸收和利用，不被吸收的也能順利排出體外，因此，不存在藥物殘留的問題，所以它是ー種很理想的飼料添加剤。合生元是ー種將益生菌和能夠特異性促進益生菌增殖的物質(益生元)按照一定的配比聯合應用的制劑，它同時具有益生菌和益生元的特性。不僅可以通過體外飼喂益生菌調節腸道菌群，而且還可以通過益生元促進腸內固有益生菌的増殖。因此，合生元中的兩種組分能夠在腸道內相互協同，為腸道建立ー個良好的微生態環境。本發明提供的重組乳桿菌和中草藥合生元是將構建的一株表達淀粉酶的重組乳桿菌作為益生菌，再通過體外試驗篩選出能夠特異性促進該重組乳桿菌增殖的中草藥，將兩者按照一定的比例配比后制成的。經體外試驗表明，本發明提供的重組乳桿菌和中草藥合生元中的中草藥能夠促進重組乳桿菌的増殖，抑制大腸桿菌、沙門氏菌的生長；體內試驗表明，合生元能夠促進肉雞的生長，提高免疫力，降低死亡率。本發明提供的重組乳桿菌和中草藥合生元可以作為添加劑應用于飼料中，對于畜禽，尤其是幼齡動物，對提高生長速度、降低料肉比、増加經濟效益等具有重要的意義。在本發明提供的重組乳桿菌和中草藥合生元以及由其制成的合生元制劑中，重組乳桿菌為活的微生物制劑，ロ服這種活菌制劑后，能夠在腸道中定植，并在生長代謝中產生多種物質，如乳酸、抗菌肽、消化酶，尤其是重組到該菌中的淀粉酶，能夠在腸道高效表達，補充腸道中的淀粉酶，加之乳桿菌和中草藥的多重作用，能夠抑制有害菌的生長，提高動物的生產性能，改善機體的免疫力，減少腹瀉，增強體質。本發明提供的重組乳桿菌和中草藥合生元以及由其制成的合生元制劑作為飼料添加劑用于動物的生產，為動物腸道建立了一個良好的微生態環境。本發明提供的重組乳桿菌和中草藥合生元以及由其制成的合生元制劑與現有的飼料添加劑相比具有如下優勢和效果I、安全性好，無殘留
本發明提供的合生元及合生元制劑是由重組乳桿菌與具有健胃消食和增強免疫力的中草藥按照一定比例配比而成的，各成份均不含有毒有害物質，因此ロ服后也不會在機體內產生殘留。2、可以補充腸道內的淀粉酶本發明提供的合生元及合生元制劑的組分重組乳桿菌是ー種通過基因工程技術將淀粉酶基因整合到干酪乳桿菌Lactobacillus cacei (ATCC5276)中的基因工程菌，該重組乳酸桿菌的特征是含有表達質粒pllac-sp-amy,重組表達質粒pllac-sp-amy含有乳酸桿菌復制子ori、核糖體結合位點RBS、操縱子lac、乳酸桿菌信號肽基因(signalpeptide, sp)、淀粉酶基因(amylase, amy)、核糖體結合位點RBS和抗性篩選基因紅霉素Ery(erythromycin, Ery)基因，其表達式為-ori-RBS-lac-sp-amy-RBS_Ery-,在體外證明能夠高效分泌表達淀粉酶。3、能夠同時通過外源和內源增加腸道中的乳桿菌 本發明提供的合生元及合生元制劑的組分中含有重組乳桿菌和乳桿菌的益生元中草藥，因此重組乳桿菌可以直接增加腸道內的乳桿菌，益生元中草藥不僅可以促進重組乳桿菌的増殖，還可以刺激腸道內源性的乳桿菌的増殖，可以在腸道內盡快建立益生菌的優勢菌群。
