專利名稱：灰氈毛忍冬渝蕾1號組培種苗的繁育方法
技術領域：
本發明屬于植物組織培養技術領域，涉及一種植物組培種苗的繁育方法。
背景技術：
灰租毛忍冬(Lonicera m acranthoides Hand. Mazz)是忍冬科忍冬屬多年生半常綠纏繞小灌木或直立小灌木植物，其花蕾的綠原酸含量在全國各種金銀花中最高，是西南、 中南地區商品金銀花的主要品種之一。渝蕾I號于2008年經重慶市林木品種審定委員會審定為灰氈毛忍冬的一個新品種。該品種畝產鮮花達400千克以上，較傳統種植灰氈毛忍冬增產3(Γ80%，抗逆性和適應性也較傳統家種灰氈毛忍冬強，其最顯著的特點是花期長達2(Γ30天且整個花期都是花蕾， 基本上不開花，與傳統家種灰氈毛忍冬7 10天的花蕾期相比，采摘期大大延長，便于采摘用工安排和加工時間安排。該品種已列入重慶“兩翼”農戶萬元增收計劃中。由于該品種植株性狀變異較大，目前通常采用無性系育種方法如扦插、嫁接繁殖優良單株無性系，但嫁接的砧木和接穗資源不多，扦插成活率低于40%，導致繁殖系數較低，不能滿足生產和市場需求。因此，通過組織培養的無性繁殖在短期內實現種苗產業化很有市場前景。
發明內容
有鑒于此，本發明的目的在于提供一種灰氈毛忍冬渝蕾I號組培種苗的繁育方法，具有愈傷組織誘導率高，不定芽分化率和增殖系數高，生根率高，試管苗移栽成活率高， 芽苗生長健壯、葉形葉色正常、皮下生根、新葉萌發快等優點，能夠滿足灰氈毛忍冬渝蕾I 號大面積規模化栽培的需要。為達到上述目的，本發明提供如下技術方案
灰氈毛忍冬渝蕾I號組培種苗的繁育方法，包括以下步驟
a.愈傷組織誘導以當年抽出的葉片作為外植體，將葉片消毒后，接種于誘導培養基上進行愈傷組織誘導培養，獲得愈傷組織；所述誘導培養基是以B5為基本培養基，并添加 6-芐氨基嘌呤(6-BA) 2mg/L、激動素(KT) 2mg/L、萘乙酸(NAA) O. lmg/L、卡拉膠5. 5 6. Og/ L和蔗糖30g/L,調節pH至5. 6 5. 8 ；
b.不定芽分化將步驟a所得愈傷組織轉接至分化培養基中進行不定芽分化培養，獲得初代叢生芽；所述分化培養基是以B5為基本培養基，并添加6-BA lmg/L、KT 2mg/L、NAA
O.lmg/L、卡拉膠5. 5 6. Og/L和鹿糖30g/L,調節pH至5. 6 5· 8 ；
c.不定芽繼代將步驟b所得初代叢生芽切割成單芽后，轉接至繼代培養基中進行不定芽繼代培養，獲得繼代叢生芽；所述繼代培養基是以MB為基本培養基，并添加6-BA Img/ L、吲哚乙酸(IAA) O. 8mg/L、卡拉膠5. 5 6. Og/L和蔗糖30g/L，調節pH至5. 6 5. 8 ；
d.生根待步驟c所得繼代叢生芽生長至I.5 2cm高時，將叢生芽切割成單芽后，轉接至生根培養基中進行生根培養，獲得試管苗；所述生根培養基是以1/3MB培養基為基本培養基，并添加卩引哚丁酸(IBA)l. 5mg/L、IAA O. lmg/L、卡拉膠5. 5^6. Og/L和鹿糖30g/L,調節pH 至 5. 6 5. 8 ；
e.試管苗移栽將步驟d所得試管苗移栽入體積比為1:9的珍珠巖-泥炭土混合基質中培養，即得灰氈毛忍冬渝蕾I號組培種苗。進一步，步驟a所述愈傷組織誘導培養、步驟b所述不定芽分化培養和步驟d所述生根培養的條件為每天在溫度為25土1°C、光照強度為200(Γ30001χ的條件下光照培養1(Γ12小時；步驟c所述不定芽繼代培養的條件為每天在溫度為25±1°C、光照強度為 200(Γ30001χ的條件下光照培養1(Γ12小時，晝夜溫差控制在8 12°C;步驟e所述培養的條件為每天在基質濕度為75°/Γ85%、光照強度為150(Γ30001χ的條件下光照1(Γ 2小時，每 10天施用I次氮質量百分含量為15%、磷和鉀質量百分含量各為5%的氮磷鉀三元復混肥。上述技術方案中涉及的Β5培養基是1968年Gamborg等設計的培養基，為植物組織培養中的常用培養基；MS培養基是1962年Murashige和Skoog為培養煙草細胞而設計的培養基，也是植物組織培養中的常用培養基;MB培養基是發明人在MS培養基的基礎上改良而得，主要是對MS培養基中大量元素的種類及其濃度進行了調整，微量元素的種類與MS 培養基相同但各組分的濃度約相當于MS培養基中濃度的2/3，鐵鹽與有機物的種類及其濃度與MS培養基相同；1/2、1/3、1/4MB培養基是指培養基中大量元素各組分的濃度分別相當于MB培養基中濃度的1/2、1/3、1/4，微量元素、鐵鹽與有機物的濃度與MB培養基相同。B5、 MS和MB培養基的具體配方如下表所示。
