專利名稱：湘蕾金銀花葉片離體培養與植株再生和擴繁方法及培養基的制作方法
技術領域：
本發明屬于植物繁殖技術領域，具體涉及ー種湘蕾金銀花葉片離體培養與植株再生和擴繁方法及培養基。
背景技術：
湘蕾金銀花的原植物為灰租毛忍冬(Lonicera macranthoides Hand Mazz),是1997年從灰氈毛忍冬自然變異株選育出來的品種。生產中，湘蕾金銀花的主要繁殖方法是扦插和嫁接，但扦插繁殖生根時間較長(1-3個月)，生根率不高(只有30% 40% )，以金銀花為砧木嫁接的“湘蕾金銀花”，樹冠擴大后，容易出現后期不親和與早衰，大部分發黃，有的枯萎或者死亡，且兩種方法的繁殖 系數和繁殖速度都有限，而用現有的灰氈毛忍冬離體組培技術增殖系數低，得到的植株生根少，需時長，成本高，品質低，移栽成活率低，難以滿足市場上對其優質種苗的需求。另外，現有的灰氈毛忍冬離體組培技術采用的外植體主要是莖尖、帶腋芽莖段，增殖方式是直接從外植體上產生叢生芽的器官型増殖方式；誘導葉片愈傷組織及其再分化的技術相對滯后，影響了現代生物技在其遺傳改良和新品種的選育中的應用。
發明內容
本發明g在克服現有湘蕾金銀花離體培養及擴繁技術中存在的増殖系數低，得到的植株生根少，需時長，成本高，品質低，移栽成活率低，難以滿足市場上對其優質種苗的需求的問題，提供一種湘蕾金銀花葉片離體培養與植株再生和擴繁方法及培養基。為了達到上述目的，本發明提供的技術方案為所述湘蕾金銀花葉片離體培養與植株再生和擴繁方法，包括如下步驟(I)葉片愈傷組織的誘導選擇湘蕾金銀花健康植株上的幼葉或成年葉，用75%酒精浸泡30秒鐘后,然后用I 2%的NaClO消毒6 IOmin,再用無菌水沖洗2 3遍，在超凈工作臺上將葉片剪成約Icm2的小塊接種到愈傷組織誘導培養基中，培養30 40天，得生長狀態很好的愈傷組織，其中，誘導培養基成分為B5+6-BA I. 0mg/L+NAA0. lmg/L+3%蔗糖；(2)愈傷組織的分化將誘導的愈傷組織轉移到分化培養基上，培養I 2個月，得到較多的叢生芽，其中，分化培養基成分為B5+6-BA I. 5mg/L+NAA0. lmg/L+3%蔗糖；(3)壯苗培養將密集的叢生芽分離，轉移到無激素的1/2MS壯苗培養基上培養I 2周；(4)生根培養將經步驟(3)培養出的無根壯苗轉移到生根培養基上進行生根培養，約20-25天待根長3-5cm時即可出瓶煉苗移栽，其中，生根培養基成分為1/4MS+NAA0. 2mg/L+IBA0. 4mg/L+l. 5%蔗糖。 本發明的有益效果體現在利用本發明的方法對湘蕾金銀花進行離體培養與再生擴繁，増殖系數高，愈傷組織的分化率達70% 80% ;無根苗生根培養20-25天時生根11-13條，需時短，苗生長健壯，且所用激素、糖，MS母液的濃度也比較低，大大節省了成本。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進ー步的說明。實施例I葉片愈傷組織的誘導選擇湘蕾金銀花健康植株上的幼葉或成年葉，用75%酒精浸泡30秒鐘后，然后用2%的NaClO消毒6min，再用無菌水沖洗3遍，在超凈工作臺上將葉片剪成Icm2的小塊接 種到培養基成分為B5+6-BA I. Omg/L+NAA 0. lmg/L+3%蔗糖的愈傷組織誘導培養基中培養30 40天；愈傷組織的分化將誘導的愈傷組織轉移到培養基成分為も+6-BA I. 5mg/L+NAA 0. lmg/L+3%蔗糖的分化培養基上培養I 2個月，得叢生芽；壯苗培養將密集的叢生芽分離，轉移到無激素的1/2MS壯苗培養基上培養I 2周；生根培養將無根壯苗轉移到培養基成分為1/4MS+NAA0. 2mg/L+IBA0. 4mg/L+l. 5%蔗糖的生根培養基上進行生根培養20-25天，待根長3 5cm時出瓶煉苗移栽。實施例2本發明湘蕾金銀花葉片離體培養與植株再生和擴繁方法與現有技術的效果對比實驗在其他條件一致的前提下，將本發明的方法與現有技術中的離體培養方法進行對比實驗，實驗參數及結果如表I所示表I
權利要求
1.一種湘蕾金銀花葉片離體培養與植株再生和擴繁方法，包括如下步驟 (1)葉片愈傷組織的誘導選擇湘蕾金銀花健康植株上的幼葉或成年葉，消毒后接種到愈傷組織誘導培養基中培養，其中，誘導培養基成分為B5+6-BA I. Omg/L+NAAO. lmg/L+3*%鹿糖； (2)愈傷組織的分化將誘導的愈傷組織轉移到分化培養基上培養，其中，分化培養基成分為B5+6_BA I. 5mg/L+NAA 0. lmg/L+3%鹿糖； (3)壯苗培養將經步驟(2)分化培養后長出的叢生芽分離，轉移到無激素的1/2MS壯苗培養基上培養； (4)生根培養將經步驟(3)培養出的無根壯苗轉移到生根培養基上進行生根培養，然后出瓶煉苗移栽，其中，生根培養基成分為1/4MS+NAA0. 2mg/L+IBA0. 4mg/L+l. 5%蔗糖。
2.一種用于如權利要求I所述的方法的誘導培養基，其特征在于，所述培養基成分為B5+6-BA I. 0mg/L+NAA0. lmg/L+3%鹿糖。
3.一種用于如權利要求I所述的方法的分化培養基，其特征在于，所述培養基成分為B5+6-BA I. 5mg/L+NAA0. lmg/L+3%鹿糖。
4.一種用于如權利要求I所述的方法的生根培養基，其特征在于，所述培養基成分為1/4MS+NAA0. 2mg/L+IBA0. 4mg/L+l. 5%蔗糖。
全文摘要
本發明公開了一種湘蕾金銀花葉片離體培養與植株再生和擴繁方法及培養基，使用本發明的方法和培養基培養湘蕾金銀花，能有效解決現有湘蕾金銀花離體培養及擴繁技術中存在的增殖系數低，得到的植株生根少，需時長，成本高，品質低，移栽成活率低，難以滿足市場上對其優質種苗的需求的問題。
文檔編號A01H4/00GK102657082SQ20121013118
公開日2012年9月12日 申請日期2012年4月28日 優先權日2012年4月28日
發明者于曉英, 廖禎妮, 符紅艷, 陳己任, 韓蓉 申請人:湖南農業大學