具體實施例方式實施例I本實施例提供的重組乳桿菌和中草藥合生元，由重組乳桿菌活菌粉和中草藥組成，重組乳桿菌活菌粉和中草藥的重量配比為重組乳桿菌活菌粉中草藥=I : 50 ;重組乳桿菌活菌粉中活菌數為5 X IO11個/克，中草藥由以下重量份數的原料藥組成黃芪4份、黨參4份、神曲4份、麥芽4份、茯苓4份、甘草I份。實施例2本實施例提供的重組乳桿菌和中草藥合生元，由重組乳桿菌活菌粉和中草藥組成，重組乳桿菌活菌粉和中草藥的重量配比為重組乳桿菌活菌粉中草藥=I : 50 ;重組乳桿菌活菌粉中活菌數為8 X IO11個/克，中草藥由以下重量份數的原料藥組成黃芪4份、黨參4份、神曲4份、麥芽4份、茯苓4份、甘草I份。實施例3本實施例提供的合生元制劑，由本發明實施例I提供的重組乳桿菌和中草藥合生元制成，其組成為由本發明實施例I提供的重組乳桿菌和中草藥合生元、CaCO3、淀粉、海藻酸鈉、羧甲基淀粉鈉組成，重組乳桿菌和中草藥合生元的重量百分含量為88%，CaCO3的重量百分含量為I %，淀粉的重量百分含量為5%，海藻酸鈉的重量百分含量為1%，羧甲基淀粉鈉的重量百分含量為5%。本實施例提供的合生元制劑為粉劑，其制備方法同常規粉劑的制備方法，即將各種原料混合均勻后包裝即得粉劑。每克制得的合生元制劑中含重組乳桿菌40億個。實施例4本實施例提供的合生元制劑，由本發明實施例2提供的重組乳桿菌和中草藥合生元制成，其組成為由本發明實施例2提供的重組乳桿菌和中草藥合生元、CaCO3、淀粉、海藻酸鈉、羧甲基淀粉鈉組成，重組乳桿菌和中草藥合生元的重量百分含量為92%，CaCO3的重量百分含量為I %，淀粉的重量百分含量為3%，海藻酸鈉的重量百分含量為O. 5%，羧甲基淀粉鈉的重量百分含量為3. 5%。本實施例提供的合生元制劑為片劑，其制備方法同常規片劑的制備方法，即將原料混合均勻后，直接壓片，包裝后即得片劑。每克制得的合生元制劑中含重組乳桿菌36億個。實施例5本實施例提供的合生元制劑，由本發明實施例2提供的重組乳桿菌和中草藥合生元制成，其組成為由本發明實施例2提供的重 組乳桿菌和中草藥合生元、CaCO3、淀粉、海藻酸鈉、羧甲基淀粉鈉組成，重組乳桿菌和中草藥合生元的重量百分含量為92%，CaCO3的重量百分含量為I %，淀粉的重量百分含量為I %，海藻酸鈉的重量百分含量為1%，羧甲基淀粉鈉的重量百分含量為5%。本實施例提供的合生元制劑為片劑，其制備方法同常規片劑的制備方法。實施例6本實施例提供的合生元制劑，由本發明實施例2提供的重組乳桿菌和中草藥合生元制成，其組成為由本發明實施例2提供的重組乳桿菌和中草藥合生元、CaCO3、淀粉、海藻酸鈉、羧甲基淀粉鈉組成，重組乳桿菌和中草藥合生元的重量百分含量為92%，CaCO3的重量百分含量為I %，淀粉的重量百分含量為5%，海藻酸鈉的重量百分含量為1%，羧甲基淀粉鈉的重量百分含量為I %。本實施例提供的合生元制劑為片劑，其制備方法同常規片劑的制備方法。實施例7本實施例提供的合生元制劑，由本發明實施例2提供的重組乳桿菌和中草藥合生元制成，其組成為由本發明實施例2提供的重組乳桿菌和中草藥合生元、CaCO3、淀粉、海藻酸鈉、羧甲基淀粉鈉組成，重組乳桿菌和中草藥合生元的重量百分含量為92%，CaCO3的重量百分含量為I %，淀粉的重量百分含量為3%，海藻酸鈉的重量百分含量為O. 1%，羧甲基淀粉鈉的重量百分含量為3. 9%。本實施例提供的合生元制劑為液體制劑，其制備方法同常規液體制劑的制備方法。試驗例I證明中草藥組方能夠作為益生元促進重組乳桿菌的生長菌種重組乳桿菌(源于干釀乳桿菌Lactobacills casei ATCC5276)；培養基蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母提取物5g、K2HP042g、こ酸鈉5g、檸檬酸ニ銨2g、葡萄糖 20g、吐溫-801ml、MgSO4 · 7H2O O. 58g、MnSO4 · 4Η200· 25g、水 1000ml，調 pH 值至6. 2 ；中草藥的制備按以下重量份數稱取原料藥黃芪4份、黨參4份、神曲4份、麥芽4份、茯苓4份、甘草I份，將藥材粉碎成粉末備用；測定不同濃度的中草藥提取液對重組乳桿菌生長的影響將活化的重組乳桿菌液分別接種到含有重量百分比為O. 1%>0. 2%,O. 3%,O. 4%的中草藥的培養基中，以不含中草藥的培養基為對照，置37°C恒溫厭氧振蕩培養24h，然后以10倍稀釋平板滴種法測定菌液的濃度，測定結果見表I所示。
