一種瓊膠寡糖作為保護劑保藏保加利亞乳桿菌的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及菌種保藏的技術領域，尤其涉及一種瓊膠寡糖作為保護劑保藏保加利 亞乳桿菌的方法。
【背景技術】
[0002] 江蘺 (Gracilaria)是多年生的大型紅藻，屬于紅藻門，是我國廣東、浙江、臺灣沿 海藻類養殖品種之一，主要作為漁業養殖飼料和生產食品膠原料。江蘺菜瓊膠寡糖是一種 非消化性低聚糖，對保加利亞乳桿菌的生長具有明顯促進作用，并且具有抑制病原菌、腐敗 菌等有害菌的生長，能提高人體免疫力，改善內分泌系統，促進營養物質的吸收，對人體亞 健康狀態進行改善，對抗生素、激素、細胞毒性藥物等所致的菌群失調所引起的腸炎、腹瀉、 便秘以及藥物的副作用進行治療，具有延年益壽的作用。因此江蘺菜瓊膠寡糖是一種新型 保健品以及食品添加劑或飼料添加劑。
[0003] 目前，在現有技術中還未有江蘺菜瓊膠寡糖對益生菌的促進效果的報導，國內外 主要研究寡糖的抗病毒、抗炎癥、抗癌癥等作用。工業生產益生菌發酵產品，往往出現產品 益生菌數量不達標的問題。有鑒于此，本發明人研究和設計了一種瓊膠寡糖作為保護劑保 藏保加利亞乳桿菌的方法，本案由此產生。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在于提供一種瓊膠寡糖作為保護劑保藏保加利亞乳桿菌的方法，利 用江蘺菜瓊膠寡糖作為保加利亞乳桿菌的碳源，保護保加利亞乳桿菌在低溫貯藏下的活 性，保護保加利亞乳桿菌在人體胃腸液中存活率，提高保加利亞乳桿菌的菌活力。
[0005] 為了實現上述目的，本發明解決其技術問題所采取的技術方案是：
[0006] -種瓊膠寡糖作為保護劑保藏保加利亞乳桿菌的方法，包括以下步驟：
[0007] 步驟一、制備瓊膠寡糖:將江蘺清洗除雜，烘干，加入江蘺重量30倍的水使江蘺充 分溶脹，置于80°C的水浴中加熱2h;高壓滅菌，121°C滅菌20min;將江蘺趁熱擠膠，用濾布包 裹江蘺，并利用壓力機擠壓，收集擠膠濾出的多糖溶液，冷卻、烘干、粉碎成顆粒，即得江蘺 粗多糖;將冷卻的粗多糖溶解水中，制成濃度為5g/L的多糖溶液，加入瓊膠酶處理;加酶量 為15 % (v/v)，酶活為300U/mL;酶解20-1280min，以制備寡糖溶液，冷凍干燥，或真空干燥成 固體粉末，制得聚合度為3-8的瓊膠寡糖；
[0008] 步驟二、菌種培養:制備MRS培養基，瓊膠寡糖作為碳源，接種保加利亞乳桿菌0D_ 值為〇. 8的菌液，接種量為2 %，無氧環境下，42 °C，靜置培養2-3天；
[0009] 步驟三、液體菌保藏:在OD600值為1.2保加利亞乳桿菌液體中，添加濃度為l-10g/L 且聚合度為3-8的瓊膠寡糖，放置4 °C下貯藏；
[0010] 步驟四、固體菌劑保藏：在〇D6QQ值為1.2保加利亞乳桿菌液體中，添加濃度為5g/L 且聚合度為3的瓊膠寡糖，噴霧干燥制備固體菌劑，噴霧干燥條件為:麥芽糊精添加量25 %， 進風溫度130°C，進風速度4m3/min，進料速度700mL/h，空氣壓力0.3Pa，制備固體菌劑，制備 好的固體菌劑放置在常溫或-20°C貯藏。
[0011] 作為實施例的優選方式，所述步驟一中，酶解時間為20min，制得聚合度為8的瓊膠 寡糖。
[0012] 作為實施例的優選方式，所述步驟一中，酶解時間為80min，制得聚合度為5的瓊膠 寡糖。
[0013] 作為實施例的優選方式，所述步驟一中，酶解時間為1280min，制得聚合度為3的瓊 膠寡糖。
[0014] 作為實施例的優選方式，所述步驟二中，MRS培養基的組成為：牛肉蛋白粉10g、魚 肉汁l〇g，酵母浸出汁粉5g，瓊膠寡糖20g，醋酸鈉 5g，檸檬酸二銨2g，吐溫SOO.lg，硫酸鎂 0.58g，硫酸猛0.28g，蒸溜水 1000ml; 121 °C 高壓滅菌 15min，調節pH6.2-6.4。