權利要求
1.灰氈毛忍冬渝蕾I號組培種苗的繁育方法，其特征在于，包括以下步驟a.愈傷組織誘導以當年抽出的葉片作為外植體，將葉片消毒后，接種于誘導培養基上進行愈傷組織誘導培養，獲得愈傷組織；所述誘導培養基是以B5為基本培養基，并添加 6-BA 2mg/L、KT 2mg/L、NAA O. lmg/L、卡拉膠 5. 5 6. Og/L 和鹿糖 30g/L,調節 pH 至5.6 5· 8 ；b.不定芽分化將步驟a所得愈傷組織轉接至分化培養基中進行不定芽分化培養，獲得初代叢生芽；所述分化培養基是以B5為基本培養基，并添加6-BA lmg/L、KT 2mg/L、NAA O. lmg/L、卡拉膠5. 5 6. Og/L和鹿糖30g/L,調節pH至5. 6 5· 8 ；c.不定芽繼代將步驟b所得初代叢生芽切割成單芽后，轉接至繼代培養基中進行不定芽繼代培養，獲得繼代叢生芽；所述繼代培養基是以MB為基本培養基，并添加6-BA Img/ L、IAA O. 8mg/L、卡拉膠 5. 5 6. Og/L 和鹿糖 30g/L,調節 pH 至 5. 6 5. 8 ；d.生根待步驟c所得繼代叢生芽生長至I.5 2cm高時，將叢生芽切割成單芽后，轉接至生根培養基中進行生根培養，獲得試管苗；所述生根培養基是以1/3MB培養基為基本培養基，并添加IBA I. 5mg/L、IAA O. lmg/L、卡拉膠5. 5 6. Og/L和蔗糖30g/L,調節pH至 5. 6 5. 8 ；e.試管苗移栽將步驟d所得試管苗移栽入體積比為1:9的珍珠巖-泥炭土混合基質中培養，即得灰氈毛忍冬渝蕾I號組培種苗。
2.根據權利要求I所述的灰氈毛忍冬渝蕾I號組培種苗的繁育方法，其特征在于，步驟a所述愈傷組織誘導培養、步驟b所述不定芽分化培養和步驟d所述生根培養的條件為 每天在溫度為25±1°C、光照強度為200(Γ30001χ的條件下光照培養1(Γ 2小時；步驟c所述不定芽繼代培養的條件為每天在溫度為25±1°C、光照強度為200(Γ30001χ的條件下光照培養1(Γ12小時，晝夜溫差控制在8 12°C;步驟e所述培養的條件為每天在基質濕度為 75% 85%、光照強度為150(Γ30001χ的條件下光照培養10 12小時，每10天施用I次氮質量百分含量為15%、磷和鉀質量百分含量各為5%的氮磷鉀三元復混肥。
全文摘要
本發明公開了一種灰氈毛忍冬渝蕾1號組培種苗的繁育方法，是以當年抽出的葉片作為外植體，將其消毒后接種于誘導培養基上進行愈傷組織誘導培養，再將愈傷組織轉接至分化培養基中進行不定芽分化培養，所得初代叢生芽切割成單芽后轉接至繼代培養基中進行不定芽繼代培養，待繼代叢生芽生長至1.5~2cm高時，將其切割成單芽后轉接至生根培養基中進行生根培養，生成的試管苗再移栽入體積比為1:9的珍珠巖-泥炭土混合基質中培養，即得灰氈毛忍冬渝蕾1號組培種苗，本發明對誘導培養基、分化培養基、繼代培養基和生根培養基均進行了優化，所得方法具有愈傷組織誘導率高，不定芽分化率和增殖系數高，生根率高，試管苗移栽成活率高，芽苗生長健壯、葉形葉色正常、皮下生根、新葉萌發快等優點，能夠滿足灰氈毛忍冬渝蕾1號大面積規模化栽培的需要。
文檔編號A01H4/00GK102577969SQ20121005972
公開日2012年7月18日 申請日期2012年3月8日 優先權日2012年3月8日
發明者劉奕清, 唐建民, 廖林正, 陳澤雄, 黃登艷, 黃科 申請人:重慶文理學院