表I中草藥提取液對重組乳桿菌生長影響試驗結果(活菌數単位10nCFU/ML)
權利要求
1.一種重組乳桿菌和中草藥合生元，其特征在干，由重組乳桿菌活菌粉和中草藥組成，重組乳桿菌活菌粉和中草藥的重量配比為重組乳桿菌活菌粉中草藥=I : 50 ;重組乳桿菌活菌粉中活菌數為(5 8) X IO11個/克，所述中草藥由以下重量份數的原料藥組成黃芪4份、黨參4份、神曲4份、麥芽4份、獲苓4份、甘草I份。
2.一種由權利要求I所述重組乳桿菌和中草藥合生元制成的合生元制劑，其特征在干，由重組乳桿菌和中草藥合生元、CaCO3、粘合剤、助懸劑、崩解劑組成，重組乳桿菌和中草藥合生兀的重量百分含量為88 92%,CaCO3的重量百分含量為I%，粘合劑的重量百分含量為I 5%,助懸劑的重量百分含量為O. I I崩解劑的重量百分含量為I 5%。
3.根據權利要求2所述的合生元制劑，其特征在于，所述合生元制劑為粉劑、片劑或液體制劑。
4.根據權利要求2所述的合生元制劑，其特征在于，所述粘合劑為淀粉，所述助懸劑為海藻酸鈉，所述崩解劑為羧甲基淀粉鈉。
5.一種重組乳桿菌和中草藥合生元作為雞飼料添加劑的應用。
6.根據權利要求5所述的重組乳桿菌和中草藥合生元作為雞飼料添加劑的應用，其特征在于，重組乳桿菌和中草藥合生元的添加量為重組乳桿菌和中草藥合生元中的中草藥的重量為雞飼料重量的O. I O. 4%。
7.根據權利要求6所述的重組乳桿菌和中草藥合生元作為雞飼料添加劑的應用，其特征在于，重組乳桿菌和中草藥合生元的添加量為重組乳桿菌和中草藥合生元中的中草藥的重量為雞飼料重量的O. 3%。
8.一種由重組乳桿菌和中草藥合生元制成的合生元制劑作為雞飼料添加劑的應用。
9.根據權利要求8所述的合生元制劑作為雞飼料添加劑的應用，其特征在于，合生元制劑的添加量為合生元制劑中的中草藥的重量為雞飼料重量的O. I O. 4%。
10.根據權利要求9所述的合生元制劑作為雞飼料添加劑的應用，其特征在于，合生元制劑的添加量為合生元制劑中的中草藥的重量為雞飼料重量的O. 3%。
全文摘要
本發明涉及微生物添加劑技術領域，具體公開了一種重組乳桿菌和中草藥合生元，同時還公開了由該合生元制成的合生元制劑及其用途。重組乳桿菌和中草藥合生元由重組乳桿菌活菌粉和中草藥組成，重組乳桿菌活菌粉和中草藥的重量配比為重組乳桿菌活菌粉∶中草藥＝1∶50；重組乳桿菌活菌粉中活菌數為(5～8)×1011個/克，所述中草藥由以下重量份數的原料藥組成黃芪4份、黨參4份、神曲4份、麥芽4份、茯苓4份、甘草1份。本發明提供的重組乳桿菌和中草藥合生元可以作為添加劑應用于飼料中，對于畜禽，尤其是幼齡動物，對提高生長速度、降低料肉比、增加經濟效益等具有重要的意義。
文檔編號A23K1/17GK102687804SQ20121001129
公開日2012年9月26日 申請日期2012年1月15日 優先權日2012年1月15日
發明者丁軻, 余祖華, 劉煒, 李潤樂, 王天奇, 程相朝, 胡益源, 趙振升, 魏迎軍, 黃俊克 申請人:河南科技大學