[0015] 采用本發明的技術方案后，具有以下有益效果：
[0016] 1.本發明利用江蘺菜瓊膠寡糖作為保加利亞乳桿菌的生長碳源，有效提高了保加 利亞乳桿菌在低溫貯藏下和菌制劑下的活性以及在胃腸消化環境下的保護作用。
[0017] 2.本發明所使用的江蘺菜瓊膠寡糖不會產生任何污染成分，更不會污染環境。本 方法在實際生產中投資少見效快，適合推廣應用。
[0018] 3.采用高壓滅菌加熱處理，可以有效的對江蘺菜進行加熱處理，減少水浴加熱時 間，減少熱能損耗，相應國家節能減排的號召。
【附圖說明】
[0019] 圖1為本發明不同聚合度瓊膠寡糖對保加利亞乳桿菌在固態菌劑中的作用；
[0020] 圖2為本發明不同濃度瓊膠寡糖對保加利亞乳桿菌在固態菌劑中的作用；
[0021] 圖3為本發明瓊膠寡糖提高保加利亞乳桿菌在胃液模擬液中的耐受性作用；
[0022] 圖4為本發明瓊膠寡糖提高保加利亞乳桿菌在腸液模擬液中的耐受性作用。
【具體實施方式】
[0023] 酶活單位定義為每分鐘產生lyg還原糖所需酶量。
[0024]空白對照組:制備MRS培養基，MRS培養基的組成為：牛肉蛋白粉10g、魚肉汁10g，酵 母浸出汁粉5g，葡萄糖20g，醋酸鈉5g，檸檬酸二銨2g，吐溫80 O.lg，硫酸鎂0.58g，硫酸錳 0.28g，蒸溜水1000ml; 121°C高壓滅菌15min，調節pH6.2-6.4;葡萄糖作為碳源，接種保加利 亞乳桿菌0D6QQ值為0.8的菌液，接種量為2%。無氧環境下，42°C，靜置培養2-3天。
[0025]江蘺菜瓊膠寡糖組：制備江蘺菜瓊膠寡糖，將瓊膠寡糖代替MRS培養基中的葡萄 糖，并利用不同聚合度的寡糖(DP3、DP5、DP8)和不同濃度寡糖（lg/L、3g//L、5g/L、7g/L、10g/ L)來對保加利亞乳桿菌進行培養。接種保加利亞乳桿菌0D6(k)值為0.8的菌液，接種量為2%。 無氧環境下，42 °C，靜置培養2-3天。
[0026]實施例1: 一種保加利亞乳桿菌生長的江蘺菜瓊膠寡糖制備方法
[0027]步驟一、江蘺除雜：將江蘺清洗除雜，至沒有泥沙，水樣清澈，烘干，加入江蘺重量 30倍的水使江蘺充分溶脹，然后置于80 °C的水浴中加熱2h;
[0028] 步驟二、高壓滅菌:對加熱處理后的江蘺進行高壓滅菌，將微生物殺滅，高壓滅菌 溫度為121°C，滅菌時間為20min;
[0029] 步驟三、擠膠:將江蘺趁熱擠膠，用濾布包裹江蘺，并利用壓力機對裝有江蘺的濾 布進行擠壓，收集擠膠濾出的多糖溶液;將收集的多糖溶液進行冷卻、烘干、粉碎成顆粒裝 袋備用，放置在陰涼干燥處保存，即得江蘺粗多糖；
[0030] 步驟四、酶處理:將冷卻的粗多糖溶解水中，制成濃度為5g/L的多糖溶液，加入瓊 膠酶處理;加酶量為15% (v/v)，酶活為300U/mL;酶解20-1280min，以制備寡糖溶液；
[0031 ]步驟五、干燥:寡糖溶液進行冷凍干燥，或真空干燥成固體粉末，制得瓊膠寡糖。 [0032]作為實施例1的優選方式，所述步驟四中，酶解時間為20min，制得聚合度為8的瓊 膠寡糖。
[0033]作為實施例1的優選方式，所述步驟四中，酶解時間為80min，制得聚合度為5的瓊 膠寡糖。
[0034]作為實施例1的優選方式，所述步驟四中，酶解時間為1280min，制得聚合度為3的 瓊膠寡糖。
[0035] 實施例2:不同聚合度瓊膠寡糖對提高保加利亞乳桿菌在低溫貯藏下菌活力的影 響
[0036] 利用以上制備寡糖方法制備出不同聚合度的瓊膠寡糖，將其添加至已發酵達到 〇D6QQ值為0.8的保加利亞乳桿菌的MRS